综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定
芦丁简介:
芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophora japonica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。
中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。
芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。
补充知识:
关于苷（gān）和甙(dài): 苷类（glycosides，旧称甙）又称配糖体，是糖或糖的衍生物的半缩醛羟基与另一类非糖物质中的羟基以缩醛键（甙键）脱水缩合而成的环状缩醛衍生物，水解后能生成糖与非糖化合物。目前国际上通用“苷”如“皂苷”，而过去习惯使用的中文名称“甙”目前已不再使用如“皂甙”现统称“皂苷”。
一、目的要求：
1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。
2、掌握化学鉴别试验、苷水解、衍生物制备、熔点和薄层层析检测等手段在苷类结构鉴定上的作用。
3、通过UV、IR、HNMR和MS图谱解析，了解光谱方法黄酮类化合物结构鉴定中的作用。
二、已知重要成分性质：
1. 芦丁（rutin）：分子式C27H30O16·3H2O，为浅黄色针状结晶物，mp174～178℃（含三分子水）；100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，115～117℃软化，214～215 ℃发泡分解。难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、二硫化碳、苯等，易溶于吡啶，甲酰胺特别是碱液。通常常用的溶剂下其溶解情况为：较难溶于冷水（1：8000～10000），冷乙醇（1：650）；可溶于热水（1：180～200）以及冷甲醇（1：100）；较易溶于热乙醇（1：60）和热甲醇（1：10）。
2. 槲皮素（quercetin）为芦丁的苷元其分子式为：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。一般在碱水中溶解显黄色。
3. 皂苷（saponin ）一般为白色粉末，mp 210℃～220℃。易溶于吡啶。能溶于甲醇（1：200），可酸水解得下列两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。
（1）白桦酯醇（betulin ）无色针晶，mp215～220℃，能溶于醋酸，丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯等；难溶于石油醚和水。
（2）槐花二醇（sophoradiol ）无色针晶，mp219~ 224℃，溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇、难溶于水。
HO CH 2OH
HO
OH
（1）
（2）
芦丁属于黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，因此可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱等可进行黄酮及糖的鉴定。芦丁酸性条件下水解的过程见下反应方程式：
O HO OR OH OH R=glu rha 芦丁R=OH 槲皮素
三、提取分离和纯化
注1：硼砂因能与芦丁结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用，实验证明，提取时加入硼砂，产品质量要好些。
注2：加石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐花米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但pH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的降解。
注3：pH过低会使芦丁形成锌盐而降低收率。
四、芦丁的鉴定
定性反应鉴别见附录。
（一）芦丁的酸水解
烧瓶中
H2SO4 200ml
1小时
沉淀
中和冷水洗两次，干燥
用95%乙醇25 ml重结晶
中性滤液，结晶时可加入冷水20 ml，
最后称重，计算收率。
浓缩
黄色细针状结晶
浓缩液（槲皮素）
（供糖的鉴定）
（二）糖的鉴定（纸色谱法）
纸层析鉴定：采用中速层析滤纸（裁剪尺寸：5×20 cm）取水解母液20 ml，于水浴上加热，同时于搅拌下加BaCO3细粉中和至中性，过滤去多余BaCO3后，滤液浓缩至2~3 ml，得样品液供纸色谱点样用。
标准对照品：以葡萄糖和鼠李糖标准品作对照（1％葡萄糖标准品醇溶液及1％鼠李糖标准品醇溶液）。
展开剂：正丁酵-醋酸-水（BAW）（4：1：5）上层，悬挂并利用上层展开剂纸色谱分离。
显色剂：苯胺以及邻苯二甲酸混合试液，喷后105℃烘10分钟。显棕红色斑点。
注意事项:纸层析展开时可事先用铅笔在裁剪好的层析纸上画出展开起点(即点样的位置)和预制终点(即展开完毕后展开液的前沿)，这样方便进行测量计算比移值。另外由于糖液一般无色，因此点样位置也可事先用铅笔点出标记，注意如果糖液浓度过低（实验时应尽量将糖液蒸发浓缩至3毫升以内）则应多次点样以达到浓集的目的，否则展开后的点不够明显。点样时也需要注意点样液斑不易扩散太大，应控制液斑直径在3 mm以内，同时各点样点之间应尽量保持距离不可过于靠近，否则展开后可能得到较大的样班，而且不同样斑之间可能重合相互干扰而不易测量比移值。下图给出正确的纸层析法标示。
（三）芦丁和槲皮素的薄层层析鉴定
吸附剂：硅胶G（400目）以0.4 % 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）水液作为粘合剂制薄层层析板，板片自然阴干后于烘箱中100 ℃活化1小时。
展开剂：（1）CHCl3-MeOH-HCOOH（15：5：1）
（2）CHCl3-丁酮-HCOOH（5：3：1）
显色剂：1% 的FeC13和1% 的K3[Fe（CN）6]水溶液，使用时等体积混和。
注意：薄层层析点样注意事项依照纸层析
五、实验说明及注意事项
1．用石灰水调节芦丁提取溶液的pH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮结构在强碱性条件下易被破坏。
2．调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低（pH 2以下）会使芦丁形成钅羊盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
3．注意观察槲皮素制备过程中的实验现象。
六、思考题
1．苷类结构检识的一般程序？
2．苷类水解的催化方法？
3．怎样确定芦丁结构中糖基是否联结在槲皮素3-O位上？
4．怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？
5．UV在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
附录：芦丁的定性检测
1．芦丁的定性反应
取芦丁适量，加乙醇使溶解，分成三份供下述试验用：
(1)盐酸镁粉试验：取样品液适量，加2滴浓HCl、再酌加少许镁粉，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。
(2)锆-枸试验：取样品液适量，然后加2％ZrOCl2的甲醇溶液，注意观察颜色变化，再加入2％枸椽酸的甲醇溶液，并详细记录颜色变化。
(3)α-萘酚-浓硫酸反应：取样品液适量，加等体积的l0％α-萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁缓加浓硫酸，注意观察两液界面的颜色。
2．芦丁的UV
(1)鉴定试剂的配制
①甲醇钠溶液：取0.25g金属钠，切碎，小心加入色谱甲醇10 ml中，此液置于玻璃瓶中，用橡皮塞密封。
②三氯化铝溶液：取1g无水三氯化铝，小心加入色谱甲醇20 ml中，放置24小时后全部溶解即得。
③醋酸钠：用无水粉末醋酸钠。
④⑤硼酸饱和溶液：取无水硼酸，加入适量色谱甲醇、制成饱和溶液。
（上述贮备液可放置六个月）
（2）芦丁溶液的配制
精密称取芦丁纯品0.5g，用甲醇适量溶解至50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。
（3）光谱的测定
①甲醇光谱：取样品液置石英杯中，至200～500 nm内进行扫描，重复一次，观察紫外光谱。
②甲醇钠光谱：取样品液置石英杯中，加入甲醇钠溶液3滴后，
立即测定，放置5分钟后再测一次。
③三氯化铝光谱，在盛有样品液的石英杯中，加入三氯化铝6滴，放置1分钟后进行测定。测定后加入3滴盐酸溶液（盐酸：水＝1：1）再进行测定。
④醋酸钠光谱：取样品液约3 ml，加入过量的无水醋酸钠固体，摇匀（杯底剩有约2 mg的醋酸钠），加入醋酸钠后两分钟内测定，5分钟到10分钟后再测定一次。
3．芦丁及槲皮素的色谱
支持剂：中速层析滤纸（5×20 cm）
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层
样品：自制槲皮素的乙醇溶液
自制芦丁的乙醇溶液
对照品：槲皮素标准品的乙醇溶液
芦丁标准品的乙醇溶液
显色剂：三氯化铝乙醇溶液喷雾
预习报告及实验报告格式和要求：
预习报告：
1、实验目的
2、实验原理
3、实验步骤：
（1）要求将实验内容分拆，并画出流程图
（2）要求写明各试剂的用途和各步骤的目的和实验原理
4、回答指导教师提出的问题
实验报告：
实验报告一律每班用一样大小软皮本，正面写实验报告，背面写实验记录，上课前交预习报告和上一次的实验报告（预习报告和实验报告写一份即可）。
组号同组人（预习报告完成）
天气情况实验室温度湿度（预习报告完成）
1、实验目的（预习报告完成）
2、实验原理（预习报告完成）
3、实验步骤：
（1）要求将实验内容分拆，并画出流程图（预习报告完成）（2）要求写明各试剂的用量和加入时间（实验报告完成）（3）要求写明各试剂的用途和各步骤的目的和实验原理（实验
报告完成）
4、实验数据
5、描述实验结果
6、对实验数据进行处理和分析，并分析实验结果的合理性。（实验后完成）
7、回答讲义后思考题
槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图：
2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文 芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言 随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1
实验二芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求 实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定 芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。 中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。 芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 补充知识:
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1.芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定 一、概述 槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。 药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。 主要化学成分的结构及理化性质： 芦丁（rutin）：C 27H 30 O 16 ·3H 2 O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子 水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C 15H 10 O 7 ·2H 2 O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结 晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 二、实验部分 （一）实验目的 1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。 2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。 3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。 （二）实验原理 1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。 2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。 3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。 （三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：槐米50g(每组)。
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别 一、实验目的 （1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 （2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 二、实验原理 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下： 水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。 三、实验内容 （一）芦丁(芸香苷)的提取 1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇， 较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。[实验原理] 芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 [实验内容] 一、芦丁的提取分离及精制 方法⑴ 500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9 滤液 药渣 10分钟，维持pH8～9 pH 至4 ～5 沉淀 低温（80℃）干燥，称重。按1：200的比例加水， 加热使溶解，趁热滤过 滤液 静置，抽滤，减压干燥，计算收率 芦丁精制品
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一） 一、实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 二、实验原理 芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。 本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 三、药品材料 槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸 四、实验操作 芦丁的的提取和精制 芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持
PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60
℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。 五、实验说明及注意事项 1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9，不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。 2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二） 一、实验目的 1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。 2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。 二实验原理
芦丁的提取分离和鉴别 槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。味苦性凉，入肝、大肠经。具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。 一、实验目的： 1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法； 2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。 二、仪器与试药 （一）仪器 SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器 圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药 槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉 α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品 甲酸丙酮 三、主要成分的结构与性质：
* 皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中， 酸水解得上述两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。 R=H 槲皮素 R=–glu –rha 芦丁 白桦脂醇 槐花二醇 四、实验原理： 1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。 2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。 五、实验内容 O O RO OH OH O H O H O H CH 2OH O H OH
实验一 芦丁的提取、精制与鉴定 一、实验目的与要求 l 、以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法； 2、掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷，苷元和糖部分的鉴定方法。 R=-glu-rha 芦丁 R=H 槲皮素 芦丁溶解度：冷水1：8000 热水1：200 冷乙醇1：300 热乙醇1：30 难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、及石油醚等溶剂。 槲皮素溶解度：冷乙醇1：650 热乙醇1：60 可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、 乙醚、氯仿和水中。 二、实验原理 本实验是利用芦丁在热水中和冷水中溶解度相差较大的性质，用热水提取和 精制；芸香苷属于苷类化合物，可被稀酸水解成槲皮素（苷元），葡萄糖和鼠李 糖。芦丁和槲皮素通过化学反应，色谱法和光谱分析进行检识与鉴定。 三、实验内容 （一）提取分离和纯化 l 、芦丁的提取： 2、精制（重结晶）： 3、芦丁的水解： O O OH OH OR OH HO
流程图如下： 槐米（20g ） 研碎，于500ml 烧杯中， 加350，250ml 水煮沸15min,10min 棉花过滤 150ml ，1%H 2SO 4 直火加热水解30min 放置 1-1.5h ，抽滤 精品芦丁 （水浴浓缩至2ml ） (二)鉴定 l 、化学检识 取芦丁和槲皮素少量，置2支试管中分别加乙醇8ml 使溶解 (1)盐酸—镁粉反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加浓 盐酸5滴，再加少量镁粉，观察颜色变化。 (2)Molish 反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加10%α —萘酚0.5ml 摇匀，倾斜试管，沿管壁缓缓滴加浓硫酸0.5ml ，静置，观察二层 溶液界面处颜色变化，并比较芦丁和槲皮素的区别。 (3)FeCL 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯 化铁乙醇液几滴，观察颜色变化。 (4) AlCl 3反应：取芦丁和槲皮素乙醇液0.5ml ，置2支试管中分别加1%三氯 化铝乙醇液几滴，先置可见光下观察后，置紫外灯下观察颜色变化。
槐米中芦丁的提取、纯化和鉴定 摘要:芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 关键词:芦丁提取纯化鉴定 Ａbsｔract: ruｔin ａs flaｖoｎoｉd gｌyｃosiｄｅｓ,witｈｐｈe ｎｏlic hydｒoｘyl groｕｐs in mｏｌeculeｓ, acid，soｌuｂle in ｄiluｔe ｌｙe，ｐrecipｉtateｄｉn theａcid，canｕse tｈe ｐｒｏｐeｒｔiｅs oｆeｘtraｃtion and separａｔiｏn. Solubｌe ｒｕtｉｎｕsing hｏt waｔｅr, hｏt etｈａｎol and difｆicuｌｔｔo soｌuble ｉn ｃｏlｄwａter, cold etｈａｎｏｌnatuｒｅｏｆseleｃting recｒｙsｔalｌiｚation meｔhod fｏｒrefiｎiｎｇ．Ｒutin ｑｕercｅtin ｃan bｅgeneｒａtｅd ｂy dilｕte ａcｉd hydrｏlysiｓaｎd the gｌucose,rhamnoｓe, ｉn accordａnｃｅwith the ｐrepａration ｏf queｒcｅtin. Bｙｐａper cｈromatoｇｒaphy and ｕｌtraｖiolet sｐｅctroｓcopy identifｉｃation ｏf fｌａvonoｉｄs ａnd suｇaｒ. Keｙwｏrds：identificａtiｏn of ｒutiｎextrａctioｎａnd purification 二)实验的基本原理 １.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定 实验一预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。 实验二产品的精制:重结晶；苷的水解。 实验三苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。
槐花米中芦丁的提取分离与鉴定 （一）预试；苷的碱提取，酸沉淀；薄层层析铺板。 （二）产品的精制:重结晶；苷的水解。 （三）苷、苷元的定性鉴定；甙、甙元的TLC鉴定；糖的纸层析鉴定。 教学目的：1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法。 2．掌握化学鉴别试验、苷水解、薄层层检查等手段在苷类结构鉴定上的作用。 已知重要成分及其性质 1．芦丁（芸香苷，rutin） 淡黄色针晶，水中结晶者含3分结晶水，C27H30O16·3H2O 100mmHg和110℃加热12小时后，变为无水物，无水物于25℃变棕，115～7℃软化，214～5℃发泡分解，1g芦丁溶于约300ml冷水，200ml沸水，7ml沸甲醇，溶吡啶，甲酰胺和碱液，微溶于乙醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿，二硫化碳、乙醚、苯和石油醚。 2．槲皮素（Guereetin） 为芦丁的苷元，C15H10O7，MW302.23；含二分子结晶水为黄色针晶，（稀乙醇），5～7℃失水，314℃解，1g溶于290ml无水乙醇、23ml沸乙醇，溶于冰醋一般在碱水中溶解显黄色，几不溶于水。 O HO OR OH OH R=glu rha芦丁 R=OH槲皮素 3．皂苷（Saponin） 粗品为白色粉末，mp 210℃～20℃（dec）。易溶于吡啶。能溶于200倍的甲醇，酸水解得下列两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。 （1）白桦酯醇（Betulin）无色针晶，mp215～2℃，能溶于醋酸，丙酮、醋
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定 一、实验目的 1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。 2．掌握重结晶及过滤等基本操作。 3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。 二、实验原理 芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。 芦丁在不同溶剂中的溶液度：
芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。 槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。 槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点 313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为 4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下： 槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ， 359nm。 三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
河南理工大学 天然产物的分离与纯化实验 专业班级 学号 姓名 准备教师斯琴格日乐 指导教师斯琴格日乐 时间 2010-2011年第2学期
目录 讲义内容： 实验一小檗碱的提取、精制、鉴定及含量测定--4学时实验二黄酮化合物芦丁的提取、分离和鉴定----4学时实验三阿魏酸的提取、分离和鉴定-----------4学时报告内容： 预习报告 实验报告
实验二黄酮化合物芦丁的提取、分离和鉴定 一、目的要求 1、通过芦丁的提取与精制掌握超声波法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、掌握高效液相法分析黄酮类化合物 二、重点难点 3、芦丁的提取方法：超声波法提取黄酮类化合物的原理及操作。 4、掌握HPLC法 三、学时 4学时 四、实验原理 高效液相色谱法（HPLC）是在20世纪60年代末期，在经典液相色谱法的基础上发展起来的新型分离方法。高效液相色谱法中反相色谱在测定黄酮含量中扮演着中心角色，它是基于溶质在极性流动相和非极性固定相表面之间的疏水效应建立的一种色谱模式。应用反相HPLC分析黄酮类化合物，一般优先选甲醇-水体系为流动相。为了提高分离度，常常需要梯度洗脱。由于黄酮类化合物常带有酚羟基，在水中会部分解离，而未解离的羟基与固定相作用较强，从而导致拖尾。所以黄酮类化合物的反相HPLC中需加入酸如乙酸调节PH，抑制解离，克服拖尾现象。本研究以芦丁为对照品，通过高效液相来测定怀菊花的黄酮含量。五、仪器与试剂 怀菊花，HPLC，超声提取器，医用离心机，真空泵，芦丁标准品，甲醇为色谱纯，乙醇为分析纯等。. 六、方法 色谱柱:C 柱(4.6mm X50mm,5μm,)；流动相:甲醇-0.2%冰乙酸(25:75)；流速:0.50mL·min-1; 检测波长: 18 ；在此条件下测得黄酮含量的色谱图。 260nm；柱温:250C;进样量为L 10 七、实验内容 1.对照品溶液的配制 分别精密称取芦丁对照品10mg，用30%乙醇溶解，置100ml棕色容量瓶里，加30%乙醇配制成浓度为0.1mg·mL-1的对照品溶液；然后从0.1mg·mL-1的对照品溶液分别取2mL，4mL，6mL，8mL，10mL置50mL棕色容量瓶中，加30%乙醇配制成4ug·mL-1，8ug·mL-1，12ug·mL-1，16ug·mL-1，20ug·mL-1的标准溶液，备用。2．样品溶液的制备 原料的预处理:选取市售怀菊花若干，洗净，晾干，之后放入电热鼓风干燥箱60℃的条件下烘干，烘干之后，然后用搅碎机搅成粉末，研磨，过筛，备用。 准确称取怀菊花0.2g，放在具塞锥形瓶中,加4mL浓度为70%的乙醇，密塞，超声提取1h，放冷，在离心机离心30min，将上清液在真空抽滤机下过滤，再用0.45μm 微孔滤膜滤过，取过滤液,定容至50ml 容量瓶，备用。 3.空白试验 取对照品溶液、供试品溶液及空白对照溶液各10μl,依法测定,结果表明,空白样品中有无干扰。 4.线性关系的考察 以上述4ug·mL-1，8ug·mL-1，，12ug·mL-1，，16ug·mL-1，，20ug·mL-1，的标准溶液为横坐标（X），以峰面积为纵坐标(Y)进行线性回归，得方程为y=33.29x-8.284，r=0.9993，结果表明线性关系良好。 浓度ug·mL-1， 4 8 12 16 20 峰面积119 254 386 525 662 5、精密度试验 以上述4ug·mL-1，，8ug·mL-1，，12ug·mL-1，，16ug·mL-1，，20ug·mL-1，的标准溶液，按上述色谱条件测定，每次进样10uL，重复进样6次，结果封面积的RSD小于5%，说明精密度良好。 6、稳定性试验 精密量取供试品溶液10uL，分别在1h，2h，3h，4h，6h，8h，10h，12h，24h进样，测定峰面积，在24h内其RSD小于5%，说明样品的稳定性好。
槐米中芦丁的提取、纯化和鉴定 摘要：芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 关键词：芦丁提取纯化鉴定 Abstract: rutin as flavonoid glycosides, with phenolic hydroxyl groups in molecules, acid, soluble in dilute lye, precipitated in the acid, can use the properties of extraction and separation. Soluble rutin using hot water, hot ethanol and difficult to soluble in cold water, cold ethanol nature of selecting recrystallization method for refining. Rutin quercetin can be generated by dilute acid hydrolysis and the glucose, rhamnose, in accordance with the preparation of quercetin. By paper chromatography and ultraviolet spectroscopy identification of flavonoids and sugar. Keywords: identification of rutin extraction and purification 二）实验的基本原理 1.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。 3芦丁的鉴定原理 （1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。
芦丁的提取与鉴定 一、实验目的要求 1、熟悉黄酮类化合物的提取原理。 2、掌握芦丁的提取的基本方法。 二、实验重点和难点 芦丁的提取的基本方法。 三、实验原理 芦丁亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，其中以槐花米（槐树的花蕾）和乔麦叶中含量较高。槐花米中的含量为12～16％，已知的成分为： 1、芦丁：熔点为177～178℃，为淡黄色小针状结晶。溶解度为：冷水中1：8000，热水中1：200，冷乙醇中1：300，热乙醇中1：30。难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。 2、槲皮素（Quercetin）：熔点为316℃，313～314℃，黄色结晶。溶于热乙醇1：60、冷乙醇1：650，可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。 3、皂苷：其粗品为白色粉末，经酸水解后得二种皂甙元及糖的部分，两种皂苷元为桦脂醇和槐花双醇，另外还含有槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。 本实验用芦丁在热水冷水溶解度差别较大的性质，用热水提取，然后再利用其在热乙醇和冷乙醇中溶解度的差异，进行精制。 四、实验仪器、试剂与材料 1、仪器：棉花、500ml烧杯、1000ml烧杯、电热套、漏斗、架盘天平、真空泵、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、剪刀、冷凝管、蒸馏烧瓶、乳胶管、研钵、量筒、容量瓶、试管、紫外分析仪、层析缸、聚酰胺酯薄层板。 2、试液： （1）4mol/L硫酸溶液：取硫酸24ml，边搅拌边加入60ml水中，放冷，加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （2）1％三氯化铝乙醇溶液：取三氯化铝1g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 （3）0.1mol/L硝酸银试液：取硝酸银1.75g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 （4）10％氨试液：取氨10ml，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 3、试剂与材料：槐米、芦丁对照品、乙醇、硫酸、碳酸钡、盐酸、镁粉、醋酸铅、α-萘酚、正丁醇、醋酸、三氯化铝、硝酸银、氨水、氯仿、甲醇、丁
槐米中芦丁的提取、分离和鉴定 张景清 （广西科技大学生物与化学工程学院广西柳州545006） 1.摘要:本实验以槐米为原料，采用碱提酸沉法从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。该方法提取率高达26.3%，对提取的芦丁做了薄板识别及紫外分析，并与标准品做对比，结果表明提取的芦丁与标准品的纯度大致相等。 2.引言 芦丁,亦称芸香苷,广泛存在于植物界中,现已发现的含芦丁的植物有50种以上,其中以槐米和荞麦叶中含量最高,可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于黄酮类化合物,在心脑血管疾病的治疗上起到了举足轻重的作用,具有VP样作用。有助于保持毛细血管正常弹性,同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其临床效果肯定,副作用少,同时也是一种植物原料药[1]。黄酮类化合物的提取方法较多主要是依据其溶解性及酸性。黄酮类化合物的提取方法一般有：①热水提取法②醇提法③碱提酸沉法④系统溶剂提取法本实验碱提酸沉法通过从槐米中提取芦丁，使我们学习和掌握提取和精制芦丁的具体操作方法，并了解如何对黄酮类化合物鉴定。 3.实验原理 槐米中含芦丁、槲皮素、皂苷、白桦、酯醇等多种成分。芦丁是其主要成分，含量为16%-25%。芦丁属于黄酮类化合物，结构中含有多个酚羟基，呈酸性，苷元为槲皮素，糖基为芸香糖。芦丁为浅黄色细小针状结晶，95-97℃脱水，熔点314℃，可溶于沸乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、丙酮，不溶于石油醚和水。芦丁可溶于碱液中，呈黄色酸化后又析出，故可采用碱提酸沉法得到芦丁产品。然后利用在冷水中不溶，在热水中微溶的溶解度差精制，可获得纯度高的微细针状结晶，最后利用芦丁、槲皮素、及糖的性质予以鉴定。 4.实验部分 4.1实验药品 槐米（市售），氧化钙AR（西陇化工股份有限公司），盐酸AR（西陇科学有限公司），四硼酸钠AR（广东省台山市化工厂），甲醇AR（天津市大茂化学试剂厂），三氯甲烷AR（成都市科隆化学品有限公司）,氯仿（分析纯，成都市科龙化工试剂厂），乙醇（分析纯）