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乳酸脱氢酶LDH法操作说明

乳酸脱氢酶LDH法操作说明
乳酸脱氢酶LDH法操作说明

LDH法细胞毒性检测:

原理:乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率

LDH(乳酸脱氢酶)是一种极为稳定的细胞质酶,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损,LDH 即被释放到细胞外;LDH催化乳酸形成丙酮酸盐,和INT(四唑盐类)反应转化成红色甲臢化合物,可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性,这种情况下目标细胞被效应细胞裂解,可判断细胞受损的程度。

乳酸脱氢酶(LDH)在胞质内含量非常丰富,细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜,但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外,此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比,通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较,可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速,可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性,目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。

同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组

按5∶1、10∶1、20∶1(效应细胞∶靶细胞)

细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶

操作流程:

设立效应细胞孔(不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组):50μl效应细胞+50μl培养基

实验组:靶细胞不变,改变效应细胞:50μl效应细胞+50μl靶细胞

设立靶细胞自发释放组:50μl靶细胞+50μl培养基

设立靶细胞最大释放组:50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液(10×)

设立体积校正对照组:100μl培养基+10μl裂解液(10×)

设立背景对照组:100μl培养基

250g离心4分钟

37℃孵育4小时

离心前45分钟添加裂解液(10×)至靶细胞最大释放组

250g离心4分钟

取上清50μl转移至另一孔板

(可选)于独立的孔中加50μl LDH阳性对照(1:5000)

于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物

室温避光孵育30分钟

添加50μl终止溶液

490nm测吸收值

1.靶细胞接种数目的优化

1.1.设立检测板

1.1.1.准备靶细胞:调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl,使用与细胞毒分析相同的培养

基及孔板终体积。例如,若以50μl/孔的靶细胞及50μl/孔的效应细胞接种,则以100μl/孔梯

度稀释。

1.1.

2.设置不含细胞的背景对照组

1.1.3.可选:验证LDH阳性对照。使用涡旋混匀器轻轻混匀LDH阳性对照液,以1:5000稀释(稀

释方法:取2μl原液至10ml的PBS+1%BSA)。使用与实验孔相同的体积。

1.2.细胞裂解及收获上清

1.2.1.裂解细胞每100μl培养基加10μl裂解溶液(10×)

1.2.2.37℃,5%CO2孵育45分钟

1.2.3. 250g离心4分钟

1.3. LDH检测

1.3.1. 转移50μl上清至另一孔板

1.3.

2. 解冻检测缓冲液,取12ml(避光),将剩余的迅速冻存(可以使用37℃水浴解冻,但不可放置过长时间)。将12ml检测缓冲液添加到一瓶底物混合液(可用于两个96孔板)中,倒置混匀。稀释后,避光、迅速添加。

1.3.3. 50μl/孔添加稀释的底物混合液,室温避光孵育30分钟(未使用的稀释后底物混合物液放于-20℃保存6-8周)

1.3.4. 添加50μl终止溶液

1.3.5. 将孔中含有的气泡去除,一小时内检测吸收值(490或492nm)

1.3.6. 至少检测两次吸收值

接种靶细胞(100μl/孔)至96孔板

加入裂解液(或冻存-解冻)

250g离心4分钟

取上清50μl转移至另一孔板

用检测缓冲液稀释底物混合物

添加底物混合物50μl/孔

室温避光孵育30分钟

添加50μl终止溶液

490nm测吸收值

2.细胞毒分析检测

2.1. 设立检测板

2.1.1. 效应细胞自发释放组设立不同浓度的效应细胞自发释放组,终体积与实验孔一致

2.1.2. 实验组加入相同数目的靶细胞,按照不同效靶比加入效应细胞,补足培养基(最小体积:100μl/孔)。

2.1.

3. 靶细胞自发释放组加入最优化的靶细胞数,补足终体积

2.1.4. 靶细胞最大释放组加入最优化的靶细胞数,补足终体积。

2.1.5. 体积校正对照组100μl培养基中加入10μl的裂解液,用于校正由于加入裂解液而引起的体积变化(体积改变影响酚红及血清的含量)。

2.1.6. 背景对照组用于校正培养基中由酚红及血清引起的LDH影响。

2.1.7. LDH阳性对照(可选)使用涡旋混匀器轻轻混匀LDH阳性对照液,以1:5000稀释(稀释方法:取2μl原液至10ml的PBS+1%BSA)。使用与实验孔相同的体积

2.1.8. 250g离心4分钟,以使效应细胞与靶细胞充分接触

2.2. 细胞培养、收获上清

2.2.1. 37℃,5%CO2孵育检测板(效靶细胞接触的最短时间为4小时)

2.2.2. 靶细胞最大释放组中加入裂解液每100μl培养基加10μl裂解溶液(10×)。该体系中Triton X-100的浓度为0.8%,可使靶细胞完全裂解(收获上清前45分钟加入裂解溶液)。显微镜下观察细胞状态,若靶细胞未完全裂解,再补5μl 的裂解液。

2.2.

3. 250g离心4分钟

2.3. LDH检测

2.3.1. 转移50μl上清至另一孔板

2.3.2. 解冻检测缓冲液,取12ml(避光),将剩余的迅速冻存(可以使用37℃水浴解冻,但不可放置过长时间)。将12ml检测缓冲液添加到一瓶底物混合液(可用于两个96孔板)中,倒置混匀。稀释后,避光、迅速添加。

2.3.3. 50μl/孔添加稀释的底物混合液,室温避光孵育30分钟(未使用的稀释后底物混合物液放于-20℃保存6-8周)

2.3.4. 添加50μl终止溶液

2.3.5. 将孔中含有的气泡去除,一小时内检测吸收值(490或492nm)

2.4. 结果统计

2.4.1. 所有的实验组、效应细胞自发释放组、靶细胞自发释放组的吸收值应减去背景平均吸收值2.4.2. 靶细胞最大释放组的吸收值应减去体积校正对照组的平均吸收值

2.4.

3. 校正后的值用于杀伤率的统计:

细胞杀伤率(%)= [(实验组释放-效应细胞自发释放-靶细胞自发释放)/(靶细胞最大释放-靶细胞自发释放)]×100%

乳酸脱氢酶制备

乳酸脱氢酶制备 原理: 乳酸脱氢酶(LDH)(EC1.1.1.27)存在于具糖无氧代谢途径的细胞中,为水溶性酶,催化如下反应: L(+)—乳酸+NAD+ →丙酮酸 + NADH +H+ 乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备的方法为捣碎心肌组织用水抽提,磷酸钙胶吸附,硫酸铵分级盐析及有机溶剂沉淀,最后结晶出乳酸脱氢酶。 乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下,LDH催化NAD±还原生成NADH。NADH在340nm有最大吸收,摩尔消光系数为6.2×103,NADH的分子量为663.44。 LDH活力单位定义为:25℃、每分钟催化生成1微摩尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫外分光光度计测定酶反应进程的OD340的增量,可求出制备样品中的LDH活力。 试剂: (1)CaCl2?6H2O (2)Na3PO4 (3)冰乙酸 (4)0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2) (5)0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2) (6)0.3饱和度的硫酸铵溶液(19.5g/100ml) (7)丙酮

(8)硫酸铵粉末 (9)0.5mol/L DL-乳酸钠。 (10)2mmol/L NAD+溶液:称取133mg NAD+,溶于5ml蒸馏水中,加入约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0,定容10ml,冰箱贮存。(11) 0.1mol/L pH10.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 A液0.2mol/L甘氨酸溶液:称取15.01g甘氨酸用蒸馏水溶解,定容1L。 B液0.2mol/L NaOH溶液:称取8gNaOH用蒸馏水溶解,定容1L。 取100mlA液与64.0mlB液混合,蒸馏水定容200ml。 操作: 一、磷酸钙胶制备 (1)称取19.8g CaCl2?6H2O,溶于150ml蒸馏水中,用自来水稀释成1600ml。 (2)称取22.8g Na3PO4?12H2O溶于150ml蒸馏水中。 (3)将两溶液混合,用冰乙酸调pH至7.4,室温下放置,使磷酸钙胶沉淀。 (4)吸去上清液,4000r/min离心3min,收集胶体备用。 二、 LDH制备 1、LDH水提取 (1)取100g新鲜或短期冰冻保存的牛心,去除脂肪、血管,称重,切成小块,低温下绞碎。 (2)加入400ml冰冷的蒸馏水,冰浴中搅拌,提取20min。

血清乳酸脱氢酶同工酶测定

血清乳酸脱氢酶同工酶测定 (醋酸纤维素薄膜电泳法) [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离,然后在薄膜上进行酶反应,显色试剂中包括有底物(乳酸)、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)和碘硝基四唑蓝(INT),NAD+和PMS起递氢作用,INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下: LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1.PH8.6巴比妥缓冲液(离子强度0.05):称取巴比妥钠10.3g,巴比妥1.84g,溶于热的蒸馏水中,冷后加蒸馏水至1L。 2.0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液:称取磷酸二氢钾2.16g,磷酸氢二钠 (Na2 HPO4.2H2O)30.13g, 溶于蒸馏水中,并稀释至1L。 3.0.5mol/L乳酸钠溶液:吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4.显色试剂:临用前配制下列试剂: (1)1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)水溶液; (2)辅酶Ⅰ(NAD+)10mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml; (3)碘硝基四唑蓝[氯化2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑](INT)12mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中; (4)0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中(2)、(3)、(4)混合后为甲液,(1)为乙液;用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前,将上述溶液充分混和;但PMS水溶液加入量为0.2ml,且应待其他三种溶液混和后再加。 4.洗脱液:正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。

乳酸脱氢酶LDH法操作说明

LDH法细胞毒性检测: 原理:乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH(乳酸脱氢酶)是一种极为稳定的细胞质酶,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损,LDH 即被释放到细胞外;LDH催化乳酸形成丙酮酸盐,和INT(四唑盐类)反应转化成红色甲臢化合物,可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性,这种情况下目标细胞被效应细胞裂解,可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶(LDH)在胞质内含量非常丰富,细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜,但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外,此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比,通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较,可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速,可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性,目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。 同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5∶1、10∶1、20∶1(效应细胞∶靶细胞) 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶

操作流程: 设立效应细胞孔(不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组):50μl效应细胞+50μl培养基 实验组:靶细胞不变,改变效应细胞:50μl效应细胞+50μl靶细胞 设立靶细胞自发释放组:50μl靶细胞+50μl培养基 设立靶细胞最大释放组:50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液(10×) 设立体积校正对照组:100μl培养基+10μl裂解液(10×) 设立背景对照组:100μl培养基 250g离心4分钟 37℃孵育4小时 离心前45分钟添加裂解液(10×)至靶细胞最大释放组 250g离心4分钟 取上清50μl转移至另一孔板 (可选)于独立的孔中加50μl LDH阳性对照(1:5000) 于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物 室温避光孵育30分钟 添加50μl终止溶液 490nm测吸收值 1.靶细胞接种数目的优化 1.1.设立检测板 1.1.1.准备靶细胞:调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl,使用与细胞毒分析相同的培养 基及孔板终体积。例如,若以50μl/孔的靶细胞及50μl/孔的效应细胞接种,则以100μl/孔梯

血气分析中血乳酸检测之临床意义

血气分析中血乳酸检测之临床意义? 全测定在的应用 乳酸测定 §乳酸是糖()的。乳酸产生于骨胳,肌肉,脑和。经后由肾分泌。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及量不足。乳酸水平的增高可见于多种临床疾病。 乳酸酸中毒 §相乳酸升高最常见于乳酸酸中毒,但也可与关联: –A型乳酸酸中毒:严重组织缺氧时发生,任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。 –B型乳酸酸中毒:组织缺氧并不明显,但组织缺氧可同时存在。 A型乳酸酸中毒 § §严重 § § §局域性不足(组织缺氧) B型乳酸酸中毒 §药物引起 – – – –双呱类(药物) B型乳酸酸中毒 §疾病 –糖尿病 – –肝脏疾病 –(由于在血中的堆积,导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒和酮症的一类先天性代谢性疾病) –缺陷(影响糖类合成的酶缺陷) –缺陷(影响的疾病) – 正常参考范围 –L –高:>L 通过监测乳酸来评估治疗效果,乳酸水平降低说明组织氧供得到改善。 乳酸测定临床应用 §乳酸测定对指导患者救治有非常重要的作用,尤其是处理、、血流不足引起的组织缺氧。因此,要求通过,在30分钟内(包括)提交具有诊断价值的检测结果。由此将带来了临床乳酸检测申请的大幅度提高。

乳酸测定 §在以下科室或中检测乳酸有重要 意义: –外科手术(如) –重症监护科(ICU) – –(重点)实验室 乳酸测定临床应用 §心脏手术 §冠状动脉分流术 §体外膜氧合(交换膜式) §休克状况的评估 §内球囊植入术 §急诊科患者的分类救治 §创伤病人的评估 §的诊断 §烧伤患者 …… 开放性心脏手术 §通过血中乳酸测定对开放性心脏手术后进程的重要意义已经明确。通常手术后的恢复期,血中乳酸水平仅轻度升高,24小时至接近正常水平。若手术后的24小时内/后的血中乳酸结果不符合该模式,就需要进行容量支持、心脏、扩展和呼吸支持的治疗。 体外膜氧合(ECMO) §由于ECMO(体外循环交换膜式氧合作用)的强迫性与高费用,只有在病人的病情严重情况下才进行。血乳酸的测定作为是否需要进行ECMO的依据,也用来评价ECMO为组织供氧的效果。 休克状况的评估 §血乳酸升高常见于循环性休克的患者,循环性休克(严重)可由的减少(失血或脱水),心输出量减少或脓毒血症()性血流紊乱等引起。虽然各种疾病的发生休克机理不一样,但休克情况下导致乳酸升高的原因似乎与组织缺氧或氧的利用缺陷有关。乳酸测定也同样用于疗效监测,如早期检测,乳酸结果可作为休克是否存在及严重性的重要指针,此时针对休克状况所采取的治疗措施是最为有效的。 冠状动脉分流术 §作为心肺分流术(CPB)的常规方法,需要诱导心动阻止,常引起乳酸的升高。如在CPB血乳酸检测峰值达到或超过L,手术后患者的死亡危险性更高。 §手术后,随着心脏血的再灌注,乳酸通常会降低。如再灌注后乳酸持续产生,即血乳酸浓度升高或不下降,表明心脏氧()利用恢复到正常的延迟。这与功能降低相关,可能需要心脏兴奋剂或主动脉内球囊起博器的支持。 主动脉内球囊起博器植入术 §主动脉内球囊起博器植入术(IABP)有时作为在心外科手术遇到困难时的一种治疗手段。即便如此,其死亡率也是相当高的。如果有一个早期指标可提示

LDH同工酶

LDH同工酶 定义1:具有相同底物,但电泳迁移率不同的酶。可来简介 用电泳方法将LDH同工酶分离,分析其酶谱,发现脊椎动物各组织中有五条酶带。每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚体,LDH有两类肽链,A(M)或B(H),各有不同同工酶 的免疫性质,按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链(B4)和4条A链(A4)形成,称为纯聚体;而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交而成的,分别可写成AB3、A2B2、A3B,称为杂交体。 编辑本段分类 基因性同工酶或原级同工酶 由不同基因产生的肽链而衍生的同工酶。这里所指的不同基因可以在不同染色体或在同一染色体的不同位点上,例如LDH中A、B两条肽链的基因分别在第11及第12对染色体上,唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1对染色体的不同位点上。这类同工酶因分子结构差异较大,彼此间无交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以是同源染色体的等位基因,这种成对的等位基因上两个基因结构不同的情况,在遗传学上称为杂合子。杂合子在同一个体中可合成同一种酶的两种不同

肽链,或亚基,这两种亚基尚可杂交,形成同工酶。在生物群体的不同个体中,有时同一基因位点上的一个(对杂合子来说)或一对(对纯合子来说)基因也可发生遗传变异,从而产生变异的酶,出现群体中的遗传多态。不同个体中这些遗传变异的酶也属于基因性同工酶。其在免疫学上常有交叉反应。由同一基因转录出前体核糖核酸(前体RNA),经过不同的加工剪接过程而生成多种不同的mRNA,再转译出多种肽链,从而组成同工酶。这类同工酶因发现较晚,在国际上尚无统一命名,彼此间也有交叉免疫。 次生同工酶或转译后同工酶 由同一基因、同一mRNA转译生成原始的酶蛋白,再经过不同的化学修同工酶试剂 饰,如酰胺基水解、磷酸化、肽链断裂、糖链上的糖基增减等形成不同结构的酶蛋白,它们的免疫性往往相同。国际生化协会命名委员会(CBN)建议只将原级同工酶列为同工酶,而将次生同工酶称为共合酶,但不少生化学家还是把上述各类酶的不同结构形式都包括在广义的同工酶概念中。 编辑本段功能 在动、植物中,一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同,形成各组织特异的同工酶谱,叫做组织的多态性,体现各组织的特异功能。大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节,常表现不同的生理功能,例如动物肝脏的碱性磷酸酯酶和肝脏的排泄功能有关,而肠粘膜的碱性磷酸酯酶却参与脂肪和钙、磷

实验室检查正常值大全

实验室检查结果及正常值 (一)血常规 红细胞(RBC)成年男性:(4.0~5.5)×1012/L 成年女性:(3.5~5.0)×1012/L 新生儿:(6.0~7.0)×1012/L 血红蛋白(Hb)成年男性:120~160g/L 成年女性:1l0~150g/L 新生儿:170~200g/L 白细胞(WBC)成人:(4.0~10.0)×109/L;新生儿:(15.0~20.0)×109/L 中性杆状核粒细胞:1%~5% 中性分叶核粒细胞:50%~70% 嗜酸性粒细胞:0.5%~5% 嗜碱粒性细胞:O%~1% 淋巴细胞:20%~40% 单核细胞:3%~8% 血小板(PLT)(100~300)×109/L (二)尿常规 1.酸碱度(pH)5~8 2.比重(SG)1.015~1.025 3.尿蛋白(Pro)定性定量试验 Pro定性:阴性(neg),Pro定量≤O.15g/24h 4.葡萄糖(Glu)定性:阴性(neg)、糖定量:<2.8mmol/24小时(0.5g/24小时) 5.酮体(Ket)阴性(neg) 6.胆红素(Bil)和尿胆原(Ubg)均为阴性(neg) 7.亚硝酸盐(Nit)阴性(neg) 8.白细胞(Leu)<25/μl 9.红细胞或血红蛋白(潜血试验)(Ery或OB)≤l0/μl 10.尿沉渣镜检白细胞<5/HP(每高倍镜视野)红细胞<3/HP(每高倍镜视野)(三)粪常规 1.颜色黄褐色成型便 2.镜检 (1)白细胞:正常粪便不见或偶见; (2)红细胞:正常粪便无红细胞; (3)细菌:主要为大肠杆菌和肠球菌; (4)虫卵。 3.粪便潜血试验(occult blood test,OBT)正常粪便OBT阴性。 (四)痰液检验 一般性状检查正常人痰液呈无色或灰白色。 化脓性感染时呈黄色;

乳酸脱氢酶教案资料

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶,几乎存在于所有组织中。同工酶有六种种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4,可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 基本信息 英文名称: LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清135.0~215.0U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 乳酸脱氢酶A 简介 乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LDH 是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LDH几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中的活性普遍很高,所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。 LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主,LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主,LDH4次之。血清中LDH含量的顺序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5. 正常参考值 人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢,依次命名为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同,存在明显的组织特异性,人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多,而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从睾丸和精子中发现了LDHx,其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成,分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 正常参考值 (1)琼脂糖电泳法: LDH1(28.4±5.3)%; LDH2(41.0±5.0)%;

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氧酶有5种同工酶形式,即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5,可用电泳法进行分离。人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。脾、胰、甲状腺、肾上腺中LDH3较多。乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。 一、正常值 琼脂糖电泳法:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5 二、临床意义 (1)、乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。 (2)、LDH1和LDH2升高,且LDH1/LDH2>1见于:急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高,可排除溶血性贫血)。 (3)、LDH5升高:骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。 (4)、单纯LDH1升高:细菌性细胞瘤(如,畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。 (5)、总LDH升高而同工酶谱正常见于:心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。对部分癌症患者LDH值越高,预后越不良。

(6)、LDH2、LDH3及LDH4均升高:大量血小板破坏(如:肺栓塞、大量输血等)、淋巴系统疾病(如:传染性单核细胞增多症、淋巴瘤及淋巴性白血病等)。 三、注意事项 (1)、溶血可使LDH1/LDH2失去意义。 (2)、LDH同工酶分布有组织差异性。 ①LDH1:心肌(占酶总量50%以上)>肾>胰腺>膈肌>红细胞。 ②LDH5:肝(占酶总量50%以上)>皮肤>骨髓>关节滑液>白细胞>血小板>胆汁。 ③LDH3:肺>脾>脑>肠>淋巴液>内分泌腺。 ④LDHX(或LD-C2)由成熟睾丸合成,为精子独有,据认为LDHX很可能是乙醇脱氢酶。 ⑤LDH的H亚基突变频度比M亚基高,黑人比白人高且有家族性。H1和M1与H、M性质不同,故电泳谱上可出现复带。

血液生化检查各指标及对应正常值列表

血液生化检查各指标及对 应正常值列表 Prepared on 22 November 2020

血液生化检查各指标及对应正常值列表 (二氧化碳结合力) 2O~30 mmol/L (一氧化碳定性)(—) (a羟丁酸脱氨酶) 90~22O IU/L (磷酸肌酶激酶) 25~170 mmol/L (乳酸脱氢酶) 40~100 mmol/L (激肌酸激酶同功酶) 0~16 (血清白/球蛋白)~2-3g (高密度脂蛋白〕~ mmol/L (低密度低蛋白)~ mmol/L (极低密度脂蛋白) 1~3 mmol/L (C反应蛋白)(—) (免疫球蛋白)~ mg/ml (免疫球蛋白) 9~23 mg/ml (免疫球蛋白)~ ml (铁蛋白) 20~200 ng/ml (蛋白电脉) 3~ % (蛋白电脉)~ % (蛋白电脉)~ % (蛋白电脉)~ % (纤维蛋白原) 2~4g/L () 44~133 µmol/L

(肌酐清除率) 80~120 ml/分 (血糖)~ mmol/L (血淀粉酶) 40~160 U (补体)~L (抗链O) 1:400以下 (类风湿因子)(—) (肥达氏反应)(—) (外裴氏反应)(—) (癌胚抗原)<5mg 血生化 项目结果 ----------参考值---------- 谷丙转氨酶-ALT 0 ~ 40 U 尿素~ 7 mmol/L 血肌酐 40 ~ 130 umol/L 血尿酸 180 ~ 410 umol/L 胆固醇~ mmol/L 甘油三脂~ mmol/L 葡萄糖~ mmol/L 总胆红素 3 ~ 24 umol/L 项目谷丙转氨酶-ALT 临床意义正常时,谷-丙主要存在于组织细胞内,以肝细胞含量最多,心肌细胞中含量其次,只有极少量释放血中。所以血清中此酶活力很低。当、心肌病变、

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称:乳酸脱氢酶 英文名称:lactate dehydrogenase;LDH 定义:广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于L-乳酸; D-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于D-乳酸,两者均以NAD+为氢受体。在厌氧酵解时,催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢,形成乳酸。 应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);酶(二级学科) 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶(LDH)实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介

编辑本段基本信息 英文名称:LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清~L; 尿560~2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1](LD)分子量为135~140KD,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中的活性普遍很高,所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主,LD2次之;肺以LD3.LD4为主;骨骼肌以LD5为主;肝以LD5为主,LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.

血浆乳酸测定意义

全血乳酸(LA)测定在临床中的应用 急诊科苏中杰 【概况】:乳酸(Lactic acid, LA) 分子量90,是葡萄糖分子量的一半,是体内糖无氧代谢(糖酵解)的代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中生成。乳酸主要产生于骨胳,肌肉,脑和红细胞,经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供和代谢状态以及灌注量是否不足。 乳酸水平的生理性增高可见于剧烈运动所致的肌肉痉挛等,但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病,而与呼吸性碱中毒也有关联。 A型乳酸酸中毒:严重组织缺氧时发生,任何原因引起的组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。常见于休克、严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足(组织缺氧)。 B型乳酸酸中毒:组织缺氧存在但并不明显。包括: (1).药物引起者有:酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类(糖尿病药物)。 (2).疾病引起者有:糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙二酸在血中的堆积,导致严重到可引起死亡的代谢性酸中毒和酮症的一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合成的酶缺陷)、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸分解的疾病)、脓毒血症。 血浆乳酸的正常值为1.0士0.5mmol/L, <2mmol/L均可视为正常,大于此值即可诊断为“高乳酸血症”。在危重病人,虽然低灌注和缺氧是“高乳酸血症”的重要原因,但不是唯一的原因,儿茶酚胺分泌增加和碱中毒等也可因促进糖酵解而增加乳酸含量。此外,肝功能下降导致乳酸摄取减少也会造成血乳酸增加。由此可见,血浆乳酸水平可受许多非循环因素的影响,单纯的“高乳酸血症”并不足以判断外周灌注不足和缺氧。但在上述情况下,乳酸水平一般不会很高,往往<5mmol /L,称为“中度高乳酸血症”。同时由于缓冲系统通常是正常的,一般不会伴有酸

乳酸脱氢酶细胞毒性检测

产品简介: 产品编号产品名称产品包装产品价格 C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit),是一种基于diaphorase催化的INT显色反应,通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测,更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时,基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测,本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里,其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性,就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标,并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞,随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是,在乳酸脱氢酶的作用下,NAD+被还原生成NADH,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan),在490nm波长下产生吸收峰,从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下: 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单: 产品编号产品名称包装 C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml C0016-2 乳酸溶液2ml C0016-3 酶溶液1ml×2 C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml C0016-5 INT稀释液2ml —说明书1份 保存条件: -20℃保存,一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放,2-3天内有效。 注意事项: 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活,4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶,由于血清含有乳酸脱氢酶,建议血清的使用浓度不要超过1%,并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清,在检测时一定要设置没有细胞,但加入了相同体积培养液的对照孔,以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大,都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 【临床意义】 (1)心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍,尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时,血清LDH1和LDH2显著升高,约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1,且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病,出现心肌损害时,病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。 (2)脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时,只有血清同工酶谱的绝对值增高,而不影响同工酶的相互比值,如果累及脑干时,病人血清LDH1的含量也增高。 (3)急性心肌梗塞发病后12~24小时,血清LDH1也已升高。若同时测定LDH 总活性,可发现LDH1/总LDH的比值升高。早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的比值升高。对急性心肌梗塞诊断的阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。 (4)胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。 (5)急性肝炎,肝细胞损伤或坏死后,向血流释入大量的LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高,故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高,LDH4不增,LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5持续升高或下降后再度升高,则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人的血清LDH5.LDH4活性极高时,常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。 (6)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高,肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死(ATN)、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时,血清LDH5均可增高。 (7)肺含LDH3较多,肺部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等,LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3.LDH4常与LDH5同时升高。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1.LDH2下降,LDH4.LDH5升高。 (8)血清LDH总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH2<1)的病例,临床出现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等。 (9)肌营养不良病人肌肉中LDH1.LDH2明显增高,LDH5显著下降;而血清则相反,LDH1.LDH2明显减少,LDH4.LDH5显著,表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。 (10)恶性病变时LDH3常增高。

血浆乳酸测定意义

全血乳酸(LA)测定在临床中得应用 急诊科苏中杰 【概况】:乳酸(Lactic acid, LA) 分子量90,就是葡萄糖分子量得一半,就是体内糖无氧代谢(糖酵解)得代谢终产物。主要由葡萄糖通过糖酵解途径在细胞浆中生成。乳酸主要产生于骨胳,肌肉,脑与红细胞,经肝脏代谢后由肾脏分泌排泄。血乳酸测定可反映组织氧供与代谢状态以及灌注量就是否不足。 乳酸水平得生理性增高可见于剧烈运动所致得肌肉痉挛等,但病理性增高则最常见于乳酸性酸中毒等多种临床疾病,而与呼吸性碱中毒也有关联。 A型乳酸酸中毒:严重组织缺氧时发生,任何原因引起得组织缺氧将导致A型乳酸酸中毒发生。常见于休克、严重哮喘、一氧化碳中毒、心衰、局域性血流灌注不足(组织缺氧)。 B型乳酸酸中毒:组织缺氧存在但并不明显。包括: (1)、药物引起者有:酒精中毒、阿斯匹林、氰化物、双呱类(糖尿病药物)。 (2)、疾病引起者有:糖尿病、恶性肿瘤、肝脏疾病、甲基丙二酸血症(由于甲基丙二酸在血中得堆积,导致严重到可引起死亡得代谢性酸中毒与酮症得一类先天性代谢性疾病)、糖原酶缺陷(影响糖类合成得酶缺陷)、脂肪酸氧化缺陷(影响脂肪酸分解得疾病)、脓毒血症。 血浆乳酸得正常值为1、0士0、5mmol/L, <2mmol/L均可视为正常,大于此值即可诊断为“高乳酸血症”。在危重病人,虽然低灌注与缺氧就是“高乳酸血症”得重要原因,但不就是唯一得原因,儿茶酚胺分泌增加与碱中毒等也可因促进糖酵解而增加乳酸含量。此外,肝功能下降导致乳酸摄取减少也会造成血乳酸增加。由此可见,血浆乳酸水平可受许多非循环因素得影响,单纯得“高乳酸血症”并不足以判断外周灌注不足与缺氧。但在上述情况下,乳酸水平一般不会很高,往往<5mmol/L,称为“中度高乳酸血症”。同时由于缓冲系统通常就是正常得,一般不

6、常用检验正常值

6、常用检验正常值

常用检验项目正常值 临床血液检查 检验项目符号 正常参考值 法定单位换算旧制单位 血红蛋白HB 男120~160g/L 女110~150 g/L 新生儿170~200 g/L 10 12~16g/dl 11~15 g/dl 17~20 g/dl 红细胞RBC 男(4.0~5.5)×1012 /L 女(3.5~5.0)×1012 /L 新生儿(6~7)×1012 /L 100 400万~550万/mm3 350万~500万/mm3 600万~700万/mm3 白细胞WBC 成人(4~10)×109 /L 儿童(5~12)×109 /L 新生儿(15~20)×109 /L 1000 4000~10000/ mm3 5000~12000/ mm3 15000~20000/ mm3 白细胞分类中性粒细胞 杆状核 分叶核 嗜酸粒细胞嗜碱粒细胞单核细胞 淋巴细胞DC N E B M L 0.01~0.05 0.50~0.70 0.005~0.05 0~0.01 0.03~0.08 0.2~0.4 新生儿~婴儿期 0.4~0.8 1%~5% 50%~70% 0.5%~5% 0%~1% 3%~8% 20%~40% 40%~80% 血细胞比容HCT 男0.42~0.49L/L;女0.37~0.43L/L 100 42%~49%;37%~43% 平均红细胞体积MCV 82~95fL 平均红细胞血红蛋白 含量 MCH 27~31pg 平均红细胞血红蛋白 浓度MCH C 320~360g/L 网织红细胞 百分计数绝对计数RC 成人0.005~0.015 儿童0.005~0.015 新生儿0.03~0.06 (24~84) ×10 9 /L 1000 24000~84000/ mm3 红细胞沉降血沉ESR 男0~15mm/h 女0~20mm/h 出血时间测定 测定器法Duke法BT 6.88±2.08min 1~3min

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase ,LDH)是存在于细胞浆内的一种酶,乳酸脱氢酶在生命体中糖代谢中扮演重要角色。 在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地方: 1、存在于活细胞内。若你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells),那么贴在壁上的就是活细胞,此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内,所以测得贴壁细胞中的乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中活细胞的量,我们称之为LDHV。 2、存在于漂浮于培养液中的凋亡小体(Apoptotic bodies)。由于凋亡小体有细胞膜,因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没有释放到胞外。此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量,我们称之为LDHa。 3、存在于培养液中。坏死的细胞(Necrosis)胞膜破裂乳酸脱氢酶释放,分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中坏死细胞(necrotic cell)的量,我们称之为LDHn。 那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细胞损伤的程度。 凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。 因为即使我们每次埋板的细胞数相同,但是由于细胞生长受多方面影响,所得的细胞数量也不一样,所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不一样,所以不能单纯通过测上清中LDH的量或测细胞总LHD来评估细胞受损的程度,而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程度是比较符合实际。 另附简要操作:吸取细胞培养瓶中液体置离心管中离心,离心后沉淀于管底的是凋亡小体,上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋亡小体和贴附于培养瓶壁上的细胞破膜即可测定凋亡小体和活细胞的LDH.

积液乳酸脱氢酶

积液乳酸脱氢酶 文章目录*一、积液乳酸脱氢酶的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、积液乳酸脱氢酶的 正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、积液乳酸脱氢酶的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、积液乳酸脱氢酶的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、积液乳酸脱氢酶的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应 积液乳酸脱氢酶的基本信息 1、定义乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机 体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是 能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功 酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、 LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊 断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。LDH几乎存在于所有 组织中,人体以肾脏食量最高,心肌、骨骼肌、肝、红细胞依次减少。积液中的乳酸脱氢酶较有诊断意义。 2、专科分类呼吸

3、检查分类胸腹水检查 4、适用性别男女均适用 5、是否空腹非空腹 积液乳酸脱氢酶的正常值和临床意义 1、正常值血清 100-300U/L; 尿 560-2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 2、临床意义异常结果: 渗出液中LD以化脓性感染积液活性最高,均值可达正常血清的30倍,其次为癌性积液,结核性积液略高于正常血清。炎症或充血性心功能不全胸腔积液时,LD活性可和血清活性相似。癌性胸腔积液LD活性则约为患者自身血清LD活性的3.5倍,而良性积液约为其自身血清LD活性的2.5倍,有助于鉴别诊断。 Light曾提出浆膜腔积液中LD200U/L,积液LD/血清LD比值0.6可作为渗出液的指标。急性心肌梗塞发作后,早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的比值升高。肝炎、急性肝细胞损伤及骨骼肌损伤时LDH5都会升高。患活动性风湿性心脏病、急性病毒性心肌炎、溶血性贫血、肾坏死等病LDH1也可升高。

常规化验及正常值

血液一般检查 1:白细胞计数(WBC)(参考值:4~10),(单位:10^9/L) 2:红细胞计数(RBC)(参考值:3.5~5.5),(单位:10^12/L) 3:血红蛋白浓度(HGB)(参考值:120~160),(单位:g/L) 4:红细胞压积(HCT)(参考值:40~48),(单位:%) 5:平均红细胞体积(MCV)(参考值:80~97),(单位:fL) 6:平均红细胞血红蛋白含量(MCH)(参考值:26.5~33.5),(单位:pg)7:平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)(参考值:300~360),(单位:g/L)8:血小板计数(PLT)(参考值:100~300),(单位:10^9/L) 9:淋巴细胞比值(LY%)(参考值:17~48),(单位:%) 10:单核细胞比例(MONO%)(参考值:4-10),(单位:%) 11:中性粒细胞比例(NEUT%)(参考值:43~76),(单位:%) 12:淋巴细胞计数(LY)(参考值:0.8~4.0),(单位:10^9/L) 13:单核细胞计数(MONO)(参考值:0.3~0.8),(单位:10^9/L) 14:中性粒细胞计数(NEUT)(参考值:1.2~6.8),(单位:10^9/L) 15:红细胞分布宽度(参考值:11~14.5),(单位:%) 16:血小板体积分布宽度(PDW)(参考值:9~18),(单位:%) 17:平均血小板体积(MPV)(参考值:7.4~12.5),(单位:fL) 18:大血小板比例(P-LCR)(参考值:10~50),(单位:%)

肝功能基本项目与参考值 ALT(谷丙转氨酶)5~40 AST(谷草转氨酶)0~40 AST/ALT(谷草/谷丙)0.80~1.50 GGT(谷氨酰转移酶)7~32 ALP或AKP(碱性磷酸酶)53~128 TBILI(总胆红素) 5.1~19.0 DBILI(直接胆红素:结合胆红素)0.0~5.1 IBILI(间接胆红素) 5.0~12.0 TP(总蛋白)60~80 ALB(白蛋白)40~55 GLB(球蛋白)20~30.0 A/G(白球比)(1.5~2.5):1 LDH-L(乳酸脱氢酶)109~245

血清乳酸脱氢酶LDH测定

血清乳酸脱氢酶LDH测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目,确保检测结果的准确。 2 实验原理 LDH催化乳酸氧化为丙酮酸,同时将NAD+还原为NADH, LDH NADH的生成速率与标本中乳酸脱氢酶的活力成正比。 L-乳酸 + NAD+丙酮酸 + NADH + H+ 3 标本: 3.1 病人准备:无特殊。 3.2 类型:血清或EDTA血浆。 3.3 标本存放:3天内的活性损失:2~8℃保存:<8%;15~25℃保存:<2%。 3.4 标本运输:常温条件下保存运输。 3.5 标本拒收标准:标本溶血、细菌污染的标本。 4 实验材料

4.1 试剂:上海复星长征医学科学有限公司LDH试剂盒(沪 食药监械(准)字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014)4.1.1 试剂组成 氯化钾 190mmol/L 试剂1(R1)乳酸 62.5mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 试剂2(R2)NAD+ 30mmol/L Tris缓冲液 100mmol/L 4.1.2试剂准备试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存:2~8℃避光、密封的储存条件下, 试剂(盒)自生产之日起有效期为12个月。试剂1 与试剂 2 启用后,在2~10℃避光的条件下可稳定14天。 4.1.4 变质指示当试剂有看得见的微生物生长,有浊度, 或者未开盖的液体有沉淀时,表明试剂已变质,不能继续使用。 4.1.5 注意事项试剂中含叠氮钠为防腐剂。不可入口!避 免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。

4.2 校准品:使用上海复星长征医学科学有限公司提供的LDH校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品:使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器 AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备:将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测:仪器开机后,检查各种试剂的位置,体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤:参见生化检验AU2700生化分析仪,罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪,东芝TBA-120生化分析仪操作规程。

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