化学发光及生物发光的原理及其应用 点击次数：291 发表于：2008-08-24 01:39转载请注明来自丁香园 来源：丁香园 一、发光物质的类型 （一）无机化合物化学发光分析 1、金属离子分析 痕量金属离子对化学发光反应具有很好的催化作用，因而化学发光测定金属离子得到广泛的应用( 见表1) 。但是，由于不同金属离子催化氧化发光试剂时，发光光谱相同，致使金属离子催化化学发光反应的选择性较差。为提高分析的选择性，可采用以下方法: (1)利用待测金属离子与干扰离子配合物稳定性不同进行选择性分析，如加入掩蔽剂EDTA 或水杨酸掩蔽干扰离子; (2) 优化实验条件以减少其它离子的干扰; (3) 稀释样品溶液; (4) 加入敏化剂。但是，当样品中待测物相对于干扰物浓度很小时，上述方法也无济于事，只得进行前处理，常用的分离方法有色谱、溶剂萃取等。 色谱分离的高选择性与化学发光检测的高灵敏度相结合，是一种很有前途的联用技术。关键是流动相的选择，流动相选择得好，不仅可以提高选择性，还可以进行多个离子的同时测定。如用离子交换分离法同时测定Cr (à) 和Cr (? ) 。溶剂萃取也是提高化学发光测定金属离子选择性的一个有效方法。这种方法的主要问题是费时，因为进行化学发光检测前必须将无机物从有机溶剂中反萃取出来，或是将有机溶剂蒸发除去。较好的方法是自动在线溶剂萃取选择性检测待测物。
2、其它无机化合物的分析 化学发光反应中，过氧化氢是最常用的一种氧化剂，因此有关H 2 O 2 化学发光分析的报道较多( 见表2) ，涉及到鲁米诺、过氧草酸酯及光泽精等化学发光反应。根据鲁米诺化学发光反应制成的H2O 2 光纤传感器与流动注射法联用，可检测10nmo l ／L ～1 mmo ／L 的H 2 O 2 ，用模拟酶代替辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光，检测限可达5 . 5×10 －9 mo l ／L 。根据ClO - 对鲁米诺的氧化作用，可用于测定ClO - ，其它物质如Cl 2 的干扰，可用流动注射法消除。利用停流技术测定水中ClO - 不必进行前处理。含氮的无机化合物如NH3 ／NH 4 ，可将其衍生后用TCPO 化学发光法检测，线性范围为2 。9ug ／L ～6 m g ／L 。CN －能抑制鲁米诺H 2 O 2 －Cu (II ) 的化学发光，据此可分析测定CN —。在低温条件下化学发光分析测定CN －，当进样量为100uL 时，线性范围为10 －9 －10 -7 g ／mL ，当进样量20 uL 时，线性范围为10 －8 ～5×10 -7 g ／mL 。 （二）有机化合物的化学发光分析 1、有机酸 有机化合物的同系物结构和性质相似，使单一组分的测定遇到困难，因此有机化合物同系物的分析常与HPLC 相结合。有机酸的化学发光分析( 见表3) ，一般是先将其衍生
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
生物发光毒性测试分析 毒性是一项综合的生物学参数，它是衡量样品对活性生物体所产生的影响，不能以化学分析的方法进行测定，一些生物测试方法如鱼类试验、浮游动物试验、藻类试验等则较为复杂，且必须使用高等生物进行试验，从而引起众多的争议。发光细菌测试使用了具有发光特性的天然或人工遗传改造的微生物，这一方法经研究被证实具有快速、简便的特点，同时有很好的灵敏度和可靠性，发光细菌本身又没有危害性。发光细菌试验已成为环境样品毒性检测的生物测试技术，被列入了我国国家标准GB/T 15441-1995，德国国家标准(DIN38412)和国际标准(ISO11348)。 发光细菌毒性测试方法是一个我国国家标准和ISO标准认证的，运用发光细菌Vibrio fischeri进行急性毒理测试。 发光细菌闪烁测试（flash test）是一个改良的方法用于测试含有固体和有色的样品。 上述两个系统包括化学发光检测仪（闪烁测试系统的发光仪必需有自动样品注射器），软件程序，试剂冷却/孵育器和冷冻干粉状态的测试用发光细菌。 生物重金属试剂盒是一个革命性地用于分析环境中少量样品的方法。这些细菌能够特异性地感受到某种特定金属的存在，如来自固体和液体样品中ppb水平的铅、汞、砷和镉。发光终点测试方法具有很高的灵敏度，快速和高通量进行。 发光细菌毒性测试 此方法是传统和标准的通过发光细菌方法来测试化合物或污水的毒性（GB/T 15441-1995，ISO 113483: 水质）测定水样对Vibrio fischeri <发光细菌测试>的光发射抑制效果。这个测试方法是建立在此基础之上的――当有毒性的化合物存在时，细菌的发光量会降低。这个方法非常快速，只需要5－30分钟就可以完成。。 标准发光细菌的测试过程是：把样品和细菌混合在一起，经过短暂的孵育，测试发光强度。检测仪器只需要化学发光仪（如Berthold Detection Systems管式或板式化学发光仪)。 检测系统包括仪器和试剂（冷冻干粉）。细菌可以常温运送给客户。 生物发光毒性测试产品： Berthold Detection Systems公司的化学发光仪 Kenreal TM生物毒性试剂盒 制冷恒温孵育器 分析软件
(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病，称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善，以及抗生素的滥用，人类对病菌的抵抗能力却在不断下降，食源性疾病一直呈上升的趋势。因此，对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性，常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染，这些方法需要一定的培养时间，少则2～3天，多至数周，才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面，以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 （二）、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下： 1、活细胞计数的改进方法 （1）、旋转平皿计数方法 （2）、疏水性栅格滤膜法（HGMF）或等格法（isogrid method） （3）、血膜系统（Pertrifilm） （4）、酶底物技术（ColiComplete） （5）、直接外荧光滤过技术（DEFT） （6）、“即用胶”系统（SimPlate） 2、用于估计微生物数量的新方法 （1）、阻抗法 （2）、A TP生物发光技术 3、其他方法 （1）、微量量热法 （2）、接触酶测定仪 （3）、放射测定法 （三）、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 （四）、大肠杆菌O157：H7快速检测方法 大肠杆菌O157：H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型，自1982年在美国被分离并命名以来，陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关，是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157：H7属于肠杆菌科埃希氏菌属，为革兰氏阴性杆菌，有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点，E.coli O157：H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用，可以从多方面对E.coli O157：H7进行检测。 1、E.coli O157：H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 （五）、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，呈普通串状排列无芽孢，无鞭毛，不能运动。该菌在自然界中分布广泛，如空气、水、土壤、饲料和一些物品上，是最常见的化脓性球菌之一，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的，目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件，近年来
基层疾控中心微生物检验的常见问题与对策探讨 发表时间：2018-05-15T10:08:51.423Z 来源：《心理医生》2018年11期作者：马兰花[导读] 疾控中心的主要的服务宗旨为以人为本，加强各类疾病的控制以及预防工作，属于一种公益性的事业单位 马兰花 （甘肃省临夏市疾病预防控制中心甘肃临夏 731100） 【摘要】疾控中心的主要的服务宗旨为以人为本，加强各类疾病的控制以及预防工作，属于一种公益性的事业单位，疾控中心需要将科研作为工作的基础，减少疾病对人群造成的伤害，疾控中心中微生物实验室的主要工作为，对疾控中心所负责范围内的各项传染病的日常监控工作以及体检诊断工作等。因此本文便对疾控中心中微生物检测工作作为主要的叙述内容，对其中的影响因素以及具体的解决措施进行浅薄的分析。 【关键词】基层疾控中心；微生物检验；常见问题与对策探讨【中图分类号】R37 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8231（2018）11-0307-02 微生物检测工作可以直接对疾控中心的工作开展方向产生影响，在处理食物中毒等突发性安全事故时，微生物检测具有高效性的特点，可以在极短时间内，对导致食物中毒的病菌进行查询，然后可以采用针对性的措施，处理食物中毒事件，但是在微生物的检验中，还存在着问题以及不足之处，对微生物检测的准确性产生影响。因此，需要对影响因素进行妥善的解决，促进疾控中心工作的开展。 1.资料与方法 1.1 基线资料 对全国范围内的各州县疾病防控中心的微生物检验工作情况进行总结。 1.2 方式 微生物实验室的人力资源情况进行分析，然后开展相关统计学的处理。 1.3 结果 在我国的各级疾控中心的工作人员中，工作人员具有本科学历的所占比例为12.74%，具有大专学历的工作人员为78.21%，中专学历的工作人员为10.05%[1]。 2.影响疾控中心微生物检测工作的原因 2.1 技术人员的个人因素 基层控制中心微生物检测工作对工作人员有着较高的要求，不但需要工作人员具有完善的理论知识，并且还需要其具有细致的检验技术，可以对实验进行实际操作，在基层疾控中心微生物检查工作中，此工作较为依赖工作人员的主观判断，因此需要不断加强工作人员的业务能力，才可以达到减少检测工作失误性的目的，提高微生物检测工作的准确性。 2.2 设备仪器 微生物检测对所使用的设备也具有非常高的要求，包括冰箱、水浴箱以及生化培养箱等，都可以对微生物检测结果产生影响，使其失去准确性，所以需要减少仪器设备的影响，达到减少误差的目的。 2.3 环境因素 微生物检测中使用的实验室又分为净化实验室以及无菌实验室等四个板块，实验室的内部环境也会对微生物的检测结果产生影响，而且由于微生物的特殊性，在检验工作中一旦出现失误，有很大可能对检验工作人员的身体健康产生影响，使实验室的环境安全得不到保证。 3.微生物检验中的质量控制 3.1 对培养基以及所选用试剂进行检查 检验的主要目的为，对试剂的外观、生产厂家以及数量等基础参数进行检查，试剂的外观检查主要内容为以下：（1）固体试剂的潮解程度。 （2）液体试剂的透明性以及均匀性。 （3）培养基中其厚度是否保持在均匀状况下，表面是否平整、光滑[2]。 3.2 诊断血清 在检验过程中，签收血清时，需要对血清的各项基本参数进行确定，包括生产厂家以及生产批号的审核，并且需要保证检验工作需要在无菌环境下开展。 3.3 实验结果的对比 在进行微生物检验时，其检验结果主要的判断依据便是技术人员的主观判断，因此为保证实验室的准确性，需要同时开展多个检验工作，保证检验管结果的准确性，也可以通过此方式对实验室之间的差异性进行判断[3]。 4.加强微生物检验工作准确性的措施 4.1 加强工作人员的业务能力 首先需要对实验室中的工作人员进行系统专业化的培训，培训的主要内容为专业能力以及工作素质的培养。在提高工作人员专业能力的同时，也需要培养其对工作认真的态度，使工作人员对自身工作有着较强的认同感，可以以饱满的态度对待每一次的微生物检验。在接受培训后，需要保证微生物检测的准确性，并且工作人员可以对各项实验操作妥善的开展，减少由于操作失误出现的误差现象，保证微生物检测工作的准确性，而且工作人员上岗前，需要对其进行统一考核，上岗人员需要具有相关证件，保证工作岗位员工本身的专业技能达到标准。考核的主要内容为以下： （1）加标实验以及样品重测考核。 （2）人员在培训期间内的学习情况以及最终的评估情况。 4.2 检验设备的性能定期检查
第一章化学发光技术 一、免疫学检测发展阶段 免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。我国免疫学的检测基本历经了以下几个过程，如图1.1所示。 20世纪60年代70年代90年代时间 图1.1免疫学检测发展阶段 尽管免疫诊断在临床诊断中占据着非常重要的地位，但是从我国临床免疫诊断现状来看，无论是临床应用方面，还是产业化角度，都处于相对比较落后的状态，亟待改进。下表１.１就此做一比较： 表1.1 中国免疫诊断现状 由以上分析不难看出，化学发光免疫检测是大势所趋；而取代进口，发展我国的化学发光检测事业，
正是临床检验界着手发展的方向。由此，我公司自1998年立项至今，致利于化学发光检测方案设计，自行开发了具有国内领先水平的化学发光底物，与国外知名检测仪器生产商联合开发了化学发光全自动、半自动检测仪，并自行设计开发了化学发光管理软件，而今形成了仪器、试剂、软件全面配套，为我国的临床检验界提供了一套完善的解决方案。 二、化学发光免疫分析技术 【概述】 本世纪70年代中期Arakawe首次报道用发光信号进行酶免疫分析，利用发光的化学反应分析超微量物质，特别是用于临床免疫分析中检验超微量活性物质。目前，这一技术已从实验室的稀有技术过渡到临床医学的常规检测手段。化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光或生物发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。其检测原理与放射免疫（RIA）和酶免疫（EIA）相似，不同这处是以发光物质代替放射性核素或酶作为标记物，并藉助其自身的发光强度直接进行测定。 化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保持期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 【原理】 在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统，其基本原理同酶联免疫技术（ELISA），常采用双抗体夹心法、竞争法、间接法等反应模式，如图1.2，1.3，1.4所示。 如图1.2双抗体夹心法反应原理示意图
微生物实验中常见的问题汇总 一、无菌操作要求 1. 接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2. 进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3. 接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4. 进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5. 从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6. 接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7. 接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8. 吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。 二、无菌间使用要求 1、无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开，并设有与无菌间大小相应的缓冲间及推拉门，另设有0.5-0.7平方米的小窗，以备进入无菌间后传递物品。 2、无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。 3、无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯消毒时，需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。 4、处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。 5、在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。 三、消毒灭菌要求 微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，必须经灭菌后方
精心整理 摘要： 微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常用的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 体积，是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和他们的生长抑制紧密相关。所以有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，可以从其重
量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 取一 5为（ 可用离心或过滤法测定。一般干重为湿重的10-20%。在离心法中，将一定体积待测培养液倒入离心管中，设定一定的离心时间和转速，进行离心，并用清水离心洗涤1-5次，进行干燥。干燥可用烘箱在105℃或100℃下烘干，或采用红外线烘干，也可在80℃或40℃下真空干燥，干燥后称重。如用过滤法，丝状真菌可用滤纸过滤，细菌可用醋酸纤维膜等滤膜过滤，过滤后用少量水洗涤，在40℃下进行真空干燥。称干重发法较为烦琐，通常获取的微生物产品为菌体时，常采用这种方法，如活性干酵母
（activity dry yeast,ADY）,一些以微生物菌体为活性物质的饲料和肥料。 比浊法： 微生物的生长引起培养物混浊度的增高。通过紫外分光光度计测定一定波长下的吸 公司的紫外 OD600 或数法 血球计数板法: 血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片，玻片上有四条沟和两条嵴，
甲胎蛋白检测操作规程 【检验原理】 产品采用双抗体来心法定量测定人血清中的甲胎蛋白(AFP)的含量。在微孔版的孔内先包被了识别抗AFP的单克隆抗体,用辣根过氧化酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。待测孕妇血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应。再加上发光底物,用微孔板发光分析仪读取发光数值,发光值与待测血清中AFP含量成正比。 【储存条件及有效期】 试剂盒于2-8℃避光贮存，不得冻存,有效为12个月。 开封有效期:板条开封后2-8C存放效期为3个月,其他液体组份同成品试剂盒效期。 【检测仪器及试剂】 仪器：重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪 试剂：潍坊康华甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法） 【样本要求】 抽取静脉血3mL,置一次性采血管内,充分离心,吸取血清,不应有溶血及细胞颗粒:血清标本4℃存放最好不要超过3天,若不能及时检测,应-20℃冻存,检测时应将标本融化后混合均匀,并避免反复冻融。 【检验方法】 手工操作步骤: 1、将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡30分钟 2、,将浓缩洗涤液按1:40的比例稀释,摇匀备用,作为应用洗涤液 3、根据AFP参考品、质控品及待测标本确定所需孔数。 4、直接取AFP参考品、质控品及标本各25微升加入相应孔内,再每孔加入50 微升AFP酶结合物,用振荡器振荡30秒钟(此步非常重要),盖上封板膜,置37℃温浴1小时。 5、取出,用应用洗涤液洗涤5次,洗涤时每孔注满洗涤液,停留10秒后吸尽拍干。 6、根据使用量,将底物液A、B按1:1混匀,现用现配。每孔加入50微升,用振荡器振荡20秒钟,设定每孔测量时间为1秒,于10-20分钟内测定结果。 仪器操作步骤： 按照重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪操作规程检测。 【参考区间】 测定正常人血清样本并结合参考文献的报道,建议正常参考值范围如下: 正常人血清中AFP浓度<20ng/mL 若用于产前筛查,应结合相应的风险分析评估软件使用。 由于地区及人群的差异,以上范围仅供参考,各实验室在长期实践中应建立本实验室自己的正常参考值范围。 【检验结果的解释】 AFP质控品Q1浓度应为2.5-7.5ng/mL,质控品Q2应为105~195ng/mL 【检验方法的局限性】 1、每次检测必须做AFP标准曲线,不能使用以前做过的标准曲线。 2、含大量脂质、严重黄及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果。 3、建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定使用本品 4、本品仅用于人血清的测定,不得使用抗凝血浆。 5、用其他方法得出的AFP浓度值与本品测定结果不具有直接的可比性,应结合其他有关的临床诊断结果作
支原体检测试剂盒(MycoAlert Mycoplasma Detection Kit) 定义：支原体（mycoplasma），又称霉形体，没有细胞壁的原核生物，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。它对许多抗生素具有抗性，如类胸膜肺炎微生物。 一.支原体污染成为细胞培养的重大隐患: 1．研究表明，世界范围内超过15%的培养细胞都有支原体污染。2．支原体污染会对细胞造成多方面的影响，包括代谢、免疫或生化特性、生长状况、以及细胞存活等多方面的改变。 3．支原体污染会影响实验结果的稳定性、可靠性和准确性。 4．支原体难以检测，同时也很难消除。支原体能轻易地通过标准滤膜，同时也能拮抗绝大多数的抗生素，给细胞培养造成巨大损失。 二.常规检测才能有效避免细胞支原体污染: 1．常规性的进行支原体检测是保证细胞培养中不受到支原体污染影响的唯一途径。 2．传统的支原体检测方法需要在特殊的选择性培养基作用下对样品进行培养，时间往往达数周，费时，费力并且无法获得足够的灵敏度和特异性。 三检测原理 美国Lonza MycoAlert Mycoplasma Detection Kit支原体检测试剂盒是利用支原体酶的这一特定活性，进行选择性的生物化学检测。这些酶的存在提供了一种快速的筛选操作，能灵敏地检测出样本中的
支原体污染。这些存活的支原体被溶解，然后释放出来的酶与支原体检测试剂盒中提供的底物发生催化反应，将ADP转化成ATP。通过测量样品中添加底物前后ATP的含量，可以得到一个比率，该比率指示支原体是否存在。如果这些酶不存在，第二次读数相对于第一次读数就没有增加；如果酶与底物进行特异性反应，就会导致ATP含量上升。ATP含量的上升通过生物发光化学反应可以检测到，其公式如下：Luciferase ATP + Luciferin + O2 ——————> Oxyluciferin + AMP Mg 2+ + PPi + CO2 + LIGHT 这个反应的发生是在室温(18°C～22°C)进行的，也是荧光素酶反应的最佳温度。 在支原体检测试剂盒的检测原理中，最后通过分光光度计读数，由于发出光的强度与ATP的浓度成线性关系，因此可检测支原体的污染问题。
微生物实验基础操作及常见问题 缓冲蛋白胨是否可以做为菌落大肠的稀释液？ 如果是作为第三方检测报告不可以，属于不按标准方法操作。如果是自己做研究可以。 酱，酱油类应当选择什么稀释液？酱和酱油稀释液用无菌蒸馏水依据GB/T 4789.22-2003 食品卫生微生物学检验调味品 对于酸奶类比较稠的液体，或者是含有其他固体添加物的液体，如何做原液检测？稠度大于牛奶的样品一般不采用体积取样，目前情况可以根据国标要求将样品25g+225mL稀释后，用大平皿做10mL的10-1稀释液。 固体样品稀释倍数递进能取1ml到9ml里吗？固体样品稀释当然可以取1mL 到9mL。课件里是指当液体样品原液取样1mL之后, 要做第一个10倍 梯度稀释时要取25mL加入225mL，后面的梯度就按1mL到9mL。 一次性牙签的大肠菌群和霉菌，应该如何制样检测？按照木牙签国家标准（LY/T 1159-2006）中的相关规定，依照GB 14934-2016消毒餐（饮）具进行制样，即棉签擦拭法50cm2，按GB 4789.3-2016 大肠菌群计数MPN法检测。按GB 4789.15-2016 霉菌和酵母计数，即称量25g+225mL 稀释液均质后进行霉菌检测。 消毒产品杀毒效果的话，微生物指标怎么检验？建议参考《消毒技术规范2017》& GB 15979 一次性使用卫生用品卫生标准。 采样用镊子和无菌盘都是用什么办法灭菌的呢？灭菌条件是什么？金属材 质等耐高温器皿首先采用高温干热灭菌，160℃，2h 瓜子、花生、开口松子是带壳检的吗？带壳炒货及坚果制品的制备根据样品的食用方式、外壳的坚硬程度及单个体积的大小，合理选择适宜的制备方式。如瓜子带壳食入、个体又小易碎，带壳称量直接碾压的方式进行检验。花生去壳检验。松子带壳研碎再均质。 空气沉降菌和接触面应该参照那个超标准？GB 50591-2010 《洁净室施工及验收规范》GB 50073-2013《洁净厂房设计规范》GB 15982-2012 医院消毒卫生标准SN/T 0168-2015 进出口食品中菌落总数计数方法饮料为啥不调pH？依据饮料类型而定，强酸性或碱性饮料是需要调pH的。碳酸钠溶液灭菌条件？高压蒸汽灭菌121℃/20min 或无菌过滤除 菌。皮蛋、糟蛋、咸鸭蛋检测取样取哪一部分？对于带壳的蛋类，取内容物。方法：对蛋壳表面清洁消毒，无菌操作打开部分蛋壳，用灭菌勺称取样品（含蛋白和蛋黄）参考标准GB/T 4789.19-2003 食品卫 生微生物学检验蛋与蛋制品检验
化学发光法检测肝炎病毒的结果解读 肝炎病毒感染是一个全球性的健康问题，根据美国疾病控制中心的报告，全球有将近20亿的感染人群。其中3.5亿人为慢性持续性感染。另外，全球有近3/4的人居住高流行区域，其中也包括中国。因此，有效的肝炎病毒检测和筛查显得十分重要。 化学发光法检测肝炎病毒，在方法上提高了病毒检测的灵敏度和特异性，而且流量检测，快速、方便，并逐渐替代ELISA，成为肝炎病毒的常规检测方法。 目前，发光法检测肝炎病毒的项目包括 甲型肝炎病毒HA V-IgM、HA V-IgG 乙型肝炎病毒HBsAg、anti-HBs、HBeAg、anti-HBe、anti-HBc-IgM、anti-HBc 丙型肝炎病毒anti-HCV 肝炎病毒的感染是一个动态的变化过程，应结合病史资料全面综合分析和判断不同项目、不同时期的检测结果。以下关于肝炎病毒检验结果的解释，供临床医生参考、应用。 1. 甲型肝炎病毒中的HA V-IgM抗体在发病早期出现在血液中，半年后恢复正常，可以用于早期诊断急性甲型肝炎；HA V-IgG抗体是一种保护性抗体，其升高表示既往感染HA V，可用于流行病学调查。 2. 乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）：常伴随HBV同时存在，可以作为传染性的标志之一。其升高常见于乙型肝炎的潜伏期和急性期；慢性迁延性肝炎、慢性活动性肝炎、或者乙肝的携带者。（参考值0-0.05 IU/ml） 3. 乙型肝炎病毒表面抗体（anti-HBs）：一般在HBsAg转阴后出现，是保护性抗体，可以持续多年，其保护性与该抗体的浓度高低有关。其升高表示既往感染，现已恢复，或者是乙肝疫苗接种成功。（参考值0-10 mIU/ml） 4. 乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)：升高为阳性，表明患者已感染乙肝病毒，并且病毒复制活跃，传染性强；如持续升高易转为慢性肝炎。（参考值0-1 s/co） 5. 乙型肝炎病毒e抗体(anti-HBe)：降低为阳性，阳性见于HBeAg转阴的病人，表明HBV 部分被清除或抑制，病毒复制减少，传染性降低。（参考值>1 s/co） 6. 乙型肝炎病毒核心抗体（anti-HBc）：升高为阳性，anti-HBc升高且高水平，表明乙型肝炎正在感染；低水平则是既往感染，具有流行病学意义。anti-HBc-IgM是机体感染HBV后在血液中最早出现的特异性抗体，在肝炎的急性期水平升高，是诊断乙型肝炎和病毒复制活跃的指标。（参考值0-1 s/co） 7. 丙型肝炎病毒抗体（anti-HCV）：升高表示既往或现症感染HCV，是一种非保护性抗体，可用于流行病学调查感染消退；还见于假抗HCV反应性结果。（参考值0-1 s/co）
主要任务 1.对常用钻井液材料进行生物毒性分析，遴选出符合环保要求的材料。 2.通过进行生物毒性分析，对不符合环保要求的钻井液材料，如果是必备材 料而且目前又找不到相同功能的替代品，则研制新型的符合环保要求的替代品材料。 3.在遴选出的钻井液材料中，择优选用价格性能比较好的材料，通过室内钻 井液性能综合试验研究，研制出一种钻井液性能优良，能保证钻探施工顺 利进行，符合环境保护要求的新型钻井液体系。 4.现场试验两口井，通过实践检验其钻井液综合性能，整理试验数据，编写 研究报告。 一、完成了符合环保要求的钻井液材料的遴选 1．生物毒性测定方法的选择 （1）糠虾生物试验法 （2）微毒性分析法 （3）发光细菌法 通过对发光细菌法与糠虾法试验结果对比，我们发现发光细菌法的EC50值与糠虾生物试验法的LC50值之间具有一定的相关性：EC50值总是小于LC50值，实验结果见表1。这说明相同数值的EC50值和LC50值相比，EC50值比LC50值对环境的毒性污染更小，更安全可靠。
表1 四种钻井液体系的EC 50值与LC 50值比较 因此本项目采用发光细菌法，测定钻井液单剂及体系的生物毒性，用EC50(相对发光率50%时)来表征被测物的生物毒性， EC50值越大，表明被测物的生物毒性越小；EC50值越小，表明被测物的生物毒性越大。我们参照糠虾法的排放标准，以EC50＞30000ppm 作为钻井液单剂及体系允许排放的标准。并参照糠虾生物毒性试验法的生物毒性分级标准，将生物毒性等级划分为六个等级(表2)，以此作为本项目的环境可接受性评价方法和标准。 表2 生物毒性等级分类
微生物快速检测方法及应用进展【关键词】微生物快速检测 随着人们生活水平不断提高，各种安全问题越来越受到人们的重视，微生物的污染问题也相应地备受关注。在食品和环境等各个方面都有微生物污染的可能，一旦污染，微生物将大量繁殖而导致食源性疾病或环境污染甚至医院内感染。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏，导致感染的致病菌的种类越来越多，病原微生物对人类的威胁越来越大。传统的检验方法，主要包括形态检查和生化方法，其准确性、灵敏性均较高，但涉及的实验较多、操作烦琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，而且要有大量人员参与［1，2］。所以，迫切需要准确、省时、省力和省成本的快速检验方法。本文对微生物快速检测方法的进展情况及实际应用进行综述，以利于预防食源性疾病及公共卫生突发事件的发生。 1 即用型纸片法 3M公司的perrifilmTMPlate系列微生物测试片，可分别检测菌落总数、大肠菌群计数、霉菌和酵母计数［3］。由RCP Scientific Inc 公司开发上市的Regdigel系列，除上述项目外还有检测乳杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的产品［4］，这两个系列的产品与传统检测方法之间的相关性非常好。如用大肠菌群快检纸片检测餐具的表面，操作简便、快速、省料，特异性和敏感性与发酵法符合率高，已经被列为国标方法。使用时应正确掌握操作技术和判断标准，从而达到理想的检测效果［5］。美国3M公司生产的PF(Petrifilm)试纸还加入了染色
剂、显色剂，增强了菌落的目视效果，而且避免了热琼脂法不适宜受损细菌恢复的缺陷。霉菌快速检验纸片，应用于食品检验中的霉菌具有操作简便，仅需36℃培养，不需要低温设备；快速，仅需2 d就可观察结果，比现在的国家标准检验方法缩短3～5 d，大大提高了工作效率。纸片法与国标法在霉菌检出率上差异无统计学意义，且菌落典型，易判定。纸片荧光法利用细菌产生某些代谢酶或代谢产物的特点而建立的一种酶—底物反应法。只需检测食品中大肠菌群、大肠杆菌的有关酶的活性，将荧光产物在365 nm紫外光下观察即可。同时纸片可高压灭菌处理，4℃保存，简化了实验准备、操作和判断［6］。但由于它们价格昂贵，限制了在基层单位的实际应用。 2 生物化学技术 2.1 PCR技术 PCR技术采用体外酶促反应合成特异性DNA片段，再通过扩增产物来识别细菌。由于PCR灵敏度高，理论上可以检出一个细菌的拷贝基因，因此在细菌的检测中只需短时间增菌甚至不增菌，即可通过PCR进行筛选，节约了大量时间，但PCR技术也存在一些缺点：食物成分、增菌培养基成分和其他微生物DNA对Taq酶具有抑制作用，可能导致检验结果假阴性；操作过程要求严格，微量的外源性DNA进入PCR后可以引起无限放大产生假阳性结果，扩增过程中有一定的装配误差，会对结果产生影响。由于以上原因，PCR技术对操作者的自身素质要求很高，对于基层单位而言难以做到。短时间内也不会有经济效益和社会效益，因此影响了这项技术在基层的应用。 2.2 基因探针技术基因探针技术利用具有同源性序列的核酸单
免疫学技术的迅速发展对精度的要求越来越高，一般的酶免检测技术已逐渐无法适应这种形势的需要。现今发展的主流已不再是用放射性同位素标记的测定方法(避免污染环境及对人体损害)，而是转向于能在任何地方操作的快速均相和固相测定，最终趋向于能够枪测到皮克或10负18摩尔级的、非同位素的、自动或半自动的实验室测定技术，发光免疫分析技术顺应了这一潮流，开创了免疫诊断的新纪元。 发光免疫分析是一种灵敏度高、特异性强、检测快速及无放射危害的分析技术。70年代末以来得到了迅速发展，目前在国际上已经实现商品化和产业化的发光免疫分析产品，基本上可以分为：化学发光、时间分辨荧光(也称时间延迟光致发光)、电化学发光(也称场致发光和电致发光)几种。 1、化学发光 化学发光是指在化学反应过程中发出可见光的现象。通常是指有些化合物不经紫外光或可见光照射，通过吸收化学能(主要为氧化还原反应)，从基态激发至激发态。退激时通过跃迁(或将激发能转移至受体分子上)，释放能量产生光子，以光形式放出能量从而导致的发光现象。其主要特点为消耗发光剂。同时量子效率相对较低。 1.1 按化学反应类型分类：可分为酶促化学发光和非酶促化学发光两类。其中酶促化学发光主要包括辣根过氧化物酶(HRP)系统、碱性磷酸酶 (ALP)系统、黄嘌呤氧化酶系统等。酶促发光的共同特点为发光过程中作为标记物的酶基本不被消耗，而反应体系中发光剂充分过
最，因此发光信号强而稳定，且发光时间较长。因此可采用速率法测量，故检测方式简单、成本较低。酶促反应的主要缺点为工作曲线可能随时间漂移，而且低端斜率容易呈非线性下移。而非酶促化学发光包括吖啶酯系统、草酸酯系统、三价铁一鲁米诺系统等。非酶促发光的共同特点为发光过程中标记物被消耗，同时作为标记物的发光剂是发光反应的瓶颈，即含量总是相对不足，因此发光信号持续时间较短；如果直接在免疫反应杯中启动发光反应，由于发光剂被很快消耗，故只能进行一次性测量。所以重复性较差。为降低检测成本并实现重复测量，目前普遍采用原位进样加流动池的时间积分测量方式。因此仪器成本及维护费用较高，而且反复使用的流动池可能导致交叉污染；并目冲洗或进样中产生的气泡也会干扰测定；同时繁琐冗长的冲洗过程也会成为提高检测效率的瓶颈。另外，使用磁性或非磁性微粒时，强烈的散射吸收作用也会降低灵敏度。 1.2 按发光持续时间分类：可分为闪光和辉光两类，闪光型发光时间在数秒内，如吖啶酯系统。其检测方式一般采用原位进样和时间积分法测量，即在检测器部位加装进样器，并保证加入发光剂和检测2个过程同步进行；同时以整个发光信号峰的面积为发光强度。而辉光型发光时间在数分钟至数十分钟以上，如HRP一鲁米诺系统、ALP—AMPPD 系统、黄嘌呤氧化酶-鲁米诺系统等。其信号检测无需原位进样，一般以速率法测量，即在发光信号相对稳定的区域任意点测量单位时间的发光强度。 测量化学发光反应的光强度，求得某些化学物质和生物物质的
化学发光及生物发光的原理及其应用 第一部分概述 化学发光 (ChemiLuminescence ，简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光，必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。化学发光体系用化学式表示为： 依据供能反应的特点，可将化学发光分析法分为： 1 ）普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反 应 ) ； 2 ）生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应；简称 BCL) ； 3 ）电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应，简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为： 1 ）直接测定 CL 分析法； 2 ）偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合，测定体系中某一组份； 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ； 4 ）固相、气相、掖相 CL 。分析法； 5 ）酵联免疫 CL 分析法等。 化学发光的系统一般可以表示为：
在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ，其直接影响到仪器的检测性能，其最高检测极限为 10 － 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样，但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系，而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形，以峰高定量，也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ，故进样与记录时差短，分析速度快。 第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤，即化学激发和发光。因此，一个化学反应要成为发光反应，必须满足两个条件：第一：反应必须提供足够的能量（ 170 ～ 300KJ ／ mol ），第二，这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态，并且有足够的荧光量子产率。到目前为止，所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应，且多为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。对于一般化学发光反应，值约为 10 － 6 ，较典型的发光剂，如鲁米诺，发光效率可达 0 . 01 ，发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4—氨基已基—N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化学发光反应，辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢，但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子，在很大浓度范围内，金属离子浓度与发光强度成正比，从而可进行某些金属离子的化学发光分析，利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物，达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用，测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上，经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后，再在碱性条件下与过氧化氢－铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法，如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后，通过离心和透析分离，然后进行化学发光检测。此外应用的还有 N 2(B2 羧基丙酰基 ) 异鲁米诺，并对其性能进行了研究。
微生物检验实习心得体会3篇 生物界的微生物达几万种，大多数对人类有益，只有一少部份能致病。下面是微生物检验实习心得，希望大家喜欢。 篇一：微生物检验实习心得 病原微生物检验实习总结大三下学期5月份，我们动物检疫专业的同学开始了为期2个多月的教学实习，在众多辅导老师之中，我有幸跟随我校动物科技学院预防系的赵宇军教授进行学习。实习的地点就在我校动科楼的微生物实验室，以前我们曾在这里上过实验课，所以并不陌生。这次大家来到实验室为自行选择课题进行相关实验操作，我对世界闻名的金黄色葡萄球菌非常感兴趣，在老师的带领下进行了相关食物中该菌的检验。下面我们来回顾这次实验。 一、实验内容：食品中金黄葡萄球菌的检测方法实验内容金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌，也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一。本菌广泛分布于自然界，如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中，也经常有本菌存在。据报导，在正常人群中的带菌率可达30%~80%，其中皮肤带菌率为8~22%，鼻腔和咽喉部等上呼吸道的带菌率在40~50%以上，因此其可通过各种途径和方式，尤其是经工作人员的手和上呼吸道而污染食品。由于致病金黄葡萄球菌能产生肠毒素，故一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒。由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒，在世界各国都极为普遍。特别是在北美及欧洲等地区发病率更高。在上述这些国家中，每年有金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例，仅次于沙门氏菌，而在细菌性食物中毒病例排到第2~3位，有此而造成的经济损失也相当惨重，在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例也时有报导，所以目前世界各国都把金黄色葡萄球菌列为食品卫生的法定检测项目。我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家标准GB.4789-10-84及检验检疫系统行业标准SN.0172-92作为依据。 整个检测过程获得最终结果须时5天左右，既费时又费力，并造成货物积压，也影响货物的及时出运，并使货主的仓储成本提高，造成较大的经济损失。多年来很多食品微生物实验室都在探索和寻找一些准确性高，并快速的检测方法，最近我们分别从美国3M公司和法国生物梅里埃公司获得两种快速检测致病性金黄色葡萄球菌的培养基，其名称为：①PetrifilmRS