不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征
摘要目的探讨不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征。方法80例乳腺癌患者為研究对象，分析不同年龄段患者的病理特征。结果≥65岁患者人表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性率、浸润性导管癌率、孕激动素受体（PR）阳性率、临床分期Ⅰ期率均低于0.05）。结论0.05）。
3 讨论
近年来，受女性生存压力增大、环境污染加剧等多因素影响，乳腺癌人群逐年增多，且呈年轻化趋势。乳腺癌发病率最高的年龄段在36～50岁，51～60岁居其次，最低年龄段为≥65岁，与报道中亚洲高发年龄符合。
研究示，病理类型是重要的对乳腺癌患者预后造成影响的因素，有文献指出，浸润性导管癌为最常见乳腺癌类型，本次研究中共61例，占76.3%，与文献报道的75%～84%一致。浸润性导管癌在≥65岁患者中发病率低于<65岁患者，但小叶癌在此年龄段发病率却成高于<65岁患者显示，相较浸润性导管癌，小叶癌有相对理想的预后[2，3]。就病理特征而言，年轻乳腺癌患者预后差，侵袭性强，年轻乳腺癌患者以浸润性癌为主，且多为浸润性导管癌，有研究示，其原发肿瘤直径也呈较大显示，pTNM分期较晚，HER-2呈高表达，是对预后造成独立影响的因素。我国老年乳腺癌的原发病灶明显大于年轻患者，但有较低的局部淋巴结转移率，表明老年乳腺癌有较好的生物学行为。有报道示，老年患者患小叶癌、小管癌及粘液癌的比例高于年轻患者，从组织学上分析，有更理想的预后[4-6]。
大量报道指出，年轻乳腺癌患者以肿瘤体积大、分期晚为主要表现，而老年患者与之相反[7，8]。本次选取的病例，肿瘤T4期在≥65岁患者中占有较高比例，表明相较其他年龄段，原发灶呈更大显示。TNM分期中，Ⅰ期在≥65岁患者中均居较低水平，Ⅳ期居较高水平，与部分文献报道不同，可能与我国妇女未彻底接受健康普查，特别是老年群体，乳腺健康常识缺乏，无法较好的对乳房自我检查，有乳房肿物出院时，也较少到院就诊相关，促使确诊时，病灶较大，临床分期较晚，严重者甚至已远处转移[4，5]。HER-2指标及孕激素受体、雌激素受体指标表达是对乳腺癌患者进行分期分型的基础，也可对治疗方案的制定和预后的评估提供重要参考。有研究示，青年患者HER-2有较高的阳性率，孕激素受体、雌激素受体有较低的阳性率[9，10]，
提示老年乳腺癌患者相较中青年患者，有更好的生物学行为。
综上所述，<65岁乳腺癌患者病情发现早，原发灶呈較小显示，但生物学行为较差，HER-2有较高阳性率；而≥65岁乳腺癌患者HER-2阳性率低，病理类型较好，但确诊时分期较晚，原发灶呈较大显示。
参考文献
乳腺癌患者的心理特征及心理护理 摘要】不同的性格、病情和治疗过程，使癌症患者有不同的心理特征。心理护理对癌症患者建立信心、调整心态、增强生理机能非常重要，在护理过程中要及时了解、超前预见，根据患者不同的心理特征，用科学的护理语言积极施护。 【关键词】乳腺癌；心理特征；心理护理；语言 1乳腺癌患者的心理特征分析 1.1怀疑否认期 患者突然得知确诊为乳腺癌，企图以否认的心理方式来达到心理平衡，怀疑医生的诊断错误或检查上的错误。 1.2愤怒发泄期 否认之后，患者常会出现强烈的愤怒和悲痛，一旦证实癌症的诊断，病人会立即感到对世间的一切都有无限的愤怒和不平，有被生活遗弃、被命运捉弄的感觉。并把这种愤怒向周围的人发泄。如常借故各种理由表现出愤怒和嫉妒，常常与亲人、医护人员发生吵闹，事事感到不如意，不顺眼，还会认为所有人都对他不起，委屈了他。同进以怕周围人遗弃他。表现这些心理行为的如：大声喧哗，百般报怒，愤愤不平，这种情绪持续不定，会消耗病人战胜疾病与正常生活的精力。 1.3悲伤抑郁期 当病人在治疗或休养过程中，想到自已还未完成的工作和事业，想到亲人及子女的生活、前途和家中的一切而自已又不能顾及时，便会从内心深处产生难以言状的痛楚和悲伤。再加上疼痛的折磨，用药难受，则进一步转化为绝望，从而产生轻生的念头，一旦产生了这种心理之后，就可能采取各种手段过早结束自己的生命。 1.4情感升华期 也有许多癌症患者虽有多种心理矛盾，但最终能认识到现实是无法改变的，惧怕死亡是无用的，而能以平静的心情面对现实，生活得更充实更有价值，在短暂有限的时间里，实现自己的愿望和理想，这就是升华，升华为积极的心理防范反应，病人把消极的心理转为积极的效应，以使心理通过代偿来达到平衡。病人在积极的心理状态下，不但心理平衡，而且身体状态也会随心理状态的改变朝好的方面发展。 2癌症患者的心理护理 对癌症患者的护理，要根据患者的性格特点和不同时期的心理特点，有针对性地开展护理。除创造安静、舒适、良好的修养治疗环境和提高病人同病魔作斗争的积极性外，还应做到以下几点： 2.1及时了解病人心理变化 随时掌握病人的心理变化情况，要了解病人真实的心理状态。就必须要把关心病人，对病人的职业、文化、家庭、配偶以及个人生活境遇等都就在有所了解，同时还应熟悉病人的
入院记录 姓名：周凤华职业：退休 性别：女性出生地：北京 年龄：68岁入院时间：2008年12月15日9：15 民族：汉族病史采集时间：2008年12月15日9：30 婚况：已婚病史陈述者：患者本人 发病节气：立冬 主诉：右乳癌术后5月，要求化疗。 现病史：患者今年7月初无意中发现右乳外上象限一约1.0×1.0㎝大小肿物，质硬，无触痛，边界清楚，至宣武医院查乳腺钼靶，疑为乳腺癌，急于医科院肿瘤医院住院手术治疗，08.7.16行右乳乳腺癌根治术，术后病理：右乳浸润性导管癌，肿瘤大小1.5×1.0×1.0㎝，伴导管内癌，右腋窝淋巴结清扫1/12，免疫组化：ER（-）,PR（-）,C-erbB-2（+++），术后出院，伤口处有渗液不愈合。08.10.15开始于我科行CA方案（环磷酰胺1.0g d1，法玛新60mg d1、2/21d）化疗三周期，未出现明显毒副反应。今为继续行第四周期化疗收入病房。现症见：右胸壁处手术切口钝痛，右上肢轻度水肿、麻木，偶有恶心、呕吐，伴反酸烧心，乏力，双下肢明显，自汗，纳可，入睡困难，二便调。 既往史： 2型糖尿病病史8年，以诺和灵30R控制血糖，现空腹血糖水平约10mmol/L水平，餐后13mmol/L左右。2005年诊断垂体瘤，未治疗。否认冠心病，高血压病史；否认肝炎、结核病等传染病史。 过敏史：否认药物及食物过敏史。 其他情况：生于北京，长于北京；无疫地、区接触史；无输血史；月经14 3/28-30 46，经色量正常，无腹痛，孕2产1，未哺乳，一女体健。无吸烟及饮酒史，其丈夫患肺癌因突发心梗去世。否认家族遗传病史。 以上病史情况属实，家属签字： 体格检查 T36.3℃P78次/分R20次/分BP 130/80 mmHg H152cm W64kg 神志清楚，精神可，营养中等，步入病房，查体合作，自动体位，表情自然，面色少华，语言清晰流利，应答切题，语声如常，双目有神，未闻及咳嗽、喘息及异常气味，舌淡红边有齿痕，苔少脉细。全身皮肤粘膜无黄染，全身浅表淋巴结无肿大，头颅大小形态正常，巩膜无
·病理与临床· 2012年12月第50卷第36期 中国现代医生CHINA MODERN DOCTOR 乳腺癌是一种高度异质性的肿瘤，其发病率有逐年上升的趋势，而且无论组织形态、免疫表型、分子生物学特征还是治疗上都有非常大的差异，因此了解这些差异可以对患者实施更有针对性的治疗。当今国际病理学专家提倡根据cDNA 组织芯片基因表型将乳腺癌分为五种亚型：腔A 型（Luminal A ）、腔 B 型（Lumina B ）、正常乳腺样型（normal breast-like ）、HER-2过表达型（HER-2overexpressing ）、基底细胞样型（basal-like ），它们具有独立的生物学行为和临床预后[1，2]。BLB C 是具有不良临床预后的一种乳腺癌的独立亚型，我们应用免疫组化方法筛选出177例BLBC ，探讨其病理形态特 征、免疫表型与分子病理检测，为乳腺癌的临床诊断与治疗提供线索。 1资料与方法1.1临床资料 收集本院2010年7月~2012年6月病理诊断为浸润性 乳腺癌手术标本1101例。乳腺BLBC 的诊断标准为：ER 、 PR 、HER2阴性，EGFR 和/或CK5/6阳性。根据此标准，我们在1101例乳腺浸润性癌中筛选出BLBC 177例。组织经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋、切片，HE 染色。1.2观察指标 组织学分级、肿瘤的结构特征及细胞特征、生长方式、核分裂像及淋巴结转移情况。 1.3免疫组化及结果判定 采用SP 法，一抗为鼠抗人单克隆抗体，包括CK5/6、EGFR ，抗体及SP 试剂盒均购自福建迈新生物科技有限公司，具体操作步骤按照说明书。CK5/6、EGFR 呈胞膜和（或）浆染色，按阳性细胞百分数分为4级：-，+，2+，3+。1.4FISH 方法及结果判定 采用荧光原位杂交法，EGFR 基因检测试剂盒购自广州 安必平医药科技有限公司，具体操作步骤按照说明书。桔红色为EGFR ，绿色为CEP7，两种比值均大于2∶1，提示EGFR 基底细胞样型乳腺癌病理形态特征、免疫表型与 分子病理检测的相关性 瞿伟 南昌市第三医院病理科，江西南昌 330009 [摘要]目的观察基底细胞样乳腺癌（basal-like breast carcinoma ，BLBC ）的病理形态特征，探讨基底细胞样乳腺癌的免疫表型特点并与之分子检测的相关性。方法对177例BLBC 进行形态学观察及免疫组化EGFR 、CK5/6检测，再从中挑选10例进行荧光原位杂交（FISH ）检测。结果BLBC 是一组组织形态上呈巢片状排列、无腺管形成、大多为推进性边缘、地图样坏死、核分裂象活跃的、组织学几乎均为Ⅲ级、免疫表型ER 、PR 及C-erbB-2阴性、EGFR 和/或CK5/6阳性的乳腺癌；有EGFR 基因扩增的患者其淋巴结转移率更高（P ＜0.05）。结论BLBC 是近年来比较热 点的一种新的乳腺癌亚型，具有独特的组织形态特点、免疫组化特征及分子生物学特点，已越来越得到人们的重视和深度认识。 [关键词]乳腺癌；基底细胞样；免疫表型；分子病理[中图分类号]R737.9[文献标识码]B [文章编号]1673-9701（2012）36-0112-03 Correlation of pathologic morphology ，immunophenotype and molecule de -tection of basal like breast cancer QU Wei Department of Pathology ，the Third Hospital of Nanchang City ，Nanchang 330009，China [Abstract]Objective To observe the pathologic morphology characteristics of basal like breast cancer carcinoma （BLBC ），and to discuss the correlation of immune phenotype and molecular detection of BLBC.Methods All of 177cases of BLBC were observed underwent morphological observation and immunohistochemical detection of EGFR ，CK5/6，Then 10cases were selected to detected by fluorescence in situ hybridization （FISH ）.Results The morphology of BLBC was nest schistose arrangement ，no glandular tube formation ，Mostly the advancing edge ，map necrosis ，mitotic activity ，histology of almost all Ⅲ，and the immune phenotypes of blbc was ER ，PR and C-erbB-2negative ，EGFR and/or CK5/6positive ；EGFR gene amplification were associated with higher lymph node metastasis （P ＜0.05）.Conclusion BLBC is a popular new subtype of breast carcinoma in recent years ，with unique histologic features ，immunohistochemical and molecular biological character -istics ，and it has gained more and more attention and recognition. [Key words]Breast cancer ；Basal like ；Immunological phenotype ；Molecular pathology 112
不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征 摘要目的探讨不同年龄段乳腺癌患者的临床病理特征。方法80例乳腺癌患者為研究对象，分析不同年龄段患者的病理特征。结果≥65岁患者人表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性率、浸润性导管癌率、孕激动素受体（PR）阳性率、临床分期Ⅰ期率均低于0.05）。结论0.05）。 3 讨论 近年来，受女性生存压力增大、环境污染加剧等多因素影响，乳腺癌人群逐年增多，且呈年轻化趋势。乳腺癌发病率最高的年龄段在36～50岁，51～60岁居其次，最低年龄段为≥65岁，与报道中亚洲高发年龄符合。 研究示，病理类型是重要的对乳腺癌患者预后造成影响的因素，有文献指出，浸润性导管癌为最常见乳腺癌类型，本次研究中共61例，占76.3%，与文献报道的75%～84%一致。浸润性导管癌在≥65岁患者中发病率低于<65岁患者，但小叶癌在此年龄段发病率却成高于<65岁患者显示，相较浸润性导管癌，小叶癌有相对理想的预后[2，3]。就病理特征而言，年轻乳腺癌患者预后差，侵袭性强，年轻乳腺癌患者以浸润性癌为主，且多为浸润性导管癌，有研究示，其原发肿瘤直径也呈较大显示，pTNM分期较晚，HER-2呈高表达，是对预后造成独立影响的因素。我国老年乳腺癌的原发病灶明显大于年轻患者，但有较低的局部淋巴结转移率，表明老年乳腺癌有较好的生物学行为。有报道示，老年患者患小叶癌、小管癌及粘液癌的比例高于年轻患者，从组织学上分析，有更理想的预后[4-6]。 大量报道指出，年轻乳腺癌患者以肿瘤体积大、分期晚为主要表现，而老年患者与之相反[7，8]。本次选取的病例，肿瘤T4期在≥65岁患者中占有较高比例，表明相较其他年龄段，原发灶呈更大显示。TNM分期中，Ⅰ期在≥65岁患者中均居较低水平，Ⅳ期居较高水平，与部分文献报道不同，可能与我国妇女未彻底接受健康普查，特别是老年群体，乳腺健康常识缺乏，无法较好的对乳房自我检查，有乳房肿物出院时，也较少到院就诊相关，促使确诊时，病灶较大，临床分期较晚，严重者甚至已远处转移[4，5]。HER-2指标及孕激素受体、雌激素受体指标表达是对乳腺癌患者进行分期分型的基础，也可对治疗方案的制定和预后的评估提供重要参考。有研究示，青年患者HER-2有较高的阳性率，孕激素受体、雌激素受体有较低的阳性率[9，10]， 提示老年乳腺癌患者相较中青年患者，有更好的生物学行为。 综上所述，<65岁乳腺癌患者病情发现早，原发灶呈較小显示，但生物学行为较差，HER-2有较高阳性率；而≥65岁乳腺癌患者HER-2阳性率低，病理类型较好，但确诊时分期较晚，原发灶呈较大显示。 参考文献
乳腺癌诊疗方案 乳腺癌中医称之为“乳岩”，其临床特点为乳房部肿块，质地坚硬，溃后凸如放莲或如菜花。据资料统计发病率占全身各种肿瘤的 7-10%,为女性最常见的恶性肿瘤之一，仅次于子宫瘤。其发病与遗传因素有关，以绝经期前后的妇女（40-60岁之间）发病率最高，多因情志不畅，肝郁不舒，气滞血瘀；或冲任失调，经络阻塞；或脾虚失运，痰浊内生，痰瘀互阻所致，治宜疏肝解郁，调理冲任，化痰散络等。 一、诊断 （一）疾病诊断 诊断标准：参照中华人民共和国卫生部医政司编<中国常见恶性肿瘤诊治规范>。 1、病史及体检 询问肿物发生时间、疼痛、及与月经关系，有无乳头溢液，有否作过治疗，既往乳房是否等大，乳头是否内陷，局部是否治检，及子宫或甲状腺功能性疾病，询问月经及婚育史，是否妊娠，哺乳期，家庭中恶性肿瘤病史，特别有否乳腺癌，体检中注意观察双侧乳房外形，有否静脉回张，乳头位置及分泌物，皮肤有否红、肿、结节及湿疹样变。记录肿块部位，大小，形状，质地，表面情况，活动度，与皮肤、
胸大肌、胸壁关系，积压乳头有否溢液，数量，性质，管口部位，注意腋窝及锁骨上淋巴结，绘图表示乳房肿块与腋窝肿大淋巴结。 2、病理、细胞学诊断 （1）脱落细胞学检查：早期管内癌有乳头溢液者，可将液体作涂片细胞学检查，乳头糜烂疑Paget病者可作刮片或印片检查。 （2）针吸细胞学检查：可部分代替冰冻切片检查，阳性可确诊，阴性不能除外，应进一步作活组织检查，操作时应注意避免造成肿瘤的播散。 （3）活组织检查：包括切除及切取活检。除非肿瘤很大，一般均以切除活检为好。最好能同时作冰冻切片检查，如果恶性的则作根治性手术。标本应常规作受体测定。如无冰冻切片检查条件，病理证实后，应在不迟于2周内作手术治疗. 3、其他辅助检查 1）、乳腺X线摄影：有干板照相和钼靶Ｘ线照相两种方法。 2）．B超检查。 3）．近红外线乳房扫描。 4）．CT：乳癌CT表现与钼靶X线片相似，并可清晰显示腋淋巴结与内乳淋巴结。 5）．疑有肺、肝或骨转移者应作相应的检查。 乳腺癌的诊断多依据临床表现、影像学检查、病理学检查和细胞学检查以及血清学检查进行综合判断，其中病理学、细胞学检查结果是诊断乳腺癌的金标准。
形态生长方式类型培养条件 人乳腺癌细胞MCF7 上皮样贴壁生长常规该细胞是从一名69岁的白人女性 乳腺癌患者的胸腔积液中分离建立的。该细胞保留了多个分化乳腺上皮的特性，包括：能通过胞质雌激素受体加工雌二醇并能形成隆突结构( domes );该细胞表达WNT7B 癌基因；TNF- a可以抑制MCF-7细胞的生长；抗雌激素处理能调节细胞胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的分泌。ER(+),PR(+),Her-2(-) 人乳腺癌细胞MDA-MB-231 上皮样贴壁生长三阴MDA-MB-231是从一名 51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7B癌基因。属于高转移性恶性乳腺癌细胞系，易成瘤，且常用 于肿瘤转移研究 人乳腺导管癌细胞MDA-MB-435S 上皮样贴壁生长三阴，转移性乳腺导管腺 癌MDA-MB-435S 是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本(MDA-MB-435)中筛选得到。MDA-MB-435是从一名31岁的转移性乳腺导管腺癌女性患者胸水中分离得到的。但近来证明MDA-MB-435细胞被M14黑色素瘤细胞污染。 人乳腺癌细胞MDA-MB-453 上皮样；多角形贴壁生长三阴，转移性乳腺癌 该细胞系由Cailleau R在1976年从一名48岁的患有转移性乳腺癌的白人女性的心包渗出液中分离建立的。该细胞表达FGF的受体。 人乳腺癌细胞MDA-MB-157 上皮样贴壁生长髓样癌该细胞源自一位患有 乳腺髓样癌的44岁黑人女性，表达WNT7B癌基因，细胞与细胞边界处有细胞桥粒、微绒毛、张力细丝。 人乳腺癌细胞SK-BR-3 上皮样贴壁生长这株细胞是1970年由Trempe G和 Old LJ从一位43岁的白人女性乳腺癌患者的胸腔积液中分离得到的。该细胞亚显微结构特征包括微丝和桥粒、肝糖原颗粒、大溶酶体、成束的细胞质纤丝；过表达 ______________ HER2/c-erb-2 基因产物。 人乳腺导管癌细胞ZR-75-1 上皮样贴壁生长该细胞产生高水平的黏液素 MUC-1 mRNA，低水平的MUC-2 mRNA，但不表达MUC-3基因；表达雌激素受体。 人乳腺导管癌细胞HCC38 上皮样贴壁生长该细胞于1992年从一位50岁的白 人女性乳腺导管癌组织中分离建立，该患者曾有平滑肌肉瘤的病史，其母亲死于乳腺 癌；该细胞癌基因her2/neu- , p53+ ;上皮细胞特异性标志物EGP2 (上皮糖蛋白2) 和CK19
100分通过。因为自己没有找到相应的答案，努力完成后发出来方便大家查阅。格式不美观，请包涵，我 已经尽力了。 单选题：每道题只有一个答案。 1.乳腺癌治疗中首选的方法是Ｂ A.放射治疗 B.手术治疗 C.化学药物治疗 D.内分泌治疗 2.大部分的乳腺疾病都是因为身体内分泌失调体内激素分泌不平衡。由各种因素所引起体内 雌性激素偏高、孕激素相对减低从而无法节制雌激素和保护乳房所造成的。（）Ａ A.正确 B.错误 3.乳腺癌的发病率在女性恶性肿瘤中位于第几位Ａ A.第一位 B.第二位 C.第三位 D.第四位 4.对于乳腺癌的化疗方案说法错误的是Ｄ A.根据患者特点和治疗目的制定个体化给药方案 B.联合化疗适用于病变广泛且有症状， 要迅速缩小肿瘤的患者C.既往使用过的化疗药物应避免再次使用D.既往使用过的化疗药物可以再次使用 5.乳腺癌患病的相关因素因素有哪些Ｄ A.内分泌因素 B.饮食因素 C.精神因素 D.上述都包括 6.I-III期乳腺癌，在初始治疗后的最初3年内，应每4-6个月随访一次，此后为每年随访一次。随访应包括常规体检，并应每年进行一次乳腺X线摄片检查。（）Ｂ A.正确 B.错误 7.乳腺癌表现乳头溢液者为多见，因癌瘤坏死、出血、分泌物增多等原因造成。45岁以上妇 女发生乳头溢液，尤以血性溢液者，应高度重视。（）Ｂ
A.正确 B.错误 8.血行转移好发部位不正确的是（）Ｄ A.骨 B.肝 C.皮肤 D.肾 多选题：每道题有两个或两个以上的答案，多选漏选均不得分。 1.晚期乳腺癌首选的内分泌治疗适应症有（）ＡＢＣＤ A.患者年龄大于35岁 B.无病生存期大于2年 C.仅有骨和软组织转移 D.ER和/或PR阳性 2.关于乳腺癌目前多采用的病理分型有（）ＡＢＣＤ A.非浸润性癌 B.早期浸润性癌 C.浸润性特殊癌 D.浸润性非特殊癌
MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25％的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶（25ml培养瓶）静置消化2－5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞
细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代；每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基 +5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件：37℃ 5% CO2 消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA溶液，消化5-10min 传代的比例：1：2~1：4 换液时间：2~3天换液一次 冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO
乳腺癌分子分型 乳腺癌是常见恶性肿瘤，严重威胁女性健康，居女性恶性肿瘤之首。乳腺癌是一类分子水平上具有高度异质性的疾病，不同乳腺癌患者在临床、病理、还有复发转移特征上都不同，应采取的治疗手段也不尽相同。 乳腺癌的发生、发展、转移和预后与多种因素有关，肿瘤大小、淋巴结转移情况、组织学分级、临床分期等是传统上判断乳腺癌预后的常用指标。除了根据手术切除的组织在肉眼和显微镜下形态给出的病理诊断，医生也需要根据免疫组化（ICH）报告上的肿瘤组织各分子的表达情况，对乳腺癌进行分型，这也是后续临床治疗的重要依据。 乳腺癌分子分型的研究已从高分子水平深入到基因水平，其相关因子包括ER、PR、HER-2基因、Ki-67蛋白表达等，这些生物学指标不但与肿瘤的生长、浸润、转移、复发等密切相关。目前，临床及病理医生可以根据肿瘤细胞的某些分子改变将肿瘤分成若干个亚型，一方面可以对患者的临床转归做出预判，另一方面根据不同分子亚型采用不同的后续治疗。[1] 1雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR） ER、PR是乳腺癌内分泌治疗和预后评估的重要指征。
乳腺是性激素的靶器官，正常情况下组织存在雌激素和孕激素两类受体。当乳腺上皮癌变时，雌、孕激素受体会部分或全部丢失，如果乳腺肿瘤组织中仍能检测出这两类受体，表明该肿瘤受内分泌调节，可应用内分泌治疗，且疗效和预后均普遍较好。 NCCN将ER、PR的表达作为乳腺癌治疗选择的首要指标，并列入乳腺癌复发风险度评估参数。 ER（Estrogen Receptor）是存在于乳腺上皮细胞中的一种蛋白质，能够与雌激素特异性结合，形成激素-受体复合物，进入细胞核后发挥生物学效应。 PR（Progesterone Receptor)是ER作用于染色体后，新合成的另一种蛋白质，可以调节乳腺上皮细胞的生长，而PR的合成受ER的调控，ER阳性者PR一般也为阳性。[2] 2Ki-67 Ki-67是一种在增殖细胞中表达的核抗原，能反映细胞增殖状态的核抗原，了解恶性肿瘤的细胞增殖活性。 Ki-67已成为目前应用较广的检测恶性肿瘤增殖活性的分子标志之一。Ki-67的表达不仅与乳腺癌分子分型密切相关，对乳腺癌术后局部复发的预测也是密不可分。[3] Ki-67可以预测乳腺癌患者新辅助化疗后的病理缓解率，临床研究发现Ki-67表达水平升高，化疗后临床完全缓解率较高。
MCF-7是一种很好养的人乳腺癌细胞，培养基用DMEM或RPMI1640均可，10- 15%的小 牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基，加入0.25%的胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使胰酶流遍瓶壁，以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml 培养瓶)静置消化2—5min，待细胞缩起变圆，将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗，而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用，感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快，一般不放到培养箱中消化，以免消化太过。需要注意的是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起，一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该 细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-a受体和WNT7BS基因 培养基L15: Leibovitz Medium 血清10%FBS 细胞传代方法1:2~1:4 传代；每周2~3次 细胞传代情况C5 细胞冻存条件MDA-MB-231人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基：DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件：37 C 5% CO2 消化条件：0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA 溶液，消化5-10min 传代的比例：1 : 2~1: 4 换液时间：2~3天换液一次 冻存液比例：85%培养基，10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度：1-2 X 10 6/管，液氮保存 MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏方法：取出冻存管后，投入37 C水浴中，震荡解冻2 min , 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入 5 ml 37 C预热的培养基，并清洗冻存管一次，将离心管离心( 1000 rpm , 5 min),弃去上清液，再加入 2 ml培养■基，转入培养瓶中培养。 产品名称：人正常乳腺细胞Hs 578Bst 规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点：细胞代数为4-5代左右 包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书 细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC
乳腺癌的病理类型 1.非浸润性癌包括导管内癌（癌细胞未突破导管壁基底膜）、小叶原位癌（癌细胞未突破末梢乳管或腺泡基底膜）及乳头湿疹样乳腺癌。此型属早期，预后较好。 2.早期浸润性癌包括早期浸润性导管癌（癌细胞突破管壁基底膜，开始向间质浸润），早期浸润性小叶癌（癌细胞突破末梢乳管或腺泡基底膜，开始向间质浸润，但仍局限于小叶内）。此型仍属早期，预后较好。（早期浸润是指癌的浸润成分小于l0％） 3.浸润性特殊癌包括乳头状癌、髓样癌（伴大量淋巴细胞浸润）、小管癌（高分化腺癌）、腺样囊性癌、粘液腺癌、大汗腺样癌、鳞状细胞癌等。此型分化一般较高，预后尚好。 4.浸润性非特殊癌包括浸润性小叶癌、浸润性导管癌、硬癌、髓样癌（无大量淋巴细胞浸润）、单纯癌、腺癌等。此型一般分化低，预后较上述类型差，且是乳腺癌中最常见的类型，占80％，但判断预后尚需结合疾病分期等因素。 乳腺癌的危险度分级 1.低度危险的定义患者术后淋巴结阴性，并同时具有以下特征：pT≤2cm、病理分级1级、未侵犯肿瘤周边血管、HER-2（-）、年龄≥35岁。化疗方案可以选择CMF×6或AC/EC×4-6个周期。
2.中度危险的定义①腋窝淋巴结阴性，并至少具备以下特征的一项：pT＞2cm、病理分级为2-3级、有肿瘤周边血管侵犯、H ER-2基因过表达或扩增、年龄＜35岁。②腋窝淋巴结转移1-3和HER-2（-）。可选用的方案有FAC/FEC×6。 3.高度危险的定义：①腋窝淋巴结转移1-3和HER-2（+）；②腋窝淋巴结转移＞3。可选用的方案有：ＡＣ→Ｔ，FEC×3→T×3，TAC×6，也可用密集化疗。 如何评估一个乳腺癌病人复发和转移的危险度？ 乳腺癌病人都担心自己的病是否会复发？是否会转移？那么如何评估一个具体的乳腺癌病人复发和转移的危险度？下面作一 些介绍。 首先要了解病人的年龄、肿瘤最大直径（T）、腋窝淋巴结转移情况、癌细胞组织学分级、有无广泛的肿瘤周围血脉及淋巴管浸润、雌激素受体（ER）、孕激素受体（ER）、原癌基因HER-2 三者表达状况。 专家们根据上述情况，将复发和转移的危险度分三级，分别是低 危、中危和高危。 1．低危 腋窝淋巴结阴性，且具备所有下列特征：肿瘤最大直径≦2cm，且癌细胞组织学分级I级（分化良好）、且没有广泛的肿瘤周围
[转载]柳光宇医生有关乳腺癌的经典答复 阅读：27142012-02-20 11:42 标签：转载 原文地址：柳光宇医生有关乳腺癌的经典答复 原文作者：先特 柳光宇是复旦大学附属肿瘤医院的医生,他在好大夫网站有自己的网站专门免费 回答病患的问题,他有关乳腺癌的一些回复对治疗乳腺癌很有指导意义: 1,卵巢是分泌雌激素的器官，当雌激素在体内处于一定水平时，会刺激乳腺癌 细胞的生长，特别是骨头转移灶内的癌细胞。切除卵巢是一种传统的内分泌治 疗方法，可以进一步抑制依赖雌激素而生长的乳腺癌。如果您不愿意切除双侧 卵巢，现在还有一种方法就死药物性卵巢抑制，每个月用一针诺雷得，同样可 以达到卵巢切除的效果，只是每月花费在2000元左右。 2,诺雷得联合三苯氧胺好，建议每半年再用一针唑来磷酸来预防卵巢抑制之后 的骨质疏松，而且还有预防骨转移的功效。 3,保乳的缺点就是局部复发率高于全乳切除，不过这并不影响患者的生存率， 因为局部复发之后，还可以补救全乳切除。 4,术后上肢水肿可能是淋巴回流的障碍，推荐用迈之灵或者艾脉朗口服治疗 5,临床实践中我们发现化疗和herceptin联合应用的疗效更好，另外在化疗结束 后还将继续用Herceptin。 6,化疗回来多休息多喝水，多吃精肉，多吃纤维素和水果。 7,别吃灵芝孢子粉胶囊，会冲谈赫赛汀的作用的。 8,腋窝放疗的目的还是为了防止腋窝淋巴结复发，但如果腋窝清扫到位，自然 不必再放疗。放疗的部位应该是手术无法到达的锁骨上区和内乳区。ER-PR+的 患者可以用三苯。 9,化疗和内分泌治疗不能同时用. 10,美国罗氏公司生产的Herceptin是纯生物工程产物，是一种癌抗体（有点类 似抗病毒的疫苗），不是什么提取物，更是与灵芝孢子粉无关。假的终究真不了，骗子和奸商们是利用病人求生的愿望来中饱私囊，还散发错误的信息，企 图让患者上当去购买他们的产品，真是可恶之极。从这一点就可以看出目前多 数的抗癌保健品是靠不住的，我们医生并不认可，请看好你的钱袋子。Herceptin很贵，但终究是真药，救命的药，刀就得用在刃上。最后提醒，医生 没有推荐的药物或者保健品可能会对现在您正在使用的抗癌治疗带来负面影响，或者减低疗效，或者其它不良反应，还有不可预料的后遗症，因此不建议同时用。 11,目前法乐通和三苯的比较研究发现前者虽然副作用略低，但是最近的研究发 现它治疗乳腺癌的疗效远不如三苯，而且妇科的副作用（卵巢囊肿、子宫内膜 增厚，潮热等）一点也不比三苯轻。说明书上也只适合用于绝经后的患者。 12,5年的三苯氧胺当然是标准，但是有证据显示继续应用到10年也是安全的， 能否继续发挥预防复发的作用目前有争议，但你没有绝经，采用芳香化酶抑制 剂并不合适。我自己的一个病人，她当年淋巴结有17个转移，最后听我意见去 做了腹腔镜下的双侧卵巢切除手术，然后再继续用芳香化酶抑制剂5年。目前
咳嗽,咳痰较前明显减轻,憋气明显好转,痰色转白,纳可,大便调,舌红,苔薄黄,脉沉细。燥热已减,重点攻破痰瘀热毒之结,拟以小陷胸汤合千金苇茎汤化裁,药用:瓜蒌皮15g,薤白10g,清半夏10g,桃仁5g,沙参15g,海浮石10g,川贝母10g,百合30g,枇杷叶15g,芦根30g,杏仁10g,生薏苡仁15g,金荞麦15g,桔梗10g,旋覆花10g,白花蛇舌草30g,草河车15g,鸡内金30g,生麦芽30g,鱼腥草15g,炙甘草10g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中小陷胸汤清热化痰,宽胸理气,千金苇茎汤清热生津散结,鸡内金、生麦芽开胃进食散结。 2006年6月26日。左肺癌术后3年多,CT示:肺外缘、左肺门小结节与前比无明显变化。已不咳嗽,晨起有少量黏痰,上腹胀,舌红,苔少黄,脉沉细。病情稳定,上方加鳖甲、炮山甲以加强软坚散结消瘤之效。14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次 收稿日期:2009-09-30 作者简介:程旭锋(1976-),男,河南郑州人,主治医师,博士研究生,主要从事中西医结合防治乳腺癌的研究。 通讯作者:刘胜。服,每日2次。 2009年4月29日。左肺癌术后6年4个月。复查双肺小结节灶无明显变化。现有时前胸、后背间断性疼痛,咳嗽,少量白痰,右腰部酸痛,纳可,眠可,尿频。脉弦细,舌红,苔薄黄。药用:百合30g,浙贝母10g,鼠妇10g,生地10g,熟地10g,桔梗10g,杭白芍15g,金荞麦15g,炮山甲10g,鳖甲15g,灵芝10g,橘核10g,乌药10g,僵蚕10g,桑寄生15g,桑螵蛸10g,代赭石15g,鸡内金30g,生麦芽30g,白花蛇舌草30g,14剂。2天1剂。上药煎2次合在一起约500mL,分4次服,每日2次。 方中僵蚕,鼠妇皆虫类药之轻清者,善入肺化痰逐瘀散结;患者有前列腺肥大症,桑螵蛸、桑寄生补肾,橘核、乌药、灵芝理下焦,愈尿频。 现患者已术后6年余,仍在治疗中。 按本例患者肺癌术后肺外缘、左肺门小结节, CEA高于正常值,辨证为肺燥津伤,肺失清肃,兼气阴两伤,痰瘀互结。治疗给予清肺润燥,益气养阴,兼以清热解毒,软坚散结等治疗,之后根据病情变化随证用药,坚持治疗4年(术后6年),病情一直稳定,收到了延长寿命,改善生活质量的理想效果。 刘胜治疗乳腺癌的辨治特点与遣方规律 程旭锋,刘玲琳,吴春宇,宋晓芸 (上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科,上海200032) 摘要:从辨证论治、立法原则、遣方规律、用药经验四方面总结了刘胜教授防治乳腺癌复发转移的经验,强调了重视辨病、扶正为主、擅用温补、兼顾变证的学术特点。 关键词:乳腺癌;中医药;经验 中图分类号:R249文献标识码:A文章编号:1000-1719(2010)05-0793-02 Character istis of D ifferen tiati on w it h Treat m en t and R egu lar Patteron of Prescr i p ti on of LI U Sh eng Treati ng Breast Cancer C H ENG X u-feng,LIU L ing-lin,W U Chun-yu,S HONG X i ao-yun (Longhua H osp ital A ff itiarted to Shangha i Unorersit y of TCM,Shanghai200032,China) Abstrac t:P ro fesso r L i u-sheng c s exper i ences of t he preventi on and cure fo r t he re l apse and m etastasis o f breast cancer w ere su mm ar i zed i n Syndrom e D iffe renti a tion and T reat m ent,the princ i p l e of trea t m en t and prescr i pti on,experiences of medicati on,aca-de m i c characte ristics of reconstruction of t he d ifferenti a l diagnosis of diseases,m a i n o f t he strengthen i ng body res i stance,be i ng ex-pert i n supple m ent and warm,conside ration o f de teriorated case w ere e m phasized. K ey word s:Breast cance r;T rad iti ona l Chinese M ed i c i ne;Exper i ences 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈明显上升趋势。目前国际公认乳腺癌是全身性疾病,并强调综合治疗和个体化治疗,中医药调治在乳腺癌治疗中的重要性也逐步被认同。中医药治疗有助于减轻乳腺癌西医疗法的不良反应,提高疗效,调节免疫功能,从而达到改善生活质量,抑制肿瘤生长、延长生存期的目的。刘胜教授是上海中医药大学附属龙华医院乳腺外科主任医师,中华中医药学会外科分会副主任委员。师从我国著名中医外科专家陆德铭教授,深得其真传,形成了独到的中医药治疗乳腺癌的思路与方法。现将其辨证及用药经验报道如下。 1辨病分期结合辨证 对于乳腺癌术后患者,刘师强调应遵循辨病与辨证相结合的原则,根据患者所处的不同治疗阶段,一般将患者分为3期:即手术放化疗期、内分泌治疗期、相对稳定期。然后根据临床分期,结合患者接受的西医治疗手段,分清虚实主次,辨明邪正盛衰,综合论治。刘师通常认为,乳腺癌术后患者,虽然临床分期不同,
MCF-7 就是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可, 10－15％的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0、25％的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2－5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错。因为MCF-7消化较快,一般不放到培养箱中消化,以免消化太过。需要注意的就是MCF-7生长较快如不及时传代可出现整瓶细胞浮起,一般都来不及抢救。 MDA-MB-231人乳腺癌细胞 细胞中文名称人乳腺癌细胞 细胞英文名称 MDA-MB-231 物种人 细胞形态特征上皮样 细胞生长特性贴壁生长 细胞特种特性 MDA-MB-231就是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体与WNT7B癌基因 培养基 L15: Leibovitz Medium 血清 10%FBS 细胞传代方法 1:2~1:4传代;每周2~3次 细胞传代情况 C5 细胞冻存条件MDA-MB-231 人乳腺癌细胞基础培养基+5%DMSO+20%FBS 支原体检测阴性 说明 培养基:DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10% 培养条件:37℃ 5% CO2 消化条件:0、25% (w/v) Trypsin-0、53mM EDTA溶液,消化5-10min 传代的比例:1:2~1:4 换液时间:2~3天换液一次 冻存液比例:85%培养基,10%FBS, 5% (v/v) DMSO 冻存密度:1-2 ×10 6/管,液氮保存 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞复苏方法:取出冻存管后,投入37 ℃水浴中,震荡解冻2 min,酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37 ℃预热的培养基,并清洗冻存管一次,将离心管离心(1000 rpm,5 min),弃去上清液,再加入2 ml培养基,转入培养瓶中培养。 产品名称:人正常乳腺细胞 Hs 578Bst 规格:70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶 特点:细胞代数为4-5代左右 包装:内层无菌自封袋;专用防压泡沫盒;外层防压保温气泡袋;说明书 细胞来源:ATCC、sciencell、ICLC
各种类型乳腺癌的X线表现 一、病因： 1）、遗传因素；2）、激素因素；3）、饮食；4）、吸烟与饮洒；5）、病毒；6）、其它； 二、乳腺癌X线征象： 乳腺癌X线诊断的主要目的是发现早期乳腺癌及鉴别良恶性，认识乳腺癌的X线表现及其病理基础对诊断与鉴别诊断十分重要。乳腺癌的X线表现一般可分直接征象和间接征象。 一）、直接征象： 肿块/结节 钙化 非对称性致密影 单导管增粗、扩张 二）、间接征象： 乳晕增厚 皮肤增厚 乳头内陷 乳腺结构扭曲 静脉血管增多增粗
牛角征 腋下淋巴结肿大 常见类型乳腺癌X线征象 一、导管原位癌（DCIS） 占普查中的20%--30%，90%DCIS在X线片上因有钙化而发现。病理：来源于乳腺小导管肿瘤，癌细胞局限于导管内，未侵及基层。分型：粉刺型、非粉刺型 临床表现：触及无痛性肿块，部分伴Paget’s病 典型X线表现： 1）、不伴肿块呈“V”形分布的簇样钙化； 2）、一象限内不伴肿块的圆形、不规则形簇样分布钙化，或分散分布多个小簇样钙化。 二、浸润性导管癌（IDC） 最为常见占乳腺癌60% 发展规律：正常上皮-上皮增生-不典型增生-导管原位癌-浸润性导管癌 病理：癌细胞突破基底膜向间质浸润。形成癌巢和索带，瘤内可发现广泛纤维和间质。 生物学特性：浸润性生长，边界不清，无包膜，极少见到出血和坏死。
临床表现：无痛性肿块。 典型X线表现： 1）、单纯肿块 2）、单纯钙化 3）、结构扭曲 4）、肿块伴钙化 5）、X线阴性 三、浸润性小叶癌 占原发性乳腺癌第二位，占8%--14%，中等恶性，以多灶性，多中心性及双侧生长为特点。 病理：癌细胞体积小，形态较一致，细胞质少，常呈单一索状可线状排列，癌细胞围绕导管或小叶呈同心圆或靶样结构。 典型X线表现： 1）、结构扭曲：较常见，不伴钙化 2）、不定型钙化介于良恶间的钙化 3）、局灶性不对称致密 4）、X线阴性 注意：伴钙化的肿块不是浸润性小叶癌的特征性表现。 四、粘液腺癌 常见于绝经后妇女，年龄大，肿瘤生长慢，转移晚。
小鼠乳腺癌模型的建立 乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，目前，国内外乳腺癌发病率均呈显著上升趋势，在西方发达国家和我国主要城市女性乳腺癌发病率已居妇女恶性肿瘤的首位。与某些恶性肿瘤不同的是，及时正确的诊断与干预能显著改善乳腺癌患者的生存率及生活质量，甚至能获得终生治愈的效果。为了探索乳腺癌的生物学特征和探讨新的治疗方法，国内外研究者借助乳腺癌动物模型，对乳腺癌的病因、发病机制、早期诊断和治疗等方面开展研究。 目前乳腺癌动物模型的建立可分为自发型、诱发型和移植型三种，每种方法各有利弊，实验室使用最多的是移植型。自发型乳腺癌模型多采用近交系小鼠，如C3H，其生长到一定年龄便自然发生乳腺肿瘤。这种模型最大的特点是实验动物未经任何有意识的人工处理，其发生的条件比较自然，与人类患病过程更为相似。目前此种动物模型是乳腺肿瘤多级预防、治疗和研究发病机制的良好模型。但自发型乳腺癌模型生长缓慢，不易同时获得大批病程基本一致的动物，观察时间长，实验耗费大。诱发型乳腺癌模型是通过经口、涂抹、注射和埋藏等方法应用于实验动物，使之发生乳腺癌。用二甲基苯蒽为诱癌剂诱发乳腺癌，是应用较多的一种方法。这种方法形成的肿瘤与人体肿瘤增殖动力学基本类似，但诱癌过程较长，成功率不高，肿瘤发生的潜伏期个体变异较大，不易同时获得病程或肿块大小均一的模型。相比之下，移植型动物模型克服了上述缺点。迄今，进入移植型动物
模型实验研究的人乳腺癌细胞系有20多种，其中较为常用的有MCF7、MDA．MB-231和MDA．MB-435等。采用移植法建立的乳腺癌模型周期短，成本低，可使实验动物均带有同样的肿瘤，生长速度也较一致，个体差异小，无自发缓解，成瘤率高，是目前实验室应用最多的模型。 对此，重点查阅资料关于移植性乳腺癌动物模型制作的具体步骤。 材料与方法 （1）实验材料 a.动物及分组：取20只昆明鼠随机分成A组（10只），B组（5只），C 组对照组（5只），编号饲养。 b.试剂：无菌水，生理盐水，台酚蓝，2%冰醋酸，甲醛，乙醇，二甲苯，石蜡等。 c.仪器：离心机，显微镜，计数板，电子称，超净工作台，温箱，切片机等。 （2）实验方法 a.模型建立：取H22肿瘤细胞，3000转离心分钟，再用无菌生理盐水洗涤肿瘤细胞3次，并做适当稀释，取40微升细胞悬液加入10微升0.4%台酚蓝染色并镜检计数，制成浓度为3*106个/ml的肿瘤细胞悬液，每只小鼠右腋皮下接种肿瘤细胞悬液0.2毫升。 b.细胞计数：细胞计数液2%冰醋酸溶液。取50微升细胞悬液加入450微升的细胞计数液中计数。 （3）记录： 接种完成后,逐日观察接种部位有无感染,肿瘤生长后有无自然消退,