水体浮游植物分析规范
参考淡水生物资源调查技术规范DB43/T 432-2009
水层设置
水深小于3m时，只在中层采样，混合均匀水体，可以只采表层（0.5m）水样；水深3m～6m时，在表层、底层采样，其中表层水在离水面0.5m处，底层水在离泥面0.5m处；水深6m～10m时，在表层、中层、底层采样；水深大于10m时，在表层、5m、10m水深层采样，10m以下除特殊需要外一般不采样，对于深水湖泊，取样的水层可以将取样间隔加大，如0m,10m,20m,50m, 100m。
采样
定量样品在定性采样之前用采水器采集，每个采样点取水样1L，贫营养型水体应酌情增加采水量。泥沙多时需先在容器内沉淀后再取样。分层采样时，取各层水样等量混匀后取水样1L。大型浮游植物定性样品用25号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集，注意网口与水面垂直，网口上端不要露出水面。
固定
浮游植物样品立即用鲁哥氏液固定，用量为水样体积的1％～1.5％。如样品需较长时间保存，则需加入37%～40％甲醛溶液，用量为水样体积的4％。
现行的一些规律性的方法为：取水样，500ml,加入5ml鲁格，虹吸到30-50ml,加入1ml甲醛。
水样的沉淀和浓缩
固定后的浮游植物水样摇匀倒入固定在架子上的1L沉淀器中，2h后将沉淀器轻轻旋转，使沉淀器壁上尽量少附着浮游植物，再静置24h。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸时管口要始终低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸过程不可摇动，如搅动了底部应重新沉淀。吸至澄清液的1/3时，应逐渐减缓流速，至留下含沉淀物的水样20mL～25（或30～40）mL，放入30（或50）mL的定量样品瓶中。用吸出的少量上清液冲洗沉淀器2次～3次，一并放入样品瓶中，定容到30（或50）mL。如样品的水量超过30（或50）mL，可静置24 h后，或到计数前再吸去超过定容刻度的余水量。浓缩后的水量多少要视浮游植物浓度大小而定，正常情况下可用透明度作参考,依透明度确定水样浓缩体积见表3，浓缩标准以每个视野里有十几个藻类为宜。
1
2 计数
● 计数框行格法
计数前需先核准浓缩沉淀后定量瓶中水样的实际体积，可加纯水使其成30mL 、50mL 、100mL 等整量。然后将定量样品充分摇匀，迅速吸出0.1mL 置于0.1mL 计数框内（面积20mm ×20mm ）。盖上盖玻片后，在高倍镜下选择3行～5行逐行计数，数量少时可全片计数。
1L 水样中的浮游植物个数（密度）可用下列公式计算：
01n 10
N V N =P N V ??………………………………………………（1） 式中:
N ——1L 水样中浮游生物的数量，个/L ；
N 0——计数框总格数；
N 1——计数过的方格数；
V 1——1L 水样经浓缩后的体积，mL ；
V 0——计数框容积，mL ；
P n ——计数的浮游植物个数。
● 计数框整体计数法
对计数框内所有物种进行鉴定，然后进行计算。
结果整理
分析浮游植物物种组成，分类单元确定到属或以下，给出结果。
《植物生理学实验》课程大纲 一、课程概述 课程名称（中文）：植物生理学实验 （英文）：Plant Physiology Experiments 课程编号：18241054 课程学分：0.8 课程总学时：24 课程性质：专业基础课 前修课程：植物学、生物化学、植物生理学 二、课程内容简介 植物生理学是农林院校各相关专业的重要学科基础课，是学习相关后续课程的必要前提，也是进行农业科学研究和指导农业生产的重要手段和依据。本实验课程紧密结合理论课学习内容，加深学生对理论知识的理解。掌握植物生理学的实验技术、基本原理以及研究过程对了解植物生理学的基本理论是非常重要的。本大纲体现了植物生理学最实用的技术方法。实验内容上和农业生产实践相结合，加强学生服务三农的能力。实验手段和方法上，注重传统、经典技术理论与现代新兴技术的结合，提高学生对新技术、新知识的理解和应用能力。 三、实验目标与要求 植物生理学实验的基本目标旨在培养各专业、各层次学生有关植物生理学方面的基本研究方法和技能，包括基本操作技能的训练、独立工作能力的培养、实事求是的科学工作态度和严谨的工作作风的建立。开设植物生理学实验课程，不仅可以使学生加深对植物生理学基本原理、基础知识的理解，而且对培养学生分析问题、解决问题的能力和严谨的科学态度以及提高科研能力等都具有十分重要的作用。 要求学生实验前必须预习实验指导和有关理论，明确实验目的、原理、预期结果，操作关键步骤及注意事项；实验时要严肃认真专心操作，注意观察实验过程中出现的现象和结果；及时将实验结果如实记录下来；实验结束后，根据实验结果进行科学分析，完成实验报告。 四、学时分配 植物生理学实验课学时分配 实验项目名称学时实验类别备注 植物组织水势的测定3学时验证性 叶绿体色素的提取及定量测定3学时验证性 植物的溶液培养及缺素症状观察3学时验证性 植物呼吸强度的测定3学时设计性 红外CO2分析仪法测定植物呼吸速率3学时设计性选修 植物生长物质生理效应的测定3学时验证性 植物种子生活力的快速测定3学时验证性
水体浮游植物分析规范 参考淡水生物资源调查技术规范DB43/T 432-2009 水层设置 水深小于3m时，只在中层采样，混合均匀水体，可以只采表层（0.5m）水样；水深3m～6m时，在表层、底层采样，其中表层水在离水面0.5m处，底层水在离泥面0.5m处；水深6m～10m时，在表层、中层、底层采样；水深大于10m时，在表层、5m、10m水深层采样，10m以下除特殊需要外一般不采样，对于深水湖泊，取样的水层可以将取样间隔加大，如0m,10m,20m,50m, 100m。 采样 定量样品在定性采样之前用采水器采集，每个采样点取水样1L，贫营养型水体应酌情增加采水量。泥沙多时需先在容器内沉淀后再取样。分层采样时，取各层水样等量混匀后取水样1L。大型浮游植物定性样品用25号浮游生物网在表层缓慢拖曳采集，注意网口与水面垂直，网口上端不要露出水面。 固定 浮游植物样品立即用鲁哥氏液固定，用量为水样体积的1％～1.5％。如样品需较长时间保存，则需加入37%～40％甲醛溶液，用量为水样体积的4％。 现行的一些规律性的方法为：取水样，500ml,加入5ml鲁格，虹吸到30-50ml,加入1ml甲醛。 水样的沉淀和浓缩 固定后的浮游植物水样摇匀倒入固定在架子上的1L沉淀器中，2h后将沉淀器轻轻旋转，使沉淀器壁上尽量少附着浮游植物，再静置24h。充分沉淀后，用虹吸管慢慢吸去上清液。虹吸时管口要始终低于水面，流速、流量不能太大，沉淀和虹吸过程不可摇动，如搅动了底部应重新沉淀。吸至澄清液的1/3时，应逐渐减缓流速，至留下含沉淀物的水样20mL～25（或30～40）mL，放入30（或50）mL的定量样品瓶中。用吸出的少量上清液冲洗沉淀器2次～3次，一并放入样品瓶中，定容到30（或50）mL。如样品的水量超过30（或50）mL，可静置24 h后，或到计数前再吸去超过定容刻度的余水量。浓缩后的水量多少要视浮游植物浓度大小而定，正常情况下可用透明度作参考,依透明度确定水样浓缩体积见表3，浓缩标准以每个视野里有十几个藻类为宜。 1
Journal of Water Resources Research 水资源研究, 2018, 7(5), 533-540 Published Online October 2018 in Hans. https://www.doczj.com/doc/1318092314.html,/journal/jwrr https://https://www.doczj.com/doc/1318092314.html,/10.12677/jwrr.2018.75060 Species Composition and Diversity of Phytoplankton in Tianhe River Xianhua Zhou, Yanyan Wang, Shiwei Gong Bureau of Shiyan Hydrology and Water Resources Exploration, Shiyan Hubei Received: Sep. 2nd, 2018; accepted: Sep. 14th, 2018; published: Sep. 25th, 2018 Abstract Through the phytoplankton monitoring data at Guanyin section in Tianhe River from 2016 to 2018, the variation of phytoplankton was analyzed by means of indicator biological method, dominant group me-thod and diversity index method. It is found that there are 7 doors and 45 genera of phytoplankton. Among them, the most species are green algae gate and silicon algae gate, accounting for 28.89% and 44.44%, respectively. The richness index at Guanyin section is between 0.89 and 1.67, the diversity index is between 1.32 and 2.49, and the evenness index is between 0.45 and 0.96; the phytoplankton density is 3.62 to 364.12 × 105/L. It was also found that the proportion of dominant genera density to total density and diversity index were negatively correlated, and the water quality was seriously polluted when the density of dominant genera was above 68%. Keywords Phytoplankton, Genera Composition, Diversity Index, Water Quality Evaluation, Tianhe River 天河浮游植物属类组成及多样性分析 周先华，汪炎炎，龚世伟 十堰市水文水资源勘测局，湖北十堰 收稿日期：2018年9月2日；录用日期：2018年9月14日；发布日期：2018年9月25日 摘要 通过2016~2018年天河观音断面浮游植物监测数据，运用指示生物法、优势属群法、多样性指数法解析其浮游作者简介：周先华，高级工程师，从事水文水资源管理工作。
2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定 将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方 （1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用； 取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。 （2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液 称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。 （3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液 称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。 （4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。 （5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液 取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法 （1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至
②浮游植物 调查期间，绥芬河（包括支流）浮游植物经鉴定共计6门40种属。其中，硅藻门最多，21种属，占52.5%；绿藻门次之，10种属，占25%；蓝藻门5种属，占12.5%；隐藻门2种属，占5%；甲藻门、裸藻门各1种属，共占2.5%。 绥芬河春季浮游植物优势种属有舟形藻、小环藻、针杆藻、桥弯藻；另外，绿藻门的衣藻、集星藻，蓝藻门的蓝纤维藻也在占优势。绥芬河秋季浮游植物优势种属有硅藻门的短小舟形藻、简单舟形藻、异极藻；绿藻门的斜列栅列藻、柱状栅裂藻、盘星藻、纤维藻；蓝藻门的平裂藻、针状蓝纤维藻等。 绥芬河春季浮游植物数量均值为1.75×106 ind/L。秋季浮游植物数量均值为1.81 ×106ind/L。春季浮游植物生物量均值为4.15mg/L。秋季浮游植物生物量均值为1.85mg/L。 ③浮游动物 绥芬河浮游动物经鉴定共计4类33个种属，其中原生动物12个种属，占36.4%；轮虫16个种属，占48.5%；枝角类2个种属，占6.1%；桡足类3个种属，占9.0%。 绥芬河春季浮游动物优势属有原生动物的侠盗虫，轮虫中的晶囊轮虫、三肢轮虫、螺形龟甲轮虫；桡足类的无节幼体。绥芬河秋季浮游动物优势属有原生动物有滚动焰毛虫、筒壳虫、侠盗虫；轮虫类有蒲达臂尾轮虫、三肢轮虫、矩形龟甲轮虫、螺形龟甲轮虫、前节晶囊轮虫；枝角类有柯氏象鼻蚤；桡足类有某种剑水蚤、无节幼体及桡足类幼体。 绥芬河浮游动物数量均值为4.40×103 ind/L。生物量均值为0.41mg/L。 ④底栖动物 调查期间共采到底栖动物4类41种（软体动物、环节动物、水生昆虫、甲壳动物及扁形动物），隶属于11目20科，其中水生昆虫28种，分属5目12科，占总数68.3%；软体动物5种，3目5科；环节动物7种，2目2科；甲壳动物1种，1目1科。 春季绥芬河底栖动物优势种属有生米蜉、东北田螺、黑龙江短沟蜷、圆顶珠蚌和钩虾等。秋季绥芬河底栖动物优势种属有生米蜉、Epeorus uenori，东北田螺、黑龙江短沟蜷、圆顶珠蚌、宽身舌蛭、钩虾等。
小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。 株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。 主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。 叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定 样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。 总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。 丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)
小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积 鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。 株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。 主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。 叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定 样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。 总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。 可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug
植物组织中可溶性糖含量的测定 在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 任何植物鲜样或干样。 （二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。 （三）仪器设备 分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。 三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。 表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。
青山湖浮游植物群落特征及水质评价 青山湖浮游植物群落特征及水质评价 【摘要】：2015年3月至2015年6月对南昌青山湖浮游植物进行调查研究。调查期间共发现浮游植物27属，其中25属隶属于6个具体的门，还有其中暂无法归门类目的属。其中蓝藻门种类最多，有9属，占全部种类的33.3％；其次为绿藻和硅藻门，分别为6属（22.2％）和4属（14.8％）。 【关键词】青山湖浮游植物种群特征 【Title】The phytoplankton community characteristics and water quality assessment of Castle Peak Lake 【Abstract】 From March 2015 to June 2015, the phytoplankton of the Nanchang lake was investigated.. During the survey found a total of 27 genera of phytoplankton, including 25 genera belonging to 6 a specific gate, and the temporarily unable to return to belong to a category. 【Key words】Qingshan lake phytoplankton Population characteristic 1 、前言 青山湖位于南昌市区东北面，水域面积316 hm2，平均水深为1． 9 m 左右，是南昌最大的内湖，由于城市排污和调蓄的作用，水质富营养化严重，为保护湖区生态环境［1］， 2001 年10 月，南昌市委、市政府开始大力整治青山湖。浮游植物是湖泊重要的生物群落，其种群结构特征经常作为评价水域营养水平、污染状况、资源现状、生产潜力等的指标和标准。作为初级生产者，浮游植物的群落结构直接影响着水生态系统的结构和功能，并能对水体营养状态的变化迅速做出响应［2］，其群落结构的时空变化特征与环境因子关系密切，生态系统中
植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民 浙江农林大学植物学科 2013年8月
实验一植物组织水势的测定 水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法 【实验目的】 了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。 【实验原理】 水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。 当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。 【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。 【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的
武汉大学浮游植物的调查和鉴定 【摘要】本实验主要对武汉大学月亮湖水样及东湖水样进行采集，用福尔马林液固定水样中的浮游植物，然后用1000cm广口瓶或分液漏斗沉淀已固定水样，用微量加样器取一定体积样本置于显微镜下进行观察及属种的鉴定 【关键词】月亮湖东湖浮游植物鉴定显微镜 【前言】 1）研究背景 浮游植物主要由藻类植物中的一些种类组成，其类群主要有蓝藻门、绿藻门、裸藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门和甲藻门7类。浮游植物一般为小型，肉眼难以看到，需借助显微镜方能观察其细微结构。它们之中有单细胞体、群体，有的则是丝状踢（大多不分枝）。水体中的大部分动态特征，如清晰度、营养状况、浮游动物和鱼的产量等，在很大程度上都取决于浮游植物。因此，浮游植物的调查和鉴定与渔业生产和环境保护有着密切的关系。 2）实验目的 1．学习对运动活泼的微型动物的观察和实验方法，增强显微镜操作能力。 2．通过观察认识浮游植物的基本特征及动物学教学中以它作为代表动物进行研究的意义。 3．认识浮游植物的常见种类。 1. 材料和方法 1.1 实验材料 材料：武大校内月亮湖内浮游植物东湖表面浮游植物 实验试剂及器具：浮游植物网，标本瓶，记号笔，显微镜，培养皿，滴管，相机，固 定液。 1.2 实验方法 1.2.1 水样的采集 经查阅资料得知，一般水体中浮游植物较少，必须借助浮游植物网在水体中进行长时间采集，而且水体中以流水居多，选点的时候应选择流速较缓的水体或者是静水，否则，将难以取到理想的样品。 本组于2013年xx月xx日进行了第一次浮游植物的采集，采集地点为月亮湖；本组于2013年xx月xx日进行了第二次浮游植物采集，采集地点为东湖。采样方法为：将浮游植物网放置于流速较缓的水域内静止五分钟以上，然后提起浮游植物网，将水样转移至离心管中，加固定液（甲醛溶液）固定 1.2.2浮游植物的鉴定 吸取固定的水样于载玻片上，制成临时装片，置于显微镜下观察，观察到一种藻类植物后，首先根据其形态结构，生活习性等特征将其归入个大门类中，然后参照淡水浮游植物图谱进行属种鉴定，拍摄照片做记录。 2. 结果 通过将采集标本，固定后置于显微镜下面观察，将其形态特征与浮游植物鉴定手册进行比对，我们大致鉴定出了以下十几种浮游植物种类：
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植物生理学实验指导
目录
植物材料的采集、处理与保存 植物生理实验使用的材料非常广泛，根据来源可划分为天然的植物材料（如植物幼苗、根、茎、叶、花等器官或组织等）和人工培养、选育的植物材料（如杂交种、诱导突变种、植物组织培养突变型细胞、愈伤组织、酵母等）两大类；按其水分状况、生理状态可划分为新鲜植物材料（如苹果、梨、桃果肉，蔬菜叶片，绿豆、豌豆芽下胚轴，麦芽、谷芽，鳞茎、花椰菜等）和干材料（小麦面粉，玉米粉，大豆粉，根、茎、叶干粉，干酵母等）两大类，因实验目的和条件不同，而加以选择。 植物材料的采集和处理，是植物生理研究测定中的重要环节。在实际工作中，往往容易把注意力集中在具体的仪器测定上，而对于如何正确地采集和处理样品却不够注意，结果导致了较大的实验误差，甚至造成整个测定结果的失败。因此，必须对样品的采集、处理与保存给予足够的重视。 一、原始样品及平均样品的采取、处理 植物生理研究测定结果的可靠性（或准确性），首先取决于试材对总体的代表性，如果采样缺乏代表性，那么测定所得数据再精确也没有意义。所以，样品的采集除必须遵循田间试验抽样技术的一般原则外，还要根据不同测定项目的具体要求，正确采集所需试材。目前，随着研究技术的不断发展，应该不断提高采样技术的水平。 在作物苗期的许多生理测定项目中都需要采集整株的试材样品，在作物中后期的一些生理测定项目中，如作物群体物质生产的研究，也需要采集整株的试材样品，有时虽然是测定植株的部分器官，但为了维持器官的正常生理状态，也需要进行整株采样。 除研究作物群体物质生产外，对于作物生理过程的研究来说，许多生理指标测定中的整株采样，也只是对地上部分的采样，没有必要连根采样，当然对根系的研究测定例外。采样时间因研究目的而不同，如按生育时期或某一特殊需要的时间进行。除逆境生理研究等特殊需要外，所取植株应是能代表试验小区正常生育无损伤的健康植株。
10.2调查海域浮游植物状况 2015年8月在调查海域监测到浮游植物18种，其中硅藻门17种，占总数的94.44%；甲藻门1种，占总数的5.56%。优势种为刚毛根管藻Rhizosolenia setigera、中肋骨条藻Skeletonema costatum、羽纹藻Pinnularia sp. 、小环藻Cyclotella sp. 、日本星杆藻Asterionella japonica 、拟旋链角毛藻Chaetoceros pseudocurvisetus。浮游植物生物密度变化范围在（0.98~3.67）×104个/m3之间，平均为1.91×104个/m3。多样性指数范围在1.05~2.02之间，平均值为1.61；均匀度变化范围在0.51~0.78之间，平均值0.70；丰富度指数范围在0.14~0.37之间，平均值为0.29。 2015年10月在调查海域监测到浮游植物9种，其中硅藻门8种，占种类组成的88.89%；甲藻门1种，占种类组成的11.11%。优势种为虹彩圆筛藻Coscinodiscus oculus-iridis、辐射圆筛藻Coscinodiscus radiatus、夜光藻Noctiluca scintillans。浮游植物生物密度变化范围在（0.78~38.89）×104个/m3之间，平均为11.58×104个/m3。多样性指数范围在0.19~1.80之间，平均值为0.85；均匀度变化范围在0.11~0.78之间，平均值0.41；丰富度指数范围在0.11~0.35之间，平均值为0.21。 2016年5月在调查海域监测到浮游植物12种，其中硅藻门11种，占总数的91.67%；甲藻门1种，占总数的8.33%。优势种为辐射圆筛藻Actinocyclus ehrenbergii、星脐圆筛藻Coscinodiscus asteromphalus、虹彩圆筛藻Coscinodiscus oculus-iridis、威氏圆筛藻Coscinodiscus wailesii。浮游植物生物密度变化范围在（0.30~0.72）×104个/m3之间，平均为0.48×104个/m3。多样性指数范围在0.00~2.20之间，平均值为1.55；均匀度变化范围在0.00~1.00之间，平均值0.80；丰富度指数范围在0.00~0.33之间，平均值为0.22。 2016年8月在调查海域监测到浮游植物19种，其中硅藻门17种，占总数的89.47%；甲藻门2种，占总数的10.53%。优势种为密联角毛藻Chaetoceros densus、格氏圆筛藻Coscinodiscus granii、虹彩圆筛藻Coscinodiscus oculus-iridis、辐射圆筛藻Coscinodiscus radiatus、细弱圆筛藻Coscinodiscus subtilis、威氏圆筛藻Coscinodiscus wailesii、小环藻Cyclotella sp.、浮动弯角藻Eucampia zoodiacus、柔弱菱形藻Nitzschia delicatissima、中肋骨条藻Skeletonema costatum、三角角藻
※交流园地 农业与技术 2017, V ol.37, No.16 243 ——以2011—2012年为例 魏 雷 （国家海洋局汕尾海洋环境监测中心站，广东 汕尾 516600） 摘 要：于2011年7月、10月和2012年3月在大亚湾沿岸海域进行了浮游植物采样调查，对其沿岸海域进行了浮游植 物的种类组成、细胞数量、水平分布和垂直分布、季节动态、优势种群及生态学指数的初步研究。共鉴定浮游植物156种，隶属于7门78属，其中硅藻50属107种，占68.58％；甲藻17属38种，占24.36％；此外，还鉴定出蓝藻、金藻、针胞藻、裸藻和绿藻。在采样调查的3个季节里，2012年3月浮游植物细胞数量最多，最高值达到9.02×106 cells/L ，多样性指数均值H 为0.58，均匀度均值为0.18，均为3个季节里最低。浮游植物优势种群主要为骨条藻和角毛藻，不同季节存在交叉与交替。在空间分布上，从整个大亚湾海域来看，西北沿岸浮游植物细胞数量要高于东南沿岸，从局部海域来看，小湾内细胞数量高于小湾外，表层浮游植物数量普遍高于底层。 关键词：大亚湾；浮游植物；群落结构 中图分类号：Q-9 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20170833214 浮游植物是海洋初级生产力的最重要的来源，是海洋物质转化和能量循环中的重要环节，在海洋生态网络系统中占据重要地位，它的群落结构变化往往能够直接或间接影响着其他高级生物的多样性和分布，极大地制约着海洋生产力的发展。本文在2011年7月—2012年3月期间对整个大亚湾沿岸海域的浮游植物进行了3个季度的调查，分析了其种类组成、细胞数量、空间分布、季节动态、优势种群及物种多样性，以期为该海域的赤潮及生态系统研究提供基础数据和背景资料。 1 材料与方法 1.1 站位布设 在大亚湾海域共设置了6个采样站位（图1）。DS00站位设在大亚湾西南方向的大鹏澳海域，DS11站位设在西北部的澳头港海域，DS14站位位于大辣甲与三门岛之间的海域，DS18站位设在大亚湾北部的霞涌海域，DS20站位大亚湾东南沿岸海域，DS24站位设在范和港的港口海域。1.2 浮游植物样品采集与观察 试验于2011年7月、10月和2012年3月对大亚湾海域的6个设定站位各采样1次。浮游植物样品的采集分网采（定性）与瓶采（定量）。浮游植物定性样品用孔径为20μm 的浮游生物网，进行垂直、水平拖网，收集样品约200mL ，加入5%甲醛溶液固定。定量样品用5L 采 水器采集表层（离水面0.5m ）和底层（离水底约1m ）水样，分别取1L 装入聚乙烯塑料瓶中，并立即用鲁哥氏液固定，最后浓缩至5~10mL ，保存到15mL 的离心管。 定性和定量样品除了在光镜下进行种类鉴定外，还借助扫描电子显微镜对光镜下难以识别的种类进行鉴定。定量样品采用0.1mL 浮游植物计数框在光镜下进行数量统计。 2 结果与讨论 2.1 浮游植物种类组成特征 通过对3个季节采集的浮游植物样品的初步分析，共鉴定浮游植物156种（含变种、变型）。其中，硅藻是最主要的类群，鉴定出50属107种，占浮游植物总种类的68.59%；甲藻次之，含17属38种，占24.36%；蓝藻4属4种；针胞藻、金藻和绿藻各2属2种；裸藻1属1种。 硅藻中，角毛藻属和海链藻属的种类最多，各12种，其次是根管藻属，鉴定出10种；甲藻中原多甲藻属和原甲藻属为主要的优势类群，分别为8种和6种。2.2 浮游植物数量分布特征2.2.1 水平分布和垂直分布 在调查的3个季节里，春季和夏季浮游植物细胞数量水平分布大体一致，在整个大亚湾海域春季和夏季，浮游植物生物量呈现出从西北沿岸向东南沿岸递减的趋势；其中位于澳头港的DS11站位浮游植物细胞数量最高，大亚湾湾口的DS14站位细胞数量最低。秋季浮游植物生物量呈现东北向西南方向递减；浮游植物细胞数量最高的是位于大亚湾北部沿岸的DS18站位，生物量最少的位于大鹏澳海域的DS00站位。 在调查的3个季节里，浮游植物细胞数量垂直分布各有不同。2012年春季，大亚湾海域表、底层各站位浮游植物细胞数量互有高低，DS00、DS14和DS20站位，生物量表层高于底层；DS11、DS18和DS24站位，底层细胞数量高于表层。 2011年夏季，除DS18站位外，其他站位表层浮游植物生物量均高于底层。2011年秋季，所有站位表层浮游植物细胞数量均高于底层。总体来说，大亚湾海域浮游植物生物量在垂直分布上存在一定的规律性，在大多数站位表层海水浮游植物细胞数量高于底层。2.2.2 季节变化 大亚湾海域浮游植物群落结构调查 图1 大亚湾近岸海域调查站位分布
1 叶圆片放氧活性的测定 原理：同光合速率一样，叶片光合放氧速率是反应光合能力的一项重要指标，其大小本质上取决于PSII活性的大小。 称取2～3 cm2 叶片约0.2g，用打孔器2-3 mm2的小圆片后放入含有200mmol Trincine-NaOH，100 mmol NaHCO3，pH7.0 的缓冲液中，并用注射器抽真空1min 左右，使缓冲液充分渗入到叶肉细胞里，最后将叶圆片连同缓冲液转移至极谱氧电极(Hansatech，英国)的反应杯里测定放氧活性，测定在20℃及800μmol.m-2.s-1光强下进行，每个样品测定3个重复。 2 核酮糖-1，5-二磷酸羧化酶（RuBPCase）活性测定 原理：Rubiscase是光合作用中最重要的关键酶，它既催化RuBP羧化反应，又催化RuBP加氧反应，对植物的光合作用具有重要的调控作用。 参照李合生等[57]的方法，称取0.5g叶片加入匀浆液6ml（100mmol/L Tris-HCl 缓冲液pH7.8，10 mmol/L MgCl2，1.0 mmol/L EDTA，20 mmol/L 2-巯基乙醇，2%聚乙烯吡咯烷酮）冰浴研磨匀浆，14000g、4℃离心20min，上清液作酶液活性分析。反应液总体积为200μL，内含反应介质100mmol/L Tris- HCI 缓冲液(pH7.8)、0.4mmol/L EDTA、12 mmol/L MgCl2）93.3μL、50 mmol/L ATP、50mmol/L 磷酸肌酸，200mmol/L NaHCO3各13.3μL，160 u/ml 磷酸肌酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油酸激酶，160 u/ml 磷酸甘油醛脱氢酶各6.7μL，5mM/L NADH，蒸馏水各13.3μL，RuBPCase提取液6.7μL 30℃恒温水浴10 min, 最后加入9 mmol/L RuBP 6.7μL反应开始，用Theymo1500型酶标仪96孔板测定340 nm下光吸收的变化。以ΔA340·min-1下降0.01为l U，每个样品测定3个重复。
实验八、浮游植物数量（密度）和生物量的调查 一、实验目的： １、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。 ２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。 二、原理：见《海洋生态学》第六章第一节。 生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。 海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。 三、仪器与设备： １、分光光度计２、显微镜３、浮游植物计数框４、采水瓶 ５、电动吸引器６、离心沉淀器７、抽滤器８、微孔滤膜 ９、核孔滤膜 10、冰箱 11、20μm孔径筛绢 四、药品与试剂： 等。 丙硐、甲醛、路戈氏碘液、MgCO 3 五、实验步骤： 1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。 2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a总量）、2μm 核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2~20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。 3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a含量及占叶绿素a总量比
一植物组织中ETH（乙烯）释放量的测定 测定原理：ACC是乙烯合成的直接前体，为了更好地了解乙烯对植物的调节作用，有必要测定植物中ACC的含量，在冷却的Hg+存在下，NaClO专一地使ACC转化成乙烯。ACC：1-氨基环丙烷-1-羧酸 测定中气相色谱仪用的是氢火焰检测器FID。 色谱仪包括固定相和流动相。由于固定相和流动相对各种物质的吸附或溶解能力不同，因此各物质的分配系数不一样。当待测样（含ETH混合气体）加入固定相以后，不断通以流动相（通常为氮气、氢气）待测物不断再分配，最后按照分配系数大小顺序依次被分离，并进入检测系统被检测，检测信号的大小，反映出物质含量的多少，在记录仪上呈现色谱图。判断气相色谱仪氢火焰检测器是否点燃的3种方法？如何判断检测器已工作？ 1、将不锈钢镊子接触到检测器的喷扣处，若镊子上有水珠证明氢气已被点燃； 2、根据记录笔的位置来判断； 3、微电流放大器的“引燃开关”切换“引燃”时，检测器如发出扑声火焰已被点燃。 结果分析：经冷冻的苹果ETH释放速率低于常温的乙烯释放速率。经低温处理ACC合成酶的形成受到损伤和影响，从而降低乙烯的合成与释放。 3大温度3大气流量：基线成一直线表明稳定了 柱温80度进样器温度120度检测器温度140度 N2 流量35微升每分钟400 H2 流量45 微升每分钟55千帕空气流量350 微升每分钟40 千帕 二植物组织中脂肪氧化酶活力测定 原理根据基质浓度一定，反应体系中溶解氧浓度的变化与酶活力大小呈线性相关原理进行测定。LOX氧化多元不饱和脂肪酸生成具有共轭双键的过氧化物时消耗氧气，溶液中氧浓度的减少速率与酶活力大小成正比，用氧电极可精确的测定酶活力。 结果：经过干旱处理的小麦组织中LOX活力低（受干旱条件的诱导LOX基因的表达） 注意事项：1测定时，维持温度恒定，氧电极对温度变化非常敏感; 2 反应杯中不应有气泡，否则会造成信号不稳 3 进行试验时要保持磁转子的转动，以平衡氧气浓度 4 电极使用一段时间后，在阳极上形成一层氧化膜，使电极的灵敏度下降，需要用清洁剂清洁阳极。 三半伤害温度的求算 1 以伤害度为纵坐标，温度为横坐标，制作曲线，50%伤害对应的温度即半伤害温度； 2 以Logistic生长曲线方程拟合Y=K/(1+Ae-BT) Y 伤害度（相当于胁变）K 最大外渗量 T 温度（相当于胁强）A，B 常数 据Logistic方程，以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，的一直线，直线与横轴交点即半伤害温度。 半伤害温度的生理意义，半伤害温度通常可用来表示植物对高温或低温抗性的大小。在高温伤害情况下，若半伤害温度高，说明对高温伤害抗性强；在低温伤害时，则半伤害温度越低，植物对低温伤害抗性强。对于其他逆境，具有相应的生理意义。 但是对于高温伤害，同样以Ln（（K/Y）-1）为纵坐标，以T为横坐标作图，发现做出的不是直线而是S型曲线。 四蒸汽压渗透压计测植物组织渗透势蒸汽压渗透压计的工作原理 1 原理对于一种溶液来说，溶质颗粒数的增加改变了溶剂分子的自由度，导致溶剂分子主要特征的改变。这些溶液特征的相对变化与溶液中粒子的增加量呈线性相关，所以称他们为