药物分析的方法学验证所要做到的事项（一）
新药申报时，药品质量标准中分析方法必须验证；药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法必须进行验证；2005版药典中分析方法验证指导原则只规定了项目和基本方法而没有合格标准:附录XIX A；中国GMP(98)非常关注验证的过程,分析方法验证不完善是常见的问题
药物分析检验时药品生产的GMP的药物分析的方法学验证，是保证药物分析结果准确性的前提和基础，也是实现药物分析检测GMP的必然要素。
构成药物分析中的检测方法验证，这要涉及到以下些方面的内容：
1、分析方法验证成功的前提条件：
（！）仪器已经确认、校正并在有效期内（2）经过培训的人员（3）可靠稳定的对照品
（4）可靠稳定的实验试剂（5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内无降解。
2、分析方法学验证所要求验证的内容：（1）含量的测定（2）杂质的含量测定（3）药物的定性鉴定（4）药物的含量均匀度测定（5）药物的微生物检测（6）药物的细菌内毒素的检测
验证内容：
准确度：准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。
测定回收率R（recovery）的具体方法可采用加样回收试验法来进行测定。加样回收试验已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。数据要求:规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次
精密度：（重复性、中间精密度和重现性精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。
（1）重复性(repeatability):在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价
（2）中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备
所得结果的精密度
（3）重现性(reproducibility)不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度
（4）数据要求：需报告SD，RSD和可信限。
专属性：指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力，是指该法用于复杂样品分析时是否受到相互干扰程度的度量
?通常通过分析含有加了杂质、降解产物、有关化学物质或安慰剂成分的样品，将所获分析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行比较，两组测试结果之差即专属性
?鉴别反应---应能与可能共存的物质或结构相似化合物区别，不含被分析的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应?含量测定和杂质测定---色谱法和其他方法，应附代表性图谱，亦说明专属性。图中应标明各组份的位置，色谱法中的分离度应符合要求?杂质可获得的情况下，对于含量测定，试样中可加入杂质或辅料，考察测试结果是否受干扰；对于杂质测定，也可向试样中加入一定量的杂质，考察杂质间是否得到分离
检测限：检测限系指试样在确定的实验条件下，被测物能被检测出的最低浓度或含量。它是限度检验效能指标，无需定量测定，只要指出高于或低于该规定浓度即可。
?非仪器分析目视法：用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量
?信噪比法:用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限
?也可采用标准差法：空白值＝0时；①测定背景10次以上，求出标准差σ
②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X，即为方法的检出值；空白值不等于0；①测定背景10次以上，求出标准差σ；②将σ乘以三倍；③在工作曲线上求出3σ相对应的浓度X；④将求得的对应浓度值加上空白值即得该方法的检出限
定量限（1imit of quantitationLOQ）
?指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求
?常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限
定量限：
指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度要求
?常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定方法的实际测定下限
线性：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。线形通常用最小二乘法处理数据求得回归曲线的斜率（Slope）来表示。数据要求：至少需要五个浓度考察线形，需提供相关系数、y截距（是检定的可能偏差）、回归斜率及方差等参数，应列出回归方程数和线性图
注意：做线性时，应注意尽量做的点多一点、线性浓度范围宽一点，这样做的好处是：当你在准确度考察时，你做的回收率考察的浓度就大些，配制溶液时就容易操作些，否者，在你做线性考察时，你做的线性浓度范围不宽，那么你在考察回收率时，你采用加入法考察时的浓度变化范围不宽，操作浓度很难控制，造成实际操作困难。我碰到一个在做方法学研究的人，由于她在考察线性时，做的线性浓度不大，在做回收率时，加入后的量造成回收率浓度超出线性考察范围的浓度，我说那样是不行的。因为在做分析计算时又恰恰用了线性关系来计算，结果肯定是值得怀疑，结果是不能令人肯定的！（这是
经验总结）
范围：指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高、低限浓度或量的区间。范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果和要求确定。
?原料药和制剂含量测定范围为80%-120%；制剂含量均匀度范围为70%-130%；杂质测定应为被测杂质汇报值到限度的120%；溶出度应为测定范围的±20%，如规定了限度范围，应为下限的-20%至上限的+20%，例如缓释片1h<20%,7h>70%,则验证范围定为0-90%。
耐用性：指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度;如果方法易受到分析条件的影响，或要求苛刻，应注明。典型的变动包括：分析溶液的稳定性，提取时间等。药物分
析的方法学验证事项（二）
含量测定方法验证的接收标准
?容量分析法：用原料药精制品(含量>99.5％)或对照品考察方法的精密度，相对标准差一般应不大于0.2％；进行回收率试验。回收率一
般在99.7～100.3％之间
?UV法：用适当浓度的精制品进行测定，其RSD一般不大于1％。制剂的测定，回收率一般应在98％～102％之间；线性：吸光度A一般在0.2～0.7，浓度点n＝5。用浓度c对A作线性回归处理，得一直线方程，r应达到0.9999(n＝5)，方程的截距应近于零含量测定方法验证
的接收标准
?HPLC法：
?要求RSD<2％，回收率98％～102％之间。
?线性范围：用精制品配制一系列标准溶液，浓度点n应为5～7，用浓度c对峰高h或被测物的响应值之比进行回归处理，建立回归方
程，r应大于0.999，截距应趋于零
分析方法验证步骤：
?验证方案的制订
?验证目的、方法改进背景、
?提供的原料药和产品、仪器概要、试剂、对照品
?待验证的方法，项目，合格标准
?实施人员的培训
?参考文献
?验证的实施
?收集完整的验证过程记录和原始图谱
?复核
?验证报告
?评价该方法是否通过验证
方法确认和方法转移
?对新产品的方法验证通常在产品开发阶段完成；大规模生产后的
验证通常包括方法确认和方法转移
?分析方法确认是指当国家标准或药典标准拟变化或已经变化时在本实验室进行的对所涉及产品是否适用的确认实验
?确认之前应对新旧方法进行核对，标明所有变更细节
?检验样品的信息（批号、规格),变更项目的接收标准
?确认试验的样品通常包括正常产品、稳定性产品?方法转移指检验方法由转移方转移至接收方时进行的实验。
?流动相PH（±0.5)
?流动相组成(有机相±5%）
?色谱柱（同一厂家的三个批号，或两个不同厂家（同固定相和填
充物，尺寸）
?温度（20-25C)和流速(±10%）
?检测波长(±5nm)
检验项目和验证内容总结
?鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。
?杂质的限度检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求?杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。
?含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求
检验分析方法的验证和确认 一、法规要求二、分析方法验证三、分析方法确认四、分析方法验证和确认总结一、法规要求：新版GMP（2010年修订）第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验。（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证。1. 采用新的检验方法；2. 检验方法需变更的；3. 采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；4. 法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。法规要求：中国药典（2010年版）凡例1. 检验方法和限度。2. 二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。法规要求：分析方法确认或验证相关指南二、分析方法验证 1. 分析方法验证的定义 2. 分析方法验证的目的 3. 分析方法验证范围 4. 分析方法验证的时机 5. 需验证的分析方法类型 6. 分析方法验证的具体内容 7. 验证检测项目小结 8. 分析方法验证的方式和步骤 9. 分析方法验证常见问题1. 分析
方法验证的定义是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。 2. 分析方法验证的目的（1）证明采用的分析方法是科学、合理。（2）证明分析方法能有效控制药品的内在质量。? 验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中。 3. 分析方法验证范围（1）适用范围：化学药品的理化分析方法和仪器分析方法的验证与确认；清洁验证方法的验证。（2）不适用：化学药品的微生物方法；生物制品分析方法验证。 4. 分析方法验证的时机（1）建立新的药品质量标准；（2）药品生产工艺变更；（3）制剂的组分变更；（4）对原分析方法进行修订时。方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。 5. 需验证的分析方法类型（1）鉴别试验（2）杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法）（3）原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分（如防腐剂等）的定量测定含量测定（4）化学药品/中药制剂中其他需控制成分(如残留物、添加剂等）的测定（5）制剂溶出度、释放度等检查（6）原料药粒度检测 6. 分析方法验证的具体内容（1）专属性（2）线性（3）范围（4）准确性（5）精密度（6）检测限（7）定量限（8）耐用性（9）系统适用性根据检测的类型，采用的技术检测方法，确定具体方法拟订验证的内容。专属性1. 鉴别、杂质和含量测定的方法学
Q2B 分析方法验证：方法学 简介 ICH指南“关于分析方法验证的术语”阐述了分析方法验证中应考虑的项目，本文件是对Q2A的补充，其目的是对每一种分析方法的各种验证项目提供指导和建议。在某些情况下（如专属性），为了确保原料药和制剂的质量，应对一些综合起来的分析方法的总体能力进行研究。另外，文件对在新药申请中必须要递交的资料作了指导。 所有验证中收集的相关数据和验证项目的计算公式都应递交并进行适当的讨论。 本指南未提到的方法，也可应用和采纳。申报者的责任应是选择最适合他们产品的验证方法和方案。但要切记，分析方法验证的主要目的是证明其适合于预期目的。对于生物技术产品和生物制品，由于它们的复杂特性，在某些情况下，其分析方法的验证可能与本文中提到的方法不同。 在整个方法学验证研究过程中，必须使用已完全鉴定并标示纯度的参考物质，其纯度要求取决于预期用途。 与Q2A一样，为清楚起见，本文在各独立的章节中考虑了不同的验证项目，这些章节的排列反映了建立和评估一种分析方法的过程。 事实上在进行实验设计时，一些适当的验证项目通常可以同时考虑，以对分析方法的能力提供合理、全面的了解，如专属性、线性、范围、准确度和精密度。 1．专属性 在鉴别检查、杂质和含量测定的方法学验证中应进行专属性研究，证明专属性的方法取决于分析方法的预期目的。 一般一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性（完全鉴定），在此情况下，建议采用两种或两种以上的分析方法以达到能鉴定的水平。 1．1鉴别 合适的鉴别试验应能区别出可能存在结构相似的化合物。可以通过与已知参考物质比较，从含有被分析物的样品中得到的正结果和不含被分析物的样品中得到的负结果来确定。此外，鉴别试验也可以取与被测物结构相似或相关的物质来试验而得不到正反应来证实。在考虑可能会造成干扰的前提下，应根据合理科学的判断来选择可能存在的干扰物。 1．2含量和杂质测定 在色谱方法中，应用典型的色谱图来证明专属性，并在图上恰当地标出每一种成分，其他分离技术也应如此。 在色谱方法中，应在一定程度上考察关键性的分离。对关键性分离，可用两个洗脱程度最接近的化合物的分离度来证明具有专属性。 当用非专属性方法测定含量，可用其他辅助性的分析方法来证实整个方法的专属性，例如：用滴定法来测定放行原料药的含量，可结合用合适的杂质检查方法。 下述方法均适用于含量和杂质测定： 1．2．1可以得到杂质的情况 对含量测定来说，专属性应包括提供被分析物在杂质和（或）辅料存在时能被区分的证明，实际操作中可以在纯物质（原料或制剂）中加入一定量的杂质或辅料，与未加杂质或辅料的样品测定结果比较，以证明其含量测定结果不受这些物质的影响。 对杂质检查来说，通过加入含有一定量杂质的原料药或制剂，证明各杂质之间能分离，并也能与样品矩阵中其他组分分离。 1．2．2无法得到杂质的情况
分析方法的验证 1日本药局方收载分析方法所需资料 1.1概要对分析方法作简要说明，包括所采用分析方法的必要性，特点与优点及有关 验证的要点。如系分析方法的修订，则需阐明新方法与原方法的区别以及新方法的优势。 1.2分析方法本项记载的有关分析方法的内容要足以能对分析方法进行评价，并且必 要时可用复核试验进行评价。分析方法主要记载内容包括：分析的步骤、标准品及样品的制备方法、试剂与试药的调配、注意事项、分析系统是否正常运转的检验证明方法(例如 高效液相色谱法中的分离效率的研究)、分析结果的计算公式、测定次数等。并且，如果 使用了药局方以外的装置，还需详述有关内容；如果使用了新的标准品，则必须提供其物理、化学及生物学特征数据，并提供其质量标准。 1.3有关分析方法验证的资料本项 应包括求导各验证参数的试验设计、试验数据、计算结果及检定结果等。 2验证参数(validationcharacterisitics) 分析方法适当与否可通过验证参数进行评价，下面列举了最典型的分析方法验证参数的定义及其评价方法。验证参数的有关术语及定义因分析方法的应用领域不同而不同，本文所使用的术语及定义仅限于日本药局方。评价方法项下所述内容也仅为简要概述。确定验证参数的方法很多，采用何种方法没有具体限制。但是，验证参数的限值常因确定方法的不同而发生变化。故此，确定验证参数的实验方法、实验数据、计算方法等应尽可能详细地记述。本文分析方法验证中未包括验证参数适应性/牢固性(Robustness)的 讨论，这是由于牢固性的研究主要在分析方法的开发设计阶段进行，其研究结果可以在方法的分析条件或注意事项中得到体现。 2.1真度/准确度(Accuracy/Trueness) 2.1.1定义：所谓准确度，指分析方法所得测定值的偏离程度，通常以测定值的总平均值与真值之间的差来表示。 2.1.2评价方法：准确度一般以测定室内重现精度或室间再现精度时所 得总平均值与真值的差表示。真值一般使用理论值(如滴定法)，如果理论值不存在或即使 存在但很难求出的情况下，可采用经过确证或认可的数值来代替(如制剂分析常以原料药 的测定值作为真值)。分析方法的专属性强，可以推断其分析方法的误差就小。由推出的 真值与室内(室间)再现精度的标准偏差即可计算出真值的95%置信区间，并可判断这个 区间是否包括0点，或区间的上下限值是否在分析方法所要求的精度范围之内。 2.2精 密度(Precision) 2.2.1定义：精密度是指从均匀样品中抽取的复数个供试品进行重复分 析测定时，所得到的一系列测定数据彼此之间的一致程度。测定值的误差以偏差、标准偏差、或相对标准偏差的形式表示。精度根据重复实验的条件不同以三个水平表示，分别称为：并行精度、室内再现精度、室间再现精度。并行精度(Repeatability/Intra-assayprecision)：指实验室、实验者、实验日期、装置、器具以及试药的批号等实验条件
抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则 摘要： 几乎所有的生物制药产品都会引起一定的抗药抗体（anti-drug antibody，ADA）反应，抗药抗体反应可能会降低药物疗效或导致严重的不良反应。在人体内，抗药抗体通常不会引起明显的临床反应。但是对于某些治疗性蛋白质，抗药抗体反应能引起各种临床的不良反应，包括温和事件及严重不良事件。临床前研究表明，抗药抗体能对药物暴露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动力学等造成影响。因此治疗性蛋白质的免疫原性引起了临床医生、药企及监管机构的注意。为了评估生物药物分子的免疫原性，以及将实验结果与临床事件联系起来，在临床前研究和临床研究中，很有必要开发可靠的能够有效评估抗药抗体反应的实验方法。这里方法学验证显得尤为重要，并且方法学验证是药物上市申请必不可少的。现行的监管文件对于免疫分析方法的验证的指导相当有限，特别是缺乏有关免疫原性分析方法的验证的指导。因此，本文对抗药抗体免疫分析方法的验证提供科学的建议。在现有的关于生物分析的规范性文件的基础上加入独特的性能验证。笔者建议采用实验和统计学的方法进行免疫分析的方法学验证。这些建议被视为最佳的例子，旨在促进整个医药行业形成一个更加统一的抗体检测方法。 1．简介： 生物制药产品包括氨基酸聚合物、碳水化合物或核酸，一般通过人细胞系、哺乳动物细胞或细菌进行表达，比常规的小分子药物更大（一般大于1~3KD）。由于以上特性，生物制药产品引起免疫反应的潜力更大。生物制药的免疫原性与产品的内在因素（种属特异性表位、外源性、糖基化程度、聚合或变性程度、杂质和制剂）、外在因素（给药途径、慢性或急性给药、药代动力学及内源性当量）、患者因素（自身免疫性疾病、免疫抑制、和替代疗法）相关。 抗药抗体反应可能会导致严重的临床症状，包括过敏、自身免疫和不同的药代动力学特征（例如，药物中和、生物分布异常和药物清除率增强等均可能会使
药物分析的方法学验证所要做到的事项（一） 新药申报时，药品质量标准中分析方法必须验证；药物生产工艺变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，则质量标准分析方法必须进行验证；2005版药典中分析方法验证指导原则只规定了项目和基本方法而没有合格标准:附录XIX A；中国GMP(98)非常关注验证的过程,分析方法验证不完善是常见的问题 药物分析检验时药品生产的GMP的药物分析的方法学验证，是保证药物分析结果准确性的前提和基础，也是实现药物分析检测GMP的必然要素。 构成药物分析中的检测方法验证，这要涉及到以下些方面的内容： 1、分析方法验证成功的前提条件： （！）仪器已经确认、校正并在有效期内（2）经过培训的人员（3）可靠稳定的对照品 （4）可靠稳定的实验试剂（5）确认受试溶液的稳定性，在规定时间内无降解。 2、分析方法学验证所要求验证的内容：（1）含量的测定（2）杂质的含量测定（3）药物的定性鉴定（4）药物的含量均匀度测定（5）药物的微生物检测（6）药物的细菌内毒素的检测 验证内容： 准确度：准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用加样回收试验法来进行测定。加样回收试验已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M。数据要求:规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备高、中、低三个不同浓度样品各测三次 精密度：（重复性、中间精密度和重现性精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。 （1）重复性(repeatability):在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价 （2）中间精密度同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备
分析方法开发与验证在不同行业有不同的要求，医药化学行业对于质量的控制非常严格，高效液相分析是控制产品质量的重要手段，其开发与验证对其它行业有很好的借鉴意义。一、分析方法开发 分析方法的开发主要包括色谱柱的选择、流动相的选择、检测波长的选择和梯度的优化几个方面。目前高效液相多做反相使用，所以本文主要以反相为例进行讲解。 1.色谱柱的选择 原料药生产对产品的纯度和杂质含量的要求非常苛刻，要求检测使用的色谱柱有较高的理论塔板数，能提供更好的分离度，从而对可能存在的杂质有更大的分离的可能性，所以5um 填料的色谱柱长要250mm，3.5um填料的柱长要150mm，基本上都是各个粒径柱长最长的。我比较喜欢近两年新出的亚二微米填料的色谱柱，50mm柱长就能提供很高的理论塔板数，而且柱长和粒径小了，流速增加很多，能节省很多的分析时间，极大的提高工作效率。一般选用直径为4.6mm或3.0mm的柱子，太细了可能会增大柱外效应。填料的孔径对于小分子合成药物不需要考虑，普通的分析柱都在100A左右，能满足分析检测的需要。 对于API分析方法开发，一般要求必须做色谱柱的筛选实验，最少使用三种不同类型的色谱柱，每种类型三只，要来自于不同厂家。 三种类型包括： 1)普通的C18或相应的C8色谱柱，如Waters的Symmetry C18或C8，YMC的Pack Pro C18或C8，Agilent的RX C8等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱； 2)封端处理的或者极性嵌入型色谱柱，如Waters的Symmetry Shield RP18或RP8，XTerra RP18或RP8，YMC的ODS AQ，Agilent的Zorbax SB AQ等，其它公司如菲罗门和热电也有相应的色谱柱； 3)填料用其它官能团修饰过的色谱柱，如苯基柱等，很多公司都有。 一般不同类型的色谱柱在选择性上会有很大的差异，相同类型的色谱柱生产厂家不同在选择性上也会有差异，这个主要是填料的性质和生产工艺决定的，有时候用一只色谱柱分离不好，除了优化梯度和流动相外，换一个厂家的柱子也是一个很好的选择。相同品牌型号的色谱柱，C18和C8在选择性上没有差异，但是C18保留能力更强，相同的样品分离度更高，我们一般倾向于选择用C18。我们在筛选色谱柱时尽量选择行业内排名前几位的厂家，柱子品质好，开发分析方法时能省很多力气，做出来的分析方法也有保证。一个药从开发到上市可能会持续十几年甚至更长时间，厂家有实力，开发方法时选定的柱子在若干年以后需要时还会有的
定量分析方法的方法学验证 定量分析方法的方法学验证 定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。 验证内容有：线性、范围、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、检测限、定量限和耐用性等。 一，线性 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数( r ) 越接近于1 ，表明线性关系越好。 用UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度A一般在0.3 ～0.7 ，浓度点n ＝5 ，用浓度C 对A作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数r 应大于0.9999 。 用HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点n ＝5 ～7 ，用浓度 C 对峰高h 或峰面积A或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合（如HPLC-ELSD ），建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数r 应大于0.999 。 线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。 二，范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。 三，精确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率( ％) 表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。 1. 测定方法的准确度 可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。 在加样回率收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。 回收率% = [(C-A)/B]*100% 式中，A为供试品所含被测成分量；B 为加入对照品量；C 为实测值。 2. 数据要求 在规定范围内，取同一浓度的供试品，用 6 个测定结果进行评价；或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试品溶液进行测定，用9 个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在l ∶ 1 左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的80% 和120% 。应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率( ％) 计算值，以及回收率( ％) 的相对标准偏差(RSD) 或可信限。 四，精密度 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。 1. 精密度的表示方法 气相色谱法和高效液相色谱法是对同一供试液进行至少五次以上的测定；精密度一般用相对标准偏差(relative standard deviation, RSD) 表示：RSD= 标准偏差/ 平均值′ 100 ％
定量分析方法的方法学验证 定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。 验证内容有：线性、范围、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、检测限、定量限和耐用性等。 一，线性 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。 应在规定的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，制备一系列供试品的方法进行测定，至少制备五份供试样品；以测得的响应信号对被测物浓度作图，观察是否呈线性，再用最小二乘法进行线性回归。必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算。回归方程的相关系数 ( r ) 越接近于 1 ，表明线性关系越好。 用 UV 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，吸光度 A 一般在 0.3 ～ 0.7 ，浓度点 n ＝ 5 ，用浓度 C 对 A 作线性回归，得一直线方程，方程的截距应接近于零，相关系数 r 应大于 0.9999 。 用 HPLC 法测定时，以对照品配制一定浓度范围的对照品系列溶液，浓度点 n ＝ 5 ～ 7 ，用浓度 C 对峰高 h 或峰面积 A 或被测物与内标物的响应值之比进行线性回归或非线性拟合（如 HPLC-ELSD ），建立方程，方程的截距应趋于零，相关系数 r 应大于 0.999 。 线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。 二，范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。 三，精确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率 ( ％ ) 表示。准确度应在规定的范围内测试。用于定量测定的分析方法均需做准确度验证。 1. 测定方法的准确度 可用已知纯度的对照品做加样回收率测定，即于已知被测成分含量的供试品中再精密加入一定量的已知纯度的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。 在加样回率收试验中须注意对照品的加入量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入的对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。 回收率 % = [(C-A)/B]*100% 式中， A 为供试品所含被测成分量； B 为加入对照品量； C 为实测值。 2. 数据要求 在规定范围内，取同一浓度的供试品，用 6 个测定结果进行评价；或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试品溶液进行测定，用 9 个测定结果进行评价，一般中间浓度加入量与所取供试品含量之比控制在 l ∶ 1 左右，其他两个浓度分别约为供试品含量的 80% 和 120% 。应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率 ( ％ ) 计算值，以及回收率 ( ％ ) 的相对标准偏差 (RSD) 或可信限。 四，精密度 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。
异烟肼含量测定分析方法验证方案验证原因：验证类型： 新项目验证再验证 其它 预验证 回顾性验证转移验证 方法描述： 本分析方法为中国药典2010版二部方法。为确保其检测结果准确，对该分析方法的专属性、精密度（系统精密度、方法精密度、中间精密度）、线性和范围、准确度、耐用性进行评价。 验证依据： 中国药典2010年版分析方法（295页） 验证时间： 2010年07月09日～2010年07月10日 验证项目组成员及职责：
验证内容:-
a)人员培训： b)仪器设备、标准品和试剂： 仪器设备 标准品和试剂 c)样品
色谱条件 色谱条件 色谱柱：agilent ODS-2 长度：250cm ，内径：4.6mm ，填料 C18 ，填料粒度：5μm 检测波长：262nm，带宽30 柱温：25℃ 进样量：20μl 流速：1.0ml/min 流动相A：0.02mol/l磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH至6.0），流动相B：甲醇 A:B=85:15 停止时间：12min 1.系统精密度 1.1.溶液配制 系统精密度溶液：取异烟肼10mg，置100ml容量瓶中，精密称量，用水溶解并稀释至刻度。 1.2验证过程及结果 系统精密度溶液连续进样6次，记录其异烟肼峰面积、保留时间。 可接受标准：异烟肼峰面积RSD≤2.0%,保留时间RSD≤2.0%。 结论：
2.重现性试验（方法精密度） 2.1.溶液配制 2.1.1.对照溶液：取异烟肼工作标准品10mg，精密称量，置100ml容量瓶中，用水溶解 并稀释至刻度。 2.1.2.方法精密度溶液：取异烟肼样品10mg置100ml容量瓶中，精密称定，用水溶解并 稀释至刻度。用此方法配置同一批号的样品溶液6份。 2.2.验证程序及结果 工作标准品溶液进2针，样品溶液各进2针。记录异烟肼峰面积，计算样品含量。 可接受标准：异烟肼含量的RSD≤2.0%。 结论：
杂质检查方法的方法学验证各项指标分析 姓名：王芳 药物分析中药品检验基本程序包括：鉴别、检查、含量测定、写实验报告等步骤 检查项下包括反映药品安全性有效性的试验方法和限度、均一性、纯度等制备工艺要 求等内容。药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、 疗效,甚至对 人体的健康有害的物质。杂质的来源可由生产和贮藏过程中引入：①生产过程中主要是由 于所用原料不纯或者原料反应过程中反应未完全 ，以及反应的中间产物、 反应的副产物等 造成药品原料中杂质的存在；或者是由原料生产过程中反应的溶媒、催化剂等溶剂的残留 所造成的药物的杂质。②贮藏过程引入主要是受温度、 湿度、日光、空气等外界条件的 影响或者受微生物的作用产生的杂质。 在药物的研究、 生产、贮存和临床应用等方面，必 须保持药物的纯度，降低药物的杂质，这样才能保证药物的有效性和安全性。 原料药和制剂主要是对药物中的微量杂质进行纯度检查，以判断药物纯度是否符合杂 质限量的规定要求，而生物制品的杂质检查除包括一般杂质检查，特殊杂质检查外还应对 其进行安全性检查。杂质定量、定性检查方法主要是根据药物和特殊杂质在理化性质上的 差异来进行的，可以采用容量分析法，光谱法分析法，色谱分析法等，各种检测方法所需 的方法学验证的指标包括准确度，精密度，专属性，线性，范围，检测线、定量线，耐用 性八项指标，但采用不同方法所需的指标不尽相同，杂质限量检查一般需要验证专属性， 检测线，耐用性。而杂质定量分析方法除检测限外其它指标一般都需验证 ⑷。 不同实验应该根据不同实验目的对对各项指标进行验证，下面就杂质种类及近年来检 测杂质最常用的检测方法进行分析： 1、 特殊杂质 特殊杂质是指在药物制备和贮存过程中 ， 或 合成过程中产生的副产物等，多指有机杂质, 性的对 映体。 HPLC 法测定萘普生缓释片有关物质的含量： 该缓释片主药是萘普生，特殊杂质为(6 —甲氧基—2—萘乙酮)，方法采用高效液相色谱法(HPLC)法；色谱柱：以十八烷基硅烷键 合硅胶为学号: 由于药物性质不稳定而产生的降解产物 也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒
9101分析方法验证指导原则 分析方法验证（analytical method validation）的目的是证明建立的方法适合于相应检测要求。在建立药品质量标准、变更药品生产工艺和制剂组分、修订原分析方法时，需对分析方法进行验证。生物制品质量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物学测定方法，其中理化分析方法的验证原则与化学药品基本相同，所以可参照本指导原则进行，但在进行具体验证时还需要结合生物制品的特点考虑；相对于理化分析方法而言，生物学测定方法存在更多的影响因素，因此本指导原则不涉及生物学测定方法验证的内容。 验证的分析项目：鉴别试验、杂质检查（限度或定量分析）、含量测定（包括特性参数和含量/效价测定，其中特性参数如：药物溶出度、释放度等）。 验证的指标有：专属性、准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性）、检测限、定量限、线性、范围、耐用性。在分析方法中，须用标准物质进行试验。由于分析方法具有各自的特点中，并随分析对象而变化，因此需要视具体情况拟订验证的指标。表1列出的分析项目和相应的验证指标可供参考。 表1检验项目和验证指标 项目内容鉴别杂质测定含量测定 -特性参数 -含量或效价测定定量限度 专属性②++++ 准确度-+-+ 精密度重复性-+-+中间精密度-+①-+① 检测限（LOD）--③+- 定量限(LOQ)-+-- 线性-+-+ 范围-+-+ 耐用性++++ 1已有重现性验证，不需要验证中间精密度； 2如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充； 3视具体情况予以验证。 方法学验证内容如下： 一、专属性 专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的分析方法能正确测定出被测物的能力。鉴别反应、杂质检査和含量测定方法，均应考察其专属性。如方法专属性不强，应采用一种或多种不同原理的方法予以补充。
液相分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准 审评四部黄晓龙 1、有关物质 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法,这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量,将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为： 在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。 3．精密度 1）重复性 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于15%。 2）中间精密度 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小于2.0。 5．检测限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 6．定量限 杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限
液相分析方法进行方法学验证时各项指标的可接受 标准 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
液相分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准 审评四部黄晓龙 1、有关物质 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法,这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为%，则可分别配制该杂质浓度为％、％和％的杂质溶液），分别测定其含量,将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。2．线性
化学药物分析方法验证的内容和评价 质量可控是活性化合物成药及进行药品安全有效性评价的前提。对药品的质量进行控制应该是多方面的，其中包括生产环境的控制、原辅料来源和质量的控制、生产工艺过程的控制，以及按照质量标准进行成品检验控制等。 但是，在药品研发过程中，揭示药品的品质、控制药品的质量，通常是要针对研制药品的特性 (主药的理化性质及制剂的质量要求等 )确定相应的研究测 试项目，再根据测试项目的需要，建立适宜的分析方法 (包括方法的选择和方法的验证 )，最后是根据药品质量的要求及安全性研究结果确定各测试项目的限度，起草制订检验药品质量的质量标准。分析方法是揭示药品品质的工具和手段，方法验证是判断采用的分析方法是否科学、可行的过程。实际上，方法验证就是根据确定的检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。下面就根据《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》解读分析方法验证的内容和评价要点，在对目前申报资料中分析方法验证工作中存在的问题进行分析的基础上，以高效液相色谱法为例，阐述方法验证的思路及验证要点，希望能对药物研发者有所帮助。 一、方法验证的内容 首先应该明确的是：方法验证的内容应根据检测项目的要求，同时结合所采用的分析方法的特点确定。相同的分析方法用于不同的检测项目时，其验证要求是不同的。例如，采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量检查时的验证要求是不同的；前者重点要验证方法的专属性，而后者重点要验证方法的专属性、准确度和定量限。通常需要验证的检测项目：鉴别、杂质检查 (限度试验、定量试验 )、定量测定 (含量测定、溶出度、释放度等 )，还有其他特定的检测项目 (粒径分布、分子量分布)等。方法验证的内容包括专属性、线性、范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性 (粗放度 )和系统适用性等。 1、专属性专属性系指在其他成分 (如杂质、降解物、辅料等 )存在下，采用的分析方法能够正确鉴定、检出被测物的特性。通常，鉴别、杂质检查、含量测定均应验证方法的专属性，排除非主药成分的干扰。 2、线性线性系指在设计的测定范围内，检测结果与供试品中被测物的浓度(量)直接呈线性关系的程度，是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试验和含量测定均需要验证方法的线性。
分析方法验证 一．方法验证概述 1方法验证概念解析 2各方指导原则 3方法验证的常见困难 4风险管理在分析方法中的应用 5限度与定量验证的区别与适用情况 6方法验证的前期准备 7方法验证的方案和报告 首先申明是方法验证：ICHQ2，分析方法的验证是为了证明该方法与预期的目的相一致。中国药典，药品质量标准分析方法验证的目的是证明采用的方法适合于相应的检测要求。USP1225，通过实验室研究确认方法的性能参数可以满足预期的检测要求。 什么是检测要求：结实（耐用性好）、准确、稳定 是否需要验证？ 需要经过验证的：含量测定、有关物质、残留溶剂、基因毒杂质、其他特定杂质、鉴别（仪器）、溶出度、释放度、粒径（激光衍射法）、其他采用液相色谱及光谱法等检测项目。 不需要经过验证的：炽灼残渣、干燥失重、鉴别（化学法）、性状、水分、酸碱度、PH、其他理化检测。
注意事项：方法是否需要验证，应当基于风险评估的判断，惯例只是对于风险的一致认知，并不适用于所有情况。 注册用方法验证的一般要求 代表性的样品：验证用到的样品应当能够代表上市批的质量，工艺一致，批量相当。 规范的过程：验证过程应当符合GMP或GMP 类似要求方法确认与转移相关指导原则 12015年版中国药典四部9101 2.化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 https://www.doczj.com/doc/219549968.html,P1225 4.ICHQ2 5.FDA的Analytical procedures and method validation 方法验证的常见困难： 1 已经验证的方法转移失败。 2 已经验证的方法在日常检测过程中不适用。 3方法验证过程中发现方法不适用 4 某些验证项目需要多次验证才能获得满意的结果。 分析方法风险应对前置于方法开发阶段 1在方法设计阶段应当预测全生命周期内可能存在的风险，如方法转移、可能的OOT/OOS、系统适用性试验失败原因、监管法规的变化、技术进步等。 2 收集相关方的需求，包括QC实验室、合成部门、制
药品质量标准分析方法验证山西省药品检验所(030001) 任晋斌 李嵘立 分析方法的验证已于1994年10月经I CH执委会讲座通过国际协调,形成最后文本推荐给美国、日本、欧共体国家药政管理部门采用。美国药典(U SP)23版已将“质量标准方法的认证”载入其附录。由于美国联邦法规已明确规定U SP收载的药品质量标准为法定标准,故凡分析工作者使用U SP收载的分析方法时不必再去验证其准确性与可靠性而仅需证实其在实际使用条件下的适用性。基于U SP2N F标准的法定地位,对推荐U SP采用新的或修订的质量标准分析方法则必须有足够的以实验数据支持的文件资料对该法的准确、可靠性进行验证。鉴于我国仍有大量的地方药品标准其水平参差不齐,有的分析方法缺乏专属性、重现性,急待整顿提高为国家标准。而分析方法的质量直接影响药品标准的质量,因此有必要参照I CH有关指导原则和U SP,结合我国国情,将药品质量标准分析方法的验证作为对分析方法的质控手段,形成规程性资料,逐步载入药典,必将有利于提高我国药品质量标准的总体研究水平。 质量标准分析方法的验证是通过实验室研究,确立该方法的性能特征符合预定分析申报要求,以证明该分析方法的适用性。需要验证的分析方法种类一般应包括:①原料药主成分及制剂中活性成分(含防腐剂)的定量分析。②原料药的杂质及制剂降解产物的定量分析与限度试验。③性能特征测定的分析方法如药物溶出度和释放度、原料药的粒度试验等。④药品的鉴别试验。⑤拟推荐国家标准采用的新的或修订质量标准的分析方法。 1 分析方法的验证参数 分析方法的验证参数一般包括分析方法的准确性、精密度、专属性、检测限度、定量限度、线性、范围等,它们的定义及测定方法如下。 111 准确性(accu racy) 是指用该分析方法所得的测试结果与真实值的接近程度。可通过用该法测定含有已知量被测物的样品或加有较已知量略高或略低的被测物与赋形剂的混合物,然后从试验结果计算被测物的含量百分回收率用以表示准确性,要求至少测定高、中、低三个浓度,每个浓度测定3次共提供9个数据进行评价。 112 精密度(p recisi on) 是指对同一匀质样品进行多次取样(其样本数应能满足统计分析要求),用该法测定每个样品所得测试结果的符合程度。通常以标准差(s)或相对标准差(变异系数R SD)来评定。精密度可以三种形式表达:A:重视性,B:中间精密度,C:重复性。精密度是在正确操作条件下分析方法重现性程度或重复性的一种量值。重现性指在不同实验室中使用此种分析方法的精密度。中间精密度表示实验室内部的差异,如不同的实验时间(日子),或在同一实验室中由不同的分析者或用不同的仪器进行测定的结果变异程度。重复性指在同一实验室短期内由同一分析者用同一仪器进行测定结果的变异程度,一般用三种浓度重复测定各3次,以均数的R SD和可信限表示。 113 专属性(specificity) 是指在含有该组份的样品中,用该法能准确并专一测出被测物(analyte)的能力。通常通过分析含有加了杂质、降解产物、有关化学物质或安慰剂成分的样品,将所获分析结果与未加前述成分之样品的测试结果进行比较,两组测试结果 ? 8 8 3 ?ShanxiM ed J,O ct1998,V o l27,N o.5
Q2B 分析方法验证 方法学简介 ICH 指南“关于分析方法验证的术语”阐述了分析方法验证中应考虑的项目，本文件是对 Q2A 的补充，其目的是对每一种分析方法的各种验证项目提供指导和建议。在某些情况下（如专属性），为了确保原料药和制剂的质量，应对一些综合起来的分析方法的总体能力进行研究。另外，文件对在新药申请中必须要递交的资料作了指导。 所有验证中收集的相关数据和验证项目的计算公式都应递交并进行适当的讨论。 本指南未提到的方法，也可应用和采纳。申报者的责任应是选择最适合他们产品的验证方法和方案。但要切记，分析方法验证的主要目的是证明其适合于预期目的。对于生物技术产品和生物制品，由于它们的复杂特性，在某些情况下，其分析方法的验证可能与本文中提到的方法不同。 在整个方法学验证研究过程中，必须使用已完全鉴定并标示纯度的参考物质，其纯度要求取决于预期用途。 与Q2A —样，为清楚起见，本文在各独立的章节中考虑了不同的验证项目，这些章节的排列反映了建立和评估一种分析方法的过程。 事实上在进行实验设计时，一些适当的验证项目通常可以同时考虑，以对分析方法的能力提供合理、全面的了解，如专属性、线性、范围、准确度和精密度。 1．专属性 在鉴别检查、杂质和含量测定的方法学验证中应进行专属性研究，证明专属性的方法取决于分析方法的预期目的。 般一种分析方法不太可能对某一特定的被分析物具有专属性（完全鉴定） ，在此情况 下，建议采用两种或两种以上的分析方法以达到能鉴定的水平。 1．1 鉴别 合适的鉴别试验应能区别出可能存在结构相似的化合物。可以通过与已知参考物质比
较，从含有被分析物的样品中得到的正结果和不含被分析物的样品中得到的负结果来确定。 此外，鉴别试验也可以取与被测物结构相似或相关的物质来试验而得不到正反应来证实。 在考虑可能会造成干扰的前提下，应根据合理科学的判断来选择可能存在的干扰物。 1．2 含量和杂质测定 在色谱方法中，应用典型的色谱图来证明专属性，并在图上恰当地标出每一种成分，其他分离技术也应如此。 在色谱方法中，应在一定程度上考察关键性的分离。对关键性分离，可用两个洗脱程度最接近的化合物的分离度来证明具有专属性。 当用非专属性方法测定含量，可用其他辅助性的分析方法来证实整个方法的专属性，例如：用滴定法来测定放行原料药的含量，可结合用合适的杂质检查方法。 下述方法均适用于含量和杂质测定：1．2．1 可以得到杂质的情况 对含量测定来说，专属性应包括提供被分析物在杂质和（或）辅料存在时能被区分的证明，实际操作中可以在纯物质（原料或制剂）中加入一定量的杂质或辅料，与未加杂质或辅料的样品测定结果比较，以证明其含量测定结果不受这些物质的影响。 对杂质检查来说，通过加入含有一定量杂质的原料药或制剂，证明各杂质之间能分离，并也能与样品矩阵中其他组分分离。 1．2．2 无法得到杂质的情况 如果杂质或降解物的对照品不能得到，专属性可以通过将含一定量的杂质或降解物的样品测定结果与另一种成熟的方法测定结果比较，如药典方法或经验证的其他方法（独立的方法）进行比较来证实。必要时，应包括放置在强制降解试验条件下，即光、热、湿、酸碱水解及氧化条件下的样品的测定。 对于含量测定，需要比较两种方法的结果。 对于杂质检查，要比较杂质档案。 峰纯度检验是很有用的，它显示被测物色谱峰是单个还是多个成分（如二极管阵列、质谱）。 2．线性 线性是在分析方法的范围内（见章节3）对方法进行评价。可用所建议的分析方法，直接对原料药（用标准储备溶液稀释）和（或）对分别称取制剂组分的混合物进行测定，以研究其线性。后者应在方法的范围内进行研究。