小鼠microRNA-125b过表达载体构建
目录
摘要 (1)
Abstract (3)
1 前言 (4)
2 材料与方法 (5)
2.1 材料 (5)
2.2主要试剂与仪器 (5)
2.2.1主要试剂 (5)
2.2.2主要仪器 (5)
2.3 方法 (6)
2.3.1质粒提取 (6)
2.3.2鼠尾基因组DNA提取 (6)
2.3.3 PCR引物设计与合成 (7)
2.3.4 PCR扩增 (7)
2.3.5琼脂糖凝胶电泳检测 (7)
2.3.6 DNA产物纯化及回收 (8)
2.3.7酶切及鉴定 (8)
2.3.8载体构建 (9)
3 结果与分析 (9)
4 讨论 (11)
5 结论 (11)
6 参考文献 (12)
致谢 (14)
摘要
NPC1是一种以溶酶体内脂质异常沉积为特征的中枢神经系统退行性疾病，迄今为止对NPC1的发病机制仍得不到合理的解释。研究发现miRNA对tau蛋白的调控和神经元存活至关重要，通过调节蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶来调节tau蛋白磷酸化水平。Tau 蛋白过度磷酸化损伤神经细胞功能和结构，如过度磷酸化使Tau 蛋白结合微管能力降低[1]，Tau 蛋白在神经元内聚积导致神经元轴突转运障碍[2]、乙酰胆碱释放减少[3]、蛋白酶体活性抑制[4-7]，这些功能和结构的改变可能导致神经元呈慢性进行性变性构建miR-125b表达载体，从tau蛋白磷酸化调控的研究入手，系统地研究参与tau蛋白磷酸化调控的miR-125b 的靶基因，阐释其中的分子作用机制，为tau蛋白异常病变引起的神经退行性疾病的研究与防治提供新的思路。
本实验目的：构建小鼠microRNA-125b（miR-125b）过表达载体。
方法：参考小鼠miR-125b前体序列的PCR扩增引物，重新设计限制性内切酶位点为Nhe I和EcoR I，PCR扩增，然后将目的片段和pcDNA3.1-EGFP质粒进行双酶切鉴定，使用T4 DNA连接酶进行连接，转化DH5α感受态细胞，挑取重组阳性克隆，对重组质粒进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析。
结果：菌液PCR筛选鉴定出正确的miR-125b过表达载体，测序分析证实克隆的基因序列正确。
结论：成功构建小鼠miR-125b的真核表达载体，为进一步研究miR-125b在C1型尼曼-匹克病中调控tau蛋白磷酸化的作用机制奠定实验基础。
关键词：microRNA-125b；pcDNA3.1-EGFP；过表达载体
Construction of microRNA-125b overexpression
vector in mouse
Abstract
Objective To construct the microRNA-125b(miR-125b) overexpression vector in mouse. Methods PCR amplification primers of miR-125b precursor sequence referred to article, we redesigned restriction enzymes for Nhe I and EcoR I. After being confirmed by PCR amplification, the target fragment and pcDNA3.1-EGFP plasmid were identified by double digestion., and connected using T4 DNA ligase. Then, it was transforme d in DH5α competent cells. Finally, the recombinant plasmid were picked, and identified by double digestion, agarose gel electrophoresis and DNA sequencing. Results miR-125b precursor sequence was successfully inserted into pcDNA3.1-EGFP plasmid by identification of DNA sequencing. Conclusion The eukaryotic expression vector of mouse miR-125b has been successfully constructed, which provides a foundation for further studying the mechanism of tau phosphorylation regulated by miR-125b in Niemann-Pick type C1 disease.
Key words:
microRNA-125b, pcDNA3.1-EGFP, Overexpression vector
一、前言
microRNA（miRNA，微小RNA）是一类长约20-24个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA，进化上具有高度保守性，广泛存在于真核生物中。成熟miRNA能够与靶基因3′UTR以完全互补或不完全互补的形式结合，诱导靶mRNA降解或抑制蛋白翻译，导致相应蛋白质合成缺失或减少，从而在转录水平、转录后水平、表观遗传水平等调控基因表达，参与生命过程中一系列的重要进程[1]。到目前为止，在人类和小鼠中分别发现超过1000和750种miRNA，其中一些主要在大脑中表达[2-4]，人类有接近1/3的基因受到miRNA的调控[5]。近年来的大量研究表明，miRNA的异常表达广泛参与了肿瘤、心血管疾病和糖尿病等重大疾病的发生与发展。同时，miRNA也参与了神经系统生长发育和生理功能的调控，其表达异常与神经退行性疾病的发生发展相关[6]。
C1型尼曼-匹克病（Niemann-Pick disease type C1, NPC1）是一种以溶酶体内脂质异常沉积为特征的中枢神经系统退行性疾病，迄今为止对NPC1的发病机制仍得不到合理的解释[7,8]。研究表明，tau蛋白和Aβ（Amyloid beta，β-淀粉样蛋白）在神经退行性病变中紧密联系，存在协同作用。tau蛋白在调节轴突运输功能的同时，亦参与Aβ的致病机制，加剧Aβ导致的神经元毒性、微管丢失、神经炎症变化等，进而导致神经变性和学习记忆障碍，揭示tau蛋白在神经元细胞变性的发生发展中起重要作用[9,10]。目前，虽然对tau蛋白参与神经退行性疾病的具体机理尚不明确，但已证实，抑制神经元tau蛋白过度磷酸化可以有效缓解神经退行性病变的发生和发展[11]。
miRNA对tau蛋白磷酸化的调控和神经元存活至关重要，通过调节蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶的表达来调控tau蛋白磷酸化水平。miR-125b在阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD）中的发病机理是促进tau蛋白过度磷酸化。miR-125b超表达会引起tau 蛋白过度磷酸化，分别上调蛋白激酶p35、cdk5和p44/42-MAPK和下调蛋白磷酸酯酶DUSP6、PPP1CA及抗凋亡因子Bcl-W的表达。抑制蛋白磷酸酯酶的表达会导致tau 蛋白过度磷酸化，超表达PPP1CA和Bcl-W会阻止miR-125b引起的过度磷酸化，证实蛋白磷酸酯酶可以调节miR-125b对tau蛋白的影响。然而，抑制神经元中miR-125b 的表达会降低tau蛋白过度磷酸化和蛋白激酶活性。另外，在小鼠海马内注射miR-125b 会损害联想学习以及下调DUSP6、PPP1CA和Bcl-W表达，并增强tau蛋白过度磷酸
化[12]。
本研究构建了小鼠miR-125b的真核过表达载体，为进一步研究miR-125b在C1型尼曼-匹克病中调控tau蛋白磷酸化的作用机制奠定实验基础。
二、材料与方法
2.1 材料
BALB/c小鼠、大肠杆菌DH5α感受态细胞、pcDNA3.1-EGFP质粒均由实验室保存。
2.2主要试剂与仪器
2.2.1主要试剂
PurePlasmid Mini Kit、2×Es Taq MsterMix（康为世纪）、DNA Fragment Purification kit（TaKaRa）、10×quick cut Buffer、10×quick cut Green Buffer、QuickCutTM Nhe I、QuickCutTM EcoR I、ddH2O、10×T4 DNA Ligase、10×T4 DNA Ligase Buffer、LB液体培养基、LB固体培养基、DNA Marker 2000bp、水合氯醛、琼脂糖、EB。
2.2.2主要仪器
本研究所用主要仪器的名称和生产厂家见表1。
表1 主要实验仪器
仪器生产厂家
96孔梯度PCR仪ABI公司
水浴锅北京光明医疗仪器有限公司
高压灭菌锅上海申安医疗器械场
恒温摇菌摇床江苏海门其林医用仪器厂
台式高速冷冻离心机SIGMA
Nanodrop 2000分光光度计Thermo
单人双面净化作台苏州净化设备有限公司
电子天平上海精天电子
电泳仪北京市六一仪器厂
凝胶成像系统Uvitec公司
10μl微量移液枪Eppendorf
100μl微量移液枪Eppendorf
1000μl微量移液枪Eppendorf
电热恒温培养箱北京中兴伟业仪器有限公司
气浴恒温振荡器上海比朗仪器有限公司
低温恒温槽上海平轩科学仪器有限公司
2.3 方法
2.3.1质粒提取
1、将3ml的pcDNA3.1-EGFP菌液加入到1.5ml离心管中，6000rpm离心5min，弃上清。
2、向沉淀中加入250μl Buffer P1（已加入RNase A），悬浮沉淀。
3、向离心管中加入250μl Buffer P2，缓慢的上下颠倒混匀，直到溶液变得清亮粘稠。
4、其后加入350μl Buffer N3，温和的上下颠倒，直至出现白色絮状沉淀后，12000rpm 离心15min。
5、离心后的产物弃上清，移入已装收集管的吸附柱中12000rpm离心1min，弃废液。随后加入500μl Buffer PB 12000rpm离心1min，再加入750μl Buffer PW12000rpm离心1min，弃废液，室温晾干，吸附柱至于新的离心管中，向膜上加入100μl Buffer EB，放置3min 12000rpm离心1min。
6、1%的胶进行电泳。
2.3.2鼠尾基因组DNA提取
1、取5mm鼠尾切成小块置于1.5ml离心管中，加入180μl Buffer GTL。
2、向离心管中加入20μl Proteinase K，振荡使样品彻底混匀。
3、向离心管中加入200μl BufferGL，振荡充分混匀，加入200μl无水乙醇，振荡充分混匀。
4、将上一步溶液全部加入已放入Collection Tube的Spin Column DM中，8000rpm离心1min，弃废液。
5、向Spin Column DM中加入500μl已加入无水乙醇的Buffer GW1，8000rpm离心1min，弃废液。
6、向Spin Column DM中加入500μl已加入无水乙醇的Buffer GW2，14000rpm离心1min，弃废液。
7、12000rpm离心1min，置于室温放置数分钟彻底晾干吸附材料中残余的BufferGW2。
8、将吸附柱转入一个新的离心管中，向吸附膜的中间悬空加入200μl灭菌水。
9、室温放置5min，8000rpm离心1min，将溶液收集到离心管中。
2.3.3 PCR引物设计与合成
参考小鼠miR-125b慢病毒过表达载体构建的引物[13]，重新设计限制性内切酶位点为Nhe I和EcoR I，引入保护碱基。引物序列为：Forward，5’-GT GCTAGC ACT GGA CCA CCT GTT TGC-3’。Reverse，5’-CG GAATTC AAG GGT GTA TTA CCA TCA CTT C-3’（划线部分为酶切位点），送到金唯智公司合成。
2.3.4 PCR扩增
1、反应体系：
2×Es Taq MsterMix 12.5μl
ddH2O 9.5μl
上游引物1μl
下游引物1μl
DNA模板1μl
Total 25μl
2、反应条件：
预变性：95o C 10min
变性：95o C 30s
退火：64o C 30s
延伸：72o30s
终延伸：72o C 10min
2.3.5琼脂糖凝胶电泳检测
配置1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增的PCR产物。
1、溶胶：称取0.45g琼脂糖，加入25.5ml的1×TAE电泳缓冲液，将三角瓶放入微波炉内加热溶解。冷却到60°C加入EB，轻轻摇晃混匀。
2、制胶：水平放置凝胶托盘，放入梳子形成加样孔，将琼脂糖溶液倒入，室温下完全凝结。取下梳子，把凝胶放在有电泳缓冲液的电泳槽内。
3、加样：将混合好上样缓冲液的DNA样品按顺序加入DOA加样孔内，最后加上2000bp的DNA marker。
4、电泳：盖上电泳槽盖，接好电极插头。电泳条件：120V，30min。
5、成像：取出凝胶放到凝胶成像系统中进行观察和照相。
2.3.6 DNA产物纯化及回收
1、将100μl的DB Buffer加入到PCR反应产物中。
2、将与DB Buffer 混合均匀的溶液置于已放入Collection Tube的Spin Column，12000rpm离心1min，弃上清。
3、再向其中加入500μl Rinse A，12000rpm离心1min，弃上清。
4、然后向管中加入700μl Rinse B，12000rpm 离心1min，弃上清后再离心1min。
5、将Spin Column置于新的1.5ml的新离心管中，向膜上加入25μl的灭菌水后静置2min，12000rpm离心1min，进行洗脱DNA。
2.3.7酶切及鉴定
1、质粒酶切，37°C，10min
质粒1μl
10×quickcut Buffer 2.5μl
10×quickcut Green Buffer 2.5μl
QuickCutTM Nhe I 1μl
QuickCutTM EcoR I 1μl
ddH2O 17μl
2、电泳鉴定
同2.3.5。
3、目的基因酶切，37°C，10min
DNA 20μl
10×quickcut Buffer 3μl
10×quickcut Green Buffer 3μl
QuickCutTM Nhe I 1μl
QuickCutTM EcoR I 1μl
ddH2O 2μl
4、电泳鉴定
同2.3.5。
中山大学09秋专科班 姓名：周启康 班 级：计算机科学 指导老师：吴红 设计时间：2011年8月30日
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4．多功能椅子使用功能设计 2.2拟解决的主要问题 1．现有椅子设计的设计方法、设计理念、设计原则； 2．多功能椅子设计方案的确定，包括应具有的功能，结构设计，材料选择； 3．设计的椅子在功能、外形、制造、结构等方面的可行性； 4．多功能椅子制造方法、使用方法、使用寿命。 三、研究的方法与技术路线 3.1研究的方法 1．文献研究法：就椅子方面的文献进行查阅，对现有椅子的种类、外观、功能、使用性能等内容进行分类整理，把握现有椅子设计方向、设计理念、设计方法，从而找到设计方向； 2．调查研究法：通过市场调查等方式，把握不同种类椅子的设计方式，结构原理，寻找功能、结构等优缺点； 3．实验研究方法：确定方案时或实物制作后，对设计的椅子的受力、强度等进行实验检验，确定方案可行性。 3.2技术路线 在完成本设计任务时，将按以下步骤进行： 1．通过查找资料、调查研究等方法，整理总结现有椅子设计的特点、方法、理念等； 2．在研究现有椅子基础上，就功能、使用场合、使用人群等提出多功能椅子的设计方向； 3．提出多种设计方案，对多种设计方案进行实验、调查、假设等方法，确定最佳设计方案； 4．设计多功能椅子扶手、座面、靠背等结构，计算尺寸，确定选用材料； 5．绘制多功能逃生椅造型图、装配图及零件图；
表达载体的构建方法及步骤 令狐采学 一、载体的选择及如何阅读质粒图谱 目前，载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA 是一种新的非病毒转基因载体。 一个合格质粒的组成要素： （1）复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA 分子中只有一个复制起始点。而 真核生物DNA 分子有多个复制起始位点。 （2）抗生素抗性基因可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+ （3）多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段 （4）P/E 启动子/增强子 （5）Terms 终止信号 （6）加poly（A）信号可以起到稳定mRNA 作用 选择载体主要依据构建的目的，同时要考虑载体中应有合适的限制酶切位点。如果构建的目 的是要表达一个特定的基因，则要选择合适的表达载体。 载体选择主要考虑下述3点： 【1】构建DNA 重组体的目的，克隆扩增/基因表达，选择合适的克隆载体/表达载体。 【2】.载体的类型：
（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb 选质粒。 （2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。 （3）对原核表达载体应该注意：选择合适的启动子及相应的受体菌，用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。 【3】载体MCS 中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不能产生阅读框架错位。 综上所述，选用质粒（最常用）做载体的5点要求： （1）选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载 体）； （2）一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。 （3）必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地； （4）必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。 （5）满足自己的实验需求，是否需要包装病毒，是否需要加入荧光标记，是否需要加入标签蛋白，是否需要真核抗性（如Puro、G418）等等。 无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得线性载体分子，以便于与
校徽 毕业设计（论文）题目：多功能办公椅设计 学院： 专业： 学生姓名： 学号： 指导教师： 2014 年 4 月 3 日
目录 目录 ............................................................................................................................................. - 2 - 中文摘要...................................................................................................................................... - 1 - Abstract...................................................................................................................................... - 1 - 题目要求...................................................................................................................................... - 2 - 第1章绪论............................................................................................................................ - 3 - 1.1 多功能椅设计背景和意义........................................................................................ - 3 - 1.2 多功能椅的创新点.................................................................................................... - 5 - 1.3 主要内容.................................................................................................................... - 5 - 第2章多功能椅结构设计........................................................................................................ - 7 - 2.1 多功能椅的基本结构................................................................................................ - 7 - 2.2 多功能椅的休息功能基本结构................................................................................ - 8 - 2.3 多功能椅的健身功能基本结构................................................................................ - 8 - 第3章多功能椅Solidworks仿真实现................................................................................ - 10 - 3.1 基于Solidworks软件的多功能椅........................................................................ - 10 - 3.2 多功能椅调整位置的Solidworks实现................................................................ - 12 - 3.3 多功能椅按摩功能的Solidworks实现................................................................ - 13 - 3.4 多功能椅健身功能的Solidworks实现................................................................ - 13 - 第4章总结.............................................................................................................................. - 15 - 4.1 多功能办公椅设计实现.......................................................................................... - 15 - 4.2 推广实现.................................................................................................................. - 15 - 致谢 ........................................................................................................................................... - 16 - 参考文献.................................................................................................................................... - 17 -
毕业论文管理系统设计研究 2020年4月
毕业论文管理系统设计研究本文关键词：管理系统，毕业论文，研究，设计 毕业论文管理系统设计研究本文简介：毕业论文管理工作现状当前，大多数的高校的毕业论文管理状况如下。（1）学生无法及时准确选题选题初期的大多数学生不能在前期及时、清晰且全面的了解导师的课题研究方向，也不能准确的选择合适的题目，导致了学生在选题时仅考虑到个人兴趣，盲目的进行选题，未根据自己个人能力做出正确的选择，一些学生可能会错失选题的时 毕业论文管理系统设计研究本文内容： 毕业论文管理工作现状 当前，大多数的高校的毕业论文管理状况如下。（1）学生无法及时准确选题选题初期的大多数学生不能在前期及时、清晰且全面的了解导师的课题研究方向，也不能准确的选择合适的题目，导致了学生在选题时仅考虑到个人兴趣，盲目的进行选题，未根据自己个人能力做出正确的选择，一些学生可能会错失选题的时间和机会。（2）论文各阶段需要提交大量文件，师生无法及时交流首先，学生必须先提交论
文开题报告，指导教师同意开题后，方可继续完成论文。然后，需要在一段时间内将完成论文的阶段性成果提交给导师，方便导师及时了解学生论文完成的进度，以便导师督促学生及时完成论文。如今，很多大学的论文指导方式仍旧以纸质文件进行师生之间的交流，在这种情况下，一会导致资源浪费，也会由于时间和空间限制，导致沟通不畅。（3）统计论文选题工作复杂在毕业论文管理工作中，教师的工作量较大，其中，有很多重复的工作量，处于管理工作的各级人员需要统计学生选题状况、毕业论文完成状态以及答辩成绩等信息，在这样大量的工作状态下，就会产生失误。而毕业论文对于学生来也十分重要，关系能否毕业问题，责任巨大，不容有失。毕业论文管理系统设计意义毕业论文管理系统的最大优势就是学生可以远程在陷上选题，将复杂的工作流程简单化，也会减轻毕业论文指导教师工作中不必要的压力，具有很强的现实意义，具体可以表现为以下功能。（1）缩短毕业论文题目审核时间审核毕业论文题目是为了防止出现选题过大、不切实际或与专业特点不相关的现象。各教学单位在前期的主要任务就是审核已提交的论文题目，若论文题目不合条例，审核不通过，需要单位给指导教师反馈是否通过的信息，之后审核过的信息，需要由教师通知给学生，学生需要结合实际情况以及自身的兴趣选择毕设题目，督促学生积极与指导教师沟通。通过系统可以在线随时随地审核，
一、稀释引物 1、4℃，15min、13000转离心（先等离心机降温） 2、根据OD值加DD水。 3、静置30min（冰上） 4、准备1.5毫升EP管，并加90ulDD水。 5、向EP管中加10ul引物，震荡离心，-20℃保存。 二、跑MIX检测引物（20ul体系）、 上引物0.8ul 下引物0.8ul Mix 10ul DNA（日本晴）1ul DD水7.4ul 三跑高保真酶（50ul体系） DNAorCDNA 2ul 上引物2ul 下引物2ul 5*buffer 10ul dNTPs 5ul DD水28ul Pfu（最后加）1ul 四胶回收流程 1、在紫外线下切胶，用牙签装入2ml的EP管中。 2、按量加XP2，放在55℃水浴锅中10min，每2min摇匀1次，涡旋，短离。 3、将液体冷却到室温，转移到平衡住中，离心10000转，1min30s，倒掉滤液。 4、加入xp2 300ul，离心10000r，1min30s，倒掉滤液。 5、加入spw700ul，离心10000r，1min，倒掉滤液（重复一次） 6、空转2min，13000r，之后换1.5mlEP管。 7、套上保鲜膜放入37℃烘箱中，30min。 8、加入DD水10ul，静置2min，离心2min，13000r，重复3次，-20℃保存。 五、胶回收产物检测（10ul）体系 上引物0.4ul 下引物0.4ul Mix 5ul 回收产物1ul DD水 3.2ul 六、构建blunt cloning 载体（克隆载体）（4ul 体系） 胶回收产物 3.5ul Blunt cloning 0.5ul 混匀后，PCR：25℃15min 盖子温度50℃
现代时尚餐饮空间 【摘要】由于当代人们工作节奏快，压力大，紧张度高，因此创造一个轻松，舒适的餐饮环境很 重要，而考虑到实际的消费人群，我还加入了时尚和个性。本案采用了很多现代元素，透过灯光，色彩及材料的运用使其自然地交融，整个环境很和谐。强调顾客进入空间充满食欲从而达到轻松，舒适，优雅自然地体验效果。本案装饰设计突出现代、高效、简洁的特点,在设计环节中，我们将设计注入更多的人性需求元素,采用现代人机学理念布局，保证人体充分活动的基础上,合理利用空间。本案的核心价值观是：视觉和味觉的盛宴，冷峻清凉的背景下如繁星一般喧闹的沸腾火锅----中西合璧、现代与古典的交融、阳春白雪和下里巴人的合奏。 【关键词】现代、舒适、温馨 【正文】 设计的整个过程就是把各种细微的外界事物和感受，组织成明确的概念和艺术形式，从而构筑满足于人类情感和行为需求的物化世界。设计的全部实践活动的特点就是使知识和感情条理化，这种实践活动最终归结于艺术的形式美学系统与科学的理论系统。设计是有温度的，当它作为一个构思漂浮在设计师脑海中的时候，它就是有温度的。经过一番思虑，设计品随之诞生，它带着人本身的激情和兴奋，面对这个世界的一双双眼睛。它或许是件小物品，当有人喜欢它，每天来这里，这个设计就变得温情柔和。打造个性的餐饮空间，可利用橙色物品，无需大面积铺排，橙色的色调非常明艳，用灯具做点缀即可，即增强了食欲，又能产生很好的装饰效果。 因考虑到自助火锅属于中低档消费层次，一般人均消费在30-80元左右，前来就餐顾客多属于中低层收入阶层，厅堂装修布置不宜过于豪华，因整洁大方。因此因本着装饰格调统一，风格明快，环境档次中等的原则，营造一个温馨，简洁的用餐环境为目标。地面部分采用防滑地板砖拼贴，吊顶采用纸面防火，边缘部分两级吊灯造型，暗藏温反射光源，大厅采用吸顶及大量悬挂吊灯，表面卦膏处理，墙裙部分采用普通水曲板聚氨酯透明漆面处理，这样的厅堂布置便于打扫。 还要有合理的布局;餐桌分为长条桌，和短条桌，长条桌适合10-20人进餐，短条桌适合2-4人进餐。长条桌适于居中摆放，短条桌适于靠墙边，靠窗边，可充分利用面积。长条桌和短条桌的数量因根据厅堂结构做出适宜地搭配。每张餐桌上空应设置抽油烟气罩，通过装饰处理加以美化，很好的处理存放气罐，管道设备和餐桌的关系。餐厅用的椅子要以餐厅的整体风格相一致，一般要求椅子灵巧便于搬动，椅子和椅子能叠放在一起，具收纳功能，节省空间，这个餐厅选用的是木椅，环保，舒适感强，亲近人。长条桌周围摆放的则是相对较高的椅子，给人不同的感觉和感受，这样更有选择性。象牙白色的餐桌采用木质材料的座椅，使得白色更显得高贵，有档次。同色系的餐具系列，个个都是经得起推敲的艺术单品。 餐厅的通道； （一）、对自助火锅市场的影响因素： 1、经济发展对自助火锅的影响，其中包括了消费者对自助火锅需求的增加、现有火锅存在着各档人次火锅店的结构性矛盾、社会发展和国家政策措施为餐饮行业发展起着巨大的推动作用、客观环境的变化和消费的不稳定性等几大方面的因素。 2、传统因素对自助火锅的影响，其中包含了火锅的历史性、广泛性、文化性、独特性等。 3、周边环境对自助火锅的影响，包括政策环境，如开办地的治安状况、职能部门的效率等；基础设施，如道路交通、停车位置、水电气供应、通信网络、采购途径、消费人群、金融、卫生、劳动等与经营密切相关的配套设施；措施优惠，如税务、各类收费、租金、人才引进等方面是否有优惠政策。 （二）、客源的调查分析：
家具设计 摘要：家具是人类维持日常生活，从事生产实践和开展社会活动必不可缺少的物质器具。家具的历史可以说同人类的历史一样悠久，它随着社会的进步而不断发展，反映了不同时代人类的生活和生产力水平，融科学、技术、材料、文化和艺术于一体。家具除了是一种具有实用功能的物品外，更是一种具有丰富文化形态的艺术品。几千年来，家具的设计和建筑、雕塑、绘画等造型艺术的形式与风格的发展同步，成为人类文化艺术的一个重要组成部分。所以，家具的发展进程，不仅反映了人类物质文明的发展，也显示了人类精神文明的进步。现在的家具设计不仅需要满足现代生活和工作的使用要求，也要满足人们精神上的需求。创新设计是家具设计必经的发展趋势。 关键词：家具设计时尚元素创新艺术现代 1.家具的概念 家具，从字面上理解是指人在室内生活和工作中所使用的一种器具，是人们最熟悉的日常用品之一，是一种以满足生活需要为目的，追求视觉与文化理想的共同产物，人们工作、生活和学习都离不开它。 家具是与不同历史时代人类的生活、生产力水平、地理条件及观念意识等综合因素相结合的产物。从原始人用以休憩的一座土堆到现代的各类家具，家具历史与人类历史同样悠久。从一定意义上来说，家具可以作为某一国家或地域在某一历史时期社会生产力发展水平的标志；是当时当地人们生存状态、生活方式的缩影及文化的显现，可见，家具具有丰富的文化内涵，家具的发展历程，不仅反应了人类物质文明的发展，也显示了人类精神文明的进步。 2.家具设计中创新设计的运用 在近几年家具设计中，有趣味、益智、游戏性等多种设计手法频繁的出现在儿童和青少年的家具中，而且这种设计手法渐渐的融入普通家具设计中。这样的设计出奇不意，给人更多的吸引性、奇趣性的同时，不仅给人们的生活增添了更多的情趣，而且能够体现出独特的个性情趣，透露出一种不同的、丰富的、充满情感色彩的文化品位。 2.1形态的创新设计 北欧家具设计就是具人情味最典型的代表之一如图（1-1）。它“以人为本”设计思想，既满足了现代生活方式对家具多样化的要求，又敏于捕捉“家具人情化”的脉搏，追求适合人体结构的造型的同时，重视人在视觉感知上对产品的第一印象，让家具富有生命力。因此受到世界各地的追捧和喜爱如图（1-2）。如丹麦当代著名女设计师，南娜?迪设计的著名的蝴蝶椅如图（1-3），而多层夹板儿童家具等都是非常的成功案例。她在注重新材料、新技术的同时，让家具使用起来富有人情般的亲切 图（1-1）图（1-2）图（1-3）
摘要 随着科技的飞速发展，计算机已经广泛的应用于各个领域之中，而且日趋普及。在医学领域内，计算机的应用已经十分广泛，各种智能诊断设备都与计算机紧密结合在一起，主要应用于两个方面：一是医疗设备智能化，以硬件为主。另一种是医院信息管理系统（HIS）的软件建设，以提高医院的现代化管理形象。因此，本次毕业设计的主要任务是基于B/S模式，即Browser/Server（浏览器/服务器)结构，对C/S结构的一种变化或者改进的结构。在这种结构下，用户界面完全通过WWW浏览器实现.B/S结构利用不断成熟和普及的浏览器技术实现原来需要复杂专用软件才能实现的强大功能,并节约了开发成本,是一种全新的软件系统构造技术。利用JSP语句结合Microsoft SQL Server 2000后台数据库开发“医院信息管理系统”，可应用于各大中小型医院。 本系统包括药品管理、挂号管理、开药管理和药房管理四个部分，可以实现药品、患者的录入、删除、修改和查询等功能.但由于时间有限，系统部分功能不够完善，还有待于进一步修改和完善使之功能更强大，操作更简捷，以便更好的应用于实际中去. 关键词：MIS; JSP ；HIS；SQL Server 2000
ABSTRACT With development at full speed of science and technology, already extensive to apply all field computer have, In the medical science realm, the application of the calculator is very extensive already，various intelligence examines a patient equipmentses all is close with calculator to combine together, mainly is apply in two JSPects:Turn while being the medical treatment equipments intelligence, regard hardware as principle.Another a kind of software construction that is the hospital information management system（HIS），with the exaltation hospital of modern manage image. So, the main task of this graduation project is namely structure of Browser/Server，because of B/S mode，a kind of change or improved structure to C/S structure. Under the structure，user interface realize by browser through 。B/S structure makes use of ripe the strong function that needed complicated special—purpose software to realize originally constantly and browser technology popularized to realize，having economized the development cost, it is a kind of brand—new software system that constructs technology。Utilize JSP sentence to combine “administrative system of hospital “of Microsoft SQL Server 2000 backstage database development，can apply to every large medium and small—scale dining room。 This system includes a system management，doctor's management，sufferer to manage to manage four parts and medical history，can carry out a doctor，nurse to record to go into,the delete,modification and search etc.s function. But because time is limited，some functions systems are not perfect enough，it makes it with better function to wait revising and perfecting further，operate simple and more direct, in order to apply to reality better. Keyword：MIS, JSP, HIS, SQL Server 2000