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透明质酸(HA)elisa定量检测试剂盒的操作步骤

透明质酸(HA)elisa定量检测试剂盒的操作步骤

透明质酸(HA)elisa定量检测试剂盒的操作步骤

透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒等抚生生物ELISA试剂盒间接法简单操作步骤:

?(1)、将特异性抗原与固相载体联结,形成固相抗原;

?(2)、加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体与固相抗原结合,形成固相抗原抗-体复合物;

?(3)、加酶标抗抗体;

?(4)、加入酶促反应底物,发生显色反应,显色的深浅与待测抗体的量成正比。

?透明质酸(HA)ELISA检测试剂盒操作步骤:

?1、加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

?2、温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

?3、配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

?4、洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此

?重复5次,拍干。

?5、加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。

?6、显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断。 人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA) 使用说明书 【试剂盒名称】 人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA) 【试剂盒用途】 定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子(VEGF)的含量。【检测原理】 本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法(ELISA)。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子(VEGF))多克隆抗体透明酶标包被板中,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分,再加入酶标工作液,温育足够时间后,洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根过氧化物酶(HRP)催化下转化为蓝色产物,在酸的作用下变成黄色,颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子(VEGF))浓度呈正相关,450nm波长下测定OD值,根据标准品和样品的OD值,计算样本中人血管内皮细胞生长因子(VEGF))含量。 【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品:1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个 备注:标准品用标准品稀释液依次稀释为:1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸 【操作步骤】 1、准备:从冰箱取出试剂盒,室温复温平衡30分钟。 2、配液:用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本:取足够数量的酶标包被板,固定于框架上,分别设置标准品孔、

elisa试剂盒

elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM 抗体ELISA检测。 目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点 一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。

大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书

大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒 使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。ELISA法 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板:一块(96孔) 2. 标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上, 然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为180 ng/ml,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成180 ng/ml,90 ng/ml,45 ng/ml,22.5 ng/ml,11.25 ng/ml, 5.63 ng/ml,2.82 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。 如配制90 ng/ml标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液:1×20ml。 4. 检测稀释液A:1×10ml。 5. 检测稀释液B:1×10ml。 6. 检测溶液A:1×120μl(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算 好的每次实验所需的总量配制(100μl/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B:1×120μl/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶 液A。 8. 底物溶液:1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液:1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 11. 覆膜:5张 12. 使用说明书:1份 自备物品 1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热) 2. 微量加液器及吸头,EP管 3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸

人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)

仅供科研使用,不得用于临床检验。 人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)说明书 【产品名称】 通用名称:人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA) 英文名称:Human Interleukin-6(IL-6)ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒,96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6(IL-6)的浓度。 【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人白细胞介素6(IL-6)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人白细胞介素6(IL-6)校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6(IL-6)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人白细胞介素6(IL-6)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人白细胞介素6(IL-6)的浓度。 【主要组成成分】 主要成分

校准品浓度依次为:320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品(可从蓝图生物科技产品研发系统中选择) 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。 2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书

本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断人(Human)瘦素(LEP)ELISA检测试剂盒 使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被瘦素(LEP)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素(LEP)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪(450nm) 2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱 操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。

ELISA操作步骤

Envirology ELISA试剂盒说明书 试剂盒内容物: ●Cry1Ab/Cry1Ac 抗体包被固相板 ●Cry1Ab/Cry1Ac 阳性对照组 ●Cry1Ab/Cry1Ac 酶结合物 ●底物 未提供的物品: ●TPBS清洗缓冲液(PBS/0.05% Tween-20 wash buffer),常温保存,最多一年,然后丢弃。 ●萃取缓冲液(PBS0.55% Tween-20)。可以将0.5 ml Tween-20加入到100 ml 上一步的TPBS 缓冲液内制得。不使用时放在冰箱内冷藏,ELISA分析时升至室温使用。 ●HCL(1 Mol/L) 终止液。将83 ml盐酸溶液(37%)到917ml蒸馏水或去离子水中制的。 配置过程在通风橱内操作。室温下保存可使用2年。 ●一次性吸管,可调节排气移液枪,记号笔,parafilm膜等。 实验步骤: ●此步在15min内完成。加50ul 到板孔内,随即在相应板孔内进行如下操作,加50ul 萃取缓冲液作为空白对照,加50ul Cry1Ab阳性对照,加50ul样品萃取物到板孔内。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒,使内容物充分混匀。注意勿使内容物溅出! ●盖上盖子勿使水分蒸发,并在室温下孵化1~2小时。如果有孔板摇床,可在200 rpm速 度下摇动孔板。注意:根据组织萃取方法,用户应该决定一个合适的孵化时间,以使得到最佳结果。 ●孵化结束后,小心移去盖子并将孔内液体甩到废水池内,要剧烈甩弃,尽量甩尽孔内液 体。用TPBS清洗缓冲液清洗板孔(300ul/孔),然后甩尽缓冲液,3次重复。 ●每孔加100ul底物。 ●在桌面上晃动96孔板20~30秒,使内容物充分混匀。盖上盖子室温下孵化15~30分钟。 ●加100ul HCL(1 M)终止液,并且混匀。此步能使孔内物质变黄。注意:在加入终止液 后30分钟内读板。 读板: ●调节读板仪波长到450nm。如果读板仪有双波长功能,可依据文献选600、630或者 650nm作为备选波长。 ●设置读板仪空白项到空白对照孔。

实时荧光定量PCR原理和实验

实时荧光定量PCR原理和实验 陈云地 作者单位:200030 美国应用生物系统公司(Applied Biosystems) 无论是对遗传病(如地中海贫血和血友病)、传染病(如肝炎和艾滋病)或肿瘤进行基因诊断,还是研究药物对基因表达水平的影响,或者监控药物和疗法的治疗效果,定量PCR技术都可以发挥很大作用。定量PCR技术的最新进展是实时荧光定量。该技术借助于荧光信号来检测PCR产物,一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到PCR每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定CT值,从而根据CT值确定起始DNA拷贝数,做到了真正意义上的DNA定量。这是DNA定量技术的一次飞跃。 根据最终得到的数据不同,定量PCR可以分为相对定量和绝对定量两种。典型的相对定量如比较经过不同方式处理的两个样本中基因表达水平的高低变化,得到的结果是百分比;绝对定量则需要使用标准曲线确定样本中基因的拷贝数或浓度。根据所使用的技术不同,荧光定量PCR 又可以分为TaqMan探针和SYBR Green I 荧光染料两种方法。比较而言,探针杂交技术在原理上更为严格,所得数据更为精确;荧光染料技术则成本更为低廉,实验设计更

为简便。在选择实验方案时要根据实验目的和对数据精度的要求来决定。 定量实验与定性实验最大的不同,是要考虑统计学要求并对数据进行严格的校正,以消除偶然误差。因此重复实验和设立内对照非常重要。由于各种各样的客观原因,这一点在实践中往往被轻视或忽视,需要着重强调。当然,与定性实验一样,定量PCR也要设立阴性和阳性对照,以监控试剂和实验操作方面可能出现的问题。 1 为什么终点定量不准确? 我们都知道理论上PCR是一个指数增长的过程,但是实际的PCR扩增曲线并不是标准的指数曲线,而是S形曲线。这是因为随着PCR循环的增多,扩增规模迅速增大,Taq酶、dNTP、引物,甚至DNA模板等各种PCR要素逐渐不敷需求,PCR的效率越来越低,产物增长的速度就逐渐减缓。当所有的Taq酶都被饱和以后,PCR就进入了平台期。由于各种环境因素的复杂相互作用,不同的PCR反应体系进入平台期的时机和平台期的高低都有很大变化,难以精确控制。所以,即使是重复实验,各种条件基本一致,最后得到的DNA拷贝数也是完全不一样的,波动很大(图1)。

人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书

人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂 盒说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)含量。 试验原理: CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。

实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)实验流程

实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)实验流程 一、RNA的提取(详见RNA提取及反转录) 不同组织样本的RNA提取适用不同的提取方法,因为Real-Time PCR对RNA样品的质量要求较高,所以,正式实验前要选择一款适合自己样品的提取方法,在实验过程中要防止RNA的降解,保持RNA的完整性。 在总RNA的提取过程中,注意避免mRNA的断裂;取2ug进行RNA的甲醛变性胶电泳检测,如果存在DNA污染时,要用DNase I进行消化(因为在处理过程中RNA极易降解,建议体系中加入适量RNA酶抑制剂)。 二、DNase I 消化样品RNA 中的DNA 用DNase I 消化DNA 组份加量 模板(RNA) 10ug RNase Inhibitor 4ul DNase I buffer 10ul DNase I 10ul DEPC处理H2O 至100ul 混匀,37℃ 90min 三、RNA琼脂糖凝胶电泳 1.1%的琼脂糖凝胶电泳凝胶的配制: 1)称取琼脂糖0.45g放入三角瓶中,向其中加入4.5ml的10×MOPS缓冲液和39.5ml 的DEPC水,放微波炉里溶化。 2)待冷却到60摄氏度左右时,加入1ml甲醛,摇匀(避免产生气泡)。倒入凝胶板上凝固30min。 2.取各个RNA样品4μl,加入6×RNA电泳上样缓冲液2μl混匀,加入变性胶加样孔中。3.120V电压下电泳25min。用凝胶紫外分析仪观察,照相保存。 4.RNA电泳结果如下图所示。可见28S和18S两条明亮条带,无DNA条带污染。 四.RNA反转录为cDNA 反转录程序(以MBI的M-MLV为例) 组份加量(20ul体系) 加量(40ul体系) 模板(RNA) 0.1~2.5ug(根据条带的亮度适当调整) 3ug(根据条带的亮度适当调整) 引物T18(50uM)(或其他引物) 2.0ul 4.0ul DEPC处理H2O 至12.5ul 至25ul

人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒

人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试 剂盒 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒 产品规格:96T/48T。 供应商:上海乔羽生物有限公司 上海乔羽有限公司,有elisa试剂盒,抗体,培养基 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下 专一性强:抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。 灵敏度高:由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大提高了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶:试剂盒提供6管标准品,每管已标定浓度,并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解,使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。 人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备: 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势: 全面——混合8 种不同的常见抗原,对自身免疫性疾病进行全面筛查。

ELISA试剂盒

1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原,也可用于测定抗体。 然而,影响Elisa试验结果的因素很多,故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点 一、高效、灵敏、特异的抗体; 二、稳定的重复性和可靠性; 三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体; 四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型; 五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度,损失越少,回收率越高,如果作标液1PPM,就是1毫克/升,而作出标准数据为0.99毫克/升,就是说你的回收率是99%,这个与真实成分有密切的关系,说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定,样品水中含有无机氯20mg/L,取100mL 被测水样品,加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品,测定时忽略体积变化,如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L,则认为回收率为99%。 4 发展 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前,分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的,它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举,并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法 (1)血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。 (2)血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 (3)细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。 (4)组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清

实时荧光定量PCR方法简介

实时荧光定量PCR方法简介 一.实时荧光定量PCR的基本原理 理论上,PCR过程是按照2n(n代表PCR循环的次数)指数的方式进行模板的扩增。但在实际的PCR反应过程中,随着反应的进行由于体系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰减)使得靶序列并非按指数方式扩增,而是按线性的方式增长进入平台期。因此在起始模板量与终点的荧光信号强度间没有可靠的相关性。如采用常规的终点检测法(利用EB染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量),即使起始模板量相同经PCR 扩增、EB染色后也完全有可能得到不同的终点荧光信号强度。 为了能准确判断样品中某基因转录产物(mRNA)的起始拷贝数,实时荧光定量PCR采用新的参数——Ct值,定量的根本原理是Ct值与样品中起始模板的拷贝数的对数成线性反比关系。 Ct值是如何得到的 在实时荧光定量PCR的过程中,靶序列的扩增与荧光信号的检测同时进行,定量PCR仪全程采集荧光信号,实验结束后分析软件自动按数学算法扣除荧光本底信号并设定阈值从而得到每个样品的Ct值。 Ct值的定义 Ct值中的“C”代表Cycle(循环),“t”代表检测threshhold(阈值),其含义是PCR扩增过程中荧光信号强度达到阈值所需要的循环数;也可以理解为扩增曲线与阈值线交点所对

应的横坐标。 Ct值与样品中模板的对应关系 Ct值与样品中起始模板的拷贝数的对数成线性反比关系(y=ax+b,x代表起始模板拷贝数的对数,y代表Ct值)。 与终点法相比利用Ct值的优势 由于Ct值是反映实际PCR反应过程中扩增即将进入指数期的参数,该参数几乎不受试剂消耗等因素的影响,因此利用Ct值判断的起始模板拷贝数更加精确,重复性也更好。传统的终点检测法是在PCR扩增经历了指数扩增期进入平台期后利用EB等染料染色来判断扩增产物的多少,从而间接的判断起始拷贝量,这种方法的精确度不高、重复性也不好。 下图中是96个复孔的实时扩增曲线(完全相同的反应体系、相同的反应protocol、相同的样品起始浓度),可以看到Ct值具有很好的重复性,而终点的荧光信号强度差异达到300个单位。 此外,采用实时荧光定量PCR还能从方法学上有效的防止PCR实验中交叉污染的问题。因为荧光定量PCR中模板的扩增与检测是同时进行的,当实验完成后即可获得定量结果,

小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书

小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号:E-EL-M0314 (本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!) 声明:尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整)

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值,Col I浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。 标本收集: 1.血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集 血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。 2.血浆:抗凝剂推荐使用EDTA.Na2,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可 检测。避免使用溶血,高血脂标本。 3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞 会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟,取上清检测。 4.细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测 (具体处理方法可参考:https://www.doczj.com/doc/1816184048.html,/news2.asp?tid=477 ) 6.标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,避免反复冻融, 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做 预实验,以确定稀释倍数)。 试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸

人白细胞介素ELISA检测试剂盒

人白细胞介素ELISA 检测试剂盒 人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。 试验原理: 人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1.此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。 3.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1.试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。 2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。 3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。 5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。 避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。 样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血 液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒使用说明书

人elisa试剂盒,人8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆 樊克生物专业供应: 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本8羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)含量。 试验原理: 8-OHdG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知8-OHdG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板 内进行检测。先将8-OHdG和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合 的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中8-OHdG的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品:80ng/ml 1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型 标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型 生物素标记的抗8-OHdG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型 洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀 释 底物A 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 底物B 1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型 标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型 自备材料 1.蒸馏水。 2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3.振荡器及磁力搅拌器等。 安全性

人P16ELISA试剂盒使用说明书

人P16ELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人P16的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人P16水平。用纯化的人P16抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入P16,再与HRP标记的P16抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的P16呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人P16浓度。 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

实时荧光定量PCR仪ViiA7操作步骤

实时荧光定量PCR仪ViiA 7 操作步骤 ——以RNase P示例实验为例 一、定义384孔样品模块的实验属性 打开电脑访问ViiA 7 软件,然后打开左侧仪器开关。单击Experiment Setup图标。单击Experiment Properties以访问Experiment Properties屏幕。 在ViiA 7 软件中设计RNase P实验示例时,请输入: 二、使用Define屏幕定义RNase P示例实验的目标基因、样品。 1. 单击Define以访问Define屏幕。 2. 定义目标基因 a. 单击New以增加和定义目标基因。 b. 在目标基因表中,单击Target Name列中的一个单元格,并输入: c. (可选)单击Save以便将新增或原有的正在编辑的目标基因保存到Target Library。 d. 单击Add Saved从目标基因库添加目标基因。 3. 定义样品 a. 单击New以增加和命名样品。 b. 在样品表中,单击Sample Name列中的一个单元格,并输入: c. (可选)单击Save以将新增或原有的正在编辑的样品保存到Sample Library。 d. 单击Add Saved从样品库添加样品。 4. (可选)定义生物学平行测定 a. 在Define Biological Replicates Groups表中,单击New以增加和命名生物学平行 测定组。 b. 从下拉菜单选择Color。 c. 单击Comments列,以便为该生物学平行测定组添加注释。 注:实验示例不使用生物学平行测定组。保留Biological Replicate Groups空白。 5. 选择用作参比荧光的染料ROX。

人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒说明书

人脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒只能用于科学研究,不得用于医学诊断 人(Human)脂多糖结合蛋白(LBP)ELISA检测试剂盒使用说明书 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预 先包被脂多糖结合蛋白(LBP)抗体的包被微孔中,依次加入标本、 标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显 色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成 最终的黄色。颜色的深浅和样品中的脂多糖结合蛋白(LBP)呈正相 关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞 刺激,收集血液后,3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地 分离。 2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。 3. 细胞上清液:3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟 取上清。 5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于 -20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪(450nm) 2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20 分钟。从冰箱取出的 浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解 后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 3. 浓度为0 的S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5 倍,最终结果乘以5 才是样本实际浓度。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称96孔配置48孔配置备注 微孔酶标板12 孔×8 条12 孔×4 条无 标准品0.3mL*6 管0.3mL*6 管无

doc_大鼠CD36分子CD36 酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用,不得用于临床检验。 大鼠CD36分子(CD36 )酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称:大鼠CD36分子(CD36 )酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒) 英文名称:Rat Cluster of differentiation 36(CD36 )ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒,96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中大鼠CD36分子(CD36 )的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗大鼠CD36分子(CD36 )抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入大鼠CD36分子(CD36 )校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗大鼠CD36分子(CD36 )抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中大鼠CD36分子(CD36 )的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中大鼠CD36分子(CD36 )的浓度。 【主要组成成分】 主要成分

校准品检测范围:0.218-14ng/ml。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。 2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书

克伦特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 克伦特罗(Clenbuterol)属于β-兴奋剂,因为该药可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后,残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状,对消费者的健康造成极大危害。因此世界许多国家现已被明令禁止在饲料中添加克伦特罗来增加动物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作检测β兴奋剂的方法,但是其前处理步骤费用昂贵;而使用酶联免疫检测试剂盒方法则可以经济、快速地检测尿,肌肉,肝脏及饲料中的CLE。 本试剂盒是应用ELISA技术研发而成的检测产品,操作时间短于45min,能最大限度地减少操作误差和工作强度。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被克伦特罗抗原,样本残留的克伦特罗和微孔条上预包被的抗原竞争抗克伦特罗抗体,加入酶标二抗后,用TMB底物显色,样本吸光值与其残留物克伦特罗负相关,与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数,即可得出样品中克伦特罗的含量。 三、适用范围 可定性、定量检测动物组织、饲料、尿液等样本中克伦特罗的残留量。 四、交叉反应率 克伦特罗………………………………………………100%特普他林……………………………………………小于1%非诺特罗……………………………………………小于1%马布特罗……………………………………………小于1% 西马特罗…………………………………………小于1%溴布特罗……………………………………………小于1% 塞曼特罗……………………………………………小于1% 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备: ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅振荡器 ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平:感量0.01g ┅┅刻度移液管:10ml ┅┅聚苯乙烯离心管:10ml、50ml ┅┅微量移液器:单道20μl~200μl、200μl~1000μl 多道250μl 试剂: ┅┅甲醇(分析纯) ┅┅氢氧化钠(分析纯) ┅┅浓盐酸 ----去离子水 六、提供的材料与试剂 1、96孔酶标板×1块 2、标准品×6瓶:(1ml/瓶) 0ppb, 0.05ppb, 0.15ppb,0.45ppb, 1.35ppb,4.05ppb 3、高浓度标准品:100ppb (1ml/瓶) 4、克伦特罗酶标物…………………………………………7ml 5、克伦特罗抗试剂…………………………………………9ml 6、底物液A液………………………………………7ml 7、底物液B液………………………………………7ml 8、终止液…………………………………………7ml 9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml 10、克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml 七、溶液的配制 配液1: 样品稀释液 用去离子水将克伦特罗浓缩样品稀释液(2×)按1:1体 积比进行稀释,即:1份克伦特罗浓缩样品稀释液 (2×)+1份去离子水;用于提取样本的稀释,样品稀释 液在4℃环境可保存一个月。 配液2: 洗涤工作液 用去离子水将浓缩洗涤液(10×)按1:9体积比进行稀 释,即:1份浓缩洗涤液(10×)+9份去离子水;用于酶 标板的洗涤,洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。配液3: 1M 氢氧化钠溶液 称取 4.0g 氢氧化钠加去离子水混匀溶解定容至 100ml。 配液4: 0.1M 盐酸溶液 量取0.83ml浓盐酸加去离子水混匀定容至100ml 配液5:25%甲醇溶液 将25ml无水甲醇加入到75ml去离子水中并充分混匀配液6:组织样本提取液 80ml 25%甲醇溶液加20ml 0.1M 盐酸 八、样本前处理步骤 样本处理前须知: (a)实验中必须使用一次性吸头,在吸取不同的试剂时要更换吸头。 (b)实验之前须检查各种实验器具是否洁净,必须使用洁净实验器具,以避免污染干扰实验结果。 (c)未处理的样本需冷冻保存。 (d)处理后的样本可在2-8℃避光保存24h。

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