【药品
名称】
碘标记血管紧张素I放射免疫分析药盒
【概述】肾素-血管紧张素系统在机体的血压、水、电解质平衡的调节上起着重要作用。因此血浆肾素活性(PRA)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度的测定已经成为原发性和继发性高血压的诊断及研究的重要指标。血浆肾素活性(PRA)的测定是以血管紧张素I(AI)产生的速率来表示的，血管紧张素I(AI)是由肾素作用于血管紧张素原而生成的10肽，它被血管紧张素转换酶降解成血管紧张素Ⅱ。血管紧张素I正常生理浓度下无生物活性。PRA、AⅡ二者测定均采用酶抑制剂来阻断转换酶和血管紧张素酶的活性，以达到准确测定PRA和AⅡ的目的。该项指标的测定，可作为判断肾素活性和对多种高血压及肾脏疾病诊断、分型的依据。
【测定原理】本试剂盒采用匀相竞争放射免疫分析方法，测定人血浆中AI的含量。先将校准品(或样品)、标记物和抗体按操作程序依次加入试管中，使标记抗原和抗原与限量抗体发生竞争性结合，待反映平衡后，加入分离剂，离心沉淀，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测量沉淀中放射性强度。随AI含量增加，放射性强度减少。
【试剂组成和配制方法】1.校准品 7瓶(冻干品) 每瓶用 ml缓冲液溶解，浓度分别为:0，0.19，0.38，0.75，1.5，3.0，6.0ng/ml 2.125I —AI 1-2瓶(红色冻干品) 每瓶用5.5ml缓冲液溶解，3.5μCi/μg 3.抗体 1瓶(蓝色冻干品) 使用前用 ml缓冲液溶解(如不填写100T 10ml溶解) 4.缓冲液 1瓶(液体) 5.分离试剂 1瓶(悬浮液) 使用前充分摇匀。 6.8-羟基喹啉 1瓶(液体) 7.二巯基丙醇 1瓶(液体) 8.EDTA-Na21瓶(液体) 9.保温液 1瓶(液体) 10.质控血清 2瓶(冻干品) 使用前用0.5ml缓冲液溶解
【样本要求】1.酶抑制剂的配制:按取血5ml计每支采血管加入50ulEDTA-NA2(如果晶粒析出，可温热溶解)50ul8-羟基喹啉和25ul二巯基丙醇，混匀，备用或2-8℃储存可用一周。 2.标本采集:按常规取静脉血5ml，迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制抗凝试管中，摇匀，立即放回冰水浴中冷却，待离心时取出。1000rpm离心5分钟(最好4℃离心机)，分离取出血浆，此操作应该在15分钟内完成，血浆备检或-25℃保存，可用2个月。 3.标本处理:测定前将冰冻的血浆标本在流动的冰水浴中快速融化，快速取双份标本，每份分别加入10ul保温液。作对照管的一份标本放在冰水浴中，作为测定管的一份标本放在37℃水浴中温育1小时，取样后放入冰水浴中。
【适用
仪器】
GC-2010γ放射免疫计数器、DMF-96型多管放射免疫计数器、γ放射免疫单管分析仪等。
【操作方法】将圆底聚苯乙烯试管编号(按复管操作)，按下表程序操作: AI加样测定程序表单位:μl 试剂NSB管S0-S6校准管对照管样品管生理盐水100 100 100 100
缓冲液200 ―――
校准品―100 ――
待测血浆标本――100 100
125I―AI 100 100 100 100
AI抗血清―100 100 100
混匀，4℃放置15小时以上，任取3管测量，作为总放射性T(cpm)。
分离试剂1000 1000 1000 1000
充分混匀，4℃放置15分钟
3500 rpm离心(离心力1500g)15分钟，立即吸去上清液，测各管沉淀的放射性计数(cpm)。
【数据
处理】以B/B0%为纵坐标，以校准品浓度为横坐标，在Logit-Log坐标纸上绘制校准曲线，根据样品B/B0%，从校准曲线上查出样品的含量，目前多用于自动γ计数仪预先编制的程序直接给出有关参数、校准曲线及样品浓度。
【质量
控制】
对质控血清的测定结果在允许范围内。
【方法
的局限
性】
本药盒仅用于血浆样本的测定，对其它体液样本测定的可靠性尚未得到充分的实验确认。
【对实
验结果
的解
释】
本药盒的检测结果不是临床适应症的唯一确认指标，其临床意义需结合其它检测指标及临床表现具体分析判断。
【有效
期】
2-8℃避光保存效期30天。
【注意事项】1.使用本药盒的实验室应具有“放射性同位素使用许可证”，使用过程中产生的放射性废物应按国家有关规定处理。 2.本药盒内不同批号的试剂不能混用，同一批号的试剂可混合均匀后使用。 3.各试剂必须摇匀后使用，使用前应平衡到室温(15-28℃)。 4.离心后吸弃上清液时注意不要损失沉淀。 5.标记物和校准品溶解使用后应该冰冻保存。
【包装
规格】
100T/盒
生活饮用水呋喃丹、草甘膦、灭草松和2,4-D标准检验方法——液相色谱质谱法 1范围 本方法规定了用水样直接过滤膜后，用液相色谱分离，质谱检测生活饮用水及其水源水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2，4－D四种农药含量的测定。 本方法适用于生活饮用水及其水源水中呋喃丹、草甘膦、灭草松和2，4－D四种农药的测定。 本方法最低检测质量浓度分别是：呋喃丹0.10ng/mL；草甘膦0.04μg/mL；灭草松 0.10ng/mL和2，4－D 0.40ng/mL。 在选定的分析条件下，干扰物质被液相色谱分离，再加上质谱的选择质量离子，其他物质不干扰测定。 2原理 水样直接过0.22μm滤膜，用液相色谱分离，用保留时间和质谱的选择质量离子进行定性定量分析。 3 试剂 3.1农药标样呋喃丹、草甘膦和灭草松（固体）。取10.0mg标样草甘膦定容10mL, 得草甘膦储备液1.0 mg/mL；取20.0mg标样呋喃丹定容50mL, 得呋喃丹储备液0.4 mg/mL；灭草松2.37mg 定容10mL,得灭草松储备液237μg/mL；2，4-D标准溶液（100mg/L）直接由计量院标物中心购得。 3.2 乙腈：色谱纯。 3.3 超纯水：电阻率大于18.2MΩ。 4 仪器 高效液相色谱质谱仪，所配置的质谱是三重四极杆串联质谱。 5 分析步骤 5.1 色谱质谱条件 5.1.1 质谱条件（该条件仅作参考，需要根据各个不同型号仪器的不同进行适当调整和设置）电喷雾三重四极杆串联质谱 呋喃丹：正离子ESI ，离子源温度：500℃，离子喷雾电压：5000V 草甘膦、灭草松和2，4－D：负离子ESI。离子源温度：500℃，离子喷雾电压：－4500V 采集方式：MRM，具体的离子对和所设定的去簇电压(DP)和碰撞能量（CE）见表1 表1 MS/MS检测 化合物DP (V) 1.MRM CE (V) 2.MRM CE (V) 呋喃丹43 221.1/165.2 18 221.1/123.1 31 草甘膦-31 167.9/149.8 -15 167.9/62.8 -34 灭草松-50 239.0/132.0 -37 239.0/175.0 -29 2,4-D -27 219.0/160.8 -22 219.0/124.9 -35 5.1.2 色谱条件（该条件仅作参考，根据各个不同型号仪器的不同进行适当调整和设置） 色谱柱：Atlantis C182.1mm×50 mm，粒经5μm，或者相当性能的色谱柱；流速：0.6mL/min；进样量：20μL。柱温：室温。流动相：A:超纯水（含0.1%甲酸），B：乙腈，梯度洗脱。初始流动相含10％的B，到第４min时线性增加至90％的B，保持1min，再恢复初始流动相，平衡3min。 5.1.3 四种农药的标准色谱图 四种农药的标准色谱图见图1，信号采集方式MRM（定量离子对：呋喃丹：221.1>164.2；
课程名称：临床免疫学检验技术课题名称：免疫标记技术 组员：朱恩鹏拉巴卓嘎 张燕培汪婷婷
免疫标记技术 免疫标记技术指用荧光素、放射性同位素、酶、铁蛋白、胶体金及化学（或生物）发光剂等作为追踪物，标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。藉助于荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、和发光免疫测定仪等精密仪器，对实验结果直接镜检观察或进行自动化测定，可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量测定。因此，免疫标记技术在敏感性、特异性、精确性及应用范围等方面远远超过一般免疫血清学方法。近年来，随着分子生物学、细胞生物学、基础免疫学和免疫化学等学科的发展以及现代高新技术建立的仪器分析的应用，免疫标记技术也不断完善和更新。各种新技术和新方法不断涌现，至今已成为一类检测微量和超微量生物活性物质的免疫生物化学分析技术，在医学和其他生物学科的研究领域及临床检验中应用十分广泛。 根据试验中所用标记物的种类和检测方法不同，免疫标记技术分为免疫荧光技术、放射免疫技术、免疫酶技术、免疫电镜技术、免疫胶体金技术和发光免疫测定等。 第一节放射免疫技术 放射免疫标记技术是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，以放射性同位素作为示踪物的标记免疫测定方法，由于此项技术具有灵敏度高（可检测出毫微克（ng）至微微克（pg），甚至毫微微克（fg）的超微量物质，特异性强（可分辨结构类似的抗原）、重复性强、样品及试剂用量少、测定方法易规范化和自动化等多个优点。因此，在医学及其他生物学科的研究领域和临床实验诊断中广泛应用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物及肿瘤标志物等的分析与定量测定。 （一）放射免疫测定（RIA） 放射免疫测定（Radio immunoassay , RIA）是1959 年Yalow 和Berson 首先创建的经典放射免疫分析技术，用于血清中胰岛素含量的测定。30 多年来，由于此项技术灵敏、特异、并已制成多种标准试剂盒，使用方便，应用范围十分广泛。目前国外已成功地应用RIA检测的物质多达300余种，国内研究的被测物质也达百余种，试制的RIA试剂盒已有60余种，是测定各种微量物质不可缺少的手段。 （二）免疫放射测定（IRMA）
【药品 名称】 碘标记血管紧张素I放射免疫分析药盒 【概述】肾素-血管紧张素系统在机体的血压、水、电解质平衡的调节上起着重要作用。因此血浆肾素活性(PRA)和血管紧张素Ⅱ(AⅡ)浓度的测定已经成为原发性和继发性高血压的诊断及研究的重要指标。血浆肾素活性(PRA)的测定是以血管紧张素I(AI)产生的速率来表示的，血管紧张素I(AI)是由肾素作用于血管紧张素原而生成的10肽，它被血管紧张素转换酶降解成血管紧张素Ⅱ。血管紧张素I正常生理浓度下无生物活性。PRA、AⅡ二者测定均采用酶抑制剂来阻断转换酶和血管紧张素酶的活性，以达到准确测定PRA和AⅡ的目的。该项指标的测定，可作为判断肾素活性和对多种高血压及肾脏疾病诊断、分型的依据。 【测定原理】本试剂盒采用匀相竞争放射免疫分析方法，测定人血浆中AI的含量。先将校准品(或样品)、标记物和抗体按操作程序依次加入试管中，使标记抗原和抗原与限量抗体发生竞争性结合，待反映平衡后，加入分离剂，离心沉淀，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测量沉淀中放射性强度。随AI含量增加，放射性强度减少。 【试剂组成和配制方法】1.校准品 7瓶(冻干品) 每瓶用 ml缓冲液溶解，浓度分别为:0，0.19，0.38，0.75，1.5，3.0，6.0ng/ml 2.125I —AI 1-2瓶(红色冻干品) 每瓶用5.5ml缓冲液溶解，3.5μCi/μg 3.抗体 1瓶(蓝色冻干品) 使用前用 ml缓冲液溶解(如不填写100T 10ml溶解) 4.缓冲液 1瓶(液体) 5.分离试剂 1瓶(悬浮液) 使用前充分摇匀。 6.8-羟基喹啉 1瓶(液体) 7.二巯基丙醇 1瓶(液体) 8.EDTA-Na21瓶(液体) 9.保温液 1瓶(液体) 10.质控血清 2瓶(冻干品) 使用前用0.5ml缓冲液溶解 【样本要求】1.酶抑制剂的配制:按取血5ml计每支采血管加入50ulEDTA-NA2(如果晶粒析出，可温热溶解)50ul8-羟基喹啉和25ul二巯基丙醇，混匀，备用或2-8℃储存可用一周。 2.标本采集:按常规取静脉血5ml，迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制抗凝试管中，摇匀，立即放回冰水浴中冷却，待离心时取出。1000rpm离心5分钟(最好4℃离心机)，分离取出血浆，此操作应该在15分钟内完成，血浆备检或-25℃保存，可用2个月。 3.标本处理:测定前将冰冻的血浆标本在流动的冰水浴中快速融化，快速取双份标本，每份分别加入10ul保温液。作对照管的一份标本放在冰水浴中，作为测定管的一份标本放在37℃水浴中温育1小时，取样后放入冰水浴中。 【适用 仪器】 GC-2010γ放射免疫计数器、DMF-96型多管放射免疫计数器、γ放射免疫单管分析仪等。 【操作方法】将圆底聚苯乙烯试管编号(按复管操作)，按下表程序操作: AI加样测定程序表单位:μl 试剂NSB管S0-S6校准管对照管样品管生理盐水100 100 100 100 缓冲液200 ――― 校准品―100 ―― 待测血浆标本――100 100 125I―AI 100 100 100 100 AI抗血清―100 100 100 混匀，4℃放置15小时以上，任取3管测量，作为总放射性T(cpm)。 分离试剂1000 1000 1000 1000
放射免疫分析技术 摘要RIA 是一种微量分析法, 就是利用放射性核素标记抗原或抗体, 然后与被测的抗体或抗原结合, 形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。它兼有放射性同位素的灵敏性和抗原、抗体反应的特异性两大特点。该法还具有准确性高和精密度好, 便于标准化以及操作简便、经济等优点。由于RIA具有灵敏度高，特异性强，测量简单，成本低等优点，RIA在应用方面具有一定的生命力。但是，又因为它最致命的弱点就是使用放射性核素，此外标记物有效使用时间短，难以实现操作和测量的自动化等，它的进一步发展受到一些局限。现在免疫分析技术都在朝着非同位素标记免疫分析的方向发展，自动化仪器已经投入到临床常规项目的检测中，使得传统的RIA使用市场逐渐缩小。不过第五代RIA技术的出现，使得现在的RIA 技术较其他方法在方法学有了更多的优势，尤其是纳米磁性固相的应用，为RIA自动化的研制提供了很大帮助。此外，在生命科学的实验领域，非放射标记免疫技术始终不能代替RIA。关键字RIA IRIA 基本原理第五代RIA技术 1959 年，美国科学家Berson 和Yalow 将放射性同位素测量的高灵敏度与抗原抗体的高特异性巧妙地结合起来，创立了放射免疫分析( radioimmuoassay，RIA) 技术。RIA 经过半个多世纪的发展，可以分析成百上千种物质，包括激素、维生素、肿瘤相关抗原、抗体、药物、病毒等。使那些曾认为无法检测的微量而又具有重要生物活性的物质得以精确定量，为医学、生命科学的发展做出划时代的贡献。因此，1977 年Yalow荣获诺贝尔生理学或医学奖。随后，各国学者发展了酶免疫分析( EIA) 、荧光( FIA) 、时间分辨荧光( TRFIA) 和化学发光( CLIA) 等非同位素标记免疫分析技术。 1. RIA基本原理 放射免疫分析法的本质是一种分子相同的被侧物质和同位素标记物质, 同另一种浓度有限的特异性结合试剂进行的竞争性结合。当同位素标记化合物和特异性结合试剂的量保持一定时, 加入的被侧物或标准物的量与标记物的量之和多于特异性结合试剂有效结合的数目时, 被测物或标准物与标记物一特异性结合试剂复合物之间就呈现一种函数关系。即被测物的量越多, 则标记物的被稀释程度也就越大, 使标记物一特异性结合试剂复合物的量逐渐减少, 放射性强度侧定就越低。根据这种原理来对生物体内的微量物质进行定量测定。 以标记化合物为P* . , 非标记化合物为P , 特异性结合试剂为Q, 其反应式构成了放射
免疫荧光技术的实验方法及其分类 一、免疫标记法及其分类 1.荧光免疫法 原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮，检测产物发出的荧光，荧光强度与Mb浓度呈正比，可在8min 内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好，线性范围宽，具有快速、敏感、准确的特点。 以双抗夹心法为例，首先将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体。除去未结合抗体，然后加受检标本，使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物，接着加入荧光标记的抗体，使之与抗原特异性结合，形成抗体—抗原—抗体复合物。最后根据荧光强度，即可对蛋白抗原进行定量。 传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大，时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕，作为标记物，加入正常液后激发测定，能有效去除短寿命本底荧光的干扰。
2.放射免疫法 放射免疫法是以过量的未标记抗原与放射性物质标记的抗原，竞争性地与抗体结合，形成有放射性的抗原—抗体复合物与无放射性的抗原—抗体复合物，并有过剩的标记抗原与未标记的抗原。然后通过离心沉淀等方法，将抗原—抗体复合物与游离抗原分离，分别测定其放射性强度与标准曲线比较，即可对未标记的待测抗原进行定量。 RIA法测定血清蛋白灵敏度高、特异性强，可准确定量到ng/ml 水平。但早期的方法操作麻烦，耗时长，且有放射性污染。近年来，随着单克隆抗体的应用，RIA的灵敏度又有了较大提高，且操作大为简化，并已有商品试剂盒供应，使用方便。 3.酶联免疫法(ELISA) ELISA法有竞争法和夹心法两种。竞争法是基于标准或血清Mb 和微孑L板上包被的Mb竞争性地与单克隆抗体相结合的原理而建立，该法的最低检测限为10μg/L，线性范围达1 000ug/L。夹心ELISA 法与EIA具有良好的相关性(r=0.92)。ELISA法具有灵敏度高，特异性强，精密度好，操作简单，适用于多份标本的检测，不需特殊仪器设备等优点，易于推广普及。但不适合急诊的快速检测。
碘[125I]血管紧张素Ⅱ放射免疫分析药盒 【药品 名称】 碘[125I]血管紧张素II放射免疫分析药盒 【概述】血管紧张素Ⅱ(AⅡ)是由血管紧张素转换酶降解血管紧张素I而生成的8肽，并在酶作用下转变成血管紧张素Ⅱ。血管紧张素Ⅱ具有增强血管收缩能力和提升血压的功能，是肾素-血管紧张素系统的重要物质。在机体的血压、水和电解质平衡调节上起重要作用。血浆中血管紧张素Ⅱ含量的测定，为多种高血压和肾脏疾病的分型与诊断提供依据。 【测定原理】本试剂盒采用匀相竞争放射免疫分析方法，直接测定人血浆中AⅡ的含量。先将校准品(或样品)、标记物和抗体按操作程序依次加入试管中，使标记抗原和抗原与限量抗体发生竞争性结合，待反应平衡后，加入分离剂，离心沉淀，使游离抗原与抗原抗体复合物分离，测量沉淀中放射性强度。随AⅡ含量增加，放射性强度减少。 【试剂组成和配制方法】1.校准品 7瓶(冻干品) 每瓶用 ml缓冲液溶解，浓度分别为:0，25，50，100，200，400，800pg/ml 2.125I—AII 1-2瓶(红色冻干品)每瓶用5.5ml缓冲液溶解，3.5μCi/μg 3.抗体 1瓶(蓝色冻干品)使用前用 ml缓冲液溶解(如不填写100T 10ml溶解) 4.缓冲液 1瓶(液体) 5.分离试剂 1瓶(悬浮液) 使用前充分摇匀。 6.8-羟基喹啉 1瓶(液体)(与AI药盒合用) 7.二巯基丙醇 1瓶(液体)(与AI药盒合用) 8.EDTA-Na2 1瓶(液体)(与AI药盒合用) 9.质控血清 2瓶冻干品每瓶用前用0.5ml蒸馏水溶解 【样本要求】1.酶抑制剂的配制:按取血5ml计每支采血管加入50ulEDTA-NA2(如果晶粒析出，可温热溶解)50ul 8-羟基喹啉和25ul二巯基丙醇，混匀，备用或2-8℃储存可用一周。 2.标本采集:按常规取静脉血5ml，迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制抗凝试管中，摇匀，立即放回冰水浴中冷却，待离心时取出。1000rpm离心5分钟(最好4℃离心机)，分离取出血浆，此操作应该在15分钟内完成，血浆备检或-25℃保存，可用2个月。 【适用 仪器】 GC-2010γ放射免疫计数器、DMF-96型多管放射免疫计数器、γ放射免疫单管分析仪等。 【操作方法】将圆底聚苯乙烯试管编号(按复管操作)，按下表程序操作: AⅡ加样测定程序表单位:μl 试剂NSB管S0-S6校准管样品管 生理盐水200 200 200 缓冲液300 ―― 校准品―200 ― 待测标本――200 125I―AⅡ100 100 100 AⅡ抗血清―100 100 混匀，4℃放置15小时以上，任取3管测量，作为总放射性T(cpm)。 分离试剂1000 1000 1000 充分混匀，4℃放置15分钟
二碘甲烷化学品安全技术说 明书 第一部分：化学品名称化学品中文名称：二碘甲烷 化学品英文名称：diiodomethane 中文名称2：碘化亚甲基 英文名称2：methylene iodide 技术说明书编码：751CAS No.： 1975-11-6 分子式： CH 2I 2分子量：267.87第二部分：成分/组成信息 有害物成分含量CAS No.第三部分：危险性概述 健康危害：高浓度时有麻醉和刺激作用。大鼠腹腔注射血中产生碳氧血红蛋白。 环境危害：对环境有危害。燃爆危险：本品可燃，有毒，具刺激性。第四部分：急救措施皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。食入：饮足量温水，催吐。就医。第五部分：消防措施危险特性：受热分解放出有毒的碘化物烟气。与锂、钾钠合金接触剧烈反应。有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳、碘化氢。灭火方法：消防人员须佩戴防毒面具、穿全身消防服，在上风向灭火。灭火剂：雾状水、泡沫、二氧化碳、砂土。第六部分：泄漏应急处理应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防毒服。尽可能切断泄漏源。防止流入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏：用砂土、蛭石或其它惰性材料吸收。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。用泡沫覆盖，降低蒸气灾害。用泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运第七部分：操作处置与储存 有害物成分 含量 CAS No.: 二碘甲烷 75-11-6
放射免疫分析仪技术参数 *1、对125I的探测效率≥78% *2、本底计数≤60CPM 3、探头不一致性≤2% *4、8小时稳定性：探测效率的附加误差不大于3% *5、计数精密度：γ计数器的计数精密度与幅射统计涨落的理论期望值无显著性差异。用X2双测检验法重复测量21次，应符合（10.851≤X2≤31.410）6、探头数量：5个 *7、一次装样容量：380个样品，测量过程中可随时添加 8、仪器工作方式：全自动测量、机械手抓取样品 *9、具有多核素选择测量功能，可选择125I、57Co、59Fe、75Se、ICo-I等多种放射性核素标记物测量。 10、自动排队测量，采用条码阅读自动识别技术，一次最多可设置10个检 测项目。 11、具有断电续测功能、浓度反查功能、标准曲线调用功能等。 12、具有复管测量功能，复管数最高可设置4个，提高检测准确度。 13、仪器智能化程度高，可自动进行坪、谱曲线的测量、故障自诊断提示等， 操作维护简单。 14、六种检测模式选择：放射免疫（RIA）、免疫放射（IRMA）、肝炎、TG.TM、 胰岛素系列、纯计数测量。 15、七种数据处理方式：线性内插方程、样条函数、三次多项式方程、Log-logit 方程、3/2次方程、四参数、五参数。 16、五种结合率方式：B/T、B/B0、B/Bm、F/B、B/F。 17、可编辑打印多种报告单样式，不同项目的检测结果可综合打印在一张报 告单上。 18、质控分析功能：提供批间质控、批内质控、精密度图、质控图等。 19、数据可网上传输，实现资源共享。 20、同步皮带传送样品，进样、退样不打滑。
21、利用多组光电传感器，控制机械手抓样、放样可靠方便。 22、采用条码阅读技术，实现了多项目测量的自动排队。 23、多核素的选择测量，计算机自动识别，无需旋钮调节。 24、5个探头的测量误差小于2%。 25、电路采用高度集成的模块化设计，维护方便，维修简单。注：本参数无指向性、排它性，仅为满足医院需要。
放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是以放射性核素为标记物的标记免疫分析法。于1960年由美国学者Yalow和Berson创立，并首先用于糖尿病患者血浆胰岛素含量的测定。这是医学和生物学领域中方法学的一项重大突破，开辟了医学检测史上的一个新纪元。它使得那些原先认为是无法测定的极微量而又具有重要生物学意义的物质得以精确定量，从而为进一步揭开生命奥秘打开了一条新的道路，使人们有可能在分子水平上重新认识某些生命现象的生化生理基础。此后30年，内分泌学科的飞速进展充分证明了这一超微量分析技术的巨大推动力。1977年，这项技术的发明者荣获诺贝尔生物医学奖。随后这一崭新的技术迅速渗透到医学科学的其他领域，如病毒学、药理学、血液学、免疫学、法医学、肿瘤学等，以及与医学生物学相关的学科，如农业科学、生态学及环境科学等。放射免疫分析的物质，由激素扩大到几乎一切生物活性物质。我国放射免疫分析研究起步于1962年，并迅速发展与普及，对我国生物医学的进展起了很大的促进作用。 放射免疫分析由于敏感度高、特异性强、精密度高、并可测定小分子量和大分子量物质，所以在检验医学中应用极为广泛，常用于测定各种激素（如甲状腺激素、性激素、胰岛素等）、微量蛋白质、肿瘤标志物（如AFP、CEA、CA—125、CA—199等）和药物（如苯巴比妥、氯丙嗪、庆大霉素等）等。各种检测项目均有试剂盒供应，而且仪器设备并不昂贵，所以在国内被广泛采用。但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，操作人员须经过特殊训练。另外，由于核素有半衰期，试剂盒的货存期较短，因而放射免疫分析在应用中有诸多不便之处。特别是近年来其他标记免疫分析技术如酶免疫分析、发光免疫分析等在技术上有飞跃的进展，高级仪器的自动化程度已可与生化自动分析仪相媲美，因此从长远前景看，放射免疫分析有被取代的趋势。但在目前，从所需的设备和检测的费用上，放射免疫分析还有一定的优越性，还将在一定时期内被医学检验实验室所采用。 一、放射免疫分析的基本试剂 （一）标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据，由于以标准品的量用来表示被涮物质的量，故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外，还应具备稳定性，即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求，将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液，用于制作标准曲线。 （二）标记物 标记抗原应具备：①比放射性高，以保证方法的灵敏度；②免疫活性好；③所用的核素的半衰期尽可能长，标记一次可较长时间使用，这对来之不易的抗原尤其重要；④标记简便、易防护。 要准确测量B与F的放射性，必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量，在使用125I时达5000～15000cpm。 （三）抗体 应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体，用于放射免疫测定。 根据稀释曲线，选择适当的稀释度，一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。 （四）B与F分离剂 以2%加膜活性炭溶液为例，2%加膜活性炭溶液的配制： 活性炭2g（杭州木材厂生产，森工牌732型） 右旋糖酐T200.2g
化学品安全技术说明书 第一部分化学品及企业标识 化学品中文名：二乙基锌；乙基锌 化学品英文名：diethylzinc；zinc ethide 企业名称： 生产企业地址： 邮编: 传真: 企业应急电话： 电子邮件地址： 技术说明书编码: 第二部分成分/组成信息 √纯品混合物 有害物成分浓度CAS No. 二乙基锌557-20-0 第三部分危险性概述 危险性类别：第4.2类自燃物品 侵入途径：吸入、食入、经皮吸收 健康危害：摄入、吸入或经皮肤吸收后对身体有害。对眼睛、皮肤、粘膜有强烈刺激作用。吸入可引起喉和支气管的痉挛、炎症和水肿，化学性肺炎、肺水 肿。 环境危害：对环境有害。 燃爆危险：接触空气易自燃。 第四部分急救措施
皮肤接触：立即脱去污染的衣着，用大量流动清水冲洗。如有不适感，就医。 眼睛接触：立即提起眼睑，用大量流动清水或生理盐水彻底冲洗10～15分钟。如有不适感，就医。 吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。呼吸、心跳停止，立即进行心肺复苏术。就医。 食入：用水漱口，给饮牛奶或蛋清。就医。 第五部分消防措施 危险特性：在潮湿空气中能自燃。加热时可能发生爆炸。化学反应活性较高，能与烯烃、十二碘甲烷、二氧化硫发生爆炸性反应。能和溴、水、硝基化合物发 生剧烈反应。接触空气、臭氧、甲醇或胂能着火。和非金属卤化物剧烈反 应生成可自燃的产物。 有害燃烧产物：一氧化碳、氧化锌。 灭火方法：用干粉、二氧化碳、砂土灭火。 灭火注意事项及措施：消防人员必须佩戴空气呼吸器、穿全身防火防毒服，在上风向灭火。尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至 灭火结束。处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必 须马上撤离。禁止用水和泡沫灭火。 第六部分泄漏应急处理 应急行动：严禁用水处理。根据液体流动和蒸气扩散的影响区域划定警戒区，无关人员从侧风、上风向撤离至安全区。消除所有点火源。建议应急处理人员戴 正压自给式呼吸器，穿防静电服。禁止接触或跨越泄漏物。尽可能切断泄 漏源。保持泄漏物干燥。防止泄漏物进入水体、下水道、地下室或密闭性 空间。小量泄漏：用干燥的砂土或其它不燃材料覆盖泄漏物，用洁净的无 火花工具收集泄漏物，置于一盖子较松的塑料容器中，待处置。大量泄 漏：构筑围堤或挖坑收容。用防爆泵转移至槽车或专用收集器内。 第七部分操作处置与储存
1、[判断题]汞及其化合物、砷及其无机化合物、黄磷、碘甲烷、甲基丙烯酸甲酯、氰化物等具有剧毒性。（分值1.0） 你的答案：正确 2、[判断题]化学废液要用适当的容器盛装存放、定点保存，不需要分类收集。（分值1.0） 你的答案：错误 3、[判断题]可以使用明火（如：电炉、煤气）或没有控温装置的加热设备直接加热有机溶剂，进行重结晶或溶液浓缩操作。（分值1.0） 你的答案：错误 4、[判断题]易燃、易爆物品要放在远离实验室的阴凉通风处，在实验室内保存的少量易燃易爆试剂要严格管理。（分值1.0） 你的答案：正确 5、[判断题]实验产生或剩余的易挥发物，可以倒入废液缸内。（分值1.0） 你的答案：错误 6、[判断题]可以穿拖鞋或凉鞋进入化学实验室。（分值1.0） 你的答案：错误 7、[判断题]对固态酸、碱可用手直接操作。（分值1.0） 你的答案：错误 8、[判断题]当水银仪器破损时，应尽量将洒落的水银收集起来，并在残迹处洒上硫磺粉。（分值1.0） 你的答案：正确 9、[判断题]开启氨水、浓盐酸瓶应该在通风櫉中进行。（分值1.0） 你的答案：正确 10、[判断题]腐蚀和刺激性药品，如强酸、强碱、氨水、过氧化氢、冰醋酸等，取用时尽可能戴上橡皮手套和防护眼镜，倾倒时，切勿直对容器口俯视，吸取时，应该使用橡皮球。开启有毒气体容器时应戴防毒用具。禁止手直接拿取上述物品。（分值1.0） 你的答案：正确 11、[判断题]用活泼金属做除水实验，已观察不到金属的氧化反应，就可以将活泼金属丢弃。（分值1.0） 你的答案：错误 12、[判断题]转速较低的离心机可以在工作时打开机盖观察。（分值1.0） 你的答案：错误
放射免疫分析 摘要：放射免疫技术（radio immunoassay ,RIA）类型主要包括经典的放射免疫分析(radioimmunoassay, RIA)和免疫放射分析或免疫放射度量分析( immunoradiometric assay，IRMA)。由于受接触放射性物质，损害操作人员的身体，测定完成后放射性材料的处置等问题的存在,再加上80年代初出现的非同位素标记技术得到了极大的发展和广泛应用，放射免疫技术的应用有下降的趋势。 0引言：放射性核素依衰变方式分α、β、γ三种，用于放射性标记的有β和γ两类;分别用液体闪烁计数器及γ计数器测定。目前常用的是γ型放射性核素，如125I、131I、51Cr和60Co，以125I最常用；β型放射性核素有3H、14C和32P，以3H最常用。 关键词：结构，原理，临床应用 1检测的基本结构原理、结构及其探测原理 核射线探测仪器由射线探测器和后续电子学单元两大部分组成。核射线探测器是个能量转化器，其检测原理是当射线作用于闪烁体，闪烁体吸收了射线的能量而引起闪烁体中的原子或分子激发，当受激的原子或分子退激时，则发出光子进入光电倍增管光阴极，转换为光电子，光电子在光电倍增管电场作用下到达阳极，形成电脉冲。转换模式是放射能→光能→电能→脉冲。 液体闪烁测量是在闪烁杯内进行的，放射性样品主要被溶剂和闪烁剂分子包围，射线能量先被溶剂分子吸收，受激溶剂分子退激时释放出能量激发闪烁剂，当激发态回到基态时释放出光子到达光阴极，光阴极产生光电子，在光电倍增管的电场作用下，在阳极获得大量电子，形成脉冲信号，输入后读分析电路形成数据信号，最后由计算机数据处理，求出待测抗原含量。 放射性活度测定方法放射免疫分析中经抗原抗体反应和B、F分离后通过检测放射性量来反映待测物的含量。放射性量的检测需特殊的仪器，放射免疫分析仪实际上就是进行放射性量测定的仪器。测量仪器有两类，即晶体闪烁计数仪（主要用于检测γ射线，如125I、131I、57Cr等）和液体闪烁计数仪（主要用于检测β射线，如3H、32P、14C等）。无论是晶体闪烁计数仪还是液体闪烁计数仪都是将射线（放射能）与闪烁体的作用转换成光脉冲（光能），然后用光电倍增管将光脉冲转换成电脉冲（电能），电脉冲在单位时间内出现的次数（即仪器记
免疫分析标记技术 摘要:较系统地综述了目前应用于免疫分析检测中的各种标记技术:放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法的原理、特点及免疫检测现状,同时对免疫分析标记技术的发展进行展望。 关键词:免疫分析,标记技术,研究进展 Abstract: Various labeled technique that have been app lied immunoassay presently was introduced, including labeled radiation, labeled enzyme, labeledlum inophor, labeled fluorescein and labeled paramagnetic-particle along with their principle characteristic and actuality of immunoassay, and their prospects were also discussed in this paper. Keywords: immunoassay; labeled technique; research progress
免疫分析标记技术是指以抗原抗体间的特异性反应为基础,研究标记以各种标记物(定量信号)来对某种物质进行定性或定量检测的研究。标记免疫分析[1]一般是将酶、荧光素、放射性核素等标记物对抗体或抗原进行标记,这种标记物既保持了抗体或抗原的活性,也不影响标记物的活性,当它与相应抗体或抗原反应后,可以直接测定复合物中的标记物,从而直接对目标物质进行定量分析。通过标记物的信号放大作用,可以提高免疫分析技术的敏感性。随着全世界对食品安全问题的关注程度越来越高,食品中污染物和危害物的检测日益重要,这就需要快速、准确、灵敏、能进行多组分分析的检测技术[2]。免疫学检测技术以其特异性强、灵敏度高、方便快捷、分析容量大、检测成本低、安全可靠等优点,已成为21世纪最具竞争性和挑战性的检测分析技术。而在这一基础上,标记物的选择、研究就相应也成了免疫分析研究的重点内容。检测领域的免疫分析标记方法主要有放射物标记、酶标记、荧光标记、化学发光标记、金标记外,还出现了超顺磁性粒子标记。 1 放射物标记分析 用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析(radio immunoassay, RIA)是美国科学家Yalow和Berson于1959年创立的一种微量分析法,它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术和特异性免疫化学技术相结合而建立的新方法[3]。该技术利用核素标记物的放大效应,改善了待测物的检测下限,同时以抗体或抗原作为结合试剂,大大提高了检测方法的特异性。 1.1 标记物种类 一般来说,RIA中标记抗原或抗体所用的放射性核素,最常用的是125?、121?、3H,3H 能放射出B射线,而125?、121?能放射出C射线,然后用C计数仪和液体闪烁计数仪测定。3H半衰期长,标记时需在特殊装置中进行,故多由放射性化学试剂中心做成药盒供应。其次B射线的检测需要昂贵的液体闪烁记数器测定,不易普及,故近来采用化学方法将被检测物和酪氨酸甲酯生成带有苯酚基的衍生物,便可用121?或125?标记。125?半衰期为60d,121?半衰期为8d,现今多趋向使用125?。 1.2标记方法 放射物标记中最常用的是外标记。碘标记的方法很多,最常用氯胺T法,氯胺T是一种氧化剂,它能使125?液中带负电荷的碘离子氧化成带正电荷的碘,然后取代抗原酪氨酸残基芳香环上的氢如图1。
801. [单选题]当有汞（水银）溅失时，应如何处理现场 A.用水擦 B.用拖把拖 C.扫干净后倒入垃圾桶 D.收集颗粒状水银，另在溅失处用硫磺粉盖上并统一处理 参考答案: D 802. [单选题]在蒸馏低沸点有机化合物时应采取哪种方法加热？ A.酒精灯 B.热水浴 C.电炉 D.砂浴 参考答案: B 803.[单选题]新玻璃（细菌）滤器应在流水中彻底洗涤，然后放在最后用流水洗涤。 A.1%的盐酸 B.重铬酸钾洗涤液 C.市售洗涤剂 D.氢氧化钠或碳酸氢钠稀溶液 参考答案: A 804. [单选题]危险性化学品不包括（）？
A.易燃性化学品 B.有毒性化学品 C.致癌性化学品 D.腐蚀性化学品）中浸泡数小时,（ 参考答案: C 805. [单选题]所有工作必须在工作台面的（）进行，并能够通过玻璃观察挡板看到。 A.前部 B.左部 C.右部 D.中后部 参考答案: D 806. [单选题]可燃气体的爆炸下限数值越低，爆炸极限范围越大，则爆炸危险性。( )A.越小 B.越大 C.不变 D.不确定 参考答案: B 807. [单选题]高温实验装置使用注意事项错误的是： A.注意防护高温对人体的辐射 B.熟悉高温装置的使用方法，并细心地进行操作
C.如不得已非将高温炉之类高温装置置于耐热性差的实验台上进行实验时，装置与台面之间要保留一厘米以上的间隙，并加垫隔热层，以防台面着火 D.使用高温装置的实验，要求在防火建筑内或配备有防火设施的室内进行，并要求密闭，减少热量损失 参考答案: D 808. [单选题]下列气体须在通风橱内进行操作的是： A.硫化氢 B.氟化氢 C.氯化氢 D.以上都是 参考答案: D 809.[单选题]根据农业部规定，动物病原微生物按危害程度可分为四类，其中哪类危害程度最高？ A.第一类 B.第二类 C.第三类 D.第四类 参考答案: A 810. [单选题]在安全柜内的工作开始前和结束后，安全柜的风机应至少运行（）。 A.5min B.10min
第七章放射免疫分析 第一节放射免疫技术 一、优点 灵敏度高、特异性强、重复性好、样品及试剂用量少、操作简便且易于标准化等优点。 用于各种微量蛋白质、激素、小分子药物和肿瘤标志物的定量分析。 二、基本类型及原理 （一）放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。 （二）免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。 三、常用的放射性核素 125I、131I、3H、14C等，使用最广泛的是125I。 四、放射性标记物制备及鉴定 （一）原理：以放射性碘原子通过取代反应置换被标记物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。因此，凡蛋白质、肽类等化合物在结构中含有上述基团者，均可用125Ⅰ直接标记，而对那些不含上述基团的甾体激素或药物分子，则必须在分子结构上连接相应基团才能用于放射性碘标记。 （二）标记及类型 1.直接标记法：肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其特点是标记方法操作简便，易得到比放射性较高的标记物。常用方法为：①氯胺T(ch-T)法；②乳过氧化物酶标记法。 2.间接标记法：也称联接标记法，是最常用的间接碘标记方法。该法主要用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。 （三）标记物的纯化：125Ⅰ标记物反应后，标记物需进行分离纯化以去除游离125Ⅰ和其他杂质。纯化标记物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标记物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。 （四）标记物的鉴定 1.放射化学纯度：是指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95%。该项参数还是观察在贮存期内标记物脱碘程度的重要指标。 2.免疫活性 3.比放射性 五、方法学评价 为增强结果的可比性，需对RIA方法学进行评价。除常规的灵敏度、精密度、准确性、特异性和稳定性等指标外，还应注意以下指标： （一）可靠性：又称健全性，是评价被测物与标准品的免疫活性是否相同的指标。借助标准曲线与样品稀释曲线的平行性分析来判断方法的可靠性。平行性好者可靠。 （二）剂量-反应曲线：标记免疫实验是通过已知浓度的标准品和相应的反应参数绘制成剂量-反应曲线，待测物定量是通过计算其反应参数在剂量-反应曲线上对应的标准品浓度值而确定。 （三）高剂量钩状效应：高剂量钩状效应(HOOK效应)是指当标本中被测物浓度超过线性范围上限时，所得结果反而降低或呈阴性的现象。
体外分析技术 一、概论 体外标记免疫分析是当今先进的超微量检测技术，它的测量值可精确到毫微克（ng）—微微克（pg），甚至达毫微微克级（fg），它的基础是先进的放射性或非放射性标记技术和先进的抗原—抗体结合的免疫技术。它主要被用于检测人体的各种激素和各种肿瘤标志物。是当前的重要检测技术之一。 体外标记免疫分析技术起始于1959年，由美国的Berson和Yalow共同建立了放射免疫分析法（RIA），由于RIA具有灵敏度高、特异性强、重复性好、测量简便、成本低等优点。在生物学和医学中对机体超微量活性物质的分析取得重要突破而获得飞速的发展，故Yalow在1977年获得诺贝尔奖。 但因RIA法必须使用放射性物质，所以在发展中受到一定限制。自70年代起科学家们曾先后研究并建立了多种非放射性物质的标记免疫分析，如酶标记免疫分析（EIA）、时间分辨荧光分析（TRFIA)、酶放大发光分析（CLEIA）、化学放光（CLIA）、电化学发光（ECLRA）等，并且可进行仪器的全自动化测定和全自动的数据分析。 各种测定方法主要是标记技术、标记品的不同而采用的测量方法不同，各具特点和优点，其基本原理还是标记免疫技术，其中最基本的还是放射免疫分析和免疫放射分析。 二、放射免疫分析的基本原理 放射免疫分析法（Radioimmunoassay,RIA）是建立在放射性分析的高度灵敏性与免疫反应高度特异性基础之上的超微量分析技术。通过测定放射性标记抗原—抗体复合物的量来计算出待测抗原（样品）的量。20世纪50年代末Berson和Yalow在研究胰岛素抗体时，首先了建立放射免疫分析法定量测定胰岛素含量，从而开创了生物活性物质微量测定分析的新时代，从此放射免疫分析技术以其灵敏度高、特异性强、重复性好、准确度高等优点而独树一帜。目前应用放射免疫分析技术能测定生物活性物质达300余种，被广泛应用于生物学医学各个领域。 放射免疫分析法的基本原理是竞争性抑制反应。设定限量的特异性抗体（Ab）与一定量的特异性标记抗原（*Ag）在一定条件下发生免疫反应，形成标记抗原—抗体复合物（*AgAb）。如在上述反应体系中加入非标记的抗原（Ag），则非标记抗原和标记抗原与限量抗体间发生了竞争性结合的抑制反应。当反应平衡后，将反应体系中的标记抗原—抗体复合物（B）与游离的标记抗原（F）分离，测定标记抗原-抗体复合物的放射性（每分钟计数cpm），通过计算，求出非标记抗原的量（图1） Ag + Ab AgAb + Ag + *Ag *Ag+ *AgAb 图1 放射免疫分析法的基本原理 可以看到，在反应体系中由于标记抗原和抗体都是限量的，随着投入的非标记抗原量的增大，标记抗原和抗体的结合量被抑制降低，此即为“竞争性抑制反应”。在实际应用时，用一组不同浓度的标准品抗原，在相同条件下，和标记抗原与抗体发生竞争性反应，随着标准品量的逐步增大，标记抗原-抗体结合率则逐步降低（图2），以标准品抗原浓度作为横坐标，以标记抗原-抗体复合物的结合率（B%）作为纵坐标，绘制标准曲线，测量待测样品的标记抗原-抗体复合物的放射性结合率（B%），即可自标准曲线上查得被测样品相应的含量。
免疫标记：四大免疫标记原理介绍！ 为提高抗原和抗体检测的敏感性，将已知抗体或抗原标记上易显示的物质，通过检测标记物，反映有无抗原抗体反应，从而间接测出微量的抗原或抗体。常用的标记物有酶、荧光素、放射性同位素、胶体金及电子致密物质等。这种抗原或抗体标记上显示物所进行的特异性反应称为免疫标记技术(immunolabelling technique)。 免疫标记不仅大大提高了试验敏感性，若与光镜或电镜技术相结合，能对组织或细胞内的待测物质作精确定位，从而为基础与临床医学研究及诊断提供方便。免疫标记技术大致分为两大类：一类属于免疫组织化学技术(immunohistochemical technique)，用于组织切片或其他标本中抗原的定位。另一类称为免疫测定(immunoassay)，用于液体标本中抗原或抗体的测定。 一，免疫酶技术(immunoenzymatic technique) 最早应用的免疫酶技术是免疫酶组织化学染色，即用标记的抗体与标本中的抗原发生特异性结合，当加入酶的底物时，在酶的作用下经一系列生化反应产生有色物质，借助光镜作出定位判断。目前，应用最广泛的是酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)。该法特异性强，敏感性高，既可检测抗体，又能测定可溶性抗原。主要方法及操作要领见图18.5，除了图示的两种方法外，还有抗原竞争法，现较少应用。ELISA常采用的酶为辣根过氧化物酶(hosradish peroxidase，HRP)，其底物是二氨基苯胺(DAB)，
底物被分解则呈棕褐色，可目测或借助酶标仪比色。ELISA为非均相免疫测定，另外还有均相法，在此不作介绍。 由于酶免疫测定无需特殊仪器和试剂，且操作简便，利于普及。因此，在免疫标记技术中，该法应用最为广泛，并在原有方法基础上加以改良，使得众多新的，更敏感的方法应运而生。 ①生物素-亲和素放大系统(biotin-avidin system，BAS)，建立于70年代后期，通过将酶标记在生物素或亲和素上，借助生物素与亲和素的高度亲力和生物素能与抗体结合的特点应用于ELISA，显著提高了检测的敏感性。 ②双表位ELISA(two-site ELISA)，其方法同双抗体夹心法，只是将包被的抗体和酶标抗体换成针对两个不同抗原决定簇的单抗，用于检测单抗的亲和性及表位特异性，亦可用于标本中抗原的快速检测，即在试验时可将待测抗原与酶标单抗同时加入反应体系，减少检测步骤。 ③斑点免疫渗滤试验(dot immunofiltration assay，DIFA)，其原理与ELISA相同，但以微孔膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜等)代替聚苯乙烯板作载体。试验时，将包被有抗原或抗体的微孔滤膜贴置于吸水材料上，依次滴加的标本、酶结合物、底物，分别进行洗涤，多余的标本和酶标抗体及洗涤液等可渗滤入吸水材料中，最后阳性标本在膜上呈现着色斑点。 ④酶联免疫电转移印渍法(enzyme linked immunoelectrotransferblot，ELIB)，该法将免疫转印技术与酶标技术相结合，有利于分析和检测更加复杂的抗原成分。ELIB分三阶段进行。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，先将抗原分成不同的区带(肉眼不可见)；第二阶段为转移电泳，即将凝胶上的电泳