食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则
一、2016版总则变更内容
1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。
2.删除了规范性引用文件。
3.修改了实验室基本要求：
应具有相应的微生物专业教育或培训经历
（如生物学、植物学、医学、食品科学与工
程、食品质量与安全等与微生物有关的相关
专业），具备相应的资质（应有岗位上岗证、
生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够
理解并正确实施检验。
实验室生物安全操作和消毒知识（相
关标准及培训，如GB 19489-2008 实验室
生物安全通用要求、消毒技术规范（2002））。
应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止
人为污染样品。
应在检验过程中遵守相关安全措施的规定，
确保自身安全。
有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色
的实验（即无颜色视觉障碍）。
②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。
生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应:
引起人和动物非常严重疾病，国家未发
现或已宣布消灭的微生物，如天花病毒。
引起任何动物比较严重疾病，在人和人、
人和动物之间传播如霍乱弧菌。
病原微生物分类
成严重危害如沙门氏菌、单增李斯特氏
菌。
BSL-1）：操作第四类病原微生物（属
适用范围如大肠埃希氏菌、枯草芽
重要设备是超净工作台，它可以
）
实验室生物安全级别BSL-2）：操作第三类病原微生物（属
II级生物安全柜。）
BSL-3）：操作第二类病原微生物
BSL-4）：操作第一类病原微生物
消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。
灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。
紫外线消毒（臭氧）
空间熏蒸（如空间被霉菌
微生物实验湿热灭菌或常用
高压灭菌
180℃
1h或170℃2h）
紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而达到灭菌目的。紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于表面灭菌，对固体物质灭菌不彻底。
微生物实验室消毒处理方法：
最佳杀菌波长：260nm，需定期更换。
有效杀菌距离物品：25-60cm
空气：＜2m
照射时间：灯亮5-7min后开始计算，＞30min（无人条件下打开）适用范围：室内空气、物体表面。
注意事项：人员需在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。
③检验用品--增加附录A和一次性用品。
附录A 微生物实验室常规检验用品和设备
高压锅灭菌效果评价方法/胶带，使
准确性高，高压后需要培
养后才得知检测结果。
④培养基和试剂质控-GB4789.28-2013。
⑤质控菌株-新增实验室分离、鉴定的野生菌株。
4.修改了样品采集
①采样原则：样品的采集应遵循随机性、代表性的原则；采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。
②采样方案：根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的威海程度等确定采样方案。
采样方案分为二级好三级采样方案。二级采样方案设有n、c和m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。（其中n表示桶一批次产品应采集的样品件数；c表示最大可允许超出m值得样品数；m表示微生物指标可接受水平限量值(三级采样方案)或最高安全限量值(二级采样
方案)；M表示微生物指标的最高安全限量值。）
注意事项：按照二级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值大于m值。
按照三级采样方案设定的指标，在n个样品中，允许全部样品中相应微生物指标检验值≤m值；允许有≤c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间；不允许有样品相应微生物指标检验值大于M 值。
5.修改了检验—“样品检验”
6.修改了生物安全和质量控制（优化）
7.修改了记录与报告
检验过程中应即时、客观地记录观察到的现象、结果和数据等信息。实验室应按照检验方法中规定的要求，准确、客观地报告检验结果。
8.修改了检验后样品的处理
检验结果报告后，被检样品方能处理；
检出致病菌的样品要经过无害化处理；
检验结果报告后，剩余样品和同批产品不进行微生物项目的复检。二、2016版总则具体要求
各种微生物危害分类
在中等以上甚至严重危害的情况下，使用二级采样方案。
对健康危害低的，则建议使用三级采样方案。
分级抽样方案：同批食品总微生物数量一般是正态分布，表明同批次具有均一性。但对于单一检样来说，微生物分布或数量一般不会均匀（液态食品除外）。这样的不均一型造成检验结果判读困难。N越大越准确，但是应考虑适度严格性的要求。
三、2016版总则相关质量控制
检验人员的质量控制（实施考核、监督方式）：
1.问答、试题
2.盲样测试
3.加标测试
4.实验室内部人员对比r≤0.25
参考BS EN ISO 4833-2003，其中对结果重复性的规定为：用相同的方法，同一试验材料，在相同的条件（同一操作者、相同的设备、同一实验室和短暂的时间间隔）下，所测得的两个独立测试结果只差的绝对值不能大于重复性极限（r=0.25）。
举例：第一次测试结果为105=100000CFU/g(ml)
第二次测试结果应在第一次结果的±0.25log10单位范围内
即在log104.75- og105.25范围内
即第二次测试结果在56000-178000CFU/g(ml)范围内视为无
差异。
5.实验室间对比R≤0.45
参考BS EN ISO 4833-2003，其中对结果重复性的规定为：用相同的方法，同一试验材料，在不同的条件（不同的操作者、不同的设备、不同的实验、不同或相同的时间）下，所得的两个测试结果只差绝对值不能大于再现性极限，即R=0.45。
举例：第一次测试结果为105=100000CFU/g(ml)
第二次测试结果应在第一次结果的±0.45log10单位范围内
即在log104.55- og105.45范围内
即第二次测试结果在36000-280000CFU/g(ml)范围内视为无
差异。
GB 4789.2-2016 食品微生物学检验菌落总数测定
一、菌落总数的定义
食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g(ml)检样中形成的微生物菌落总数。
在GB 4789.2-2016的培养条件下所得结果，只包括一群在平板计数琼脂上生长发育的嗜中温需氧菌或兼性厌氧菌的菌落总数。
注意：有的平板计数琼脂上长一片霉菌，则此次试验结果作废，需重新检测（霉菌属于真菌类，它产生的霉菌毒素一直普通菌的生长，所以若有一大片霉菌生长需重新检测，并清理实验室。）
二、菌落总数测定的卫生学意义
检测食品本身的新鲜程度和加工、贮存运输过程中是否受到污染。必须配合大肠菌群的检验和其他病原菌项目的检验，才能作出比较全面准确的判定。
三、2016版国家标准的主要变动
①拍击式均质：方便，只需购置一次性无菌均质袋；快捷，1-2min 内完成均质；科学，均质过程中不会产生高温；均质均匀，可使样品菌完全稀释出来；此方法不适合均质坚硬样品，如鱼骨类样品。
②培养基---平板计数琼脂
培养基改变依据：国外食品微生物检验的权威方法（ISO、FDA、AOCAC）均采用PCA，它的营养更优化。
③计数和报告-----平板和菌落选取原则
●选取每个平皿菌落数在30-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
●有较大片状生长菌落的平板不易采用。
●如片状菌落不足平板一般，而另一半平板菌落分布均匀，可计分布均匀的一半，再乘以2。
●如平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则每条单链作为一个菌落计算。
④计数和报告-----菌落总数计算方法
●如果只有一个稀释度平板的菌落数在30-300CFU适宜范围内，则计算该稀释度两个平板菌落平均数，再乘以稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
●若有两个连续稀释度的平板菌落数均在30-300CFU适宜范围内，按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d计算。N:样品中菌落数，∑C：含适宜范围CFU的平板菌落数之和， n1：第一稀释度（低稀释度）平板个数， n2：第二稀释度（高稀释度），d：稀释因子（第一稀释度）。
●所有平板菌落数均＞300，计最高稀释度平板的平均菌落数。
●所有平板菌落数均＜30，计最低稀释度平板的平均菌落数。
●样品原液和所有稀释度平板均无菌生长，以＜1乘以最低稀释倍数计算。
●所有稀释度平板菌落数均不在20-300之间，有些＜30，有些＞300，则最接近30-300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
⑤计数和报告-----结果报告（采取四舍五入法）
四、2016版国家标准的检验流程
五、其他注意事项
1.如样品（干调、面粉、脱水蔬菜）中可能含有在琼脂表面蔓延生长的菌落，可在凝固后的琼脂表面再覆盖一层（4ml）培养基。这样可
以有效防止菌落蔓延的现象出现。
2.稀释液选择磷酸盐缓冲液：适用于偏酸或偏碱性样品的稀释。
生理盐水：适用于常规样品的稀释。
3.倾注平板计数琼脂在15-20ml，一般要求达到18ml以上，即琼脂高度＞3mm。若倾注的培养基太薄，菌需要的营养成分不够，使菌生长的不完好，不便于观察结果。
4.样品与培养基一定要混合均匀，建议混匀方法：上下摇晃-左右摇晃-顺时针摇晃-逆时针摇晃。若混合不均匀，有的菌落会长到平板边缘，不便于观察，影响最终结果。
5.培养基水浴温度和倾注温度在46±1℃。培养基的冷却方法：要在恒温水浴锅中通过水来冷却；不可直接放到试验台或地面上冷却，因这样培养基底部容易先凝固，倾注培养基时，有凝固块到处，导致培养基有结块，即不美观，有影响观察结果。
6.培养条件：一般样品36±1℃培养48±2h，水产品（指原生态、未经过加工的水产品原料），它的培养温度要接近原生态的温度，即30±1℃，培养72±3h。
7.样品稀释液有时会带有细碎的食物颗粒（如奶粉、坚果），为避免这些颗粒与菌落发生混淆，可将样品稀释液与PCA混合，单做培养，置于4℃冰箱放置同样时间，以便在计数时作为对照。（营养琼脂可加红四氮唑来区别菌和颗粒，一般不建议使用）
8.必须做空白对照：检测培养基、平皿、稀释液的无菌程度。同时，应在工作台内打开一块空白PCA（其暴露时间应与检样时间相当），
以了解样品在检验过程中有无受到来自环境的污染。
GB 4789.3-2016 食品微生物学检验大肠菌群计数
一、大肠菌群定义
1.定义：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
2.该菌主要来源于人畜粪便，作为粪便污染指标评价食品的卫生状况，推断食品中肠道致病菌污染的可能。即大肠菌群为卫生学指标。
3.这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化鉴定试验，可将大肠菌群细分为大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和肠杆菌等。
二、2016年国标主要修订内容
1.标准替代：GB 4789.3-2010；GB/T 4789.32-2002；SN/T0169-2010
2.增加检验原理
MPN法：是统计学和微生物学结合的一种定量检测法，待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
平板计数法：大肠菌群在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。
3.修改典型菌落描述：如菌落直径较典型菌落小，为可疑菌落，也要挑取进行验证。
4.修改第二法平板菌落数的选择：最低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。
5.修改第二法验证试验：若少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌
落进行验证。若大于10个菌落，则挑取10个典型和可疑菌落进行验证。
三、大肠菌群检测流程
●MPN法
1.初发酵试验：
A、月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST（成分：胰蛋白胨或胰酪胨、氯化钠、乳糖、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、月桂基硫酸钠）作用：
①胰酪胨在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的氮源、维生素、氨基酸等生长因子。
②乳糖作为可发酵的碳源。
③NaCl维持体系渗透压平衡。
④磷酸盐为菌体生长提供一个相对稳定的酸碱缓冲体系。
⑤月桂基硫酸钠抑制非大肠菌群类细菌的生长。
大肠菌群类细菌利用培养基中的乳糖产气而与其它不产气的细菌相区别。
B、接种方式：1ml稀释液+10mlLST；10ml稀释液+10ml双料LST。
C、培养条件：36℃，培养24-48±2h。
D、结果观察：小导管是否产气。
2.复发酵试验：
A、煌绿乳糖胆盐肉汤BGLB（成分：蛋白胨、乳糖、牛胆粉溶液、0.1%煌绿水溶液）的作用：
①蛋白胨在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的碳源、氮源。
②牛胆盐和煌绿抑制革兰氏阳性菌及非大肠菌群的革兰氏阴性菌的生长。
③乳糖作为可发酵的碳水化合物。
B、接种方式：1环产气的LST+10mlBGLG。
C、培养条件：36℃，48±2h。
D、结果观察：小导管是否产气。
3.结果报告
根据阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中含菌量的最近似数值。MPN检索表只给了三个稀释度，如改用其他稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
●平板计数法
1.培养基：结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA）
①原理：乳糖作为可发酵碳源；胆盐和结晶紫抑制革兰氏阳性菌生长；中性红为酸碱指示剂。
②大肠菌群特点：紫红色菌落，周围红色胆盐沉淀环，菌落直径为
0.5mm或更大。
③培养基倾注方法：每个平皿倾注15-20ml，凝固后再加3-4ml覆盖，防止菌落蔓延生长，影响结果。
2.平板菌落数的选择
①选取菌落数在15-150CFU之间的平板计数。
②分别计数平板上出现的典型和可疑菌落（如菌落直径较典型菌落小）。
③最低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。
3.验证试验
①从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个
菌落的挑取全部典型和可疑菌落。
②移种于BGLB肉汤管，36±1℃培养24-48h，观察产气
③凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。
4.平板计数的报告
BGLB阳性管数比例乘以计数的平板菌落数，乘以稀释倍数，即为每g （ml）样品中大肠菌群数。
例如：
注意事项：
①样品PH调节方法：添加NaOH调节
②在36±1℃培养24-48h的意义：24h为预判，若预判未产气继续培养到48h最终确定结果。
③若典型菌落和可疑菌落超过10个，应挑取10个典型和可疑菌落接种验证；若少于10个菌落的则挑取全部典型和可疑菌落接种进行验证。
④大肠菌群类细菌可发酵乳糖产气，因此主要看小导管产气情况来确定大肠菌群。若BGLB肉汤变成黄绿色，则产酸导致。
④在乳糖发酵试验中，经常可以看到在小导管内有极微小的气泡，有时可以看到沿管壁有缓缓上浮的小气泡。如果对产气不明显的乳糖发酵现象有疑问，可以轻轻拍打试管，如有气泡沿管壁上浮，即可能有气体产生。
第六章糖代 糖(carbohydrates)即碳水化合物，是指多羟基醛或多羟基酮及其衍生物或多聚物。 根据其水解产物的情况，糖主要可分为以下四大类： 单糖：葡萄糖（G）、果糖（F），半乳糖（Gal），核糖 双糖：麦芽糖（G-G），蔗糖（G-F），乳糖（G-Gal） 多糖：淀粉，糖原（Gn），纤维素 结合糖: 糖脂，糖蛋白 其中一些多糖的生理功能如下： 淀粉：植物中养分的储存形式 糖原：动物体葡萄糖的储存形式 纤维素：作为植物的骨架 一、糖的生理功能 1. 氧化供能 2. 机体重要的碳源 3. 参与组成机体组织结构，调节细胞信息传递，形成生物活性物质，构成具有生理功能的糖蛋白。 二、糖代概况——分解、储存、合成
各种组织细胞 门静脉 肠粘膜上皮细胞 体循环 小肠肠腔 三、糖的消化吸收 食物中糖的存在形式以淀粉为主。 1.消化 消化部位：主要在小肠，少量在口腔。 消化过程：口腔 胃 肠腔 肠黏膜上皮细胞刷状缘 吸收部位：小肠上段 吸收形式：单糖 吸收机制：依赖Na+依赖型葡萄糖转运体（SGLT ）转运。 2.吸收 吸收途径： SGLT 肝脏
过程 四、糖的无氧分解 第一阶段：糖酵解 第二阶段：乳酸生成 反应部位：胞液 产能方式：底物水平磷酸化 净生成ATP 数量：2×2-2= 2ATP E1 E2 E3 调节：糖无氧酵解代途径的调节主要是通过各种变构剂对三个关键酶进行变构 调节。 E1:己糖激酶 E2: 6-磷酸果糖激酶-1 E3: 丙酮酸激酶 NAD + 乳 酸 NADH+H +
第二阶段：丙酮酸的氧化脱羧 第三阶段：三羧酸循环 生理意义： 五、糖的有氧氧化 1、反应过程 ○1糖酵解途径（同糖酵解，略） ②丙酮酸进入线粒体，氧化脱羧为乙酰CoA (acetyl CoA)。 总反应式: 关键酶 调节方式 ? 糖无氧氧化最主要的生理意义在于迅速提供能量，这对肌收缩更为重要。 ? 是某些细胞在氧供应正常情况下的重要供能途径。 ① 无线粒体的细胞，如：红细胞 ② 代谢活跃的细胞，如：白细胞、骨髓细胞 第一阶段：糖酵解途径 G （Gn ） 丙酮酸 乙酰CoA ATP ADP 胞液 线粒体 丙酮酸 乙酰CoA NAD + , HSCoA CO 2 , NADH + H + 丙酮酸脱氢酶复合体
一、名词解释 1. 血清学诊断 2. 培养基 3. 基础培养基 4. 选择培养基 5. 实验室细菌学检查结果的准确与否和标本的选择、、有直接关系。 2. 辅助诊断风湿热的抗“ O ”实验属于。 3. 血清学试验一般需作两次, 其血清分别取自疾病的和 .时方有诊断意义。 4. 5. 培养基或培养基。 6. 、和三大类。 7. 三、单项选择题 1. B. 减毒活疫苗刺激机体产生的特异性免疫的持续时间比灭活疫苗长 C. D. 减毒活疫苗可诱导机体产生分泌型 IgA , E. 2. 白百破三联疫苗的组成是
B. C. D. E. A. 丙种球蛋白 B. 胎盘球蛋白 C. 抗毒素 D. 白细胞介素 E. 干扰素 4. A. B. 一般含 IgM C. 5. 伤寒病人发病第一周内,分离病原菌应采取的标本是 A. 血液 B. 尿液 C. 粪便 D. 呕吐物 E. 脑脊液
A. 结核病 B. 军团病 C. 白喉 7. 一般需经 3~4周培养才能见到有细菌生长的细菌是 A. 结核分枝杆菌; B. 淋病奈氏菌; C. 空肠弯曲菌; D. 炭疽杆菌; E. 军团菌 8. A. B. C. D. 尽可能采集病变明显处标本 E. 标本容器上贴好标签 9. 关于血清学试验结果分析时错误的是 A. 试验阳性说明机体接触过相应的病原体; B. C.
E. 10. C. 采集标本一般应在使用抗菌药物之前 D. 采集的标本要立即送检; E. 标本送检过程中要立即保持低温和干燥。 四、问答题 1. 2. 3. 4. 答案: 断。 2. 培养基:是人工配制的细菌生长繁殖所需的营养物质,调配合适的 pH 菌后使用的培养细菌物质。 5. 6. 1. 标本的采集时间,采取方法。 2. 中和试验。 3. 急性期和恢复期。高 4倍或 4倍以上。
医学检验不要的部分 第一章蛋白质的结构与功能 思考题： 1、叙述L-α氨基酸结构特征，比较各种结构异同并分析结构与性质的关系。 结构特征：除甘氨酸外，其他氨基酸的α-碳原子都结合了4个不同的原子和基团：羧基、氨基、R 基和一个H原子。 比较：非极性脂肪族R基氨基酸：R基是非极性疏水的 极性不带电荷R基氨基酸：R基是极性亲水的，可以与水形成氢键。 芳香族R基氨基酸：R基有苯环结构 带正电荷R基氨基酸：R基生理条件下可以结合H离子而带正电荷 带负电荷R基氨基酸：R基生理条件下可以给出H离子而带负电荷 关系：结构决定性质。 2、蛋白质的基本组成单位是什么?什么是肽键？什么是肽单元？ 组成单位是氨基酸 肽键是一分子氨基酸的α-羧基和一分子氨基酸的α-氨基脱水缩合形成的酰胺键，即-CO-NH- 肽单元，肽键中的4个原子及相邻的2个α-C原子重复形成的长链结构。 4、解释蛋白质分子中模体和结构域概念及其与二、三级结构的关系。 模体，又称超二级结构，是指几个二级结构单元进一步聚集和结合形成的特定构象单元。 它是蛋白质在二级结构基础上形成三级结构时经过的一个新的结构层次。 结构域，存在于许多较大（由几百个氨基酸构成）蛋白质的三级结构中的一个或多个稳定的球形折叠区，有时与其他部分之间界限分明，可以通过对多肽链的适当酶切与分子的其他部分分开。 结构域是三级结构的一部分。 第二章功能核酸的结构与功能 思考题： 1、说明碱基与戊糖、核苷与磷酸的连接化学键是什么？核苷酸与核苷酸之间的化学键是什么？ 碱基与戊糖的连接化学键是糖苷键；核苷与磷酸的连接化学键是磷酸酯键；核苷酸与核苷酸之间的化学键3’5’-磷酸二酯键。
专题二微生物的培养与应用 课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
生物化学实验知识点整理 实验一 还原糖的测定、实验二 粮食中总糖含量的测定 1.还原糖测定的原理 3,5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成棕色的氨基化合物,在550nm 处测定光的吸收增加量，得出该溶液的浓度，从而计算得到还原糖的含量 2.总糖测定原理 多糖为非还原糖，可用酸将多糖和寡糖水解成具有还原性的单糖，在利用还原糖的性质进行测定，这样就可以分别求出总糖和还原糖的含量 3.电子天平使用 4.冷凝回流的作用： 使HCl 冷凝回流至锥形瓶中，防止HCl 挥发，从而降低HCl 的浓度。 5.多糖水解方法： 加酸进行水解 6.怎样检验淀粉都已经水解： 加入1-2滴碘液，如果立即变蓝则说明没有完全水解，反之，则说明已经完全水解。 7.各支试管中溶液的浓度计算 8.NaOH 用量：HCl NaOH n n = 9.不能中途换分光光度计,因为不同的分光光度计的光源发光强度不同 10.分光光度计的原理：在通常情况下，原子处于基态，当通过基态原子的某辐射线所具有的能量（或频率）恰好符合该原子从基态跃迁到激发态所需的能量（或频率）时，该基态原子就会从入射辐射中吸收能量，产生原子吸收光谱。原子的能级是量子化的，所以原子对不同频率辐射的吸收也是有选择的。这种选择吸收的定量关系服从式/E h hc νλ?==。 实验证明，在一定浓度范围内，物质的吸光度A 与吸光样品的浓度c 及厚度L 的乘积成正比，这就是光的吸收定律，也称为郎伯-比尔定律 分光光度计就是以郎伯比尔定律为原理，来测定浓度 11.为什么要水解多糖才能用DNS 因为DNS 只能与还原糖溶液在加热的条件下反应生成棕红色的氨基化合物，不能与没有还原性的多糖反应。 12.为什么要乘以0.9 以0.9才能得到多糖的含量。 13.为什么要中和后再测？ 因为DNS 要在中性或微碱性的环境下与葡萄糖反应 实验三 蛋白质的水解和纸色谱法分离氨基酸、实验四 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 1.纸色谱分离氨基酸分离原理 由于各氨基酸在固定相（水）和流动相（有机溶剂）中的分配系数不同，从而移动速度不同，经过一段时间后，不同的氨基酸将存在于不同的部位，达到分离的目的。 2.天然氨基酸为L 型 3.酸式水解的优点是：是保持氨基酸的旋光性不变，原来是L 型，水解后还是L 型，由于甘氨酸所有的R 基团是氢原子，所以它不是L 型
一、填空题（共35个空，共计70分） 1、菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 2、平板计数琼脂培养基的成分有胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、蒸馏水。 3、菌落总数小于100 CFU 时,按“四舍五入”原则修约，以整数报告。 4、大肠菌群：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。 5、GB 4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。 6、MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。待测样品经系列稀释并培养后,根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。 7、GB 29921-2013《食品安全国家标准食品中致病菌限量》n为同一批次产品应采集的样品件数；c为最大可允许超出m值的样品数；m为致病菌指标可接受水平的限量值；M为致病菌指标的最高安全限量值。 8、无菌生理盐水的制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 9、霉菌和酵母平板计数法的培养过程：琼脂凝固后，正置平板，置28±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5天的结果。 10、菌落总数的培养过程：待琼脂凝固后，将平板翻转，36±1℃培养48±2h。 11、霉菌和酵母平板计数法：若空白对照平板上有菌落出现，则此次检测结果无效。 12、大肠菌群平板计数法：在固体培养基中发酵乳糖产酸，在指示剂的作用下形成可计数的红色或紫色，带有或不带有沉淀环的菌落。 二、简答题（共1题，共计30分） GB 2749-2015《食品安全国家标准蛋与蛋制品》中液蛋制品的菌落总数和大肠菌群的微生 菌落总数：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿中→每皿中加入15～20ml平板计数琼脂培养基，混匀→培养→计数各平板菌落数→计数菌落总数→报告 大肠菌群（平板计数法）：25g（ml）样品+225ml稀释液，均质→10倍系列稀释→选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，倾入VRBA平板(36±1℃培养18～24h)→计数典型和可疑菌落→BGLB肉汤(36±1℃培养24～48h)→报告结果 1/ 1
临床医学检验技术士必背知识点 基础知识 1.属于血液中正常有形成分的是血小板 2.不属于临床血液学研究内容的是淋巴细胞的分化和发育 3.正常人血液PH应该在7.35~7.45 4.血浆渗透压量正常人约为290~310mOsm/(kg·H2O) 5.血液的主要生理功能包括：运输、协调、防御、维持机体内环境稳定等功能 6.在必要时，成人静脉采血的部位可选择股静脉 7.皮肤采血的特点是耳垂采血检查结果不够恒定 8.真空采血法又称为负压采血法 9.属于酸性染料的是伊红 10.关于细胞成分化学特性，叙述正确的是血红蛋白为碱性蛋白质 11.晚幼红细胞脱核成网织红细胞的过程是完成在骨髓 12.关于红细胞生理，描述正确的是红细胞有交换和携带气体的功能 13.每克血红蛋白可携带氧气为1.34ml 14.新生儿红细胞计数的参考值（6.0~7.0）X 1012/L 15.红细胞Hayem稀释液中硫酸钠的主要作用是提高比密防止细胞粘连 16.枸橼酸钠在枸橼酸钠稀释液中的主要作用是抗凝和维持渗透压 17.1966年被ICSH推荐的血红蛋白检测参考方法是HiCN 18.改良牛鲍计数板两侧支柱加盖专用盖玻片形成的计数池高为0.10mm 19.HiCN测定最大吸收峰位于540nm 20.HiN3检测的最大吸收峰位于542nm 21.正常情况下，外周血中的血红蛋白主要是氧合血红蛋白 22.瑞氏染色血涂片中，正常红细胞直径范围在6.0~9.5um 23.大红细胞是指红细胞直径>10um 24.关于嗜多色性红细胞叙述正确的是胞质内尚存少量嗜碱性物质 25.血细胞比容测定ICSH确定的参考方法是放射性核素法 26.温氏法测定血细胞比容其结果应读取红细胞柱还原红细胞层 27.对血细胞比容叙述正确的是作为MCV计算的基础数据 28.对红细胞平均指数叙述正确的是MCHC的计算单位是g/L 29.RDW反映红细胞的体积大小的异质性 30.对红细胞体积分布宽度叙述正确的是RDW可作为IDA的筛选诊断指标医学教`育网提供 31.标本中可影响RDW的因素是红细胞碎片 32.有关网织红细胞检测原理叙述错误的是经普鲁士蓝染色后可见连成线状的网状结构 33.ICSH推荐的血沉检测的标准方法为魏氏法 34.魏氏法检测血沉所采用的数值报告单位是mm/h 35.在机体防御和抵抗病原菌过程中起主要作用的外周血中的细胞是中性粒细胞 36.正常状态下衰老的中性粒细胞主要被破坏所在的系统是单核-吞噬细胞系统 37.在白细胞成熟过程中，最早出现特异性颗粒的细胞是中幼粒细胞 38.与白细胞无关的是Howell-Jolly小体 39.正常生理情况下，关于白细胞变化规律的正确叙述是早晨较低，下午较高
食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总 GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则 一、2016版总则变更内容 1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。 2.删除了规范性引用文件。 3.修改了实验室基本要求： 微生物专业教育或培训经历（如生物学、植 物学、医学、食品科学与工程、食品质量与安全等与微 生物有关的相关专业），具备相应的资质（应有岗位上岗 证、生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够理解并正 确实施检验。 ①人员修改为检验人员实验室生物安全操作和消毒知识（相关标准及培训， 如GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求、消毒技术 规范（2002））。 品。 确保自身安全。
有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验（即无颜 色视觉障碍）。 ②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。 生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应: 灭的微生物，如天花病毒。 间传播如霍乱弧菌。 病原微生物分类 沙门氏菌、单增李斯特氏菌。 第四类：通常不会引起人或动物疾病的微生物。 BSL-1）：操作第四类病原微生物（属于正压，适用 ） 实验室生物安全级别BSL-2）：操作第三类病原微生物（属于负压，适用 II级生物安全 ） BSL-3）：操作第二类病原微生物
四级（BSL-4）：操作第一类病原微生物 消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。 灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。 蒸法消毒） 消毒剂表面消毒 微生物实验 高压灭菌 干热灭菌（180℃1h或170℃2h） 培养基和试剂灭菌 过滤除菌 紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而达到灭菌目的。紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于表面灭菌，对固体物质灭菌不彻底。
第一章 蛋白质的元素组成（克氏定氮法的基础） 碳、氢、氧、氮、硫（C、H、O、N、S ） 以及磷、铁、铜、锌、碘、硒 蛋白质平均含氮量（N%）：16% ∴蛋白质含量=含氮克数×6.25（凯氏定氮法） 基本组成单位 氨基酸 熟悉氨基酸的通式与结构特点 ● 1. 20种AA中除Pro外，与羧基相连的α-碳原子上都有一个氨基，因而称α-氨 基酸。 ● 2. 不同的α-AA，其R侧链不同。氨基酸R侧链对蛋白质空间结构和理化性质有 重要影响。 ● 3. 除Gly的R侧链为H原子外，其他AA的α-碳原子都是不对称碳原子，可形成 不同的构型，因而具有旋光性。 ● 氨基酸分类P9 按侧链的结构和理化性质可分为： 非极性、疏水性氨基酸 极性、中性氨基酸 酸性氨基酸 碱性氨基酸 等电点概念 在某一溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，呈电中性，此时该溶液的pH值即为该氨基酸的等电点(isoelectric point，pI )。 紫外吸收性质 含有共轭双键的芳香族氨基酸Trp(色氨酸), Tyr（酪氨酸）的最大吸收峰在280nm波长附近。 氨基酸成肽的连接方式 两分子脱水缩合为二肽，肽键
由10个以氨基酸相连而成的肽称为寡肽。 而更多的氨基酸相连而成的肽叫做多肽；多肽链有两端，其游离a-氨基的一端称氨基末端或N-端，游离a-羧基的一端称为羧基末端或C-端。 肽链中的氨基酸分子因脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基。 蛋白质就是由许多氨基酸残基组成的多肽链。 谷胱甘肽GSH GSH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的三肽。 (1) 体重要的还原剂保护蛋白质和酶分子中的巯基免遭氧化，使蛋白质处与活性状态。 (2) 谷胱甘肽的巯基作用可以与致癌剂或药物等结合,从而阻断这些化合物与DNA、RNA 或蛋白质结合，保护机体免遭毒性损害。 蛋白质1~4级结构的定义及维系这些结构稳定的作用键 蛋白质是氨基酸通过肽键相连形成的具有三维结构的生物大分子 蛋白质的一级结构就是蛋白质多肽链中氨基酸残基的排列顺序。主要化学键是肽键，有的还包含二硫键。 蛋白质二级结构是指多肽链的主链骨架中若干肽单元，各自沿一定的轴盘旋或折叠，并以氢键为主要次级键而形成的有规则或无规则的构象，如α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规卷曲等。蛋白质二级结构一般不涉及氨基酸残基侧链的构象。 二级结构的主要结构单位——肽单元（peptide unit）[肽键与相邻的两个α-C原子所组成的残基，称为肽单元、肽单位、肽平面或酰胺平面(amide plane)。它们均位于同一个平面上，且两个α-C原子呈反式排列。] 二级结构的主要化学键——氢键(hydrogen bond) 蛋白质的三级结构是指多肽链在二级结构的基础上,由于氨基酸残基侧链R基的相互作用进一步盘曲或折迭而形成的特定构象。也就是整条多肽链中所有原子或基团在三维空间的排布位置。蛋白质三级结构的形成和稳定主要靠次级键，包括氢键、盐键、疏水键以及德华力等。此外，某些蛋白质中二硫键也起着重要的作用。 由两个或两个以上亚基之间彼此以非共价键相互作用形成的更为复杂的空间构象，称为蛋白质的四级结构。[亚基(subunit)：由一条或几条多肽链缠绕形成的具有独立三级结构的蛋白质。] 蛋白质二级结构的基本形式？重点掌握α-螺旋、β-折叠的概念 α-螺旋(α-helix) β-折叠(β-pleated sheet) β-转角(β–turn or β-bend) 无规卷曲(random coil) α-helix ①多个肽平面通过Cα的旋转，相互之间紧密盘曲成稳固的右手螺旋。 ②主链螺旋上升，每3.6个氨基酸残基上升一圈，螺距0.54nm。肽平面和螺旋长轴平行。 ③相邻两圈螺旋之间借肽键中羰基氧(C＝O)和亚氨基氢(NH)形成许多链氢键，即每一
《微生物检验技术》期末考试试题(A 卷) 一、名词解释(每小题3分，共15分) 1、菌落 2、正常菌群 3、消毒 4、噬菌体 5、最小抑菌浓度（MIC ） 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊结构 有 、 、 、 。 2.细菌生长繁殖的条件是 、 、 和气体。 3．病原菌的致病作用与 、 及 有密切关系。 4.诊断血清是用 免疫家兔等动物后取其 而制成的。一般置于 保存，使用时应避免 ， 降低效价。
5．K—B法中抑菌圈直径的大小与药物的最低抑菌浓度呈关系，即抑菌圈愈大，MIC值、细菌对药物的敏感程度。 6．、和可作为甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌的鉴别试验。 7．淋病奈瑟菌主要以方式传播，引起。 8.细菌对待测药物的敏感程度可分为、、 三级。 三、选择题(每小题1.5分，共30分)： 1、属于非细胞型微生物的是（） A、真菌 B、细菌 C、放线菌 D、病毒 E、螺旋体 2、革兰染色所用染液的顺序是（） A、稀释复红—碘液—95％乙醇—结晶紫 B、稀释复红—95％乙醇—碘液—结晶紫 C、结晶紫—碘液—95％乙醇—稀释复红 D、结晶紫—95％乙醇—碘液—稀释复红 E、稀释复红—结晶紫—碘液—95％乙醇 3、靛基质试验又称（） A、甲基红试验 B、尿素分解试验 C、硫化氢生成试验 D、吲哚试验 E、糖发酵试验 4、对人体无害的细菌代谢物是（）
A、热原质 B维生素 C、外毒素 D、内毒素 E、侵袭性酶 5、正常人体不存在细菌的部位是（） A、体表 B、口腔 C、大肠 D、尿道口 E、血液 6、实验室对接种针（环）、试管口的灭菌方法是（） A干烤法 B、流通蒸汽法 C、烧灼 D、焚烧 E、煮沸法 7、卡介苗是由何种变异而产生的（） A、形态变异 B、结构变异 C、毒力变异 D、耐药变异 E、酶活性变异 8、病原菌侵入血流并在其中大量繁殖，产生毒性代谢产物，引起严 重的全身症状，称为（） A、毒血症 B、菌血症 C、败血症 D、脓毒血症 E、 病毒血症 9、哪种动物不是微生物学检验中常用的实验动物（） A、小白鼠 B、豚鼠 C、裸鼠 D、家兔 E、马 10、下列哪项不是金黄色葡萄球菌的特点（） A、凝固酶试验阳性 B、产生溶血素 C、分解 甘露醇 D、产生耐热核酸酶 E、胆汁溶菌试验阳性 11、在普通琼脂平板上生长的化脓性细菌是（） A、金黄色葡萄球菌 B、乙型链球菌 C、肺炎
教材：人民卫生出版社《临床检验基础（第5版）》 血液部分 红细胞计数（RBC）：测定单位体积血液中红细胞的数量。 【计数方法】显微镜计数法： 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数（一般200倍）后，滴入血细胞计数盘，然后于显微镜下，计数一定范围内的红细胞数，经过换算即可求得每升血液中的红细胞数。 计算：红细胞数/L=5个中方格内红细胞×5 ×10 ×200 ×10^6/L
【参考值】 成年男性：（4. 0~5. 5）×10^12/L，成年女性：（3. 5~5. 0）×10^12/L；新生儿：（6. 0~7. 0）×10^12/L 低于3.5×10^12/L可诊断为贫血，低于1.5×10^12/L应考虑输血。 【临床意义】 1、病理性增多 相对性增多：血浆水分丢失，有形成分相对增加，绝对值没有发生变化 绝对性增多：继发性（心、肺疾病、异常血红蛋白病、某些肿瘤等）；原发性（真性红细胞增多症） 2、病理性减少 骨髓造血功能低下（再障）；造血原料缺乏（缺铁贫、巨幼贫）；红细胞破坏增加（溶贫）；红细胞丢失过多 红细胞比积（HCT/PCV）：指红细胞在全血中所占体积百分比。 【参考值】（温氏法） ①成年：男性0．40～0. 50，女性0．37～0. 48；②新生儿0.47~0.67；③儿童：0.33~0.42。【临床意义】 增高：1. 血液浓缩；2. 红细胞增多症；3. 新生儿。降低：1. 贫血；2. 其他原因的稀血症 应用：1. 疗效观察；2. 计算红细胞指数 血红蛋白(Hb)：是在人体有核红细胞及网织红细胞内合成的一种含色素辅基的结合蛋白质，是红细胞内的运输蛋白。 【检测原理】 血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰化钾的氰根（CN-）生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN），HiCN在540nm有吸收峰。在特定的实验条件下，可测得吸光度并计算Hb（G/L）。但在实际工作中，一般实验室的分光光度计达不到WHO规定的标准条件，所以利用Hb参考液制备标准曲线，换算出Hb（G/L）。 【参考值】 成年男性：120-160 g/L，成年女性：110-150 g/L；新生儿：170-200 g/L
食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则 一、2016版总则变更内容 1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。 2.删除了规范性引用文件。 3.修改了实验室基本要求： 应具有相应的微生物专业教育或培训经历 （如生物学、植物学、医学、食品科学与工 程、食品质量与安全等与微生物有关的相关 专业），具备相应的资质（应有岗位上岗证、 生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够 理解并正确实施检验。 实验室生物安全操作和消毒知识（相 关标准及培训，如GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求、消毒技术规范（2002））。 应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止 人为污染样品。 应在检验过程中遵守相关安全措施的规定， 确保自身安全。 有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色 的实验（即无颜色视觉障碍）。
②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。 生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应: 引起人和动物非常严重疾病，国家未发 现或已宣布消灭的微生物，如天花病毒。 引起任何动物比较严重疾病，在人和人、 人和动物之间传播如霍乱弧菌。 病原微生物分类 成严重危害如沙门氏菌、单增李斯特氏 菌。 BSL-1）：操作第四类病原微生物（属 适用范围如大肠埃希氏菌、枯草芽 重要设备是超净工作台，它可以 ） 实验室生物安全级别BSL-2）：操作第三类病原微生物（属 II级生物安全柜。） BSL-3）：操作第二类病原微生物 BSL-4）：操作第一类病原微生物 消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。
一、蛋白质 1.蛋白质的概念：由许多氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物，由C、H、O、N、S元素组成，N的含量为16%。 2.氨基酸共有20种，分类：非极性疏水R基氨基酸、极性不带电荷R基氨基酸、带正电 荷R基氨基酸（碱性氨基酸）、带负电荷R基氨基酸（酸性氨基酸）、芳香族氨基酸。 3.氨基酸的紫外线吸收特征：色氨酸和酪氨酸在280纳米波长附近存在吸收峰。 4.氨基酸的等电点：在某一PH值条件下，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相同，溶液中氨基酸的净电荷为零，此时溶液的PH值称为该氨基酸的等电点；蛋白质等电点： 在某一PH值下，蛋白质的净电荷为零，则该PH值称为蛋白质的等电点。 5.氨基酸残基：氨基酸缩合成肽之后氨基酸本身不完整，称为氨基酸残基。 6.半胱氨酸连接用二硫键（—S—S—） 7.肽键：一个氨基酸的α-羧基与另一个氨基酸α-氨基脱水缩合形成的化学键。 8.N末端和C末端：主链的一端含有游离的α氨基称为氨基端或N端；另一端含有游离的 α羧基，称为羧基端或C端。 9.蛋白质的分子结构：（1）一级结构：蛋白质分子内氨基酸的排列顺序，化学键为肽键和二硫键；（2）二级结构：多肽链主链的局部构象，不涉及侧链的空间排布，化学键为氢键， 其主要形式为α螺旋、β折叠、β转角和无规则卷曲；（3）三级结构：整条肽链中，全部氨基 酸残基的相对空间位置，即肽链中所有原子在三维空间的排布位置，化学键为疏水键、离子键、氢键及范德华力；（4）四级结构：蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和 相互作用。 10.α螺旋：(1)肽平面围绕Cα旋转盘绕形成右手螺旋结构，称为α螺旋；(2).螺旋上升一圈，大约需要3.6个氨基酸，螺距为0.54纳米，螺旋的直径为0.5纳米；(3).氨基酸的R基分布在 螺旋的外侧；(4).在α螺旋中，每一个肽键的羰基氧与从该羰基所属氨基酸开始向后数第五个氨基酸的氨基氢形成氢键，从而使α螺旋非常稳定。 11.模体：在许多蛋白质分子中可发现两个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，被称为模体。 12.结构域：大分子蛋白质的三级结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能，称为结构域。 13.变构效应：蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。 14.蛋白质胶体结构的稳定因素：颗粒表面电荷与水化膜。 15.什么是蛋白质的变性、复性、沉淀？变性与沉淀关系如何?导致蛋白质的变性因素？举 例说明实际工作中应用和避免蛋白质变性的例子？ 蛋白质的变性：在理化因素的作用下，蛋白质的空间构象受到破坏，其理化性质发生改变，生物活性丧失，其实质是蛋白质的次级断裂，一级结构并不破坏。 蛋白质的复性：当变性程度较轻时，如果除去变性因素，蛋白质仍能恢复或部分恢复其原 来的构象及功能，这一现象称为蛋白质的复性。
微生物检验考试题 实习班） 1．真核细胞型微生物的特点是 A. 典型的核结构 B.体积微小 C.有细胞壁 D.无完整细胞器 E.对抗生素敏 感 2. 细菌的基本结构不包括 A. 细胞膜 B.细胞质 C.核质D细胞壁E.菌毛 3. 质粒是细胞的 A. 核质DNA B.胞质DNA C.核质RNA D胞质RNA E.极体 4. 血xx 上的溶血环不包括 A. 潞血 B. a溶血 C. B溶血 D. Y容血 E.双环溶血 5?细菌L型的特点错误的是 A. 对青霉素敏感性降低 B. 对表面活性剂敏感性增高 C. 革兰染色均为阳性 D. 高度多形性. E. 抗原性改变 6. 与细菌致病性无关的结构是 A. 荚膜 B.菌毛 C. 磷壁酸 D.脂多糖
E.异染颗粒 7. 与细菌侵袭力无关的物质是 A. 荚膜 B.菌毛 C.芽胞 D.血浆凝固酶 E.透明质酸酶 8. 细菌的分解代谢产物不包括 A. CO 2和水B.各种酸类C.细菌素D.氨E. H 2S 8. 杀灭物体上所有微生物的繁殖体和芽胞的方法称为 A.消毒 B.灭菌C防腐D无菌E.杀菌 9. 紫外线的杀菌机制是 A. 破坏细菌细胞壁 B. 损害细胞膜 C. 损伤细菌核酸 D. 破坏核糖体 E. 破坏细菌中介体 10. xx 的获得属于 A.毒力变异 B.形态变异 C.荚膜变异 D.耐药性变异 E.抗原性变异 11. 细菌的遗传物质包括 A.核质和质粒 B.核质、质粒和中介体 C.核质、质粒和前噬菌体 D. 核质和前噬菌体 E.核质、中介体和前噬菌体 12. 关于外毒素，下列正确的是
A. 多由G菌产生 B. 化学成分是脂多糖 C. 抗原性弱 D. 经甲醛处理后可变成类毒素 E. 耐热 13．细菌分类的基本单位是 A. n B.目 C.科 D.属 E.种 14. 以下关于标准菌株不正确的是 A. 细菌分类依据 B. 细菌鉴定依据 C. 细菌命名依据 D. 细菌大小依据 E. 质量控制的标准 15. 能使白喉棒状杆菌菌落呈黑色的培养基是 A. 血液xx平板 B. xx血清斜面培养基 C伊红xx培养基 D. 亚碲酸钾培养基 E. 庆大霉素培养基 16. 下列为胞内寄生菌的是 A. 大肠xx B.痢疾xx
项目一任务1 血液量：成人约占体重的6%～8%，平均血量5L左右。 pH：7.35～7.45 比密：1.05～1.06 渗透压：290～310mosm/Kg·H2O 采血部位 （1）手指采血： WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指采血部位尖内侧 优点：方便、获较多血量结果比较恒定 缺点：与静脉血仍存在某些差异。 拇指、拇趾或足跟采血——半岁以下婴幼儿 皮肤完整处——严重烧伤者 任务二白细胞检验 计数计算WBC/L＝N/4×10×106×20＝N/20×109 血涂片WBC密度与WBC的总数的关系 WBC血涂片WBC个数/HP (4～7)×109/L 2～4 (7～9)×109/L 4～6 (10～12)×109/L 6～10 (13～18)×109/L 10～12 4. 减少计数域误差的措施 ＜3×109/L扩大计数范围、缩小稀释倍数 ＞15×109/L增加稀释倍数、适当减少加血量 参考值：成人：（4－10）×109/L 儿童：（5－12）×109/L 新生儿：（15－20）×109/L 6个月－2岁：（11－12）×109/L 血膜厚薄分布不均的原因： 厚：血滴大，角度大，推片速度快 薄：血滴小，角度小，推片速度慢 分布不均：推片不整齐，用力不均匀，载片不清洁 瑞氏染色对于细胞质成分，中性颗粒的染色效果好，但对细胞核和寄生虫着色能力略差吉姆萨染液对细胞核和寄生虫着色较好，对细胞质着色能力较差 WBC百分率(%) 中性杆状核粒细胞1～5 中性分叶核粒细胞50～70 嗜酸性粒细胞0.5～5 嗜碱性粒细胞0～1 淋巴细胞20～40 单核细胞3～8 (六) 异常白细胞形态 1.中性粒细胞毒性变化： ①大小不均②中毒颗粒③空泡形成④杜氏小体⑤退行性变⑥核棘突 2.棒状小体（Auerbody)
二. 细菌的简单染色和革兰氏染色 1.革兰氏染色中那一步是关键 ?为什么？你是如何操作的？ 革兰氏染色的关键步骤是：乙醇脱色（是脱色时间）。如果脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而被误 认为是革兰氏阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也可被脱色而被误认为是革兰氏阳性菌。脱色时间 的长短还受涂片的厚薄，脱色是玻片晃动的快慢及乙醇用量的多少等因素的影响，难以严格规定（脱色是 应当控制速度，脱色时间一般为20—30s）。 2.固定的目的之一是杀死菌体，这与自然死亡的菌体有何不同？ 自然死亡的菌体本身已经部分自溶，结构已经改变。固定杀死细菌时细菌结构是保持死亡时的状态的。 3.不经复染这一步能否区分革兰氏阳性菌和阴性菌？ 能。在酒精脱色后，不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋），被酒精脱色为革兰氏阴性菌。最后一步用番红染液复染，是为了让结果更清楚。 4.涂片为什么要固定，固定适应注意什么问题？ a 杀死细菌并使菌体黏附与玻片上； b 增加其对染料的亲和力。 固定时应注意：手持玻片，菌膜朝上，在微火过 3 次（手指触摸玻片反面，不烫手为宜），固定时应尽可能维持细胞原有形态，防止细胞膨胀或收缩。 三. 霉菌、放线菌的形态观察 1.镜检时，如何区分基内菌丝与气生菌丝？ 一般气生菌丝颜色较深，直生或分枝丝状，比基内菌丝粗；而基内菌丝色浅、发亮，可看到横隔膜，继而 断裂成球状或杆状小体。 2.显微镜下细菌放线菌酵母菌和霉菌的主要区别是什么？ 放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。 细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（部分杆菌还可形成芽孢）放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。 霉菌：菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。 四. 玻璃器皿的洗涤、包扎与灭菌 1. 高压蒸汽灭菌开始时为什么要将锅内排尽？灭菌后为什么要待压力降低到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物？
生物化学知识点486 时间：2011-8-10 18:04:44 点击： 、大多数的蛋白质都是由（碳）、（氢）、（氧）、（氮）等主要1生物化学一、填空题核心提示：折、蛋白质二级结构的主形式是（a-螺旋）、（B-元素组成的，组成蛋白质的基本单位是（氨基酸）。2（疏3、维行蛋白质的空间结稳定的化 学键主要有（氢键）、（盐键）、叠）（B-转角）（无规则卷曲）。... 水键）、（范德华力）等生物化学 一、填空题 、大多数的蛋白质都是由（碳）、（氢）、（氧）、（氮）等主要元素组成的，组成蛋白1 质的基本单位是（氨基酸）。 转角）（无规则卷曲）。、蛋白质二级结构的主形式是（a-螺旋）、（B-折叠）（B-2、维行蛋白质的空间结稳定的化学键主要有（氢键）、（盐键）、（疏水键）、（范德华3 力）等非共价键和（二硫键）。 、使蛋白质沉淀常用的方法有（盐析法）、（有机溶剂沉淀法）、、4 （重金 属盐沉淀法）。、核酸分（核糖核酸）和（脱氧核糖核酸）两大类。构成核酸的基本单位是（氨基酸），5 核酸彻底水解的最终产物是（碳酸）、（戊糖）、（含氮碱），此即组成核酸的基本成分。）、CA）和（鸟嘌呤B）两种，嘧啶碱主要有（胞嘧啶6、核酸中嘌呤碱主要有（腺嘌呤）和（胸腺嘧啶T）三种。（尿嘧啶U、酶是指（由活细胞产生的能够在体内外起催化作用的生物催化剂），酶所催化的反应称7 为（酶促反应），酶的活性是指（酶的催化能力）。 8、酶促反应的特点有（催化效率高）、（高度专一性）（酶活性的不稳定性）。 、酶促反应速度受许多因素影响，这些因素主要有（酶浓度）、（底物浓度）、（温度）、9 ）、（激活剂）、（抑制剂）（PH），糖的来源有（食物中糖的消化吸收）、3.9-6.1mmol/L10、正常情况下空腹血糖浓度为（（肝糖原的分解）、（糖异生作用），糖的正常去路有（氧化供能）、（合成糖原）、（转化成脂肪等），异常去路有（尿糖）。，反应在（线12）分子ATP411、三羧酸循环中有（2）次脱羧（）次脱氧反应，共生成（酮戊二酸脱氢酶粒）中进行，三种关键酶是（柠檬酸合成酶）、（异柠檬酸脱氢酶）、（a- 系）。、由于糖酵解的终产物是（乳酸），因此，机体在严重缺氧情况下，会发生（乳酸）中12 毒。 、糖的主要生理功能是（氧化供能），其次是（构成组织细胞的成分），人类食物中的13 糖主要是（淀粉）。、糖尿病患者，由于体内（胰岛素）相对或绝对不足，可引起（持续）性（高血糖），14 1 甚至出现（糖尿）），并释放能量的过程称（生H2O、营养物质在（生物体）内彻底氧化生成（CO2）和（15 物氧化），又称为（组织呼吸）或（细胞呼吸）。琥珀酸氧化呼吸链），两FADH2、体内重要的两条呼吸链是（NADH氧化呼吸链）和（16 2ATP）。条呼吸链ATP的生成数分别是（3ATP）和（）H2O17、氧化磷酸化作用是指代谢物脱下的（氢）经（呼吸链）的传递交给（氧）生成（ATP）的过程相（偶联）的作用。的过程与（ADP）磷酸化生成（ATP的主 要方式为（氧化磷酸化），其次是（底物水平磷酸化）。18、体内生成脱a-CO2是通过（有机物）的脱羧反应生成的，根据脱羧的位置不同，可分为（19、体内脱羧）。羧）和（B-氧化过程包括（脱氢）、（加水）、（再脱氢）、（硫解）四个步每一次B-20、脂酰CoA ）。）和比原来少2
微生物检验考试题（实习班） 1．真核细胞型微生物的特点是 A．典型的核结构 B. 体积微小C．有细胞壁 D. 无完整细胞器E．对抗生素敏感 2.细菌的基本结构不包括 A．细胞膜 B. 细胞质C．核质 D. 细胞壁 E. 菌毛 3.质粒是细胞的 A．核质DNA B．胞质DNA C．核质RNA D. 胞质RNA E．极体 4．血琼脂上的溶血环不包括 A. δ溶血 B. α溶血C．β溶血 D. γ溶血E．双环溶血 5.细菌L型的特点错误的是 A. 对青霉素敏感性降低 B．对表面活性剂敏感性增高 C．革兰染色均为阳性 D. 高度多形性． E．抗原性改变 6.与细菌致病性无关的结构是 A．荚膜 B. 菌毛 C．磷壁酸 D. 脂多糖 E．异染颗粒 7.与细菌侵袭力无关的物质是 A．荚膜 B. 菌毛C．芽胞D．血浆凝固酶E．透明质酸酶 8.细菌的分解代谢产物不包括 A．CO和水B．各种酸类C．细菌素 D. 氨 E. HS 228.杀灭物体上所有微生物的繁殖体和芽胞的方法称为 A．消毒 B. 灭菌 C. 防腐 D.无菌E．杀菌 9.紫外线的杀菌机制是 A．破坏细菌细胞壁 B．损害细胞膜 C．损伤细菌核酸 D. 破坏核糖体 E．破坏细菌中介体 10.卡介苗的获得属于 A．毒力变异 B.形态变异C．荚膜变异 D.耐药性变异E．抗原性变异 11.细菌的遗传物质包括 A．核质和质粒B．核质、质粒和中介体C．核质、质粒和前噬菌体 D. 核质和前噬菌体E．核质、中介体和前噬菌体 12.关于外毒素，下列正确的是 -菌产生多由GA. B．化学成分是脂多糖 C．抗原性弱 D. 经甲醛处理后可变成类毒素 E．耐热 13．细菌分类的基本单位是
血液样本采集和血涂片制备 1血液由红细胞，白细胞，血小板和血浆组成。2离体后的血液自然凝固，分离出来的淡黄色透明液体称为血清3血清与血浆的区别是血清缺少某些凝血因 子4血清适用于临床化学和临床免疫学检查，其6%~8%体重，成人/kg4~5L，占体重的5正常人血量约为（70土10ml）45% ，血细胞占中血浆占55%呈鲜红色，动脉血氧合血红蛋白含量较高，6血液的红色来自红细胞内血红蛋白，静脉血还原血红蛋白含量高，呈暗红色严重一氧化碳中毒或氰化物中毒者血液呈樱红色77.35~7.45 值的波动范围是正常人血液ph8，4~5，相对黏度为1.055~1.063，女性为 1.051~1.060正常男性的血液比密为9。血液比密与红细胞含量，红细，血细胞比密为1.090血浆比密为1.025~1.030 胞内血红蛋白含量有关。血浆比密和血浆内蛋白浓度有关10血液具有红细胞的悬浮稳定性，粘滞性，凝固性这三种特性 1.6倍11正常人的血浆黏度约为生理盐水黏度的血液黏度与血细胞比容，血浆黏度有关12 血液生理功能包括：运输功能，协调功能，维护集体内环境稳定和防御功能13 静脉血通常使用的采血部位是肘部静脉，手背静脉，内踝静脉，股静脉14在静脉采血时为了避免血小板激活，常使用塑料注射器和硅化处理后的试管15 或者塑料管）推荐采集左手无名指指端内侧血液，婴幼儿可采集拇who16世界卫生组织（趾或足跟内外侧缘血液，严重烧伤患者可选择皮肤完整处采血17彩色真空定量采血用于葡萄糖，糖耐量测试，添加的抗凝剂是氟化钠18彩色真空管定量采血用于血培养，应添加的抗凝剂是多聚茴香脑硫酸钠皮肤采血法的缺点是易于溶血，凝血，混入组织液，而且局部皮肤揉擦，针19皮肤采血检查结果重所以，刺深度不一，个体皮肤厚度差异等都影响检查结果，复性差，准确性不好采血方法应在患者，采血，溶血，样本处理，实验结果分析等方面进行质量20 控制乙二胺四乙酸盐能与血液中钙离子结合成螯合物，使钙离子失去凝血作用，21 组织血液凝固盐对血细胞形态，血小板计数影响很小，适用于血液学检查，尤其是22 EDTA 血小板计数11 / 1 23草酸盐的优点是溶解度好，价廉肝素可加强抗凝血酶灭活丝氨酸蛋白酶作用，阻止凝血酶的形成，并阻止血24 小板聚集等作用，从而阻止血液凝固：枸橼酸钠与血液的抗凝比例为125枸橼酸钠能与血液中钙离子结合成螯合物，4 ：9或1 度角26采用手工推片法制备血涂片时，通常推片与载玻片保持25~30滴，用推片将血由内向127采用厚血膜涂片法制备血涂片时，载玻片中央置血的圆形血膜，待干后，加蒸馏水使红细胞1.5cm外旋转涂成厚薄均匀，直径约溶解，再干后染色镜检将适量伊红，亚甲基蓝溶解在甲醇中，即为瑞氏染料28 瑞氏染色法是最经典，最常用的染色法，尤其对于细胞质成分，中性颗粒等29 可获很好的染色效果，但对细胞核的着色能力略差血液制备涂片时，血滴越大，角度越大，推片速度越快，血膜越厚，反之则30 越薄 红细胞检查 1血液中数量最多的有形成分是红细胞，起源于骨髓造血干细胞72h 2晚幼红细胞通过脱核成为网织红细胞，这一过程在骨髓中进行，约需，衰成完全成熟的红细胞，释放入血液，平均寿命120d3网织红细胞经约48h 老红细胞主要在脾破坏，分解为铁，珠蛋白和胆红素红细胞有交换和携带气体的红细胞生理功能是通