药品及生物制品的分析方法和方法验证指导原则
目录
1.介绍...................... (1)
2.背景..................... .. (2)
3.分析方法开发. ..................... . (3)
4.分析程序内容.............................................. ......... ..................................... .. 3
A.原则/范围 (4)
B.仪器/设备............................................. . (4)
C.操作参数.............................................. .. (4)
D.试剂/标准............................................. . (4)
E.样品制备.............................................. .. (4)
F.标准对照品溶液的制备............................................ .. (5)
G.步骤......... ....................................... (5)
H.系统适应性..... (5)
I.计算 (5)
J.数据报告 (5)
5.参考标准和教材............................................ (6)
6分析方法验证用于新药，仿制药，生物制品和DMF (6)
A.非药典分析方法............................................. (6)
B.验证特征 (7)
C.药典分析方法............................................. .. (8)
7.统计分析和模型 (8)
A.统计 (8)
B.模型 (8)
8.生命周期管理分析程序 (9)
A.重新验证 (9)
B.分析方法的可比性研究............................................ . (10)
1.另一种分析方法............................................... .. (10)
2.分析方法转移的研究 (11)
C.报告上市后变更已批准的新药，仿制药，或生物制品 (11)
9.美国FDA方法验证............................................... . (12)
10.参考文献
前言
本指导原则草案，定稿后，将代表美国食品和药物管理局（FDA）目前关于这个话题目前的想法。它不会创造或赋予或任何人的任何权利，不约束FDA或公众。您可以使用另一种方法，如果该方法符合适用的法律和法规的要求。如果你想讨论一个替代方法，请与FDA工作人员负责实施本指南。如果你不能确定适当的FDA工作人员，请拨打本指南的标题页上所列的电话号码。
介绍：
该修订指南草案将取代行业2000年的指导分析方法和方法验证草案，并最终确定后，也将取代1987年美国FDA行业指南《提交的样品和分析数据的方法验证》。该草案提供了有关申请人如何提交分析程序和方法验证数据来支持说明原料药和制剂具有强度、质量、纯度和效用的文件。它会帮你收集信息和现有数据来支持你的分析方法。该指导原则适用于原料药和制剂产品涵盖新药申请（NDA），简化新药申请（仿制药），生物制品许可申请（BLA），以及这些申请的补充申请。在这个修订草案指导原则也适用于原料药和制剂产品涵盖二类药物主文件（DMFs）。
该修订指南草案补充了国际协调会议（ICH）Q2（R1）指导原则《分析程序的验证：开发和验证的分析方法Q2（R1）和方法的文本。
该修订指南草案不涉及研究性新药申请（IND）方法验证，但研究者在准备研究性新药申请时应考虑该指导原则中的建议。研究性新药申请需要在研究的每个阶段有足够的信息，以确保正确鉴别性，质量，纯度，强度和/或效力。对分析方法和方法验证的信息量将随研究中不同阶段而变化。有关分析程序和需提交的阶段方法验证资料方面的指导意见的研究中，申请者可以参考FDA的指导原则《Ⅰ期研究药物的IND的内容和格式，包括性状、疗效和生物技术衍生产品》。一般考虑在第三阶段的研究进行之前，分析方法和分析方法验证（例如，生物测定）是在FDA行业指导原则《人类药物和生物制剂、化学、制造、控制信息会议》。
该修订指南草案不涉及生物和免疫化学检测的表征和许多原料药和制剂产品质量控制的具体方法验证的建议。例如，一些基于动物模型的生物测定，并且免疫原性评估或其它免疫测定具有独特的特征，应开发和验证过程中予以考虑。
此外，需要对现有的分析方法再验证时可能需要在制造过程中产品的生命周期的变化予以考虑。有关适当的验证方法的分析程序或者提交本指南中未提及的信息的问题，您应该向用FDA产品质量评审人员咨询。
如果您选择了与本指导草案中不同的方式，我们建议您在提交申请前与相应的FDA产品质量评审人员讨论。
FDA的指南文件，包括本指导原则，不具有法律强制性的责任。相反，指南描述的是FDA对某个主题目前的想法，并应仅作为建议，除非有明确的法律或法规要求的引用。使用“应该”这个词在FDA指南意味着什么建议或推荐，但不是必需的。
II. BACKGROUND背景
每个NDA和ANDA都必需包括必要的分析程序，以确保原料药和制剂的鉴别，强度，质量，纯度和效果.每个BLA必须包括完整的制造方法描述，包括能够确保产品身份、质量、安全、纯度和有效的分析程序。数据必须能够用于建立满足精度和可靠性标准的分析方法并适合与拟定目的.对于BLAs及补充补充，分析方法和方法验证是许可证申请或补充申请必须提交的一部分，并通过美国FDA 质量评审小组进行评估。
分析方法和验证资料应当按照ICH M2 eCTD的相应部分提交。
当一个分析程序作为NDA，ANDA或者BLA的一部分被批准时，它就变成了FDA获批药品的获批分析程序。这个分析程序可能源于FDA认可来源（如源于USP/NF的药店程序）或者是一个提交的已被认定通过美国FDA可以接受的经验证的程序。应用一个分析方法到不同的产品，需要考虑对新产品进行适当的验证研究。
III. ANALYTICAL METHODS DEVELOPMENT分析方法开发
分析方法的开发是为了一个定义药物原料药与制剂产品特性的检测标准。新方法开发初期，应当基于分析项目与方法适用范围选择检测仪器和检测方法。该方法可在开发过程中进行专属性，线性，检测限（LOD）和定量限（LOQ），范围，精度和准确度的评估。
在方法开发过程的早期阶段，方法的稳定性应进行评估，因为这个特性可以帮助您确定哪一种方法您将提交审批。在发展的早期阶段分析程序最初开发基于基本方法和以往的经验机理认识的结合。早期程序的实验数据可用于指导进一步发展。你应该在方法验证部分中提交支持该方法的有效性的发展数据。
要充分认识在变化在分析过程方法参数的影响，你应该采取的方法的稳定性研究（例如，实验方法参数设计）的系统方法。你应该从风险评估开始，并跟进多因素实验。这些方法能让你了解到方法性能参数因子的影响。检测方法的性能评价贯穿了样品生产的整个过程。在研究专属性过程中获得的知识可以帮助你评估方法的性能。
IV. CONTENT OF ANALYTICAL PROCEDURES分析程序内容
你应该说明分析过程中足够的细节，让主管分析师重现的必要条件，并提出验收标准范围内得到结果。您还应该说明需要特别注意的分析程序问题。如果所参考的分析方法未经过修改超出了已发布方法的允许，需引用FDA认可的来源（如：USP / NF，分析师协会（AOAC）国际）。你应提供详细的从其他出版来源的程序。以下是重要的信息，你应该包括一个分析程序的列表：
A.原则/范围
分析测试/技术（分离，检测等）的基本原理的说明;目标分析物和样品（S）型（如，药物，药品，生物体液等杂质或化合物）。
B.仪器/设备
所有需要的合格的设备和部件（例如，仪器类型，检测器，柱子类型，尺寸，过滤器类型等）。
C.操作参数
合格的最佳设置和范围（可予以调整）对分析至关重要（比如，流速，组件的温度，运行时间，顶空进样器、检测器的设置）。如果适用实验配置和集成参数的绘图也可以使用。
D.试剂/标准
以下应列出：
?化学的等级（例如，USP / NF，美国化学学会，高效液相色谱级，或气相色谱级）。
?来源（例如，参照美国药典标准或合格的内部参考材料）。
?状态（例如，干燥，未干燥等）及浓度。
?标准纯度（纯度校正因子）。
?存储控制。
?安全使用说明书（按目前的安全数据）。
?验证或可用的保质期。
生物试剂，如单克隆抗体，多克隆抗体，或细胞，资格审查程序中队新的批次有一定的资格限制。
E.样品制备
样品制备过程（例如，萃取法，稀释或浓缩，混合超声脱盐过程，振摇或超声处理的时间等）单方和复方检测时的溶解浓度（如，微克/毫升或毫克/毫升），以及溶液储存的稳定性信息。
F.标准对照品溶液的制备
所有标准对照品溶液的配制方法和储存条件，包括校准标准，内部标准，系统适用性标准等。
G.程序
一步一步的描述分析方法（例如，平衡时间，空白对照，安慰剂，样本，控制，灵敏度溶液（杂质的方法）和样品分析的系统适用性），以及工作范围的调整。
H.系统适用性
确证试验（次）的程序和参数，以确保系统（分析设备，电子及操作）将作为一个系统在使用的时候正常工作。适用于标准和控制，如峰拖尾，精密度和分离度。对于色谱系统的系统适用性，是指在色谱方法的验证和USP通则<621>色谱评审指导。
I.计算
用于基于标签要求和测试（例如，检测，指定和非指定杂质和相对影响因子）的积分方法和有代表性的计算公式进行数据分析（标准品，质控，样品）。这包括用于数据分析的数学转换或公式的描述，以及使用一个科学的校正因子。
J.数据报告
一个演示数字数据是与仪器的功能和验收标准是一致的。该方法应说明什么格式来与所需显著数字的具体数量报告结果（例如，百分比标签要求，重量/体重，重量/体积等）。在美国测试和材料协会（ASTM）E29描述了使用显著位数的测试数据，以确定是否符合规范的标准做法。对于色谱方法，你应该包括保留时间（RT）识别与参考标准比较的基础上，相对保留时间（RRTS）（已知和未知杂质）可接受的范围和样本结果报告标准。
V. 参考标准和教材
一级和二级参考标准和材料的定义，并讨论以下ICH指导原则：Q6A规格：新原料药和新制剂的测试程序和验收标准：化学原料（ICH Q6A ），Q6B规格：生物技术/生物制品的测试程序和验收标准，活性药物成分和Q7优良制造规范指南。对于所有的标准，应该确保适用性。原料药的标准建立中验证专属性的鉴别试验尤为关键，要严格按照存储，使用条件的参考标准操作，以避免增加杂质导致分析处理不准确。对于生物制品，应当包括支持您打算在以后的年度报告参考的参考标准资格和材料的信息。支持参考标准和材料包括鉴定试验方案，报告和分析证书（如果可以，应包括协议和相关的已知杂质的信息）。
参考标准通常可以从美国专利获得，也可以通过欧洲药典，日本药典，世界卫生组织，或标准和技术研究所提供。我们可以从美国药品与生物制品中心找到关于生物制品的参考标准。对于在美国销售的生物制品，在上市之前必须参考美国药品与生物制品中心的标准。其他来源的参考资料，必须以ICH Q6A常规与非
常规测试结果为参考。你应该考虑正交方法，进一步的测试可以包括材料的属性来确定其适应性（例如，更广泛的结构同一性和纯度和杂质的正交技术，生物活性）。
对于生物参考标准和材料，我们建议您遵循两个层次的方法检验的新参考标准，可以帮助防止不稳定的质量属性，并提供长期的链接，临床试验材料。一个两层的方法涉及用一个基本参考标准与每个新的工作参照标准进行比较，因此它是临床试验材料和当前的制造工艺的链接。
VI.分析方法验证用于新药，仿制药，生物制品，和药物主文件
A.非药典分析方法
分析方法验证是论证某一分析方法适用于其预期目的的过程。分析程序的方法和目标应明确界定，并启动明确的验证研究。这种方法是以科学为基础的方法开发和优化研究中获得。验证数据产生于被证实的草案中对生产实践所采取的特征性试验方法、合理的验收标准、规范的仪器操作。该关于药物原料、制剂分析及复方制剂分析的协议应当根据各自的特性执行并完善。ICH Q2（R1）被认为是对分析方法验证的特性建议和定义主参考。美国食品药物管理局审稿指南：色谱方法的验证是可用的。
B.验证特性
虽然不是所有的验证特性适用于所有类型的测试，验证的典型特征是：?专属性
?线性
?准确度
?精确度（重复性，中间精密度和重现）
?范围
?定量限
?检测限
稳定性指示分析即为一个定量分析方法的程序，可以检测出在储存过程中的药物物质和药物产品的质量属性（S）的变化。表现出稳定性指示测定的特异性，应进行干扰实验。包括使用的样品加入标靶分析物和所有已知的干扰杂质，实验室试制样本，和实际产品样本（由最终制造过程生产的），或者是加速试验样品。
作为新药、仿制药、生物制品的申请者，则必须：（1）提交用于建立该分析方法的符合精度和可靠性的适当标准的检测数据。（2）通知FDA的在申请成立以后的每个修改，包括对分析程序、控制变化的应用程序及方法等。所提交的数据应包括从该方法的开发到方法验证研究的稳定性数据。
C.药典分析方法
某一分析方法的适用性（如USP / NF，AOAC国际方法学图书，或其他认可的参考标准）应在实际使用条件下进行验证。药典一般章节会比较复杂，为了达到预期使用和验证目的，应当将多个步骤、地址或多种技术合理化。证明USP / NF 分析方法适用于该药品或原料药的信息应包括在提交的验证协议里。
验证方法应该包括，但不限于：药典方法中以预定的验收标准进行验证，并且该方法的详细信息（例如，多个试剂的适用性，设备，组件，色谱条件，色谱柱，检测器类型，检测器信号响应，系统适应性，样品制备和稳定性）。验证方法应包括验证范围和规定了验证特性的测试（例如，特异性，检测限，定量限，精密度，准确度等）。因为药物在不同的合成路线均有严格的设置，药品制造过程中分析方法有色谱条件改变的情况。如果按照法无偏差，稳定性研究不需要被
药典收录。
VII.统计分析和模型
A.统计
预定的验收标准验证特征可用验证数据的统计分析进行评估。在数据分析中使用的所有的统计方法和参数应根据合理的原则和恰当的预期评估。线性回归分析R（相关系数）呈报的统计数据中应该提供R平方（决定系数），最小二乘法，方差分析，置信区间等。有关对比用的统计技术的信息，以及有关分析数据，相关文献或文本的解释应进行讨论。
B.模型
一些分析方法可能使用化学计量学和/或多元模式。在开发这些模型时，应该包括在统计上足够数量的模型开发样本和可比样本进行模型范围的验证。合适的软件应被用于数据分析。模型的参数应该随之改变来测试模型的稳定性。VIII.分析程序生命周期管理
一旦分析过程（包括药典方法）被成功地验证和实施，该过程将在产品的整个生命周期遵循。方法的性能趋势分析应定期进行，以评估是否需要进行优化分析程序或对分析过程的整体或部分进行重新验证。如果某一分析方法在分析方法中规定的使用条件下反复调整，才能满足建立了系统适用性的要求，则该分析方法应重新评估、验证或修订。
在一个产品的生命周期，新的信息（例如，更好地了解产品或新杂质）可保证一个新的或其他分析方法的开发和验证。保证产品质量时，新的技术应给与更多的鼓励和信心。申请人应定期评估对产品的分析方法是否恰当，并考虑新的或替代方法。
在分析生命周期的变化时，应当对样品进行适当数量的存档，以便进行比较研究。留样数量应根据科学原理和风险评估确定。对于那些生产过程中敏感且易产生复杂变化的产品，留样样品是作对比的重要工具。在比较研究中使用的留样样品应包括具有代表性的临床试验材料样品和销售产品。
如果一个基于风险的评估或其他程序带来的新的方法或者程序在变化的分析过程中被转移到一个新的测试网站或更换；应考虑再验证，一个新的验证工作，分析方法比较研究，或两者的组合。在某些情况下，改变药物物质或药物产品的生产过程中也可能有必要对分析程序进行重新验证。这些另外的研究将在下面讨论。
A.重新验证
在验证部分（第六部分）中描述的原则适用于重新验证。当分析方法发生变化（例如，在配方或制造过程中设备或试剂或的改变），应考虑所有的分析程序的全部或部分的再验证。在药物制造过程中制造工艺的变化，或引入新的药物产品制剂，可能会影响方法的性能的改变（例如，合成路线，发酵）。分析方法应进行重新验证。
重新验证可以确保该分析方法保持其重要的性能特性（例如，专属性，精确度，准确度，等等），且重新验证的程度取决于变化的性质。
B.分析方法的可比性研究
当你提交一个FDA批准的分析方法与一个可替代的分析方法，或者当一个分析方法从一个实验室转移到另一个实验室的时候，通常需要进行分析方法比较研究。这些方案在下文讨论。
1．可供选择的分析方法
另一种分析方法是用于取代FDA批准的分析程序的分析方法。对于NDA或ANDA，您应该在申请时提交所有的被推荐的可替代的分析程序及对程序的描述。对于NDA或ANDA申请批准后的程序，或者对于BLA批准的程序，但是不包含FDA的规则，可选择分析程序的补充，修订、或删除必须在记录下一个年度报告中，而该可选择程序与批准申请中提交的分析程序相比可以对检测物质提供相同的甚至于更高的质量（鉴别、强度、质量、纯度、和效力）保证。在BLAs中，
补充或者修订的程序需要作为补充文件提交。FDA建议用适当的评审组讨论，以确定相应的报告类别。
对于生物制品，很少有分析方法可以被收录进FDA法规。发生这种情况时，替代分析程序按照21 CFR610.9（a）提交。该文件指出申请人应该提出证据“...证明该修改将保证生物产品的安全性，纯度，效力和有效性等于或优于该生物制品的一般标准或补充标准中的方法或程序可以提供的保证。程序的修订需要经过申请评审过程或者批准后补充后由FDA批准。
你应该明确可选择分析程序的用法（例如：释放、稳定性测试），并为它的内容、验证数据、与FDA批准的分析程序的比较数据提供一个认可理由。另外需要做一个比较研究来证明至少达到以下效果：
?该新方法加上任何额外的控制措施对于等于或优于原始方法。
?新的分析方法与原始程序相比更不容易产生基质效应。
如果新的程序中发现了新的方法或产品的相关的变体或任何新的杂质，则需要检测历史归档批次的样品，以证明变体或杂质的检出是由于新方法的敏感性和选择性增加的缘故而不是因为改变处理产生的杂质。
如果该过程具有稳定指示属性：
?适当的样品具有比较新方法和原始方法检测有关物质和降解产物的能力。
?进行比较的分析批次的数量应该具有统计学相关性和合理的预先建立的置信区间。
?等效，非劣效性或优越性的研究应该用适当的统计方法进行，以表明新的或修订的方法性能与原来的方法相当或比原来的方法更好。
?进行比较的产品测试的统计分析应加以鉴别。
?比较结果的偏置应该进行讨论并附带适当的说明。
2．分析方法转移的研究
分析方法转移通常是在一个内部传输协议下进行，内部传输协议列出详细的参数用于检验将应用到结果的预定验收标准。转移研究通常涉及两个或多个实验室或实验点（原始实验室和接收实验室）执行预先批准转移协议。始发和接收实验室需要使用大量的有代表性的物质（例如，同一批次的原料药或制剂产品）。比较研究评估准确度和精密度，尤其是涉及到评估实验室间的变异性。转移分析过程也是一个稳定指示方法，强制降解样品或含相关产品相关的杂质的样品应在两个站点进行分析。USP通则<1224>《分析程序转移》为该主题提供了相关指导。
C.NDA，ANDA，BLA批准上市后变更报告
上市后改变分析程序需报告FDA 并符合21 CFR314.70和21 CFR601.12.
FDA行业指南《已批准NDA或ANDA的变更》和《已批准NDA或ANDA的变更；规格- 使用执法自由裁量权的药典变化》针对NDA或ANDA不同种类的上市后
变更的相应报告类别提供了附加信息。由CDER和CBER监管的BLAs上市后变更的相似信息来源于FDA指南《特定生物技术及制定合成生物制品的已批准申请的变更》。
IX．FDA的方法验证
部分NDA或ANDA的审批流程，包括FDA实验室评估，以确定该分析方法是否适用于质量控制和监管目的。如果进行实验室评估，FDA实验室需要你根据FDA实验室提供的清单提供详细的样品和相应的试剂。这些可能包括产品样本，标准品，关键试剂，材料安全数据表和耗材。实验室结果和意见将在FDA实验室被转发到产品的质量评审员。
对于某些生物制品，许可申请的产品中代表性样品及使用同批次产品进行测试的结果总结应与生物许可申请同时提交。FDA实验室将验证的方法的性能和您提交的结果。在生物许可申请预审会或者提交生物许可后，FDA实验室会需要你提供标准品、对照、试剂、材料安全数据表和耗材。
X．参考文献
指导原则编号： 【H】G P H 5-1 化学药物质量控制分析方法验证 技术指导原则 二○○五年三月
目 录 一、概述 (1) 二、方法验证的一般原则 (2) 三、方法验证涉及到的三个主要方面 (2) （一）需要验证的检测项目 (2) （二）分析方法 (3) （三）验证内容 (3) 四、方法验证的具体内容 (3) （一）专属性 (3) 1、鉴别反应 (4) 2、杂质检查 (4) 3、含量测定 (4) （二）线性 (5) （三）范围 (5) 1、含量测定 (6) 2、制剂含量均匀度 (6) 3、溶出度或释放度 (6) 4、杂质 (6) （四）准确度 (6) 1、含量测定 (7) 2、杂质定量试验 (7) （五）精密度 (7) 1、重复性 (8) 2、中间精密度 (8) 3、重现性 (8)
（六）检测限 (8) 1、直观法 (8) 2、信噪比法 (9) （七）定量限 (9) 1、直观法 (9) 2、信噪比法 (9) （八）耐用性 (10) （九）系统适用性试验 (10) 五、方法再验证 (11) 六、方法验证的评价 (12) （一）有关方法验证评价的一般考虑 (12) （二）方法验证的整体性和系统性 (12) 七、参考文献 (13) 八、著者 (13)
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 一、概述 保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制药品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察药品质量。一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法进行验证。 方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。 方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。 本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何科学合理地进行论证方案的设计。 本指导原则主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉及的三个主要方
药品微生物检验替代方法验证指导原则 本指导原则是为所采用的试验方法能否替代药典规定的方法用于药品微生物的检验提供指导。 随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：（1)基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；(2)直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞技术法、流式细胞计数法等；（3)基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。这些方法与传统检查方法比较，或简便快速，或具有实时或近实时监控的潜力，使生产早期采取纠正措施及监控和指导优良生产成为可能，同时新技术的使用也促进了生产成本降低及检验水平的提高。 在控制药品微生物质量中，微生物实验室出于各种原因如成本、生产量、快速简便及提高药品质量等需要而采用非药典规定的检验方法（即替代方法）时，应进行替代方法的验证，确认其应用效果优于或等同于药典的方法。 微生物检验的类型及验证参数 药品微生物检验方法主要分两种类型：定性试验和定量试验。定性试验就是测定样品中是否存在活的微生物，如无菌检查及控制菌检査。定量试验就是测定样品中存在的微生物数量，如菌落计数试验。 由于生物试验的特殊性，如微生物检验方法中的抽样误差、稀释误差、操作误差、培养误差和计数误差都会对检验结果造成影响，因此，药品质量标准分析方法验证指导原则（附录XIX A)不完全适宜于微生物替代方法的验证。药品微生物检验替代方法的验证参数见表1。 表1 不同微生物检验类型验证参数 注： 尽管替代方法的验证参数与药品质量标准分析方法验证参数有相似之处，但是其具体的内容是依据微生物检验特点而设立的。替代方法验证的实验结果需进行统计分析，当替代方法属于定性检验时，一般采用非参数的统计技术；当替代方法属于定量检验时，需要采用参数统计技术。 进行微生物替代方法的验证时，若替代方法只是针对药典方法中的某一环节进行技术修改，此时，需要验证的对象仅是该项替代技术而不是整个检验方法。如无菌试验若改为使用含培养基的过滤器，然后通过适宜的技术确认活的微生物存在，那么，验证时仅需验证所用的微生物回收系统而不是整个无菌试验方法。 替代方法验证的一般要求 在开展替代方法对样品检验的适用性验证前，有必要对替代方法有一个全面的了解。首先，所选用的替代方法应具备必要的方法适用性证据，表明在不含样品的情况下，替代方法
9012 生物样品定量分析方法验证指导原则
1. 范围
准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和 制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动 学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此，必须完整地验证和 记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。
本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实 际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。
生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。 应该在相应的生物样品分析中遵守 GLP 原则或 GCP 原则。
2. 生物分析方法验证
2.1 分析方法的完整验证
分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析 物浓度的可靠性。此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每 个物种和每种基质进行完整验证。当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质 替代，但要说明理由。
一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范 围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液 中储存和处理全过程中的稳定性。
有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一 个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和 分析的原则适用于所有涉及的分析物。
对照标准物质 在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质 中。此外，色谱方法通常使用适当的内标。 应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用 性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。 对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质 不产生干扰。 当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内 标。它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免结 果的偏差。
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附件5 药物非临床药代动力学研究技术指导原则 一、概述 非临床药代动力学研究是通过体外和动物体内的研究方法，揭示药物在体内的动态变化规律，获得药物的基本药代动力学参数，阐明药物的吸收、分布、代谢和排泄（Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion, 简称ADME）的过程和特征。 非临床药代动力学研究在新药研究开发的评价过程中起着重要 作用。在药物制剂学研究中，非临床药代动力学研究结果是评价药物制剂特性和质量的重要依据。在药效学和毒理学评价中，药代动力学特征可进一步深入阐明药物作用机制，同时也是药效和毒理研究动物选择的依据之一；药物或活性代谢产物浓度数据及其相关药代动力学参数是产生、决定或阐明药效或毒性大小的基础，可提供药物对靶器官效应（药效或毒性）的依据。在临床试验中，非临床药代动力学研究结果能为设计和优化临床试验给药方案提供有关参考信息。 本指导原则是供中药、天然药物和化学药物新药的非临床药代动力学研究的参考。研究者可根据不同药物的特点，参考本指导原则，科学合理地进行试验设计，并对试验结果进行综合评价。 本指导原则的主要内容包括进行药物非临床药代动力学研究的 基本原则、试验设计的总体要求、生物样品的测定方法、研究项目（血
药浓度-时间曲线、吸收、分布、排泄、血浆蛋白结合、生物转化、对药物代谢酶活性及转运体的影响）、数据处理与分析、结果与评价等，并对研究中其他一些需要关注的问题进行了分析。附录中描述了生物样品分析和放射性同位素标记技术的相关方法和要求，供研究者参考。 二、基本原则 进行非临床药代动力学研究，要遵循以下基本原则： （一）试验目的明确； （二）试验设计合理； （三）分析方法可靠； （四）所得参数全面，满足评价要求； （五）对试验结果进行综合分析与评价； （六）具体问题具体分析。 三、试验设计 （一）总体要求 1. 受试物 中药、天然药物：受试物应采用能充分代表临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件、有效期及配制方法等，并提供质量检验报告。由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。当给药时间较
I. INTRODUCTION This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications. 本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适用于NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。 The principles also apply to drug substances and drug products covered in Type II drug master files (DMFs). If a different approach is chosen, the applicant is encouraged to discuss the matter in advance with the center with product jurisdiction to prevent the expenditure of resources on preparing a submission that may later be determined to be unacceptable. 这些原则同样适用于二类DMF所涉及的原料药和制剂。如果使用了其它方法，鼓励申请者事先和FDA药品评审中心的官员进行讨论，以免出现这种情况，那就是花了人力物力所准备起来的递交资料后来发现是不可用的。 The principles of methods validation described in this guidance apply to all types of analytical procedures. However, the specific recommendations in this guidance may not be applicable to certain unique analytical procedures for products such as biological, biotechnological, botanical, or radiopharmaceutical drugs. 本指南中所述的分析方法验证的原则适用于各种类型的分析方法。但是，本指南中特定的建议可能不适用于有些产品所用的特殊分析方法，如生物药，生物技术药，植物药或放射性药物等。 For example, many bioassays are based on animal challenge models, 39 immunogenicity assessments, or other immunoassays that have unique features that should be considered when submitting analytical procedure and methods validation information. 比如说，许多生物分析是建立在动物挑战模式，免疫原性评估或其它有着独特特性的免疫分析基础上的，在递交分析方法和分析方法验证资料时需考虑这些独特的性质。Furthermore, specific recommendations for biological and immunochemical tests that may be necessary for characterization and quality control of many drug substances and drug products are beyond the scope of this guidance document. 而且，许多原料药和制剂的界定和质量控制所需的生物和免疫化学检测并不在本指南的范围之内。 Although this guidance does not specifically address the submission of analytical procedures and validation data for raw materials, intermediates, excipients, container closure components, and other materials used in the production of drug
药品及生物制品的分析方法和方法验证指导原则 目录 1.介绍...................... (1) 2.背景..................... .. (2) 3.分析方法开发. ..................... . (3) 4.分析程序内容.............................................. ......... ..................................... .. 3 A.原则/范围 (4) B.仪器/设备............................................. . (4) C.操作参数.............................................. .. (4) D.试剂/标准............................................. . (4) E.样品制备.............................................. .. (4) F.标准对照品溶液的制备............................................ .. (5) G.步骤......... ....................................... (5) H.系统适应性..... (5) I.计算 (5) J.数据报告 (5) 5.参考标准和教材............................................ (6) 6分析方法验证用于新药，仿制药，生物制品和DMF (6) A.非药典分析方法............................................. (6) B.验证特征 (7) C.药典分析方法............................................. .. (8) 7.统计分析和模型 (8) A.统计 (8) B.模型 (8) 8.生命周期管理分析程序 (9) A.重新验证 (9) B.分析方法的可比性研究............................................ . (10) 1.另一种分析方法............................................... .. (10) 2.分析方法转移的研究 (11) C.报告上市后变更已批准的新药，仿制药，或生物制品 (11) 9.美国FDA方法验证............................................... . (12) 10.参考文献
中国药典2015年版 9012生物样品定置分析方法验证 指导原则 一、范围 准确测定生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度，对于药物和制剂研发非常重要。这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定。因此，必须完整地验证和记录应用的生物分析方法，以获得可靠的结果。 本指导原则提供生物分析方法验证的要求，也涉及非临床或临床试验样品实际分析的基本要求，以及何时可以使用部分验证或交叉验证，来替代完整验证。本指导原则二和三主要针对色谱分析方法，四针对配体结合分析方法。 生物样品定量分析方法验证和试验样品分析应符合本指导原则的技术要求。应该在相应的生物样品分析中遵守 G L P原则或GC P原则。 二、生物分析方法验证 (一）分析方法的完整验证 分析方法验证的主要目的是，证明特定方法对于测定在某种生物基质中分析物浓度的可靠性。此外，方法验证应采用与试验样品相同的抗凝剂。一般应对每个新分析方法和新分析物进行完整验证。当难于获得相同的基质时，可以采用适当基质替代，但要说明理由。 一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。 有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。 对照标准物质 在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加人到空白生物基质中。此外，色谱方法通常使用适当的内标。 应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。 当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免结果的偏差。 1.选择性 该分析方法应该能够区分目标分析物和内标与基质的内源性组分或样品中其他组分。应该使用至少6个受试者的适宜的空白基质来证明选择性（动物空白基质可以不同批次混 9012生物样品定量分析方法验证指导原则 合），它们被分别分析并评价干扰。当干扰组分的响应低于分析物定量下限响应的20%,并低于内标响应的5%时，通常即可以接受0 应该考察药物代谢物、经样品预处理生成的分解产物以及可能的同服药物引起干扰的程度。在适当情况下，也应该评价代谢物在分析过程中回复转化为母体分析物的可能性。 2.残留 应该在方法建立中考察残留并使之最小。残留可能不影响准确度和精密度。应通过在注射高浓度样品或校正标样后，注射空白样品来估计残留。高浓度样品之后在空白样品中的残留应不超过定量下限的20%，并且不超过内标的5%。如果残留不可避免，应考虑特殊措施，在方法验证时检验并在试验样品分析时应用这些措施，以确保不影响准确度和精密度。这可能包括在高浓度样品后注射空白样品，然后分析下一个试验样品。 3.定量下限 定量下限是能够被可靠定量的样品中分析物的最低浓度，具有可接受的准确度和精密度。定量下限是标准曲线的最低点，应适用于预期的浓度和试验目的。 4.标准曲线 应该在指定的浓度范围内评价仪器对分析物的响应，获得标准曲线。通过加人已知浓度的分析物（和内标）到空白基质中，制备各浓度的校正标样，其基质应该与目标试验样品基质相同。方法验证中研究的每种分析物和每一分析批，都应该有一条标准曲线。 在进行分析方法验证之前，最好应该了解预期的浓度范围。标准曲线范围应该尽量覆盖预期浓度范围，由定量下限和定量上限(校正标样的最髙浓度）来决定。该范围应该足够描述分析物的药动学。 应该使用至少6个校正浓度水平，不包括空白样品（不含分析物和内标的处理过的基质样品）和零浓度样品（含内标的处理过的基质〉。每个校正标样可以被多次处理和分析。 应该使用简单且足够描述仪器对分析物浓度响应的关系式。空白和零浓度样品结果不应参与计算标准曲线参数。 应该提交标准曲线参数，测定校正标样后回算得出的浓度应一并提交。在方法验证中，至少应该评价3条标准曲线。 校正标样回算的浓度一般应该在标示值的:t l5%以内，定量下限处应该在±20%内。至少75%校正标样，含最少6个有效浓度，应满足上述标准。如果某个校正标样结果不符合这些标准，应该拒绝这一标样，不含这一标样的标准曲线应被重新评价，包括回归分析^ 最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线，但如果有稳定性数据支持，也可以使用预先配制并储存的校正标样。 5.准确度 分析方法的准确度描述该方法测得值与分析物标示浓度的接近程度，表示为：（测得值/真实值)x l00?^应采用加人已知 ? 363
201507 FDA行业指南：分析方法验证（中英文）（下） VII. STATISTICAL ANALYSIS AND MODELS 统计学分析和模型 A. Statistics 统计学 Statistical analysis of validation data can be used to evaluate validation characteristics against predetermined acceptance criteria. All statistical procedures and parameters used in the analysis of the data should be based on sound principles and appropriate for the intended evaluation. Several statistical methods are useful for assessing validation characteristics, for example, an analysis of variance (ANOVA) to assess regression analysis R (correlation coefficient) and R squared (coefficient of determination) or linear regression to measure linearity. Many statistical methods used for assessing validation characteristics rely on population normality, and it is important to determine whether or not to reject this assumption. There are many techniques, such as histograms, normality tests, and probability plots that can be used to evaluate the observed distribution. It may be appropriate to transform the data to better fit the normal distribution or apply distribution-free (nonparametric) approaches when the observed data are
抗药抗体免疫原性分析方法学验证指导原则 摘要： 几乎所有的生物制药产品都会引起一定的抗药抗体（anti-drug antibody，ADA）反应，抗药抗体反应可能会降低药物疗效或导致严重的不良反应。在人体内，抗药抗体通常不会引起明显的临床反应。但是对于某些治疗性蛋白质，抗药抗体反应能引起各种临床的不良反应，包括温和事件及严重不良事件。临床前研究表明，抗药抗体能对药物暴露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动力学等造成影响。因此治疗性蛋白质的免疫原性引起了临床医生、药企及监管机构的注意。为了评估生物药物分子的免疫原性，以及将实验结果与临床事件联系起来，在临床前研究和临床研究中，很有必要开发可靠的能够有效评估抗药抗体反应的实验方法。这里方法学验证显得尤为重要，并且方法学验证是药物上市申请必不可少的。现行的监管文件对于免疫分析方法的验证的指导相当有限，特别是缺乏有关免疫原性分析方法的验证的指导。因此，本文对抗药抗体免疫分析方法的验证提供科学的建议。在现有的关于生物分析的规范性文件的基础上加入独特的性能验证。笔者建议采用实验和统计学的方法进行免疫分析的方法学验证。这些建议被视为最佳的例子，旨在促进整个医药行业形成一个更加统一的抗体检测方法。 1．简介： 生物制药产品包括氨基酸聚合物、碳水化合物或核酸，一般通过人细胞系、哺乳动物细胞或细菌进行表达，比常规的小分子药物更大（一般大于1~3KD）。由于以上特性，生物制药产品引起免疫反应的潜力更大。生物制药的免疫原性与产品的内在因素（种属特异性表位、外源性、糖基化程度、聚合或变性程度、杂质和制剂）、外在因素（给药途径、慢性或急性给药、药代动力学及内源性当量）、患者因素（自身免疫性疾病、免疫抑制、和替代疗法）相关。 抗药抗体反应可能会导致严重的临床症状，包括过敏、自身免疫和不同的药代动力学特征（例如，药物中和、生物分布异常和药物清除率增强等均可能会使
一、准确度 准确度系指采用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（％)表示。准确度应在规定的范围内测定。 1.化学药含量测定方法的准确度 原料药采用对照品进行测定，或用本法所得结果与已知准确度的另一个方法测定的结果进行比较。制剂可在处方量空白辅料中，加入已知量被测物对照品进行测定。如不能得到制剂辅料的全部组分，可向待测制剂中加人已知量的被测物对照品进行测定，或用所建立方法的测定结果与已知准确度的另一种方法测定结果进行比较。准确度也可由所测定的精密度、线性和专属性推算出来。 2.化学药杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂处方量空白辅料中加人已知量杂质进行测定。如不能得到杂质或降解产物对照品，可用所建立方法测定的结果与另一成熟的方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。在不能测得杂质或降解产物的校正因子或不能测得对主成分的相对校正因子的情况下，可用不加校正因子的主成分自身对照法计算杂质含量。应明确表明单个杂质和杂质总量相当于主成分的重量比（％) 或面积比（％ )。 3.中药化学成分测定方法的准确度 可用对照品进行加样回收率测定，即向已知被测成分含量的供试品中再精密加人一定量的被测成分对照品，依法测定。用实测值与供试品中含有量之差，除以加入对照品量计算回收率。在加样回收试验中须注意对照品的加人量与供试品中被测成分含有量之和必须在标准曲线线性范围之内；加入对照品的量要适当，过小则引起较大的相对误差，过大则干扰成分相对减少，真实性差。 回收率：％= (C - A ) /S X 100% 式中：A为供试品所含被测成分量；B 为加入对照品量； C 为实测值。 4.校正因子的准确度 对色谱方法而言，绝对（或定量）校正因子是指单位面积的色谱峰代表的待测物质的量。待测定物质与所选定的参照物质的绝对校正因子之比，即为相对校正因子。相对校正因子计算法常应用于化学药有关物质的测定、中药材及其复方制剂中多指标成分的测定。校正因子的表示方法很多，本指导原则中的校正因
美国FDA分析方法验证指南中英文对照 美国FDA分析方法验证指南中英文对 照 I. INTRODUCTION This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用 于支持原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications. 本指南旨在帮助申请者收集资料，递交样品并资料以支持分析方法。这些建议适 用于NDA，ANDA，BLA，PLA及其它们的补充中所涉及的原料药和制剂。 The principles also apply to drug substances and drug products covered in Type II drug master files (DMFs). If a different approach is chosen, the applicant is encouraged to discuss the matter in advance with
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则【】HGPH 5-1指导原则编号: 化学药物质量控制分析方法验证 技术指导原则 二??四年十一月 目录 一、概 述 ..................................................................... ............................................ 1 二、方法验证的一般原 则 ..................................................................... ................ 2 三、方法验证涉及到的三个主要方 面 (2) ,一,需要验证的检测项 目 ..................................................................... . (2) ,二,分析方 法 ..................................................................... .. (3) ,三,验证内 容 ..................................................................... .......................... 3 四、方法验证的具体内 容 ..................................................................... . (3)
,一,专属 性 ..................................................................... (3) 1、鉴别反 应 ..................................................................... (3) 2、杂质检 查 ..................................................................... (4) 3、含量测 定 ..................................................................... (4) ,二,线 性 ..................................................................... . (5) ,三,范 围 ..................................................................... . (5) 1、含量测 定 ..................................................................... (5) 2、制剂含量均匀度...................................................................... (5)
1 II. 背景 (2) III. 分析方法的类型 (3) A. 法定分析方法 (3) B. 可选择分析方法 (3) 3 C. 稳定性指示分析 (3) IV. 对照品…………………………………………………………………………… 4 A. 对照品的类型 (4) B. 分析报告单 (4) C. 对照品的界定 (4) V. IND 中的分析方法验证 (6) VI. NDA, ANDA, BLA 和PLA 中分析方法验证的内容和格式 (6) A. 原则 (6) B. 取样 (7) C. 仪器和仪器参数 (7) D. 试剂 (7) E. 系统适应性实验 (7) F. 对照品的制备 (7) G. 样品的制备 (8) H. 分析方法 (8) L. 计算 (8) J. 结果报告 (8) VII. NDA，ANDA,BLA 和PLA 中的分析方法验证 (9) A．非法定分析方法 (9) 1．验证项目 (9) 2. 其它分析方法验证信息 (10) a. 耐用性 (11) b. 强降解实验 (11) c. 仪器输出/原始资料 (11) 3．各类检测的建议验证项目 (13) B．法定分析方法 (15) VIII. 统计分析………………………………………………………………………… 15 A. 总则 (15)
C. 统计 (16) IX. 再验证 (16) X. 分析方法验证技术包：内容和过程…………………………………………… 17 A. 分析方法验证技术包 (17) B. 样品的选择和运输 (18) C. 各方责任 (19) XI. 方法……………………………………………………………………………… 20 A. 高效液相色谱(HPLC) (20) B. 气相色谱(GC) (22) C. 分光光度法，光谱学，光谱法和相关的物理方法 (23) D. 毛细管电泳 (23) E. 旋光度 (24) F. 粒径相关的分析方法 (25) G. 溶出度 (26) H. 其它仪器分析方法 (27) 附件A：NDA，ANDA，BLA 和PLA 申请的内容 (28) 附件B：分析方法验证的问题和延误 (29) 参考文献…………………………………………………………………………………… 30 术语表……………………………………………………………………………………… 32 This guidance provides recommendations to applicants on submitting analytical procedures, validation data, and samples to support the documentation of the identity, strength, quality, purity, and potency of drug substances and drug products. 1. 绪论 本指南旨在为申请者提供建议，以帮助其提交分析方法，方法验证资料和样品用于支持 原料药和制剂的认定，剂量，质量，纯度和效力方面的文件。 This guidance is intended to assist applicants in assembling information, submitting samples, and presenting data to support analytical methodologies. The recommendations apply to drug substances and drug products covered in new drug applications (NDAs), abbreviated new drug applications (ANDAs), biologics license applications (BLAs), product license applications (PLAs), and supplements to these applications.
摘要：本文介绍了在对有关物质检查所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。 关键词：有关物质检查分析方法验证可接收标准 药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差
（RSD）。 该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以内，响应因子的相对标准差应不大于10%。 3．精密度 1）重复性 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于15%。 2）中间精密度 配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准差应不大于20%。 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，该杂质峰与其它峰应能完
指导原则编号： 【H】G P H 5 -1 化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则 （第二稿） 二OO四年三月十九日
目录 一、概述 (4) 二、方法验证的一般原则 (5) 三、方法验证涉及到的三个要素 (5) 1、需要验证的检测项目 (5) 2、分析方法 (6) 3、验证内容 (7) 四、方法验证的具体内容 (7) （一）专属性 (7) 1、鉴别反应 (7) 2、杂质检查 (7) 3、含量测定 (8) （二）线性 (8) （三）范围 (9) 1、含量测定 (9) 2、制剂含量均匀度 (9) 3、溶出度或释放度 (9) 4、杂质 (10) （四）准确度 (10) 1、含量测定 (10) 2、杂质定量试验 (10)
（五）精密度 (11) 1、重复性 (11) 2、中间精密度 (12) 3、重现性 (12) （六）检测限 (12) 1、直观法 (12) 2、信噪比法 (12) （七）定量限 (13) 1、直观法 (13) 2、信噪比法 (13) （八）耐用性 (14) （九）系统适用性试验 (14) 五、方法再验证 (15) 六、方法验证的评价 (16) 1、有关方法验证评价的一般考虑 (16) 2、方法验证的整体性和系统性 (16) 七、参考文献 (17) 八、起草说明 (18) 九、著者 (20)
质量控制分析方法验证的技术指导原则 一、概述 保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基本原则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前提。为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制产品质量，也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察产品质量。一般地，每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法进行验证。 方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制产品的内在质量。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法是否满足检测项目的要求。 方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分。只有经过验证的分析方法才能用于控制产品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。 本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何科学合理地进行论证方案的设计。