血清乳酸脱氢酶同工酶测定
（醋酸纤维素薄膜电泳法）
[原理]
先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下：
LD
乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2
NADH2+PMS NAD++PMSH2
PMSH2 +INT PMS+INTH2
[试剂]
1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。
2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠
（Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。
3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。
4．显色试剂：临用前配制下列试剂：
（1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液；
（2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml；
（3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中；
（4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。
其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。
4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
2 5． 2%醋酸：2ml 醋酸加水至100ml 。
[主要仪器]
1. 恒温水浴箱
2. 电泳仪和电泳槽
3. 醋酸纤维素薄膜
4. 载玻片
5. 镊子
6. 培养皿
[操作步骤]
1. 取8×2cm 薄膜一条，于无光泽面的一端2cm 处轻轻用铅笔画一直线（点样线），并在另一端上写上姓名，注明正极。
2. 将标记好的薄膜浸于巴比妥缓冲液，待完全浸透后，取出夹于滤纸中，吸去多余缓冲液。用微量滴管取血清5μl 均匀滴加在点样线上，待血清渗入膜后，将膜贴在支架上。点样端放在负极。
3. 平衡5分钟后，打开电源，电压调至90—110V,电流0.4—0.6mA/cm 宽，通电30—60分钟后关闭电源。
4. 电泳结束前5分钟，开始按每条0.5ml 的量配制混合显色液。取混合显色液0.2ml 滴于载玻片上，用镊子另取醋纤膜（4×2cm ）一条置于显色液上，两面吸透后，立即将电泳结束后的醋纤膜取下，采用“滚动”手法小心覆盖在浸有显色液的醋纤膜上（点样面向下）。注意：这一步骤不能产生气泡，否则气泡处呈白斑，两条膜相贴时不能拖拉，以免图像模糊。
5. 将载玻片置于湿盒内，放在56℃水浴箱内孵育5-10分钟。
6. 将显色后的醋纤膜揭下，放入2.5 %醋酸溶液中固定5分钟，取出吸干，观察结果。
[结果与计算]
1．同工酶分离的电泳图谱（图15）：
54 3 2 1
— +
2．计算：
吸光度值总和T=A1+A2+A3+A4+A5，LD同工酶各部分百分数为：
LD1%=A1/T×100% LD2%=A2/T×100%
LD3%=A3/T×100% LD2%=A4/T×100%
LD5%=A5/T×100%
[注意事项]
1. 醋纤膜含水量不大，56℃温育期间易干涸，所以应放在有盖容器中，器皿底部垫有湿润的纱布或滤纸。
2. 缓冲液也可配制成含1%琼脂的乳酸锂缓冲液，在玻板上浇一层琼脂凝胶上，再将吸收呈色液的醋纤膜小心覆盖其上，此法温育时间可以较长，醋纤膜不易干涸，且底色明显比不用琼脂的为浅。
3．由于红细胞内LD活性较血清内约高100倍，所以，标本不能溶血，溶血者LD1恒定升高。参考值：
LD1：24% ~34% LD2：35%~44 LD3：19%~27%
LD4：0~5% LD5：0~2%。
3
乳酸脱氢酶释放法lactate dehydrogenase release assay 碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH 的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下： 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单： 保存条件： -20℃保存，一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。 注意事项： 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
乳酸脱氢酶制备 原理: 乳酸脱氢酶（LDH）（EC1.1.1.27）存在于具糖无氧代谢途径的细胞中，为水溶性酶，催化如下反应： L（+）—乳酸+NAD+ →丙酮酸 + NADH +H+ 乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备的方法为捣碎心肌组织用水抽提，磷酸钙胶吸附，硫酸铵分级盐析及有机溶剂沉淀，最后结晶出乳酸脱氢酶。 乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下，LDH催化NAD±还原生成NADH。NADH在340nm有最大吸收，摩尔消光系数为6.2×103，NADH的分子量为663.44。 LDH活力单位定义为：25℃、每分钟催化生成1微摩尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫外分光光度计测定酶反应进程的OD340的增量，可求出制备样品中的LDH活力。 试剂： (1)CaCl2?6H2O (2)Na3PO4 (3)冰乙酸 (4)0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (5)0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2） (6)0.3饱和度的硫酸铵溶液（19.5g/100ml） (7)丙酮
(8)硫酸铵粉末 (9)0.5mol/L DL-乳酸钠。 (10)2mmol/L NAD+溶液：称取133mg NAD+，溶于5ml蒸馏水中，加入约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0，定容10ml，冰箱贮存。(11) 0.1mol/L pH10.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 A液0.2mol/L甘氨酸溶液：称取15.01g甘氨酸用蒸馏水溶解，定容1L。 B液0.2mol/L NaOH溶液：称取8gNaOH用蒸馏水溶解，定容1L。 取100mlA液与64.0mlB液混合，蒸馏水定容200ml。 操作： 一、磷酸钙胶制备 （1）称取19.8g CaCl2?6H2O，溶于150ml蒸馏水中，用自来水稀释成1600ml。 （2）称取22.8g Na3PO4?12H2O溶于150ml蒸馏水中。 （3）将两溶液混合，用冰乙酸调pH至7.4，室温下放置，使磷酸钙胶沉淀。 （4）吸去上清液，4000r/min离心3min，收集胶体备用。 二、 LDH制备 1、LDH水提取 （1）取100g新鲜或短期冰冻保存的牛心，去除脂肪、血管，称重，切成小块，低温下绞碎。 （2）加入400ml冰冷的蒸馏水，冰浴中搅拌，提取20min。
血清乳酸脱氢酶同工酶测定 （醋酸纤维素薄膜电泳法） [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离，然后在薄膜上进行酶反应，显色试剂中包括有底物（乳酸）、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）和碘硝基四唑蓝（INT），NAD+和PMS起递氢作用，INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下： LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1．PH8.6巴比妥缓冲液（离子强度0.05）：称取巴比妥钠10.3g，巴比妥1.84g，溶于热的蒸馏水中，冷后加蒸馏水至1L。 2．0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液：称取磷酸二氢钾2.16g，磷酸氢二钠 （Na2 HPO4.2H2O）30.13g, 溶于蒸馏水中，并稀释至1L。 3．0.5mol/L乳酸钠溶液：吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4．显色试剂：临用前配制下列试剂： （1）1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）水溶液； （2）辅酶Ⅰ（NAD+）10mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml； （3）碘硝基四唑蓝[氯化2-（4-碘苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-苯基四唑]（INT）12mg，溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中； （4）0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中（2）、（3）、（4）混合后为甲液，（1）为乙液；用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前，将上述溶液充分混和；但PMS水溶液加入量为0.2ml，且应待其他三种溶液混和后再加。 4．洗脱液：正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。
乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒（乳酸底物法） 适用范围：用于体外定量测定人体血清中乳酸脱氢酶的活性。 1.1试剂盒包装规格 试剂1：1×25ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×60ml，试剂2：2×12ml； 试剂1：3×40ml，试剂2：3×8ml；试剂1：4×60ml，试剂2：4×12ml； 试剂1：2×400ml，试剂2：1×160ml；试剂1：1×10L，试剂2：1×2L； 试剂1：2×40ml，试剂2：2×8ml。 1.2试剂盒主要组成成分 2.1 外观 液体双试剂：试剂1无色至浅黄色澄清液体，试剂2无色至浅黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白
2.3.1试剂空白吸光度：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.5。 2.3.2试剂空白吸光度变化率：在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂时，试剂空白吸光度变化率（ΔA/min）应不大于0.002。 2.4 分析灵敏度 测定活性为200U/L样本时，吸光度变化率（ΔA/min）不小于0.012。 2.5 线性范围 测试血清样本，试剂线性在[25，750]U/L(37℃)区间内：线性相关系数（r）不小于0.990；在[25，100]U/L区间内线性绝对偏差应不超过±10U/L；（100，750]U/L区间内,线性相对偏差不超过±10%。 2.6 重复性 用质控样品重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于5%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。 2.8 准确度 相对偏差：相对偏差应不超过±10%。 2.9 稳定性 效期稳定性：试剂盒在2℃~8℃下有效期为15个月。取失效期的试剂盒进行检验，试验结果满足2.3、2.4、2.5、2.6、2.8的要求。
LDH法细胞毒性检测： 原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH（乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合物，可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶（LDH）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较，可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。 同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5∶1、10∶1、20∶1（效应细胞∶靶细胞） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶
操作流程： 设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50μl效应细胞+50μl培养基 实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50μl效应细胞+50μl靶细胞 设立靶细胞自发释放组：50μl靶细胞+50μl培养基 设立靶细胞最大释放组：50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液（10×） 设立体积校正对照组：100μl培养基+10μl裂解液（10×） 设立背景对照组：100μl培养基 250g离心4分钟 37℃孵育4小时 离心前45分钟添加裂解液（10×）至靶细胞最大释放组 250g离心4分钟 取上清50μl转移至另一孔板 （可选）于独立的孔中加50μl LDH阳性对照（1：5000） 于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物 室温避光孵育30分钟 添加50μl终止溶液 490nm测吸收值 1.靶细胞接种数目的优化 1.1.设立检测板 1.1.1.准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl，使用与细胞毒分析相同的培养 基及孔板终体积。例如，若以50μl/孔的靶细胞及50μl/孔的效应细胞接种，则以100μl/孔梯
乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(二硝基苯肼微板法) 简介： 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase ，LDH 或LD)属于氧化还原酶，能够催化氢氧原子或电子从一中底物转移到另一种底物上乳酸脱氢酶是糖酵解和糖异生的一个极其重要的酶，含有锌离子，广泛分布于人和动物组织、植物和微生物中，能可逆的催化乳酸(L)和丙酮酸(P)之间的氧化还原反应。其反应公式： 乳酸+NAD +→丙酮酸+NADH+H +。 L →P 为正向反应；P →L 为逆向反应，通过酶标仪检测440nm 处吸光度，进测得的丙酮酸钠含量计算酶的活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 准备样品： ① 血浆、血清样品：血浆、血清按照常规方法制备，可以直接用于本试剂盒的测定， -70℃冻存，用于LDH 的检测。 ②细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，-70℃冻存，用于LDH 的检测。 ③高活性样品：如果样品中含有较高活性的LDH ，可以使用蒸馏水稀释。 ④(选做)样品准备完毕后可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计 算单位蛋白重量组织或细胞内的LDH 含量。 2、 制作标准曲线：用LDH Assay buffer 准确稀释丙酮酸标准(5mmol/L)至0.5 mmol/L ， 按下表制备标准曲线。 编号 名称 TE0158 50T TE0158 100T Storage 试剂(A): 丙酮酸标准(5mmol/L) 1ml 1ml 4℃ 避光 试剂(B): LDH Assay buffer 1.5ml 3ml 4℃ 避光 试剂(C): NAD Buffer 0.3ml 0.6ml RT 试剂(D): 二硝基苯肼溶液 1.5ml 3ml 4℃ 避光 试剂(E): 碱性显色液 5.25ml 10.5ml RT 使用说明书 1份 加入物 0 1 2 3 4 5 丙酮酸标准(0.5mmol/L)(μl) 12.5 25 50 75 100
乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称：乳酸脱氢酶 英文名称：lactate dehydrogenase;LDH 定义：广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于L-乳酸； D-乳酸脱氢酶(编号：EC 作用于D-乳酸，两者均以NAD＋为氢受体。在厌氧酵解时，催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢，形成乳酸。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；酶（二级学科） 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶（LDH）同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶（LDH）实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介
编辑本段基本信息 英文名称：LDH（lactate dehydrogenase） 序列信息：1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围：血清～L； 尿560～2050U/L； 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1]（LD）分子量为135～140KD，由两种亚单位组成：H（表示heart）和M（表示muscle）。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶，即：LD1（H4）、LD2（H3M1）、LD3（H2M2）、LD4（HM3）、LD5（M4）。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应，在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应，而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化（为逆反应）。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中，而且在人体组织中的活性普遍很高，所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚，故对早期诊断价值不大。由于半寿期长（10～163小时），多用于回顾性诊断，如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主，LD2次之；肺以LD3．LD4为主；骨骼肌以LD5为主；肝以LD5为主，LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.
产品简介： 产品编号产品名称产品包装产品价格 C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit)，是一种基于diaphorase催化的INT显色反应，通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测，更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时，基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测，本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里，其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性，就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标，并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞，随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是，在乳酸脱氢酶的作用下，NAD+被还原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan)，在490nm波长下产生吸收峰，从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下： 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单： 产品编号产品名称包装 C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml C0016-2 乳酸溶液2ml C0016-3 酶溶液1ml×2 C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml C0016-5 INT稀释液2ml —说明书1份 保存条件： -20℃保存，一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放，2-3天内有效。 注意事项： 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活，4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶，由于血清含有乳酸脱氢酶，建议血清的使用浓度不要超过1%，并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清，在检测时一定要设置没有细胞，但加入了相同体积培养液的对照孔，以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大，都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。
乳酸脱氢酶（LDH）活性检测试剂盒说明书微量法 注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号：BC0685 规格：100T/48S 产品内容： 提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂一：液体7mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入1.3mL双蒸水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存两周，禁止反复冻融； 试剂三：液体7mL×1瓶，4℃保存； 试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存； 丙酮酸钠标准液：液体1mL×1支，4℃保存，2μmol/ml。 产品简介： LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。 LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤： 一、粗酶液提取：
1.细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.血清（浆）样品：直接检测。 3.丙酮酸钠标准液：取100μL标准液，倍比稀释至1、0.5、0.25、0.125、0μmol/mL，用2、1、0.5、 0.25、0.125、0μmol/mL做标准曲线。 二、测定操作表： 1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。 2.样本测定 试剂名称(μL)测定管对照管标准管待测样本1010- 标准液--10 试剂一505050 试剂二10-- 蒸馏水-1010 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴15min 试剂三505050 充分混匀，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴15min 试剂四150150150充分混匀，室温静置3min，取200μL转移至微量玻璃比色皿或在96孔板中，450nm下测定吸光度，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管需要设一个对照。
积液乳酸脱氢酶 文章目录*一、积液乳酸脱氢酶的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、积液乳酸脱氢酶的 正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、积液乳酸脱氢酶的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、积液乳酸脱氢酶的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、积液乳酸脱氢酶的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应 积液乳酸脱氢酶的基本信息 1、定义乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机 体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是 能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功 酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、 LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊 断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。LDH几乎存在于所有 组织中,人体以肾脏食量最高,心肌、骨骼肌、肝、红细胞依次减少。积液中的乳酸脱氢酶较有诊断意义。 2、专科分类呼吸
3、检查分类胸腹水检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹非空腹 积液乳酸脱氢酶的正常值和临床意义 1、正常值血清 100-300U/L; 尿 560-2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 2、临床意义异常结果: 渗出液中LD以化脓性感染积液活性最高,均值可达正常血清的30倍,其次为癌性积液,结核性积液略高于正常血清。炎症或充血性心功能不全胸腔积液时,LD活性可和血清活性相似。癌性胸腔积液LD活性则约为患者自身血清LD活性的3.5倍,而良性积液约为其自身血清LD活性的2.5倍,有助于鉴别诊断。 Light曾提出浆膜腔积液中LD200U/L,积液LD/血清LD比值0.6可作为渗出液的指标。急性心肌梗塞发作后,早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的比值升高。肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升高。患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也可升高。
乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase ,LDH）是存在于细胞浆内的一种酶，乳酸脱氢酶在生命体中糖代谢中扮演重要角色。 在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地方： 1、存在于活细胞内。若你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells)，那么贴在壁上的就是活细胞，此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内，所以测得贴壁细胞中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中活细胞的量，我们称之为LDHV。 2、存在于漂浮于培养液中的凋亡小体(Apoptotic bodies)。由于凋亡小体有细胞膜，因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没有释放到胞外。此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量，我们称之为LDHa。 3、存在于培养液中。坏死的细胞(Necrosis)胞膜破裂乳酸脱氢酶释放，分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶（LDH）活力就代表培养细胞中坏死细胞(necrotic cell)的量，我们称之为LDHn。 那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细胞损伤的程度。 凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。 因为即使我们每次埋板的细胞数相同，但是由于细胞生长受多方面影响，所得的细胞数量也不一样，所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不一样，所以不能单纯通过测上清中LDH的量或测细胞总LHD来评估细胞受损的程度，而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程度是比较符合实际。 另附简要操作：吸取细胞培养瓶中液体置离心管中离心，离心后沉淀于管底的是凋亡小体，上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋亡小体和贴附于培养瓶壁上的细胞破膜即可测定凋亡小体和活细胞的LDH.
血清乳酸脱氢酶LDH测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 LDH催化乳酸氧化为丙酮酸，同时将NAD+还原为NADH， LDH NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。 L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+ 3 标本： 3.1 病人准备：无特殊。 3.2 类型：血清或EDTA血浆。 3.3 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：<8%；15～25℃保存：<2%。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 4 实验材料
4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒（沪 食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成 氯化钾 190mmol/L 试剂1（R1）乳酸 62.5mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 试剂2（R2）NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2～8℃避光、密封的储存条件下， 试剂（盒）自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂 2 启用后，在2～10℃避光的条件下可稳定14天。 4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长，有浊度， 或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。不可入口！避 免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。
4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。
乳酸脱氢酶测定标准操作程序 1.摘要 乳酸脱氢酶常用于心机梗塞、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。 2.适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清、血浆中LDH的浓度。 3.职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定LDH浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行,室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4.检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒采用的是乳酸法。 5.原理 乳酸氧化成丙酮酸（L→P），辅酶Ⅰ（NAD+）还原成还原辅酶Ⅰ（NADH）生成，其反应产生的NADH引起340nm处吸光度的上升，吸光度上升的速率与LDH的活力呈正比关系。 ++ + NADH NAD L LDH丙酮酸 乳酸 -H ?→ + ? + ? 6.仪器 AU5811自动生化分析仪 7.试剂 7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2试剂瓶内主要成分：Tris-HCl缓冲液、L(+)乳酸锂、MES缓冲液、NADH类似物、防 腐剂 7.3试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为 12个月。试剂不可冰冻。 7.4试剂准备：试剂为即用式。 8.标准品和质量控制 8.1校准程序：此项目只需要用理论因子并做空白校准即可。以9g/L氯化钠溶液或去 离子水为空白。 8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。每日在测定前做
一 次质控，加试剂后做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。 8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。 8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》 8.5室间质评：分别参加河北省临检中心室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。 9.标本 9.1标本为及时分离的空腹血清，肝素、枸橼酸或草酸盐抗凝血浆。不可使用EDTA抗 凝血浆。采集的样本应在1小时内分析。若不能立即测定应及时分离血清，置于具塞试管内冰箱保存。 9.2标本拒收：由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请 单不符状况，一律要求重新留取标本。 9.3标本处理：收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。 10.测定程序 10.1分析参数：详见参数表。 10.2操作步骤：签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。 10.3获取结果：在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。 10.4结果报告：对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的 结果直接发报告，对不可报告结果进行复检后发报告。 11.计算 标准品校准项目后，测定室内质控，质控结果符合质控要求后方可测定样本。无需手工计算，每个标本的结果自动打印 12.废液处理 参阅检验科《安全手册》废液处理标准规程处理。 13.操作性能 13.1可报告范围：本法对LDH检测范围为0-1000 U/L。当样品测定值超过上限时，应将 样品用9 g/L氯化钠溶液作倍比稀释，重新测定，结果乘以稀释倍数。 13.2特异性/干扰：当样品中胆红素浓度≤40mg/L，甘油三酯浓度≤1000mg/dL时对测定
实验一 乳酸脱氢酶的提取、纯化及活性测定 一、原理 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, 简称LDH 、EC 、1、1、1、27）存在于一切有糖酵解作用的细胞 中，最早从牛心肌中分离并获得结晶，后来相继又从兔骨骼肌、鼠肝、猪心及枯草芽胞杆菌等材料中分离 出来。它是可溶性的酶，在NAD +的存在下，催化乳酸脱氢形成丙酮酸或使丙酮酸还原成乳酸，反应如下： 乳酸＋NAD + ??→?LDH 丙酮酸+NADH+H + 丙酮酸+2,3－二硝基苯肼???→?-O H 2丙酮酸―2,4―二硝基苯腙 ↓ 棕红色的苯腙硝醌化合物 因此，乳酸脱氢酶是肌肉糖酵解过程中的一个重要氧化还原酶。 提取和纯化乳酸脱氢酶的基本方法是用磷酸盐缓冲液抽提，用不同饱和度的硫酸铵分级盐析进行分离 等。为了进行乳酸脱氢酶同功酶的研究，在上述基础上还需进一步纯化。一般采用离子交换或分子筛进行 柱层析。 浓的乳酸脱氢酶溶液在3～15℃下可稳定几个月，但是高度稀释的酶溶液是很不稳定的。一般可将结 晶酶置于0.5饱和度硫酸铵溶液中，在低温下保存；或对0.1M ，Ph7.0磷酸盐缓冲液透析后冰冻保存，大 约在2个月内活性不降低。 从牛心肌中分离出来的乳酸脱氢酶分子量为135,000±15,000，具有4个H 型（H 4）亚基。乳酸脱氢酶 是一个重要的同功酶，有一定的器官特异性，它的变化在一定程度上更加敏感地反映器官的功能状态，因 此在临床诊断上有重要意义。该酶对一般的抑制剂有较高的稳定性，但对氯汞苯甲酸可引起酶的完全失活， 而半胱氨酸能使活力恢复。 乳酸脱氢酶具有底物立体专一性，要求L （+）－乳酸作为底物，它与某些来源于细菌的乳酸脱氢酶不 同，那些乳酸脱氢酶可使丙酮酸还原成D 或DL －乳酸。 酶活性的测定：采用2,4-二硝基苯肼比色法测定其总酶活性。以乳酸为底物，经LDH 催化，脱氢生成 丙酮酸，与2,4-二硝基苯肼反应，在碱性条件下，产物呈棕红色，于500nm 波长处比色，测得LDH 酶活性。 二、试剂与器材 试剂： 1．0.05M ，pH7.4磷酸盐缓冲液 2．0.08M ，pH7.0磷酸盐缓冲液 3．0.5M DL-乳酸钠溶液 4．0.002M NAD +溶液 5．0.1M pH10.0甘氨酸－氢氧化钠缓冲液 6．底物溶液：甘氨酸－NaOH 缓冲液2.7ml ，乳酸钠0.15ml ，NAD + 0.15ml 混合溶液。 7．2,4－二硝基苯肼：精确称取2,4－二硝基苯肼19.8mg ，溶于10mol/L 盐酸10ml 中，溶解后再加蒸 馏水至100ml 。 8．0.4M NaOH 溶液。 9．丙酮酸标准液。 10．DEAE-Sephadex-A50树脂。 器材： 1．普通离心机 2．低温高速离心机 3．紫外分光光度计 4．721分光光度计 5．层析柱
LDH法细胞毒性检测: 原理：乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损或死亡时可释放到细胞外，所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比，用比色法测定实验孔LDH活性,并与靶 细胞对照孔进行比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH （乳酸脱氢酶）是一种极为稳定的细胞质酶，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH 即被释放到细胞外；LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT （四唑盐类）反应转化成红色甲臢化合 物，可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计 收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性，这种情况下目标细胞被效应细胞裂解，可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶（LDH ）在胞质内含量非常丰富，细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜，但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH的活性与细 胞的死亡数目呈正比，通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH活性进行比较， 可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速，可应用于CTL 和NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性，目前已有LDH法 测定CTL活性的试剂盒。 同时设4个对照：靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5 ：1、10 ：1、20 : 1 （效应细胞：靶细胞） 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶 操作流程： 设立效应细胞孔（不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组）：50卩1效应细胞+50 □培养基 实验组：靶细胞不变，改变效应细胞：50 □效应细胞+50 □靶细胞 设立靶细胞自发释放组：50卩靶细胞+50卩1培养基 设立靶细胞最大释放组：50卩靶细胞+50卩1 培养基+10卩裂解液（10X） 设立体积校正对照组：100 □培养基 设立背景对照组：100卩培养基 250g离心4分钟 37C孵育4小时 离心前45分钟添加裂解液（10 X）至靶细胞最大释放组 250g离心4分钟 取上清50 □转移至另一孔板 于每孔中添加50^1再次稀释的底物混合物 室温避光孵育30分钟 添加50卩1 终止溶液 490nm测吸收值 1. 靶细胞接种数目的优化 1.1. 设立检测板 1.1.1. 准备靶细胞：调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100卩，使用与细胞毒分析相同的培养基
乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）适用范围：用于体外定量测定人血清中乳酸脱氢酶的活性。 分说明1.1 规格 试剂1:3×60 mL，试剂2:1×45 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×20 mL；试剂1:1×60 mL，试剂2:1×12 mL；试剂1:2×60 mL，试剂2:2×15 mL；试剂1:1×40 mL，试剂2:1×10 mL；试剂1:1×4L，试剂2:1×1L； 试剂1:1×16L，试剂2:1×4L。 1.2主要组成成分 试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。
2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.50。 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 在37℃、340nm波长、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率(△A/min)应不大于0.002。 2.4 分析灵敏度 测试300U/L的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0085。 2.5 准确度 用参考物质（GBW09177）对试剂（盒）进行测试，相对偏差应不超过±10%。 2.6 重复性 用血清样品或质控样品重复测试所得结果的重复性（变异系数，CV）应不大于5%。 2.7 线性 2.7.1 在[25,750]U/L区间内，线性相关系数r应不小于0.990； 2.7.2 [25,100）U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；[101,750]U/L 区间内，线性相对偏差应不超过±10%。 2.8 批间差 试剂（盒）批间相对极差应不大于10％。 2.9 稳定性
乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶就是一种糖酵解酶、乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞得胞质内,其中以肾脏含量较高、乳酸脱氢酶就是能催化丙酮酸生成乳酸得酶,几乎存在于所有组织中、同工酶有六种种形式,即LDH-1(Ｈ４)、LDH-2(H3M)、LDＨ—3(H2M2)、LDＨ—４(HM３)、ＬＤH—５(M4)及ＬDH－C4,可用电泳方法将其分离。LDH同功酶得分布有明显得组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,>LＤH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 基本信息 英文名称: LDH(lactatｅdｅhｙｄｒogenasｅ) 序列信息:1 gsgｃnldsar frylmg 长度:1６aａ｛物种来源:Hｏmo sapiｅns (ｈｕｍan)} 正常范围:血清１3５.０～２15.0U／L; 脑脊液含量为血清得1/10。 乳酸脱氢酶Ａ 简介 乳酸脱氢酶(ＬDH)分子量为1３0~140KＤa,由两种亚单位组成:H(表示hｅａrt)与M(表示muscle)。它们按不同得形式排列组合形成含４个亚基得5种同工酶,即:LDH１(H4)、ＬＤＨ２(H3M１)、LＤH3(H２M２)、LDＨ4(HＭ３)、LDＨ５(M4)、 ＬDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lａctic ａcid向pyru ｖiｃaｃiｄ方向得反应,而在中性条件下促进ｐyrｕvic acid向lactic ａcid得转化(为逆反应)。LDＨ就是参与糖无氧酵解与糖异生得重要酶。 由于LDH几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中得活性普遍很高,所以血清中ＬDH得增高对任何单一组织或器官都就是非特异得。在AMＩ时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(1０～1６3小时),多用于回顾性诊断,如对入院较晚得AMＩ病人、亚急性MＩ得诊断与病情监测。 LDＨ在组织中得分布特点就是心、肾以ＬDH1为主,ＬＤH２次之;肺以LDH3、ＬDＨ4为主;骨骼肌以ＬDＨ５为主;肝以LDH5为主,ＬDH４次之、血清中LＤH含量得顺序就是LDH2〉ＬDＨ1>ＬDH3〉ＬDH4>ＬDＨ5. 正常参考值 人组织中得乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出５种同工酶区带,根据其电泳迁移率得快慢,依次命名为LDH1,ＬDH２,ＬＤH3,LDH4,ＬDＨ5。不同组织得乳酸脱氢酶同工酶分布不同,存在明显得组织特异性,人心肌、肾与红细胞中以LＤH1与LＤＨ2最多,骨骼肌与肝中以LＤＨ4与LDH5最多,而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺与淋巴结等组织中以ＬDH3最多。后来从睾丸与精子中发现了LＤHx,其电泳迁移率介于LDH4与LDH5之间。LDH就是由Ｈ(心肌型)与Ｍ(骨骼肌型)两类亚基组成,分别形成LDH1(H４)、LDH2(H3M)、LDH3(H2Ｍ2)、ＬDH4(HM3)、LDH5(Ｍ4)。 正常参考值 (1)琼脂糖电泳法: ＬDH1(2８.4±5。3)％; LＤＨ2(41、0±５。0)％;
乳酸脱氢酶是四聚体酶，该酶亚基有两种：骨骼肌型（M）心肌型（H） 五种同工酶：H4 H3M H2M2 HM3 M4 对于肝脏的复杂性，在做肝功能检查的时候往往包括有很多项目，乳酸脱氢酶就是其中的一项指标，是反映乙肝患者肝脏健康状况的风向标，如果出现偏高，此时的患者就要及时的就诊检查，然后找出引起乳酸脱氢酶升高原因有哪些，然后对症进行治疗，那么乳酸脱氢酶升高原因有哪些呢?下面我们来听听上海乙肝医院上海长江医院肝病专家对此的详细分析。 针对乳酸脱氢酶升高原因有哪些肝病专家讲述说，乳酸脱氢酶(LDH)是一种糖酵解酶，能催化乳酸脱氢生成丙酮酸。乳酸脱氢酶存在于人体各个组织，其中肾脏的乳酸脱氢酶最多，其正常范围在血清中为100-300U/L，尿中560-2050U/L，脑髓液中10-30U/L。 一、肝脏疾病：肝脏病变，当乙肝患者肝细胞受损的时候，血液中LDH4和LDH5会显著升高。LDH5/LDH4<1常提示是原发性肝癌。急性肝炎LDH5明显升高，LDH4不增。而慢性肝炎则表现为LDH5持续升高或者下降后再升高，此时要及时的进行乙肝治疗。正常人血清中LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5，肝细胞损伤或坏死后，向血流释入大量的LDH4和LDH5，致使血中LDH5/LDH4比值升高，故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。 二、其他疾病：如肺梗塞;心脏方面的病毒性和风湿性心肌炎、克山病心肌损害、急性心肌梗塞;肾脏方面的急性肾小管坏死、慢性肾小球肾炎;以及肌营养不良病人、恶性肿瘤、休克、恶性贫血等，都可导致肝功能乳酸脱氢酶升高。 1、急性心肌梗塞是乳酸脱氢酶偏高的原因之一。急性心肌梗塞发作后，早期血清中LDH1和LDH2活性均升高，但LDH1增高更早，更明显，导致LDH1/LDH2的比值升高。