免疫比浊法

免疫比浊法.txt明骚易躲，暗贱难防。佛祖曰：你俩就是大傻B！当白天又一次把黑夜按翻在床上的时候，太阳就出生了三、免疫比浊法

免疫比浊法是抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是:当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而又比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂聚乙二醇等作用下，自液相析出;形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加/反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样申抗原的含量。免疫比浊法可分为四型，1.透射比浊法；2.散射比浊法；3.免疫胶乳比浊法；4.速率抑制免疫比浊法。

实验六免疫透射比浊法测人血清lgG

【原理】

抗原抗体结合后，形成免疫复合物，在一定时间内复合物聚合出现浊度。当光线通过溶液时，可被免疫复合物吸收。免疫复合物量越多，光线吸收越多。光线被吸收的量在一定范围内与免疫复合物的量成正比。利用比浊计测定光密度值，复合物的含量与光密度值成正比，同样当抗体量一定时，光密度值也与抗原含量成正比。本法较单向琼脂扩散试验和火箭电泳等一般免疫化学定量方法敏感、快速简便，但要求免疫复合物的数量和分子量达到一定高度，否则就难以测出。

【器材与试剂】

1.抗原:人血清IgG参考血清和待测血清。

2.抗体，兔抗人IgG

3.免疫比浊用缓冲液

4.721分光光度计、离心机、吸管、滴管、微量加样器、试管。

【方法】

1.抗原稀释，

(1)标准抗原:用缓冲液将人血清IgG参考血清稀释成不同浓度，500、900、1300、1700、2100mg/lOOml。

(2)待测血清，用缓冲液作1:40稀释。

2.取小试管24管作好标记，每拌8管，共三排，即每个稀释度均有三个重复管。1～5管为不同稀释度标准抗原管，第6管为待测血清管;第7管为抗血清对照管，第8管为待测血清对

照管。

3.加样：

(l)加抗血清：1～7管各加入免抗人IgG 2m1，第8管加缓冲液2ml。

(2)加抗原：每排1～5管分别加入不同稀释度的1出参考血清2Ou1，6管和8管分别加入1:40的待测血清2Oul，第7管加入缓冲液2Oul。

4.混匀后370C水浴1小时。

【结果】

1.用721分光光度计测定各管OD值(λ=495nm)，以缓冲液调0点。

2.绘制标准曲线，以IgG参考血清的不同浓度为横座标，其相应管OD值(三管的平均值)为纵座标，经直线回归方程处理后绘制标准曲线。

3.IgG含量计算:待测样本OD值为待测血清管OD值减抗血清对照管与待测血清对照管OD值之和，查标准曲线即可得知待测样品中IgG的实际含量。

【注意事项】

1.本法要求反应系统中保持抗体过量，故抗血清浓度选择十分重要，每批实验前必须先做抗血清浓度选择。最佳稀释度选择原则:保持抗体过量，线性范围较宽，与IgG反应后产生浊度较高，节约抗血清。

2.为了不含任何干扰粒子，所有试剂(包括待测血清)均需3，000转/分离心20分钟。

3.脂蛋白的小颗粒可形成浊度，造成假性升高，因而本试验结果可能受到血脂的影响。

【附】

缓冲液配制：

PEG6000 20.Og

NaF 2l.Og

NaCl 9.Og

NaN3 l.O9

加蒸馏水至1000ml，3，000转/分离心20分钟，室温保存。