食用菌母种1级种培养基、
食用菌原种2级种培养基
简法生产与灭菌创新技术
湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场的科技人员经过多年探索实践，研究成功食用菌母种1级种试管培养基、食用菌原种2级种培养基简法灭菌创新技术。其技术涵盖了食用菌菌种母种1级种试管培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术和食用菌菌种原种2级种培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术。现将其技术要点介绍如下：
1. 食用菌菌种母种1级种试管培养基简法生产与复制创新技术
该技术采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。1支试管（18毫米×180毫米玻璃试管）装入颗粒培养基约10克，成本不足1角钱，棉花塞堵封试管口。一次可根据生产需要，制作分装试管500支～1000支。
2. 食用菌菌种原种2级种培养基简法生产与复制创新技术
该技术同样采用湖1北3省0宜85都市16湾市86食用16菌天
麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷粒、麦粒、玉米粒为原料。取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀即可。盛装原种2级种培养基的容器为250毫升输液瓶即生理盐水瓶。1瓶装入颗粒培养基约100克，成本不足5角钱，棉花塞堵封瓶口。一次可根据生产需要，制作分装100瓶～500瓶。
3. 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术
3.1 灭菌设备：
母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术选用的灭菌设备为“苏泊尔”压力锅，即家庭做饭用的压力锅，又称家用高压锅。
3.2 灭菌操作：
向“苏泊尔”压力锅内注水5厘米深，将制备好的食用菌母种、原种培养基分别直立于压力锅内，盖上锅盖，生火灭菌40分钟～50分钟即可。
小结：该技术突破了传统方法需要用牛皮纸包扎试管口或瓶口棉花塞，全封闭高压灭菌却仍不能保证100%不湿棉花塞的难题，达到了不用专用高压灭菌锅，不用高档灭菌设备，不包扎棉花塞全裸露灭菌却100%不湿棉花塞的理想效果。其突出的特点是灭菌设备为家用炊具，可一锅多用，且价廉易购，灭菌方法简单实用，灭菌效果好。彻底解决了食用菌母种和原种制作难、消毒灭菌更难的技术难题，为食用菌种简法生产开拓出新天地。
1 目的 为了保证XG1.D型脉动真空灭菌器按照规定的要求，正确、规范操作，建立标准操作规程。 2 范围 本程序适用于非最终灭菌小容量注射剂生产线XG1.D型脉动真空灭菌器的使用操作。 3 职责 3.1 车间管理人员负责对操作人员进行本规程的培训，确保操作人员能够按照规定的要求，正确、规范操作设备。 3.2操作人员：负责对该规程进行实施，严格执行本规程规定的操作要求。 3.3车间管理人员、现场QA负责对本规程的实施监督工作。 4 内容 4.1概述 4.1.1设备的组成 本设备由主体、密封门、灭菌内车、管路系统和控制系统等部分组成。 4.1.2设备灭菌的原理 组成细菌的蛋白质分子的功能取决于它的特殊结构，在一定高温条件下受热时，蛋白质分子内氢键发生断裂影响了分子空间构型的重排，从而导致微生物死亡。细菌孢子，尤其是芽胞杆菌和梭状芽孢具有耐热性。耐热孢子的破坏取决于在湿热条件孢子的水合作用以及核酸及蛋白质的变性。因此，蒸汽灭菌中使用饱和蒸汽是至关重要的。 饱和蒸汽的穿透性比干热空气及过热蒸汽的穿透性要强得多。蒸汽冷凝时放出的潜热传给待灭菌品，使之升温并使待灭菌品所带的微生物尤其是表面的微生物发生水合作用，从而加速了它们的死亡。 本设备采用饱和湿热蒸汽灭菌及机械强制脉动真空的空气排除方式，经多次抽真空多次注入蒸汽，彻底消除灭菌室内的冷点，使空气排除量达到99%以上，完全排除温度“死角”和“小装量效应”，保证了可靠的灭菌效果。
4.2开机前检查 4.2.1检查设备是否有“完好”状态标志。 4.2.2 检查设备是否有“已清洁消毒”状态标志且在有效期范围内。确认完毕后由配料负责人取下“已清洁消毒”状态标志，交给现场QA统一存放。 4.2.3检查仪器仪表是否正常，有校验合格标志并在有效期范围内。 4.3 开机前准备 4.3.1将蒸汽管道内的冷凝水排放干净，然后打开于灭菌器连接的蒸汽阀、纯蒸汽阀、冷却水阀、压缩空气阀，检查纯蒸汽压力是否达到0.2～0.25M Pa MPa，蒸汽压力是否达到0.3～0.5MPa，压缩空气是否达到0.5～0.7MPa。4.3.2 打开平面板上的电源开关，操作工点击操作人员方框输入1861即可进入操作权限。 4.3.2.1设定好灭菌参数 4.3.2.1.1基础参数的设定 4.3.2.1.2 织物程序、器械程序、自选程序及液体程序参数的设定
食用菌的培养过程及结果 摘要：食用菌作为日常生活中的一道菜肴，深受人们的喜爱，学习和掌握其培养方法，通过切身行动来感受从培养机制备到后期的观察采集的整个过程，注意在此期间的每一个细小环节和一些不成功因素，从而得出正确的结论，丰富自身经验。 关键词：食用菌培养观察分析 前言 食用菌是指子实体硕大、肉质或胶质可供食用的大型真菌。食用菌风味独特,营养丰富,蛋白质含量较高，含多种氨基酸、维生素、糖类和矿质元素等，有的还具有药用价值。中国已知的食用菌有350多种，其中多属担子菌亚门，常见的有香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑、红菇和牛肝菌等，少数属于子囊菌亚门，如羊肚菌、马鞍菌等。食用菌的实验室培养不同于其天然生存条件，需要人工提供各种优越条件，而且在每个环节都要十分注意小心，因为在整个过程中食用菌很容易受微生菌污染致死。同时需要培养者自身知识方面的储备，从培养机制备、接种、观察分析以及食用菌料理采集等多方面，都需要精心准备相关知识，对食用菌的自然生存环境与实验室情况类同，保证食用菌的正常生长。 正文 实验一食用菌的实验室培养——平菇、香菇、金针菇的栽培 食用菌栽培技术实验安排 第4周：1.培养料的制备、装袋、灭菌、 第5周：接种； 第7周：2.翻堆、制备PDA斜面； 第8周：3.食用菌母钟的制作； 第9~12周：出菇管理及采收； 一、实验目的： 1掌握食用菌培养基的配置原理。 2通过平菇、香菇、金针菇的栽培实验，掌握食用菌代料栽培的一般方法和栽培管理技术。 二、实验内容 1. 代料栽培培养基的制备 2. 培养基的灭菌 3. 接种 三、实验器材
1．试剂：棉籽壳、麸皮、蔗糖、CaCO3。 2．仪器或其他用具：平菇菌种、香菇菌种、金针菇菌种、姬菇菌种、茶树菇菌种、台秤、盆子、聚丙烯塑料袋、颈圈、封口膜、橡皮筋、高压蒸气灭菌锅、pH试纸（pH 5.5—9.0）、记号笔、麻绳等。 四、培养料配方 棉籽壳3900g 麸皮1000 g 蔗糖50 g CaCO3 50 g 自来水5000 ml pH 7.4～7.6 五、实验方法 1.拌料按培养料配方准确称取所需棉籽壳和麸皮放入大盆中用手搅拌混合均匀，将所需的蔗糖和CaCO3溶于水中，然后泼洒在棉籽壳和麸皮上，边加水边搅拌，直至均匀。搅拌好后，焖30分钟，使培养料吸水均匀。 2.装袋边加边将培养料压实，装至3/4左右，袋口套上颈圈，用木棒在培养料中打一洞，盖上封口膜，用橡皮筋扎紧。 3.灭菌126 ℃高压蒸气灭菌90分钟。 4. 接种栽培袋冷却到25℃左右，在超净工作台上用镊子或接种枪夹取所需菌种（1个鸡蛋大小）放入培养料袋的洞中。 5. 培养接种后的栽培袋，放入23- 25℃培养室，堆放高度三至四层，空气湿度60%-65%，每周翻堆一次，使上下发菌一致，同时挑出污染的栽培袋丢弃，一般30-40天，菌丝即可长满菌袋。 6. 出菇管理 7. 采收 食用菌母种的制作——组织分离法 一、实验目的 学习和掌握食用菌的组织分离法； 二、实验原理 食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。 三、实验器材 1. 食用菌：金针菇、平菇。 2. 培养基：PDA培养基斜面。 3. 仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。 四、实验方法 1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇； 2. 种菇消毒：取1张菇片，用70%的酒精轻擦表面进行消毒； 3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上； 4.培养：将试管斜面置于15～30℃下培养； 五、注意事项 1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。
食用菌母种1级种培养基、 食用菌原种2级种培养基 简法生产与灭菌创新技术 湖北省宜都市湾市食用菌天麻繁育场的科技人员经过多年探索实践，研究成功食用菌母种1级种试管培养基、食用菌原种2级种培养基简法灭菌创新技术。其技术涵盖了食用菌菌种母种1级种试管培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术和食用菌菌种原种2级种培养基简法复制生产创新技术及简法灭菌创新技术。现将其技术要点介绍如下： 1. 食用菌菌种母种1级种试管培养基简法生产与复制创新技术 该技术采用湖1北3省8宜72都市52湾市33食用58菌天麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷物为原料，谷粒、麦粒、玉米粒均可，简称颗粒培养基（下同），又称天然无公害培养基。这种颗粒培养基制作方法特别简单，取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀后，就可以分装试管了。1支试管（18毫米×180毫米玻璃试管）装入颗粒培养基约10克，成本不足1角钱，棉花塞堵封试管口。一次可根据生产需要，制作分装试管500支～1000支。 2. 食用菌菌种原种2级种培养基简法生产与复制创新技术 该技术同样采用湖1北3省0宜85都市16湾市86食用16菌天
麻繁育场技术总监胡文华发明的“广谱通用型食用菌菌种培养基生产技术”。这种广谱通用型食用菌菌种培养基以颗粒型谷粒、麦粒、玉米粒为原料。取谷粒、麦粒、玉米粒一种或多种，与胡文华发明的食用菌种包衣剂混合均匀即可。盛装原种2级种培养基的容器为250毫升输液瓶即生理盐水瓶。1瓶装入颗粒培养基约100克，成本不足5角钱，棉花塞堵封瓶口。一次可根据生产需要，制作分装100瓶～500瓶。 3. 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术 3.1 灭菌设备： 母种培养基和原种培养基简法灭菌创新技术选用的灭菌设备为“苏泊尔”压力锅，即家庭做饭用的压力锅，又称家用高压锅。 3.2 灭菌操作： 向“苏泊尔”压力锅内注水5厘米深，将制备好的食用菌母种、原种培养基分别直立于压力锅内，盖上锅盖，生火灭菌40分钟～50分钟即可。 小结：该技术突破了传统方法需要用牛皮纸包扎试管口或瓶口棉花塞，全封闭高压灭菌却仍不能保证100%不湿棉花塞的难题，达到了不用专用高压灭菌锅，不用高档灭菌设备，不包扎棉花塞全裸露灭菌却100%不湿棉花塞的理想效果。其突出的特点是灭菌设备为家用炊具，可一锅多用，且价廉易购，灭菌方法简单实用，灭菌效果好。彻底解决了食用菌母种和原种制作难、消毒灭菌更难的技术难题，为食用菌种简法生产开拓出新天地。
新华压力蒸汽灭菌器操作规程-MAST4000控制系统型 每日使用前准备： 先排除蒸汽管道冷凝水，然后打开与灭菌器连接的蒸汽源阀门，检查其压力是否达到 适用于外接蒸汽设备)； 打开与灭菌器连接的水源阀门，检查其压力是否达到 MPa； 打开空气压缩机电源以及与灭菌连接的压缩气源阀门，检查其压力是否达； 检查设备供给电源正常后，打开设备电源开关（黑色ON－OFF标识钥匙开关），给设备送电； 检查设备表指示正常，设备记录装置处于正常工作状态； 设备维持在通电状态，当灭菌器夹层压力稳定在左右后，先启动冷锅预热程序对设备进行预热，再运行B&D测试程序，B&D测试合格后运行灭菌程序。 程序运行： 点击【用户登录】，选择用户名，输入用户密码； 选择相应程序，待设备达到启动条件后，【快速启动】键变成紫色； 点击【开门载门】，装入灭菌物品，再点击【关装载门】； 确认需要运行的程序名称，待【快速启动】键变成紫色后点击启动，程序开始运行； 灭菌完成后，在无菌区按开后门键，卸载已灭菌物品，再按关门键； 序号程序名称灭菌温度灭菌时间干燥时间备注 P01冷锅预热134℃0min3min空载，设备灭菌前的预热 P02B&D测试134℃4min B&D测试包或装置 P03织物敷料134℃5min10min总重≤包，敷料包 P04常规器械134℃5min15min总重≤包，灭菌篮筐、灭菌盒装载 P05热敏负载134℃20min15min总重≤包，耐温121℃物品 P06快速程序134℃4min1min裸露器械 P07骨科器械134℃6min15min+10min≤14kg/包，骨科器械 P08泄漏测试—————————空载，最大泄漏速率min P09朊毒体134℃30min15min感染朊病毒等特殊物品 P10管腔负载134℃7min15min+5min内径≥2mm，距开口端≤1500倍内径 P11重型负载134℃6min15min+10min较大装载量 P12小型负载134℃5min8min总重≤包，装载量<标准灭菌单元 P13敞口液体121℃30min———总重≤500ml/瓶，非密闭瓶装液体 P14重力程序121℃20min———下排汽，不抽真空 P15正压程序134℃7min10min需正压置换，真空干燥物品的灭菌 空气阀门、供水阀门、蒸汽阀门。 日常维护： 每天：待灭菌器温度降低至安全范围内，将内室污物清洗干净； 排出蒸汽器中剩余的存水（适用于自带蒸发器的设备）；注：可根据水质情况，适当调整排污频率。 每周：对密封槽门胶条等部位进行清理； 每月：清理疏通管路上的过滤网，过滤器等。
第五章培养基及设备的灭菌第一节培养基灭菌的目的、 要求和方法 一、定义 1，培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 2，灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 二、培养基灭菌的目的 1，在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果： 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力； 在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主； 杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难 杂菌会降解目的产物； 杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品； 发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。 2，工业上具体措施包括： （1）使用的培养基和设备须经灭菌； （2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； （3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； （4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； （5）使用无污染的纯粹种子。 3，培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 4，培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度（10-3） （2）尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： ●培养基中不同营养成分间的相互作用； ●对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。 5，灭菌的方法 （1）化学法 化学药品灭菌法 （2）物理法 干热灭菌法 湿热灭菌法 射线灭菌法
6，湿热灭菌的原理 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。 7，湿热灭菌中的相关定义 ?杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。 ?微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。 相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死 时间的比值。 各种微生物对湿热的相对热阻 微生物相对热阻 营养细胞和酵母细菌芽孢 霉菌孢子 病毒和噬菌体 1.0 3×106 2~10 1~5 8，湿热灭菌的优点 ?蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒； ?蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； ?蒸汽有很大的潜热； ?操作方便，易管理。 第二节湿热灭菌的理论基础 一，培养基湿热灭菌需解决的工程问题 1，将培养基中的杂菌总数N0杀灭到可以接受的总数N（10-3），需要多高的温度、多长的时间为合理。 2，菌温度和时间的确定取决于： （1）杂菌孢子的热灭死动力学 （2）反应器的形式和操作方式 （3）培养基中有效成分受热破坏的可接受范围 二、微生物的热死灭动力学方程
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
食用菌常见消毒灭菌方法 食用菌的消毒灭菌 在物品及空气中分布着大量微生物。进行食用菌生产必须树立严格的无菌观念，掌握和运用消毒、灭菌技术，严防杂菌污染，保证菌种优良纯正,使食用菌顺利生长发育，以获得较好的经济效益。消毒灭菌是排除杂菌干扰，为食用菌创造洁净生长环境的重要保证。也是食用菌生产中的一项基本技术。 几个重要概念： 灭菌：是指在一定的范围内用物质物理或化学的方法，彻底杀灭物料、容器、用具和空气中的所有微生物。 消毒：是指用物理或化学的方法，杀灭物料中、物体表面及环境中的一部分微生物，即只能杀死微生物的营养体，不能杀死微生物的休眠体。 防腐：是指用物理学或化学的方法，暂时抑制微生物的生长。 除菌：是一种用机械的方法（如过滤、离心分离、静电吸附等）除去液体或气体中微生物的方法。 1.灭菌 杀死一定环境、物品中的一切微生物（包括芽孢），使一定范围内的微生物永远丧失生长繁殖能力，使之达到无菌程度，是灭菌的目的。经过灭菌的物品称“无菌物品”。灭菌可分为杀菌和溶菌。 杀菌是指菌体失活，但菌形尚存。溶菌是指菌体死亡后发生溶解、消失的现象。 2.消毒：杀死环境、物品中的病原菌（杀不死芽孢）,而对被消毒物品基本无害的方法为消毒。 3.防腐：暂时抑制其生长。使微生物暂时处于不生长、不繁殖、但又未死亡的状态，称为防腐。属于一种抑菌作用。 4.除菌用冲洗、过滤、离心、静电吸附等机械手段，除去微生物的方法为除菌。 消毒灭菌主要利用物理或化学因素。各种理化因子究竟能起到灭菌、消毒、防腐中的哪种效果，主要取决于本身的强度或浓度、作用时间、微生物对理化因子的敏感性及菌龄等综合因素的影响。任何消毒灭菌法的使用，必须达到既杀灭物品中的微生物，又不破坏其固有性质的目的。 物理消毒灭菌 食用菌生产中常用的物理消毒灭菌法是热力灭菌及紫外线灭菌,两者都属于强杀伤力因素。 一、热力灭菌 原理： 高温使菌体蛋白质、核酸、酶等重要细胞物质发生凝固或变性失活。日常生活中的炒、烧、烤、蒸、煮等对微生物都有一种短平快的效果。根据加热方式的不同，可分为干热灭菌和湿热灭菌两类。在实践中，可根据灭菌物品的性质和具体条件选用。 （一）干热灭菌利用火焰、热空气杀死微生物(适于耐烧、耐烤物品),干热灭菌以其快速在灭菌领域占有一席之地，干热灭菌器灭菌范围较窄。 (1)酒精灯烧接种工具、管口、瓶口→烧至红热(冷却用)简、快、彻底 (2)烘烤法(热空气) 适于体积较大的玻璃、金属器皿，试管、培养皿、三角瓶、烧杯、吸管等包装放入烘箱→160-170℃、2h断电→70℃以下取物。注意：升降温勿急；勿超180℃；用时随用随开包。干热灭菌简便易行，能保持物品干燥，但使用范围有限，只适用
培养基及设备的灭菌 第一节培养基灭菌的目的、要求和方法 一、定义 1，培养基灭菌的定义 是指从培养基中杀灭有生活能力的细菌营养体及其孢子，或从中将其除去。工业规模的液体培养基灭菌，杀灭杂菌比除去杂菌更为常用。 2，灭菌与消毒的区别 灭菌：用物理或化学方法杀死或除去环境中所有微生物，包括营养细胞、细菌芽孢和孢子 消毒：用物理或化学方法杀死物料、容器、器皿内外的病源微生物。 二、培养基灭菌的目的 1，在发酵过程中夹杂其它杂菌造成的后果 生产菌和杂菌同时生长，生产菌丧失生产能力；在连续发酵过程中，杂菌的生长速度有时会比生产菌生长得更快，结果使发酵罐中以杂菌为主；杂菌及其产生的物质，使提取精制发生困难；杂菌会降解目的产物；杂菌会污染最终产品，杂菌会污染最终产品；发酵时如污染噬菌体，可使生产菌发生溶菌现象。 2，工业上具体措施包括 （1）使用的培养基和设备须经灭菌； （2）好氧培养中使用的空气应经除菌处理； （3）设备应严密，发酵罐维持正压环境； （4）培养过程中加入的物料应经过灭菌； （5）使用无污染的纯粹种子。 3，培养基灭菌的目的 杀灭培养基中的微生物，为后续发酵过程创造无菌的条件。 4，培养基灭菌的要求 （1）达到要求的无菌程度（10-3） （2）尽量减少营养成分的破坏，在灭菌过程中，培养基组分的破坏，是由两个基本类型的反应引起的： 培养基中不同营养成分间的相互作用；对热不稳定的组分如氨基酸和维生素等的分解。 5，灭菌的方法 （1）化学法 化学药品灭菌法 （2）物理法 干热灭菌法
湿热灭菌法 射线灭菌法 6，湿热灭菌的原理 每一种微生物都有一定的最适生长温度范围。当微生物处于最低温度以下时，代谢作用几乎停止而处于休眠状态。当温度超过最高限度时，微生物细胞中的原生质胶体和酶起了不可逆的凝固变性，使微生物在很短时间内死亡，加热灭菌即是根据微生物这一特性而进行的。 7，湿热灭菌中的相关定义 杀死微生物的极限温度称为致死温度。在致死温度下，杀死全部微生物所需的时间称为致死时间；在致死温度以上，温度愈高，致死时间愈短。 微生物的热阻：是指微生物在某一特定条件（主要是温度和加热方式）下的致死时间。相对热阻是指某一微生物在某条件下的致死时间与另一微生物在相同条件下的致死时间的比值。 各种微生物对湿热的相对热阻 微生物 相对热阻 营养细胞和酵母 细菌芽孢 霉菌孢子 病毒和噬菌体 1.0 3×106 2~10 1~5 8，湿热灭菌的优点 蒸汽来源容易，操作费用低，本身无毒；蒸汽有强的穿透力，灭菌易于彻底； 蒸汽有很大的潜热；操作方便，易管理。 第二节 湿热灭菌的理论基础 一，培养基湿热灭菌需解决的工程问题 1，将培养基中的杂菌总数N 0 杀灭到可以接受的总数N （10-3）， 需要多高的温度、多长的时间为合理。 菌温度和时间的确定取决于： （1）杂菌孢子的热灭死动力学 （2）反应器的形式和操作方式 （3）培养基中有效成分受热破坏的可接受范围 二、微生物的热死灭动力学方程 实验证明，微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学，即： N ：任一时刻的活细菌浓度（个/L ） () 1N k dt dN ?=-
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
食用菌接种箱如何灭菌 在食用菌制种和栽培上，因各种原因引起的杂菌污染屡见不鲜。各种杂菌（如霉菌和细菌）几乎无一例外地都是竞争性的，它们和食用菌生活在同一培养基上，争夺食用菌的营养和生活空间，影响食用菌的生长；许多杂菌还通过产生一些有毒物质来抑制食用菌菌丝的生长。从某种意义上来说，食用菌制种和栽培的中心工作就是如何来防止和控制各种杂菌的污染，以获得菌丝体或栽培体的纯培养。在生产上搞好杂菌污染的防止和控制，其中重要的一环就是接种工作。展坤公司郝俊，经过整理食用菌培育客户多年来从事食用菌工作的经验，对接种所引起的污染及防止措施分析。 如下，供同行参考。1接种箱滋生霉菌引起的污染也许有人会认为，接种箱是用于接种的设备，要经常消毒，而且每次使用前都要经过消毒处理，怎么也会生长霉菌呢？其实，这是一种误解。首先，接种箱多为木质结构，木材中含有丰富的木质纤维素，它是各种霉菌生活的良好营养成分；其次，接种箱的使用随生产而具有季节性，每年都有较长一段时间闲置未用，在这段时间内，就极有可能出现霉菌污染。那么，在什么情况下接种箱才会出现霉菌污染呢？接种箱被污染多是出现在接种箱闲置未使用的时候，但笔者认为，引起污染的直接原因往往并不在这段时间，而是在生产季节接种箱被使用的时候。在使用接种箱时，生产者操作不规范或使用不当都会使接种箱过于潮湿，比如让培养基或菌料等撒落箱内而没有及时清理，或者由于接种箱内外温差较大，引起箱内而没有及时清理，或者由于接种内外温差较大，引起箱内热空气遇冷凝结成水珠等。接种箱受潮后，如果没有及时通风排湿，这样在接种箱闲置不使用的时候，就很容易滋生霉菌。 针对上述引起接种箱污染的原因，要防止污染，在实际工作中，1.是要在接种箱使用时，尽量降低接种箱内的湿度。要避免培养基、菌料或酒精棉球等直接落入箱内，如不谨掉入箱则应尽快清理；要避免接种箱内外出现温差而引起受潮，具体应做到：（1）料袋或料瓶灭菌后应充分冷却再进入接种箱内进行消毒处理，以免引起接种箱内温度过高；（2）消毒剂的用量要严格按照规定使用。目前常见的消毒剂如气雾消毒剂、福尔马林等，在使用时都是利用这些物质发生氧化反应来产生烟雾或蒸汽，从而达到对空气消毒的目的。我们知道，氧化反应往往会产生大量的热量，因此，在保证消毒效果的前提下，消毒剂的使用不宜过量；（3）
灭菌器操作流程 Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT
威高灭菌器的操作规程 1、简介 主要应用于对包装手术器械、齿科手机、敷料包裹、玻璃器皿等物品的灭菌，是医院眼科、口腔科、手术室、化验室及生物医学研究单位等科室、部门的理想灭菌设备。目前国内小型快速灭菌器产品质量以及先进性上普遍较低，该款灭菌器是进口产品的替代品、同时也是国内产品的升级换代产品。其灭菌方式以及快速节能结构都已获得国家多项专利。 2、对电源和使用环境的要求 （1）工作环境温度：0-35℃； （2）相对湿度：20%-85%； （3）电源：三相五线制380v三线（带单独接地线）总电功率 6400W。 3、使用前准备 （1）检查水桶水位，循环水箱水位，加水至水箱1/3处，注意不要淹没排气口。 （2）在通电情况下，当液晶屏上显示锁开时，方可进行开关门操作。 4、操作程序 4、放入待灭菌物品，关门，按下开始键，设备开始自动运行。 5、有注水、蒸发器升温、脉动、升温、灭菌、排气（水）、干燥等流程。 6、流程结束，蜂鸣器报警，同时液晶屏上提示开门时，可开门取出灭菌物品。 7、灭菌结束关闭电源，门应该半开状态，切勿撞到门电子锁。 二注意事项
5、使用后的工作 （1）关闭泵的电源； （2）整理所有电缆及配件。 6、常见故障分析与排除 1、设备通电后液晶屏上显示锁关，无法开门 当压力表压力在0KPa附近时，才会显示锁开。可进入参数设置程序，查看当地气压，回空上限（10KPa），回空下限（-10KPa）的设置值是否正确。 2、安全阀总是频繁开启 安全阀的开启压力为260KPa，安全阀是连接在蒸发器上的，所以应当在程序运行中观察蒸发器的压力，看看蒸发器显示的压力是否过高，超过了260KPa。可通过进入参数设置程序，适当降低高压通道的值（例如降低5KPa）来降低程序运行时的蒸发器压力。 3、蒸发器缺水报警 用于灭菌的敷料包裹过多，吸收了大量蒸汽，可适当减少包裹数量。 7、维护保养须知： 1、设备应当水平放置或前高后低放置，否则灭菌结束后仓内可能会有存水 出现。 2、灭菌用水务必为纯净水或蒸馏水。 3、器械和织物等非液体类灭菌物品的装载量应不超过内室容积的80%，敷 料包和器械包间应保持10mm的间隙，否则将会引起不充分的灭菌与干燥。 4、灭菌物品不能触及灭菌仓四壁，否则将影响灭菌效果及干燥效果。 5、确保灭菌仓内清洁
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
食用菌生产应选择适宜本地生长的优质、高产、高抗的优良菌株，严禁使用有杂质菌污染和虫害迹象以及退化、老化的劣质菌种。严格接种程序，确保接种成功率。接种室要求干净、干燥、密闭、远离污染源。灭好的菌袋或菌瓶进入接种室内。接种室内事先应经过消毒。接种工具、接种人员的双手要用2%过氧化氢银离子或75％酒精消毒。接种要迅速准确，接种量不宜太小。 在食用菌生产中，一旦杂菌污染将直接造成培植失败，所以严格控制各个生产环节的微生物。虽然消毒工作十分重要，但大多数的食用菌生产者并不十分清楚消毒灭菌的科学原理和各种消毒方式的优缺点，所以无法制订行之有效的消毒制度，导致日常消毒工作比较随意，消毒效果不理想。 食用菌生产消毒需要先了解各个环节的消毒要求和消毒方式的优势，然后选择最合适的方案。 一、组培实验室 食用菌培养实验室和接种间是最关键环节，无菌接种工作室和无菌超净工作台是必需的，它可以很大程度的降低组培操作和无菌培养过程中的污染几率。实验室和接种间每1-2周进行一次杀孢子工作，均匀喷洒杀孢子剂杀灭空间内的霉菌等杂菌，控制整理菌落水平。 臭氧和紫外线是比较常见的微生物控制方式，是日常控制微生物的有效方式，但需要注意这两种方式主要是控制，其对孢子的杀灭效率有效，应每1-2周采用专用杀孢子剂处理一次。 关于甲醛熏蒸。甲醛熏蒸是常用的空间消毒方式，但甲醛属于剧毒，对人体有强致癌效应，应谨慎使用。生态灭菌方法为3%过氧化氢银离子溶液，均匀喷洒，10ml/m3。可以达到彻底杀孢子剂的效果，过氧化氢银离子无色无味，生态型孢子剂，对人体和植物没有任何危害。 二、操作台与器具灭菌 无菌操作台、接种机、接种枪等器具需要严格消毒灭菌。目前常用的是75%酒精，浸泡或擦拭方式消毒。酒精的具有较好的杀菌效力且没有残留，是目前最常用的消毒方式，但酒精只有在75%浓度下才具有较好的消毒效果，酒精易挥发，浓度下降后杀菌效力急剧降低，所以酒精的实际使用效果不太理想，存储和成本也较高。 与75%酒精对比，使用2%过氧化氢银离子溶液的杀菌效力更高，对真菌、霉菌、细菌等杂菌均具有高效杀灭作用。过氧化氢银离子持久稳定，成分下降对杀菌效力几乎没影响，也是生态无残留的，可以完全代替酒精。 过氧化氢银离子可以通过浸泡、喷雾、擦拭等多种方法消毒，在杀菌效力、存储和使用成本上比酒精更具优势。 三、预冷车间（冷却室）消毒 灭菌后的料瓶或料袋应采用高压灭菌，然后进入冷却室内冷却。料袋在冷却过程
食用菌栽培主要配方 木腐菌木耳配方： 1．木屑、麸皮、米糠培养基： 木屑80%、麸糠17%、豆粉2%、石膏0.5%、白灰0.5%。 2．木屑、玉米芯培养基： 木屑58%、玉米芯30%、麸皮10%、豆粉1%、石膏0.5%、白灰0.5%。3．木屑、豆秸粉培养基： 木屑58%、豆秸粉30%、麸皮10%、豆粉1%、石膏0.5%、白灰0.5%。4．木屑52%、废弃袋30%、麸皮15%、豆粉2%、石膏0.5%、白灰0.5%。5．豆秸63%、木屑20%、麸皮15%、石膏1%、白灰1%。 6．木屑74.5%、麸10%、稻糠10%、豆粉2%、玉米面2%、石膏1%、白灰0.5%。 草腐菌的配方： 适用于鸡腿菇、双孢菇、姬松茸、趟子蘑、离褶伞。 1、原种配方： ①玉米粒80%（煮至有20%破口）、木屑10%、米糠8%、糠1%、石膏1%。 ②麦粒（加水浸12-24小时）加1%石灰煮沸30分钟稍凉后装瓶。 ③玉米芯78%、米糠20%、糖1%、石膏1% 2、栽培料（发酵料配方） ①玉米秸30%、稻草40%、麸皮20%、尿素3%、磷肥2%、石膏5%。
②木耳废弃菌糠50%、玉米芯、玉米秸30%、马粪13%、尿素1.5%、磷肥1.5%、石灰4%。 ③蘑菇废料68%、玉米芯30%、石膏粉1%、石灰1%。 ④稻草40%、干牛粪50%、豆秸6%、尿素1%、石膏1%、石灰1%、过磷酸钙1%。 药用菌培养基配方： 1、原种培养基配方： ①木屑培养基：杂木屑78%、米糠20%、石膏粉1%、蔗糖1%、水分140%～160%。 ②麦粒：小麦或燕麦粒93%、木屑5%、碳酸钙或石膏粉2%。 2、栽培种： ①木屑74%、玉米面24%、石膏1%、蔗糖1%、含水60%～65%。 ②木屑78%、木屑或麸皮15%、玉米面5%、石膏1%、蔗糖1%。 ③木屑80%、麸皮16%、石膏3%、蔗糖1%。 ④段木：阔叶木段15-20cm长、填充料按③配制、底部装1层培养基、装入捆好木段、再填充培养料、灭菌常压20小时、高压8小时。3、液体培养（蜜环菌、榛蘑用） 枝段寸长、水泡后装袋、灌满营养液后灭菌（营养液：一百斤水中加入蔗糖3斤、石膏1斤、玉米面3斤）。
伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 ③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。 配置方法 蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml 0.5 %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯培养基 2.一种用于分离鉴定细菌的培养基，大肠杆菌在其上呈红色或粉红色，有的菌落只是中间呈现红色。 配置方法 蛋白胨 17g 脙胨3g 猪胆盐(或牛、羊胆盐) 5g 氯化钠 5g 琼脂 17g 蒸馏水1000mL 乳糖10g 0.01%结晶紫水溶液 10mL 0.5%中性红水溶液 5mL 麦康凯-制法 1 将蛋白胨、胨、胆盐和氯化钠溶解于400mL蒸馏水中，校正pH7.2。将琼脂加入600mL 加热溶解。将两液合并，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。 2 临用时加热溶化琼脂，趁热加入乳糖，冷至50～55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌。 吲哚试验 吲哚（indol）试验有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色，是为吲哚试验阳性。 LB培养基 配方 胰化蛋白胨 1g 酵母提取物 0.5g NaCl 1g 琼脂 1.5-2g 水100ml LB培养基-LB培养基条件 LB培养基-固态培养基 LB固体培养基1L和液体一样，加15g琼脂粉，一定要在温度降下之前加好抗生素，并且倒好板。 LB固体培养基倒板 1.配制：100mlLB培养基加入1.5g琼脂粉
食用菌灭菌参数 目录 1 灭菌质量标准 (1) 2 灭菌操作规程 (1) 1 灭菌质量标准 1.1安全使用灭菌锅。 1.2 彻底杀死菌袋内所有生物体。 1.3 袋子无破损，不进空气。 1.4 灭菌后‘闻得香”“摸着软”“看到紫”达到灭菌效果。 2 灭菌操作规程 2.1 工作人员要勤剪指甲，全部戴手套，手套每天要洗净。 2.2 生产前检查压力锅或常压柜的密封性及安全性，各种阀门、仪表灵敏度。有故障要及时汇报，请专业人员修理，时刻注意安全使用灭菌锅。 2.3 装锅时，要把周转筐码整齐，不得倒塌。无周转筐时，运输车要用编织袋垫好，轻拿轻放，不得造成袋子破损；要把锅内壁全部垫上麻袋或编织袋，防止菌袋磨损，装锅时每袋要压紧，防止倒塌。装完锅要及时清点数量。 2.4 盖上锅盖时要检查密封性，高压灭菌不得漏气；常压灭菌漏气要小。
2.5 高压灭菌时，通入蒸气时速度要慢，不要太急，从零压力升到0.5公斤压力时间为1小时，然后放尽压力锅内冷空气，继续升压1小时到标准1.5公斤压力（128℃），保持3小时，中间不得降温；或在110℃保持12小时，中间不得降温。 2.6 常压灭菌时，要先打开灭菌柜排气阀，再慢慢通入蒸汽，用3—5小时使灭菌柜温度达到100℃，进行保温15小时以上，中间不得降温。 2.7 灭菌过程中一定要严格按锅炉安全操作规程和灭菌柜安全操作规程进行操作，不得有任何马虎，否则造成损失后果不堪设想；违规操作一切后果由操作者承担。灭菌时，压力和温度太高，要通过减少蒸汽进入来控制，不得随意开大放气阀；通过实践，掌握进汽和出汽的平衡点，进行保温。 2.8 灭菌时间到后，停止向灭菌锅供应蒸汽，让灭菌锅自然冷却，待压力为零，温度80℃以下时，方可慢慢打开锅盖，让蒸汽出尽，再出锅。压力锅内有压力和温度超过80℃，严禁开锅盖。 2.9 出锅时，运输灭菌后的菌袋要轻拿轻放，防止破袋，运输车要垫好，保持车内洁净，袋子外有脏物时要擦拭干净，防止二次污染。运到接种室后，要清点数量，装好一间后要填写接种卡并签名。 2.10 若用周转筐灭菌，一定要先把周转筐全部检查一遍，所有铁刺要磨平，底部垫上编织袋，不使周转筐把菌袋磨损。 2.11 每天灭菌结束，班长要及时填写工作记录表，交车间主任签字后，交生产办公室。