食品安全模拟试卷一（第一、二章） 一、选择 1. WHO已将下列_____________列为极危险的有害农药。 A 甲萘威B涕灭威C 甲氰菊酯D 二氯苯醚菊酯 2. 蔬菜对有机磷农药的吸收能力下列正确的是： A 根菜类>叶菜类>果菜类 B 叶菜类>根菜类>果菜类 C 果菜类>叶菜类>根菜类 D 以上都不对 3. 1967年，日本米糠油事件导致5000多人患病，该病由_____________引起。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 4. 下列能引起运动失调、视野变窄的重金属是_____________。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 5. 水俣病是由下列_____________引起的。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 6. 痛痛病是由下列_____________引起的。 A 汞 B 镉 C 砷D铅 7. 下列具有“世纪之毒”之称的是_____________。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 8. 下列植物最容易受到氟化物污染的是_____________。 A 豆科植物 B 谷类植物 C 十字花科植物 D 山茶科植物 9. 下列植物对重金属吸收能力最强的是___________，最弱的是_____________。 A 小麦 B 大米 C 果类 D 蔬菜 10. 下列物质有类似人体激素作用的是_____________。 A 多氯联苯 B 二噁英 C 氰化物 D 3,4-苯并芘 11. 下列不属于有毒蛋白的是_____________。 A 蓖麻毒素 B 巴豆毒素 C 刺槐毒素D龙葵毒素 12. 去除胰蛋白酶抑制剂的方法最简单有效的方法是_____________。 A 用水浸泡至60%含水量 B 干热 C 浸泡后高压 D 高温加热 二、名词解释 1. 食品安全性 2. 食品安全 3. 过敏 4. 农药残留 5. 兽药残留 6. 实质等同性 7. 转基因食品 三、填空 1.影响食品卫生和安全最主要的因素是____________污染，其中包括 _____________和______________。 2.我国食品污染物监测网数据显示，___________、_____________和 ______________3种常见的食源性致病菌检测阳性率逐年上升。 3.环境污染物包括_____________和_____________。 4.二噁英、多环芳烃、多氯联苯等工业化合物都具有_____________和 _____________等特点，对食品安全性威胁极大。 5.食品加工过程中使用的各种包装和容器可能给食品带来有毒物质的污染，如 _____________可从聚苯乙烯塑料包装进入食品；陶瓷器皿表面的釉料中所含的_____________、_____________和_____________等盐溶入酸性食品中； _____________处理的包装纸上残留有毒的胺类化合物；不锈钢器皿存放酸性食品时间较长渗出的_____________、_____________等也可污染食物。 6.食品烹饪过程中因高温产生的_____________、_____________都是毒性极强
PUF蛋白在小鼠雄性生殖细胞及人肿瘤细胞增殖中的功能研究最近研究发现,RNA结合蛋白可能在动物发育过程和细胞增殖分化过程中发挥了重要的作用,但是多数RNA结合蛋白的作用尚有待发现。 PUF(Pumilio-Fem3-binding factor)蛋白家族是真核生物RNA结合蛋白家族中高度保守的一类,它们在低等动物中主要对基因表达起负性调控的作用。PUF蛋白可以通过Pumilio的同源结构域去结合目标mRNA的3’UTR(3’Untranslated Region)上高度特异性序列,最终导致mRNA降解和翻译水平的降低。 PUF家族蛋白广泛分布于真核生物,从酵母、线虫、果蝇到小鼠和人均存在同源基因。在果蝇和线虫中它们被发现在生殖细胞发育过程起重要作用,比如原始生殖细胞的增殖和迁移,生殖干细胞的自我更新等等。人和其他哺乳动物主要存在两种PUM蛋白,即PUMILIO1(PUMI)和PUMILI02(PUM2),它们在人和其他哺乳动物中的功能还不清楚。 尤其是它们是否像在果蝇、线虫中一样参与生殖细胞的发育和干细胞的维持还尚无报道。有研究表明,Puml或者Pum2基因敲除小鼠仍然存在生育能力;但是我们课题组前期发现两个基因同时缺失会导致胚胎致死,这对研究它们在哺乳动物精子发生过程中的作用造成了极大的困难。我们实验室前期通过生殖细胞特异性Cre(Vasa-cre和Stra8-cre)工具鼠构建了 Pum基因条件性敲除小鼠,可以使其分别在特定时间点将睾丸生殖细胞中的Pum蛋白敲除。 通过对这两种条件性敲除小鼠的表型进行分析发现,它们的睾丸显著小于对照组睾丸,并且不育。与此同时,在出生后6天时,这种睾丸的重量差异就已经变得非常显著了,这说明PUM很有可能在早期生殖细胞的发育过程中起着重要的作用。为了解释Pum基因条件性双敲小鼠的不育原因,我们首先对其进行了组织学
动物繁殖学试题库 一、名词解释 11隐睾；2副性腺 21生殖激素；2神经激素；3长反馈；4短反馈；5超短反馈；6外激素；7大神经内分泌系统；8小神经内分泌系统；9动物的化学通讯；10动物的物理通讯;11局部激素；12神经内分泌； 31性成熟；2体成熟；3行为系列；4精子发生；5精子发生周期；6果糖酵解；7外源性呼吸；8精子冷休克；9呼吸商；10精子成熟；11精子的趋流性； 41母畜初情期；2发情周期；3季节性发情；4排卵率；5产后发情；6安静排卵；7卵泡期；8黄体期；9自发性排卵;10发情鉴定；11初配适龄;12诱发性排卵； 51人工授精；2精子活率；3精子密度；4精子畸形率；5精液稀释；6变温保存；7液态保存；8冷冻精液；9精液平衡； 61受精；2精子获能；3透明带发应；4卵黄封闭作用；5妊娠识别；6妊娠的建立；7胎盘；8怀孕脉搏；9附植；10精子顶体反应；11卵裂；12子宫拴； 71分娩预兆；2产道；3胎向；4胎位；5胎势；6子宫复原；7产后期；8分娩;9牛胎衣不下;10破水;11努责;12产力;13恶露;14前置； 81发情控制；2同期发情；3诱发发情；4胚胎移植；5超数排卵；6诱发分娩；7核移植；8胚胎分割；9卵子培养；10排卵控制； 91繁殖力；2正常繁殖力；3情期受胎率；4不返情率；5配种指数；6产犊指数；7窝产仔数；8繁殖成活率；9第一情期受胎率；10繁殖率；11总受胎率；12总情期受胎率；13公羊效应； 二、填空题 11家畜的睾丸为（）形； 2成年未孕母牛卵巢的形状为（）形； 3公畜的交配器官是（）； 4母畜的交配器官是（）；
5精子在（）中最后成熟； 6原始卵泡位于卵巢的（）部； 7对分子宫二角基部之间的纵隔有一纵沟，称（）； 8胎儿的发育场所是（）； 21各种家畜孕酮的含量，在卵泡期都低于（）； 2前列腺素是（）分泌的局部激素； 3催产素分泌的调节一般是（）性的； 4调节松果腺激素分泌的主要因素是（）； 5PMSG是由马属动物子宫内膜的（）组织所分泌； 6HCG主要来源于孕妇胎盘绒毛的（）； 7在调节家畜繁殖机能方面起重要作用的前列腺素是（）； 8在所有的家畜中，发情周期内雌激素的含量以（）期最高； 9对生殖活动有间接调节作用的激素称（）； 10控制LHRH分泌调节的高级神经中枢，位于大脑基底部的中枢神经（）；11低等动物中的松果腺是（）； 31雄性动物的性成熟一般比雌性动物（）； 2精子的头部呈（）形； 3精子的呼吸主要在（）进行； 4精子的正常运动型式是（）； 5精子的发生是在睾丸内的（）中进行的； 6对精子起营养、支持作用的细胞称作（）细胞； 7精子蛋白质的分解往往表示精子品质已（）； 8精子的比重比精清略（）； 9新采出的牛、羊精液偏（）性； 10新采出的猪、马精液偏（）性； 11早期幼畜的性腺对微量促性腺激素缺乏（）； 12培育品种的性成熟比原始品种（）； 13公畜的初配年龄主要决定于（）； 14大家畜的性成熟时间比小家畜（）； 15精子向附睾内运行发生的最显著的变化是（）； 16精子最脆弱的部分是（）； 17精清中的磷脂主要来源于（）；
收稿日期：2014-07-14 *通信作者：E-mail: mfliu@https://www.doczj.com/doc/2918798141.html, PIWI/piRNA “机器”与雄性生殖细胞发育 戴 鹏，苟兰涛，刘默芳* (中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室， 上海市分子男科学重点实验室，上海 200031) 摘要：PIWI (P-element-induced wimpy testis )蛋白在动物生殖系细胞中特异性表达，为动物生殖细胞发育分化所必需。piRNA (PIWI-interacting RNAs )是最近在动物生殖系细胞中发现的一类非编码小分子RNA ，这类小RNA 特异性地与PIWI 家族蛋白相互作用。 PIWI/piRNA “机器”通过沉默转座元件和调控编码mRNA 等方式在动物生殖细胞发育分化过程中发挥重要作用。本文围绕PIWI/piRNA “机器”的生物学功能及分子机制，对近期取得的相关研究进展进行了系统性总结。关键词：PIWI ；piRNA ；转座元件；精子发生 PIWI/piRNA machinery in spermatogenesis DAI Peng, GOU Lantao, LIU Mofang * (State Key Laboratory of Molecular Biology, Shanghai Key Laboratory of Molecular Andrology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China) Abstract: PIWI proteins are specifically expressed in animal germ cells, and have been well demonstrated to be essential for germline development and gametogenesis. Recently, PIWI-interacting RNAs (piRNAs), a novel class of germ-cell-specific small noncoding RNAs, have been found associated with PIWI proteins. PIWI/piRNA machinery silence transposable elements and regulate the expression levels of mRNAs during 刘默芳，女，博士，中国科学院生物化学与细胞生物学研究所研究员，博士生导师。2000年在中科院上海生化所获博士学位。2000年至2006年分别在美国国家健康研究院国立癌症研究所(NIH/NCI )、约翰霍浦金斯医学院从事博士后研究、研究助理工作。2006年起在中科院生化与细胞所工作。获得2013年度国家杰出青年科学基金和2006年度上海市“浦江人才计划”等支持。 刘默芳研究组从事非编码RNA 功能机制研究，主要围绕piRNA 与哺乳动物精子发生、microRNA 与人类癌症等开展较系统的探索。近期工作先后发现 小鼠piRNA 及其结合蛋白MIWI 在后期精子细胞中协同降解的调控机制(Dev Cell 2013)、小鼠粗线期piRNA 指导父本mRNA 在精子形成后期大规模降解 (Cell Res 2014)；同时还发现microRNA 在炎症相关肿瘤发生中具有极其重要的调控作用，是联系炎症-癌症的新介质因子(Cancer Res 2014；Cell Res 2014；EMBO J 2012；Cell Res 2012；Cancer Res 2010)。这些原创性研究成果揭示了小分子非编码RNA 的生理和病理功能机制, 可为男性不育症及肿瘤等疾病的诊治研究提供理论依据和相关基础。
＊ 安徽省教育委员会资助课题 作者单位:233003 蚌埠医学院卫生学教研室 小鼠精子畸形试验方法的改进 ＊ 周纯先 肖 棣 王帮霞 王允滋 摘要 目的:改进检测小鼠精子畸形的试验方法。方法:采用改进的小鼠精子畸形试验方法进行观察,并与有关试验方法作对比研究。结果:两种不同量0.9%生理盐水制备的小鼠精子玻片镜检显示,环磷酰胺阳性组和生理盐水对照组,其观察结果均以用1ml 0.9%生理盐水作稀释液制备的玻片镜检满意,符合小鼠精子畸形分析的试验要求。结论:本法具有操作简便、镜检满意和结果可靠等优点。关键词 精子计数 小鼠 中国图书资料分类法分类号 R 321.1 Improvement in method of sperm aberration test in mice Zhou Chunxian ,Xiao Di ,Wang Bangxia ,Wang Yunzi (Department of Hygiology ,Bengbu Medical College ,Anhui 233003) A bstract Objective :To improve the method of sperm aberration test in mice .Methods :The im proved method for sperm aberration test was used in mice to compare w ith o ther methods .Results :Tests taken from cyclophosphamide mice and norm al saline treated mice w ere used to make sperm suspension in 2different volume (1and 3ml )of 0.9%saline for smear examination of abno rmal sperm under microscope .The result show ed that sperm suspended in 1m l saline w as satisfactory .Conclusions :This method has m any adventages ;it is easy to perfo rm ,the amount of sperm obtained is satisfactory fo r ex amination and the results are reliable .Key words sperm count ;mice 精子畸形试验常用于观察精子头部和尾部的形态异常,是研究外来化学毒物诱发人或动物精细胞突变和判断有无生殖毒性作用的常用方法之一。目前用于检测小鼠精子畸形的试验方法有多种〔1,2〕,但其操作过程过于复杂,有的试验结果甚至不够理想。本文目的是对有关试验方法进行改进,简化操作步骤,建立本实验室条件下的小鼠精子畸形试验 方法,现作报道。1 材料与方法 1.1 动物 选用本院实验动物科提供的昆明种雄性小鼠,体重25～28g 。 1.2 试剂 环磷酰胺(上海产);0.9%生理盐水;1%伊红溶液。 1.3 实验方法 试验分2组,每组4只。Ⅰ组为环磷酰胺阳性组,按40mg /kg 体重腹腔注射;Ⅱ组为0.9%生理盐水阴性对照组,按0.1ml /10g 体重腹腔注射。各试剂物均每 恩医科大学学报,1989,15(5)∶442 3 李柏青,杨贵贞.小鼠胸腺上皮细胞增养上清的生物学活性.中 华微生物学和免疫学杂志,1989,9(4)∶2224 Geenen V ,Legros JJ ,Franchimont P ,et al .Coexsis tenc e of oxytoc in and neurophysin in the human thymus .Science ,1986,232(4749)∶5085 Geenen V ,Defresne M P ,Robert F ,et al .The neurohormonal thymic microenvironment :Immunocytochemical evidence that thymic nurse cell s are neuroendocrine cells .Neuroendocrinology ,1988,47(4)∶365 6 Amsen D ,K ruisbeek AM .T hymocyte selection :Not by TC R alone . Immunol Rev ,1998,165∶2097 M arkwick AJ ,Lolait SJ ,Funder JW .Immunoreactive arginine vasopressin in the rat thymus .Endocrinology ,1986,119(4)∶16908 Geenen V ,Kecha O ,Brilot F ,et al .The thymic repertoire of neuroendocrine -related self antigens :Biol ogical rol e in T -cell selection and pharmacological impl ications .Neu roimmunomodulation ,1999,6(1,2)∶115 9 M artens H ,Kecha O ,Charlet -Renard C ,et al .Neurohypophysial peptides stimulate the phosphorylation of pre -T cell focal adhesion kinases .Neuroendocrinology ,1998,67(4)∶282 10 Geenen V ,M artens H ,Vandersmissen E ,et al .Cellular and molecular aspects of thymic T -cell education in neuroendocrine self principl es .Implications for autoimmunity .Ann NY Acad S ci ,1998,840∶328 〔收稿日期 1999-06-04〕 223 蚌埠医学院学报1999年7月第24卷第4期DOI :10.13898/j .cn ki .issn .1000-2200.1999.04.002
小鼠精子細胞活性調控之研究 The Role of [Ca2+]i in Capacitation and Decapacitation Processes in Mouse Sperm 中文摘要 精子獲能作用指的是精子經過射精之後會經過一連串生化反應的調控來使得精子具有與卵結合的能力，反之，稱為去獲能作用。精子從雄性睪丸分化到進入雌性生殖道的過程中，存在著一些獲能因子以活化精子，同時也存著一些去獲能因子使精子不被提早活化，避免在與卵受精之前就已耗盡能量，使精子能在適當的時間和適當的地點和卵結合。我們實驗室對於調控精子活性之獲能作用及去獲能作用機制深感興趣。我的論文分成兩部分：在獲能作用方面，我們承接之前已發表一專一表現於睪丸之孤兒受體（orphan receptor）鳥?酸環化?G(mGC-G)的研究，繼續進行此mGC-G可能扮演的功能性分析。RT-PCR結果得知mGC-G 高度表現於性成熟的小鼠睪丸中；利用免疫組織染色法、免疫細胞染色法和共軛焦顯微技術得知，此mGC-G表現於成熟精子頭部與尾部中段。利用流式細胞儀和電腦輔助精子分析系統得知，由牛血清白蛋白(bovine serum albumin)所引發的細胞內鈣離子上升和高泳動力皆可被抗mGC-G-ECD抗體所抑制，然而，對A23187所引發的頂體反應結果並不明顯，因此我們推論其功能與精子游動力相關。在去獲能作用方面，我們發現一貯精囊分泌蛋白SVA(貯精囊自體抗原)，可以和PAF(platelet-activating factor)及富含膽鹼(choline)的脂質，如神經磷脂(sphingomyelin)和磷脂膽鹼(phosphatidylchoine)結合。此外，我們發現SVA藉由降低細胞內鈣離子濃度來調控精子活性。以免疫細胞螢光染色法與流氏細胞儀偵測得知，細胞膜PMCA (Ca2+-ATPase通道)抑制劑，CE(Carboxyleiosin-AM)，可回復SVA所降低細胞內鈣離子濃度的現象，顯示SVA的降低細胞內鈣離子機制調節與PMCA相關。此外，SVA可能藉由結合於SPM和PC在精子細胞膜lipid raft區域，進行調控PMCA的活性，以傳遞精子去獲能作用之訊息傳遞。 英文摘要 Successful fertilization is tight regulated by sperm capacitation and decapacitation processes. During the transit of sperm from male reproductive tract to female oviduct, factors promoted or suppressed sperm activity should interplay to prevent the gamete prematurization. We are interested in the regulation of sperm activation, including capacitation and decapacitation. In capacitation process, we focus on a mouse orphan receptor, guanylyl cyclase G (mGC-G). mGC-G has been demonstrated to be highly and selectively expressed in mouse testes exclusively. The unique testis-enriched expression of mGC-G suggests the existence of physiological function mediated
毒理学实验五 小鼠精子畸形实验 一、实验目的 1、学习观察小鼠精子畸形的实验方法。 2、检测受试物对雄性生殖细胞的遗传毒性。 二、实验原理 小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。 在正常情况下，人与其它哺乳动物的精液中也有少量畸形精子，毒物影响下，数量大大提高。 三、试剂材料 1、健康成年雄性小鼠，体重25 g ~30g 2、器材 剪子、镊子、玻璃小平皿、滴管、载玻片、擦镜纸、染色缸、显微镜 3、试剂 生理盐水、甲醇、2％伊红水溶液、受试物及阳性对照物环磷酰胺 四、实验内容 1、解剖小鼠、摘取附睾、涂片、固定。 2、镜下观察精子形态，记录畸形精子。 3、计算精子畸形率。 4、结果分析与评价。 五、操作步骤 1、染毒：染毒5天，途径（一般经口） 2、处死：35天后颈椎脱臼处死 3、取材：附睾 4、涂片：将附睾所有内容物直接涂片（一滴生理盐水） 5、晾干： 6、固定：甲醇固定5分钟 7、冲洗和干燥
8、镜检：低倍镜----油镜，镜检1000个精子，记录座标。阴性对照组精子畸变率一般为1-3% 精子畸形主要表现： (1)头部：无钩、香蕉形、胖头、无定形、双头 (2)尾部：卷尾、双尾 六、实验设计 剂量和分组方法: 受试物至少设3个剂量组，同时设阳性和阴性对照组。 最高剂量组应能使部分动物死亡，然后以高剂量组的1/2～1/4递减作为中、低剂量组。 阳性对照组给予环磷酰胺(20mg/kgBW～40mg/kgBW)，腹腔注射，连续5d，每天一次。阴性对照组给予等体积的溶剂。 七、实验结果及分析 1、正常小鼠精子涂片：由于是正常小鼠的精子涂片，因其畸形精子比例较低，没有观察到畸形精子，观察到一些正常精子，但由于没有进行固定染色，所以不是非常清晰。 在观察图片过程中，看到了一些条纹状的结构，阻碍了精子的观察，考虑可能是浓度太浓或者除精子外的其他组织被涂在载玻片上所致。 2、通过小鼠染毒的畸形精子样片，在镜下观察到了正常精子及畸形精子。畸形精子包括香蕉型，以及双头双尾等。（在附件图1中可以见到正常小鼠精子及香蕉型畸形的小鼠精子） 八、注意事项 1、涂片时生理盐水不要多，精子密度太稀不易观察。 2、涂片时需将附睾剪碎将所有内容物（精子）都点到整个片子上，然后再推片。 3、阅片时，注意区分人为剪碎的精子与精子畸形。
项目名称：雌性生殖细胞减数分裂的分子基础首席科学家：孙青原中国科学院动物研究所起止年限：2012.1至2016.8 依托部门：国家人口和计划生育委员会
一、关键科学问题及研究内容 (一)拟解决的关键科学问题 自然流产、不孕不育、出生缺陷和辅助生殖成功率低的根本原因之一是卵子质量下降，而减数分裂异常是造成卵子质量下降的主要原因，但减数分裂异常的原因迄今还远未阐明。本项目拟解决的关键科学问题是：减数分裂过程如何受到精确调节进而决定雌性生殖细胞的质量？主要分解为如下三个具体问题加以解决：1）雌性生殖细胞减数分裂是如何起始的？ 2）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复如何受到调节的？3）遗传物质如何在卵母细胞减数分裂过程中维持稳定？ （二）主要研究内容 针对上述科学问题，我们将主要开展以下四个方面的研究： 1、卵原细胞减数分裂启动及卵母细胞生长起始调节机制 1）卵原细胞减数分裂启动的关键调控元件及调节途径； 2）表观遗传修饰在减数分裂启动过程中的作用； 3）卵泡形成及卵母细胞生长起始的分子机制。 2、卵母细胞减数分裂DNA断裂、修复与重组的分子基础 1）DNA断裂、修复与重组的分子基础及在卵母细胞命运、卵泡形成和染色体数目稳定等方面的作用； 2）卵母细胞减数分裂DNA修复途径选择、重组位点定位和重组频率的分子基础和机制； 3）DNA断裂修复信号通路和细胞凋亡信号通路在卵母细胞发育过程中交互对话和转换的分子机制。 3、卵母细胞减数分裂阻滞与恢复调控机制 1）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复调控新机制的发掘； 2）卵母细胞减数分裂阻滞与恢复基因调控网络；
3）颗粒细胞与卵母细胞的交叉对话在减数分裂阻滞与恢复中的作用。 4、卵母细胞减数分裂染色体精确分离调节 1）卵母细胞减数分裂过程中染色体正确分离的纺锤体检验点调节；2）染色体交叉和粘合与染色体正确分离间的关系； 3）卵子老化非整倍性增加与纺锤体检验点及染色体粘合之间的关系。
农业生物技术学报Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13(3):382~387 *基金项目：国家自然科学基金项目(No.30200137)，国家基础研究发展(973)项目(No.G199954304-3)，国家高技术研究与发展计划(863)项目 (No.2002AA216161)和教育部重大科技项目(No.03160)资助。 华进联:男,1971年生,助理研究员。E-mail:
十三、精子畸形试验 Sperm Malformation Test 1 范围 本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。 2 引用标准 GB 14924 试验动物与饲料标准 GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序 3 定义 精子畸形（sperm malformation） 指精子形态的异常改变。 4 原理 已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。 小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。 5 试验的基本原则 通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。 6 仪器和器械 生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。 7试剂 7.1 1%伊红染色液 称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。 7.2 生理盐水、甲醇（A.R） 8 实验动物和饲养环境 常规使用动物是雄性小鼠。6周~8周龄，体重为30g ~35g。 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。 9 剂量分组 受试物至少设三个剂量组。分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/
日。每组至少有5只存活动物。 10 染毒途径和方式 染毒途径视实验目的而定。常用途径为经口灌胃方式。受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。一般于首次染毒后的第35d处死动物。 11 试验方法 11.1 制片 用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。 11.2 固定 待涂片干燥后，放入甲醇（A.R）液中固定5min。取出晾干。 11.3 染色 将涂片于1%伊红染液中染色1h，然后用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。 11.4 观察与计数 首先，在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域，然后，在高倍镜下观察结构完整的1000个精子，计数其中畸形的精子。精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计数。判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相区别。 12 数据处理和结果判断 每只动物应按精子畸形类型分别记录，以便计算各实验组的精子畸形发生率和精子畸形类型的构成比。 利用Wilcoxon秩和检验法和其他适当的统计学方法。将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行比较。 精子畸形试验阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应关系者。 一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%，但每个实验室应有自己稳定的精子自发畸形率。 13 试验报告 试验报告应包括以下内容： （1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； （2）动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号和动物级别）； （3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物室合格证号； （4）剂量分组，染毒途径和方式； （5）试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； （6）结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率和精子畸形类型分析的结果（表1和表2）； （7）结论。
雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠的繁殖及其表型鉴定王志茹1,2，李军2，刘晓梅1，吴红联2，朱德生2 （1.吉林大学公共卫生学院，长春130021；2. 北京大学实验动物中心，北京100871） 【摘要】目的繁殖雄性生殖细胞特异性表达绿色荧光蛋白（GFP）小鼠，为进行小鼠生殖系统毒性研究提供有效的工具。方法将Ddx4-cre转基因雄鼠与Rosa26mT/mG转基因雌鼠交配，产生子代动物，利用分子生物学、组织病理学及活体成像等技术，分别从分子、细胞和组织水平对子代及其亲代小鼠进行表型鉴定。结果PCR结果表明在子代小鼠的睾丸组织中发生了Cre酶介导的特异性基因重组；活体成像可以看到在F1代小鼠的睾丸组织中具有GFP的表达；睾丸冰冻切片及精子荧光观察显示GFP主要表达于次级精母细胞、精子细胞和精子中。结论雄性生殖细胞特异性表达GFP小鼠繁殖成功。 【关键词】睾丸；特异性；基因重组；GFP Production and phenotype identification of specific expressed green fluorescent protein in male mice germ cells WANG Zhi-ru1,2，LI Jun2，LIU Xiao-mei1，WU Hong-lian2，ZHU De-sheng2 (1.School of public health，Jilin University，Changchun 130021，China；2. Peking University Laboratory animal centre，Beijing 100871，China) 【Abstract】Objective The aim of this study is production of organ specific animal model for studying reproductive toxicity in mice. Methods F1 generation was gotten by mating the Ddx4-cre transgenic male mice with the Rosa26mT/mG transgenic female mice. F1 offspring and its parents phenotype was screened by molecular biological, histopathological and in vivo imaging technology. Results At molecular level, specific DNA fragment was only found in testis of F1 offspring ; At the organ level, the expression of green fluorescent protein could only be observed in testis of F1 offspring; Testicular frozen sections and sperm fluorescence observation showed that green fluorescent protein were mainly expressed in the germ cell lineage such as secondary spermatocyte and spermatocyte and spermatozoon. Conclusions The production of the mice with specific germ cell expressed green fluorescent protein by Cre/loxP recombination system were built successfully. 【Key words】Testis;Specificity; Gene recombination;Green fluorescent protein 生殖系统的改变是造成不孕不育的重要原因，如何简易快速的检 [作者简介]王志茹（1988-）女，在读硕士研究生，研究方向：纳米毒理学，Email：843872569@https://www.doczj.com/doc/2918798141.html, [通讯作者]朱德生( 1960-) 男，高级工程师，研究方向：转基因动物，Email：deshengz@https://www.doczj.com/doc/2918798141.html,
小鼠输精管结扎和简单精子操作 121140052 王哲迪 174 一、实验目的 1、掌握小鼠手术的基本技巧 2、学习雄性小鼠生殖系统特点 3、练习显微操作技术 二、实验结果及分析 1、以腹部横切法剪开小鼠腹壁后，用镊子夹住脂肪垫将睾丸、附 睾和输精管拉出切口。 实验时我们将下面图片中镊子夹着的地方剪掉了1cm。但是 在仔细观察过右边这个图后发现，我们错把附睾体当做了输精管。 我们剪掉的是附睾体，而不是输精管。 2、下面这张图片是小鼠腹壁缝合后的照片。我们采取了方洁的打结方式。 在将睾丸放回腹腔的过程中，发现不管怎么推，都不能把睾丸推回阴囊，这给缝合带来了一定的难度。缝合腹壁时一定要小心，因为缝合针很容易扎到皮肤和腹腔内的脏器。
3、下图为皮肤缝合后的照片，同样采用的是方结的打结方式。皮肤相对于腹壁而言较容易缝合。 4、下图为在解剖镜下观察得到的照片。 可能由于角度问题，这张图片上只能分辨出脂肪体和睾丸，并不能看到附睾体和输精管。取出睾丸时的操作也存在问题，并没有注意到输精管在哪里。 上面剪切输精管时也没有找对输精管，所以实验失败在没有观察到输精管。 脂肪体 4、下图为在显微镜下观察精子得到的照片。 正如细线所指的，图中有着尖尖的头部和一条细长的尾巴的就是精子。 由于载玻片上有一些脂肪体残留的脂肪，所以在显微镜下会看到很多油花，影响精子的观察。但是仔细看还是可以看到许多在快速无规则运动的精子。
精子 三、备注 1、本人在实验中操作的部分： 对小鼠进行断颈处理 切开腹壁 夹出睾丸、附睾和脂肪体 剪掉1cm输精管（其实剪掉的是附睾） 部分缝合操作 2、实验要求用乙醚麻醉小鼠，但是实验过程中发现用乙醚麻醉的方法并不好，小鼠经常会醒过来，而且用乙醚操作时间长了，实验人员出现头疼恶心等不适症状。由于并不需要对小鼠进行回收，所以为了方便操作我们直接采取了断颈处理 的方法。
小鼠精子畸形试验 一、目的与要求 1、熟悉精子畸形的概念及类型、精子畸形试验的实验设计、试验检测的遗传学终点。 2、学习与掌握小鼠精子畸形试验的基本方法步骤,正常精子及畸形精子的镜下观察。 3、了解精子畸形试验数据整理、分析方法及结果的评价。 二、实验原理 精子的畸形主要就是指精子形态的异常改变,大、小鼠精子畸形受基因控制,具有高度遗传性,许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。因此精子形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。大、小鼠精子畸形试验可检测受试物对于精子生成、发育的影响,而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性,故精子畸形试验可用作检测受试物在体内对生殖细胞的致突变 作用。 三、实验设计 1、动物选择:一般采用小鼠,因为小鼠比较经济,且有大量的实验结果证实小鼠在该实验系统中对受试物最为敏感。6~8周龄(体重25~35g),雄性。每组应保证至少有5只存活小鼠。 2、染毒途径:多用腹腔注射,也可采用与人体实际接触化学毒物相同的途径,如经口、吸入及皮肤接触等。 3、染毒次数及取样时间:可采用1次或每天1次连续5天的方法进行染毒。 各种化学毒物作用于精子的不同发育阶段,可在接触某种化学毒物后不同时间出 现精子畸形,故有条件时,可于给受试物后第1、4、10周处死动物,检查精子形态。因为大部分化学毒物对精原细胞后期或初级精母细胞早期的生殖细胞较为敏感,故一般均就是于首次给受试物后的第35天处死。 4、剂量选择:至少设置3个剂量组。最高剂量组5天总剂量应能使部分动物死亡,一般可取1/2 LD50为高剂量组,然后以1/2~1/4递减作为中、低剂量组。另设溶剂对照组(阴性对照组)与阳性对照组。阳性对照组可用环磷酰胺(20 mg/kg)或甲基磺酸甲酯(75 mg/kg)或甲基磺酸乙酯(60 mg/kg)进行腹腔注射,每天1次,连续5