HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量
[摘要] 目的用高效液相色谱法测定复方穿心莲片中脱水穿心
莲内酯的含量。方法采用dia-monsil c18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（（52∶48）为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长：250 nm。结果脱水穿心莲内酯的线性范围为0.036～0.328 μg，r = 0.999 8；本品平均回收率为100.04%，rsd值为0.11%。结论本法简便、灵敏、准确。
[关键词] 高效液相色谱法；复方穿心莲片；脱水穿心莲内酯；含量测定
[中图分类号] r927.2 [文献标识码] a [文章编号] 1674-4721（2013）01（c）-0062-02
复方穿心莲片是以穿心莲、路边青药材制成的内服制剂，具有清热解毒、凉血、利湿的功效，用于风热感冒、喉痹等疾病[1]。本文采用hplc法对制剂中的有效成分脱水穿心莲内酯进行含量测定，所建立的方法准确可靠、专属性强、稳定，可用于该制剂的质量控制。现报道如下：
1 仪器与试药
仪器：agilent lc-1260高效液相色谱议（美国）、agilent
lc-1200dad检测器；ad204-s电子天平；kq-300de超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。复方穿心莲片样品（广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：c1d001、c1d002、c1d003），甲醇（色谱纯，天津市大茂化学试剂厂）；水为纯净水；脱水穿心莲内酯对照
穿心莲内酯的提取 分离及鉴定 2011级16班 摘要：穿心莲为解毒消炎类临床常用药，穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分，分子式C20H30O5，白色方形或长方形结晶，味极苦，难溶于水易溶于乙醇、甲醇等。利用乙醇提取方法、超声、回流、旋转蒸发浓缩方法对穿心莲内酯进行提取分离以及纯化，使用TLC法对其鉴别，可得到纯度较高的穿心莲内酯。 关键词：穿心莲、穿心莲内酯、超声提取法、乙醇提取法、TLC鉴别 Isolation & Identification of Andrographolide ABSTRACT:Clinical commonly used medicines, creat for detoxification counter Andrographolide is the main effective component, Traditional Chinese medicine (TCM) andrographis formula C20H30O5, white square or rectangle crystal, taste bitter, soluble in water, soluble in ethanol，methanol, https://www.doczj.com/doc/125402190.html,ing the ethanol extract method, ultrasound, reflux, rotary evaporation enrichment method to extraction separation and purification of Andrographolide, using TLC method for the identification, can get high purity Andrographolide. KEY WORDS:Andrographis paniculata；Ultrasonic extraction；Andrographolide；alcohol extraction；Thin layer chromatography (TLC) 穿心莲为常用中药，来源于爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata（Burm. f.）Nees.的干燥地上部分。收载于《中国药典》2000 年版一部。具有清热解毒，凉血，消肿的功能，临床用于感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、顿咳劳嗽、泄泻痢疾、热淋涩痛、痈肿疮疡、毒蛇咬伤等。其主要活性成分为穿心莲内酯（andrographoiide）、新穿心莲内酯（neoandrographoiide）脱水穿心莲内酯（dehydroandrographoiide）[4]。 穿心莲内酯为天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。本品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。主要药理作用：抗菌作用、抗病毒作用、利胆保
穿心莲内酯类注射剂市场浅析 陈莹、李德馨 （天津天士力集团有限公司） 摘要：穿心莲内酯是中药穿心莲的主要有效成分，具有抗感染、抗炎、解热等多种功能，对目前应用于临床的穿心莲内酯类注射剂进行了综述，并对市场前景进行了分析。 关键词：穿心莲内酯注射剂应用市场分析 穿心莲内酯(Andrographolide)是由爵床科植物穿心莲Andrographolispanieuafa(burm．f．)nees经提取制得的中药植物单体，具有清热解毒、抗菌消炎功能．是治疗上呼吸道感染、急性菌痢、病毒性感冒等常用中成药穿琥宁制剂的主要原料。[1]穿心莲具有抗感染、抗炎、解热等多种功能。20世纪70年代初，国内开始将穿心莲的茎叶或全草提取后，制成了穿心莲片等普通口服制剂。普通制剂对细菌、病毒虽然具有一定的抑制作用，但其威力不足。 穿心莲内酯是从穿心莲中提取的有效成分，单体纯度高，产品质量和药理作用较穿心莲更具有优势。目前SFDA已批准生产穿心莲内酯片剂、胶囊、软胶囊、滴丸等口服剂型。其缺点是穿心莲内酯为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。针对临床上病毒感染急症的需求，将其结构中引入不同的亲水基团，增强其水溶性，提高疗效。在我国，自七十年代开始对穿心莲内酯水溶性衍生物进行研究，开发了一系列注射剂，其中穿琥宁、炎琥宁、莲必治、喜炎平占据市场主导地位。 1.穿心莲内酯类注射剂品种 穿琥宁是穿心莲内酯经酯化、脱水、成盐而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐；炎琥宁是穿琥宁与氢氧化钠的简单反应而得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钠钾盐；莲必治是穿心莲内酯和亚硫酸氢钠发生加成反应制得的水溶性磺酸盐；喜炎平是穿心莲总内酯通过磺化得到的磺酸盐，喜炎平具有国家专利，属于江西青峰制药厂独家产品。 这4个品种的母体均为穿心莲内酯，只是引入的亲水基团或盐不同。客观分析有关这四个品种性能比较的文献资料，结构上的细微变化并没有对药理作用、药代动力学以及不良反应等方面带来质的改变，因此当前市场上穿琥宁、炎琥宁、莲必治和喜炎平“四驾马车并驱”。 穿心莲内酯注射剂具有较好的疗效，临床广泛用于治疗高热[2]、呼吸道感染[3]、儿童秋季腹泻[4]、流行性腮腺炎[5]等病毒性疾病，为中医院急诊科(室)必备纯中药制剂之一，打破
穿心莲内酯分析 简介 穿心莲为爵床科植物穿心莲的干燥地上部分。原产十印度，我国华东、中南及西南等地有栽培。又名一见喜、苦草、榄核莲等，味苦，性寒，归心、肺、大肠、膀胧经。具有清热解毒，凉血消肿之功效。用十感冒发热，咽喉肿痛，口舌生疮，顿咳劳嗽，泻泄痢疾，热淋涩痛，痈肿疮疡，毒蛇咬伤。 结构 3-[2-[decahydro-6-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-5,8a-dimethyl-2-methy lene-1-napthalenyl]ethylidene]dihydro-4-hydroxyl-2(3H)-Furanone 特点 穿心莲内酯属于二萜内酯类化合物，具有内酯环反应特征，对Legal 试剂、Kedde试剂或50%氢氧化钾显紫红色。 构效关系 穿心莲内酯由二萜双环和五元内酯环两部分通过两个碳原子连接构成。在二萜内酯基本结构上有羟基和双键官能团。 穿心莲内酯在醋酐作用下，得三乙酰化合物（32），证明存在三个羟基，羟基分别位于3α, 14α, 19-位，三乙酰化合物（32）在Al (Hg)的作用下发生氢解得化合物（33），证明了14-位是烯丙型羟基，同时14-位羟基又位于不饱和内酯羰基的β-位，所以较易失去，形成脱水穿心莲内酯。紫外光谱: λ223nm (lgε= 4.1)证明分子中有不饱和γ_内酯结构。红外光谱显示分子max 中除了γ-内酯环以外，尚有环外次甲基的存在。双键分别位于12（13), 8 （17)-位，双键均为环外双键，其中一个双键是五元内酯环的环外双键，同时也是烯丙醇的一部分，它与内酯环上的酯羰基共轭，构成了环外α,β-
不饱和-γ-内酯，由于环内张力，这种内酯结构较不稳定，极易在碱性条件下水解开环，穿心莲内酯在碱性条件下，生成化合物（34），化合物的开环，说明了穿心莲内酯存在有内酯的结构。环外双键也易发生重排，进入内酯环内形成更为稳定的α，β-不饱和-γ-内酯。另外一个双键位于二萜双环(反式十氢萘构型)上。这种结构类型决定了穿心莲内酯化学性质较不稳定和相对活泼的特点。 各种名称 穿心莲别名：一见喜、万病仙草、四支邦、槛核莲、苦胆草、斩龙剑、日行千里、四方莲、金香草、金耳钩、春莲夏柳、印度草、苦草等。 来源 穿心莲植物适于生长在亚热带，泰国、马来西亚、斯里兰卡、印度以及巴基斯坦也有穿心莲资源分布，我国广西、广东出产的穿心莲，内酯含量最高，达到4%左右。 理化性质 穿心莲内酯主要来源于爵床科植物穿心莲的全草或叶，是中药穿心莲的主要有效成分之一。穿心莲内酯又称穿心莲乙素，为二萜内酯类物质，无色方形或长方形结晶，口味极苦，分子式C20H30O5，分子量350.44，易溶于乙醇、丙酮、吡啶，微溶于水和氯仿，几乎不溶于乙醚。熔点230~231 ℃，UVλ(EtOH)max 225nm；IRγ(KBr)max cm-1：3400，3390~2979(0H)，1828，1647，979 (C=CH2)。 稳定性 以穿心莲超分子提取物为样品建立含量测定方法，主要测定其中含量
穿心莲内酯的提取、分离、鉴定及亚硫酸氢钠加成物的制备 穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andjrographis panicalata (Burmf)Ness)的全草或叶。具清热解毒，凉血消肿作用，用于治疗急性菌痢、胃肠炎、咽喉炎、尿路感染等。穿心莲中含有多种苦味素，属二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯、高穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲烷、穿心莲酮等。其中穿心莲内酯、新穿心莲内酯是穿心莲抗菌消炎的主要有效成分。 鉴于穿心莲内酯在水中的难溶性，将穿心莲内酯进行磺化、亚硫酸氢钠加成和琥珀酸酐酯化等水溶性衍生物合成研究，克服了穿心莲内酯不溶于水的特性。 穿心莲中主要成分的结构及其性质 1．穿心莲内酯(andrographolide)：C 20H 30O 6，又称穿心莲乙素，为无色方型或 长方型结晶，mp 230~232℃，[α]D 20 -126。 。味极苦，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿、乙醚，难溶于水及石油醚。 2．脱氧穿心莲内酯(14-deoxy-andrographolide)：C 20H 30O 4，又称穿心莲甲素，为无色片状或长方型结晶， mp l75~176.5℃，[α]D -36(1％，氯仿)。味稍苦，可溶于甲醇、乙醇，丙酮、吡啶、氯仿、乙醚、苯、微溶水。 3．新穿心莲内酯（neo-andrographolide )：C 26H 40O 8，又称穿心莲丙素、穿心莲新苷，为无色柱状结晶，mp l67~168℃。无苦味，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿和水，不溶于石油醚。 O O CH 2OH HO HO O O CH 2OH HO O O CH 2O-Glu 穿心莲内酯 脱氧穿心莲内酯 新穿心莲内酯 O O CH 2OH HO HO Na 一、实验目的 1. 掌握穿心莲内酯类二萜化合物的理化性质和提取分离方法。 2. 学习氧化铝柱色谱的原理和操作方法。 3. 通过穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成，掌握使脂溶性产物转化为水溶性产物的一种方法。 二、实验原理（综合性实验） 穿心莲中的内酯类化合物易溶于甲醇、乙醇．丙酮等溶剂，故利用此性质选用乙醇提取之，穿心莲中含有大量叶绿素，可用活性炭脱色法除去叶绿素类杂质；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯在氯仿中溶解度不同，初步将二者分离；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯结构上的差异，用氧化铝柱分离二者，将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物以增加其在水中的溶解性。 三、实验内容 1．仪器和试剂 玻璃色谱柱（2×30cm ）及配套分液漏斗，滤纸，50ml 三角瓶数个， 恒温水浴锅，蒸发皿，玻璃板（5×20cm ），色谱缸，玻璃漏斗，铁架台，500ml 园底烧瓶，抽滤瓶，布氏漏斗，冷凝器，旋转蒸发仪，硅胶薄层板，显色试剂喷瓶，电吹风，锥形瓶(50m1)等。 穿心莲粗粉，95％乙醇，活性炭，丙酮，氯仿，甲醇，正丁醇，亚硫酸氢钠，无水乙醇，0.3％亚硝酰铁氰化钠，10％的正丁醇氢氧化钠溶液，3，5-二硝基苯甲酸碱性溶液，50％氢氧化钾甲醇试液。
穿心莲内酯的提取分离和鉴定 一、目的要求 学习中药中内酯类成分的提取分离及检识，通过实验要求： 1.掌握从穿心莲中提取、分离穿心莲内酯的操作方法。 2.熟悉穿心莲内酯类成分的性质和检识方法。 3.了解去除叶绿素的方法。 二、实验原理 穿心莲中的内酯类化合物易溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，故利用性质选用乙醇提取之；穿心莲中含有大量叶绿素，可用活性炭脱色除去叶绿素类杂质；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯在乙酸乙酯中溶解度不同，初步讲两者分离；利用穿心莲内酯与脱氧穿心莲内酯结构上的差异，用氧化铝柱分离二者。 三、实验仪器与试剂 仪器：圆底烧瓶、旋转蒸发仪、冷凝管、烧杯、天平、胶头滴管、试管、量筒、薄层板等 试剂：穿心莲粗品、穿心莲对照品、乙醇、乙酸乙酯、活性炭、碳酸钠、水等 四、实验过程 （一）提取分离流程图
穿心莲粗粉20克 0.01%、8倍量的碳酸钠煎煮2次，每次2 h 合并提取液 提取液用25%HCl调节PH至6-7 10%活性炭脱色，蒸发(1/4-1/5) 中性氧化铝柱色谱 乙醇洗脱 95%乙醇溶解 精制穿心莲内酯 五、注意事项 1、穿心莲内酯类化合物为二萜类内酯，性质极不稳定，易氧化、聚合而树脂化。因此所提取的穿心莲应是当年产的新药材，并且要未受潮变质的茎叶部分，否则内酯含量明显下降至极低，难以提取得到。 2、水提取一般可将多糖等多种水溶性杂质提取出来，水提取出膏率较高，但穿心莲内酯水溶性较低，不适合穿心莲的提取。 3、穿心莲内酯的析晶宜在含乙醇量稍高的情况下进行，此时晶形与结晶的纯度都较好。当溶液的含水量较高，或粘稠度太大时，往往不易析出结晶。 4、加入的活性炭不能过多，否则会吸附穿心莲内酯，使产率降低。 六、思考题
穿心莲中穿心莲内酯的提取 摘要：从药用植物穿心莲中提取穿心莲内酯。150克穿心莲粗粉甲醇回流提取，水沉去杂质，二氯甲烷脱酯,活性碳脱色，结晶得穿心莲内酯精品1.5克，收 率为1%，其含量为98.5%。 关键词：穿心莲；穿心莲内酯；提取工艺 Abstract：Withdraws the Andrographis Paniculta lactone from themedicinal plant Andrographis Paniculta．Uses the methyl alcoholbackflow to withdraw，the water sinks ，the methylenechloride escapes the ester，the activated carbon decolorizes，thecrystallization results in the Andrographis Paniculta lactonehigh-quality goods 1.5 grams，the returns-ratio is 1%, its content is98.5%．Key word：Common Andrographis Herb ，Andrographolide ，Extract method 1．前言 穿心莲为爵床科穿心莲属植物，药用叶或全草，秋初茎叶盛时采割，晒干。在中药里归为凉性药物。穿心莲在亚洲，几个世纪以前就用于治疗胃肠道和呼吸道感染、发热、疱疹、咽喉痛和各种细菌性感染。在中医里，穿心莲是一种治疗感冒的重要草药，它用于退热、驱毒[1]。穿心莲不仅能抑HIV-1，还能抑制HIV-1对细胞的毒性和在细胞间的传播，从多途径抑制HIV-1，因而能防止HIV-1抗药性突变的形成。穿心莲价格低廉，且经过修饰的穿心莲内酯衍生物具有更强的抗HIV-1活性[2]。因而穿心莲及其衍生物用于艾滋病的治疗具有广阔的前景。 由于穿心莲内酯是穿心莲的主要有效成分，穿心莲内酯的含量，与其产地、收期、部位和提取工艺有很大的关系。与茎、果相比，穿心莲叶中含穿心莲内酯最高；穿心莲内酯为酯类结构，在水溶液中易水解、开环、异构化，故影响药物稳定性。在对穿心莲内酯的稳定性研究中发现，在不同温度、不同pH值环境、不同的生物样品及不同有机溶剂中，穿心莲内酯稳定性都有较明显的差异。温度越低，穿心莲内酯的稳定性越好；在碱性条件下不稳定，且随着碱性强度的增加，其不稳定性增强；在pH值为7的条件下，该药并不稳定，其最稳定的pH值为3～5；在酸性条件下，该药较稳定，但并非酸性越强，稳定性就越好。目前已经发现穿心莲内酯具有以下药理作用：抗菌消炎、解热作用；抗癌和免疫调节作用；病毒和免疫增强作用；心血管作用；保护肝脏。[3-7] 正由于穿心莲内酯具有这样广泛的药理作用，也使得人们对穿心莲内酯的提取工作发
穿心莲内酯提取工艺 1 设备与仪器 I．I 设备多功能提取罐 1．2 仪器：Agilent-1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)； Hypersil ODS 色谱柱250×4.6mm，5 7 m ；TV-1221型紫外-可见分光光度计，北京普析制造；Sartorius BS210S电子天平(德国塞多利斯股份公司)；ZF-2型三用紫外仪(上海安亭电子仪器厂)；超声波清洗器 (上海科导超声仪器有限公司) 2 提取工艺 2．1 工艺： ① 粉碎：取穿心莲叶，粉碎机上安装孔径为8ram的筛网粉碎成粗粉。 ②提取：穿心莲粗粉用4倍量95 乙醇回流提取两次，第 -次2小时，第二次1．5小时。合并回流液，滤过，回收乙醇浓缩至每 lml含2g药材．冷却10℃-20℃，静止12小时析出结晶，滤取结晶物。 ③ 重结晶：结晶物加入lO-15倍量的95%乙醇(以结晶物重量计)，搅拌溶解，加0.5 活性炭(以结晶物重量计)加热回流3O分钟，过滤，滤液回收乙醇，静止l2小时以上，滤取结晶物。 ④ 干燥：结晶物在50-70℃ 减压干燥6-8小时。 ⑤ 粉碎：干燥物经100目筛粉成细粉。 ⑥ 检测水份，含量合格后包装入库。 2．2 工艺研究：根据穿心莲内酯L2]的化学性质，在沸乙醇中溶解，在甲醇、乙醇中略溶，在水或乙醚中不溶。我们选择用不同浓度的乙醇做溶媒回流提取穿心莲内酯考察对回流提取时间、提取次数对产品收率的影响。 2．2．1 提取次数的考察：穿心莲粗粉(检测含量)。称取六份，每份 lkg，分成三组，分别加入4倍量(以药材重量计)95 乙醇，第-组回流提取-次，第二组回流提取两次，第三组回流提取三次。每次提取时间 2小时，分别合并提取液，回收乙醇，浓缩至500ml，测定体积做为储备液。 ① 出膏率的测定精密吸取储备液10ml于恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，移置干燥器中冷却0.5小时，称重，计算即得。 ② 含量测定将上述储备液冷却至l0-20℃ ，静止12小时以上，有结晶析出，滤取结晶物于6O-7O℃ 减压干燥6-8小时，干燥物称重，按照WS-10001-(HD-0971)-2002穿心莲内酯含量测定项下的方法测定含量，并计算药材中穿心莲内酯的转移率。由上表可知，提取次数的增加，出膏率、转移率呈上升趋势，1组出膏率和转移率较低，原因是提取次数少，提取不完全。二组和三组的出膏率和转移率比较接近，从能源消耗和乙醇消耗等经济方面考虑，选择二组即提取两次比较合理。 2．2．2 提取时间的考察：见表2。穿心莲粗粉(检测含量)，称取六份(每个实验平行操作两份)，每份lkg，分成三组，分别加入4倍量(以药材重量计)95 乙醇，回流提取两次。第-组回流提取两次，每次时间为1小时。第二组回流提取
穿心莲内酯 穿心莲内酯，分子式C20H30O5，天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。本品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。 基本信息 【产品名称】穿心莲内酯 【英文名称】Andrographolide 【别名】穿心莲乙素，雄茸内脂 【C A S 号】5508-58-7 【化学名称】293H)-Furanone,3-[2-[decahydro-6-hydroxy-5- (hydroxy-methyl)-5,8a-dimethyl-2-methylene-1-naphthalenyl] ethylidene]dihydro-4-hydroxy- 【植物来源】爵床科植物穿心莲Andrographis Paniculata(Burm.f) Ness的全草或叶。 【分子式】C20H30O5; 【结构式】 【分子量】350.44 【成分分类】二萜内酯类 【执行标准】WS-10001-(HD-0971)-2002 【规格】穿心莲内酯含量99% 2物理性质 白色方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭，味苦。在沸乙醇中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，极微溶于氯仿，在水或乙醚中几乎不溶。熔点230～231℃，（α）17D -126.6±2°（冰醋酸）,[α]D –112.7 (c,0.53,MeOH)，与碱性2% 3,5－二硝基苯甲酸试剂，显紫红色，异羟肟酸铁反应呈阳性。密度(21℃）1.2317g/cm3。UVλEtOHmax nm （ε）,223(12300); IRvKBrmax cm-1: 3448,3390～?279(OH),1828,1647,906 (C=CH2),1727 （α，β-不饱和γ-内酯）,1672 （共的C=C)；13CNMR。
HPLC法测定穿心莲注射液中穿心莲内酯的含量 目的建立穿心莲注射液中穿心莲内酯的高效液相色谱法含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定含量，色谱柱：Agilent TC-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（50∶50）；检测波长：224 nm；流速：1.0 ml/min。结果穿心莲内酯在0.02 022～0.1011 mg/ml（r=0.9999）内呈良好的线性关系，平均回收率（n=6）为99.1%（RSD=1.1%）。结论建立的测定穿心莲内酯的方法准确有效，有助于进一步完成穿心莲注射液的质量控制方法。 [Abstract]Objective To establish the HPLC method for determination of Andrographolide content in Chuanxinlian Injection.Methods HPLC was used in content determination，the chromatographic column was Agilent TC-C18 （4.6 mm×150 mm，5 μm），the mobile phase consisted of methanol-water （50：50），the detection wavelength was 224 nm and the flow rate was 1.0 ml/min.Results The good linear relation was maintained when Andrographolide was from 0.02 022 to 0.1011 mg/ml （r=0.9999）.The average recovery was 99.1% （n=6，RSD=1.1%）.Conclusion The method of determination of Andrographolide is accurate and effective，which can help to complete the quality control method of Andrographolide Injection. [Key words]HPLC method；Chuanxinlian Injection；Andrographolide；Content 穿心莲注射液是由穿心莲的乙醇提取物制成的注射液，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十九册，具有清热解毒的功效，主要用于咽喉肿痛、肺热咳嗽、热痢，亦可用于上呼吸道感染、细菌性痢疾等。穿心莲注射液中的主要有效成分穿心莲内酯（Andrographolide），是爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata （Burm.f.）Nees的有效成分之一，具有抗菌、消炎、止咳平喘、清热解毒、凉血消肿等作用，广泛用于上呼吸道、消化道细菌感染所引起的各种疾病[1-6]。现行质量标准采用紫外分光光度法测定穿心莲内酯含量，操作繁琐，且显色时间的长短对测定结果影响较大。本实验采用HPLC法对穿心莲注射液中有效成分穿心莲内酯的含量进行测定，通过大量实验研究，建立了穿心莲内酯的HPLC分析方法，方法准确有效，现报道如下。 1仪器与试药 Agilent1100型高效液相色谱仪含真空脫气机、低压四元泵、自动进样器和VWD检测器（美国安捷伦公司）；AUW120D型电子天平（日本岛津公司）；SK8200LH型超声仪（昆山超声仪器有限公司）；穿心莲内酯对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110797-201509）；穿心莲注射液（海南制药厂有限公司，批号：150104、150201、150914）。甲醇（色谱纯），水（超纯水）。 2方法与结果
穿心莲连内酯提取精制探索资料准备全过程 穿心莲为爵床科植物穿心莲（Andrographis paniculata（Burm．f．）Nees）的全草或叶。又名春莲秋柳，一见喜，榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。有清热解毒、消炎、消肿止痛作用。主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。 穿心莲内酯化学结构式 穿心莲内酯，分子式C20H30O5，天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。本品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。 穿心莲内酯又名：穿心莲乙素，雄茸内脂。 物理性质：白色方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭，味苦。在沸乙醇中溶解，在甲醇或乙醇中略溶，极微溶于氯仿，在水或乙醚中几乎不溶。熔点230～231℃，（α）17D -126.6±2°（冰醋酸）,[α]D –112.7 (c,0.53,MeOH)，与碱性2% 3,5－二硝基苯甲酸试剂，显紫红色，异羟肟酸铁反应呈阳性。密度(21℃）1.2317g/cm3。UVλEtOHmax nm （ε）,223(12300); IRvKBrmax cm-1: 3448,3390～?279(OH),1828,1647,906 (C=CH2),1727 （α，β-不饱和γ-内酯）,1672 （共的C=C)； 13CNMR。 制备方法：穿心莲叶用95%乙醇浸泡，所得乙醇浸泡取液用活性炭脱色，脱色液蒸馏回收乙醇后的浓缩液静置得到粗晶品，粗晶加15倍量95%乙醇加热溶解，活性炭脱色，趁热过滤，静置重结晶，得淡黄色重结晶品，再经蒸馏水、氯仿、甲醇洗涤精制得到穿心莲内酯成品。对生药计，总收率1-1.5%。 （一）目的要求 学习中药中内酯类成分的提取分离及检识，通过实验要求： 1．掌握从穿心莲中提取、分离穿心莲内酯的操作方法。 2．学习穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备。
天然药物化学设计试验 题目：穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定 学生： 学号： 院（系）：生命科学与工程学院 专业：药物制剂 指导教师： 2011年12月30日
天然药物化学课程实验任务书 一、题目：穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定 二、实验任务 1.查阅文献资料并写出所选药材化学研究进展的文献综述 2.设计实验方案并进行可行性分析（方案应包括目的意义，设计原理、 流程、实验方法、时间安排、需要的仪器与试剂） 3.对实验材料进行性状、显微和理化鉴定 4.完成穿心莲内酯单体化合物的分离及结构鉴定，鉴定数据应包括熔 点、旋光度、紫外图谱。 5.对所得数据进行分析 6.完成实验报告并提交少量穿心莲内酯样品。 三、实验要求 1.实验中要求学生不完全依赖现成条件，能在教师指导下自己创造一 些条件完成实验。 2.实验方法力求创新。 3.目的物的纯度要求用薄层层析法和熔点的测定数据说明； 4.本题目要求2-3名学生配合完成。 四、实验报告内容 1.题目 2.实验目的 3.基本原理 4.实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家 5.分离方法创新之处 6.自制或创造了那些实验条件条件 7.实验流程及操作方法 8.结果与分析 9.结论 10.在所完成实验的基础上提出一个新的研究课题 11.合理化建议
穿心莲内酯的提取分离与结构鉴定 一、文献综述 1、成分来源：为爵床科植物穿心功Andrographis paniculata (Burm.f.) Nees的地上部分，主产广东、福建。 结构及化学成分： 穿心莲内酯的结构式 [中文名称] 穿心莲内酯 [别名] 穿心莲乙素、熊耳内酯 [分子式] C 20H 30 O 5 [分子量] Mw＝350.45 [ 熔点 ] 229-232℃ [物理性质] 斜方棱形或片状结晶（乙醇或甲醇），无臭, 味极苦,穿心莲内酯在水中的溶解度非常小（几乎不容），易溶于丙酮、甲醇、乙醇。比旋度[A]2 126. 6? 2b( 冰醋酸) [药理作用] 穿心莲内酯为天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。本品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。 ○1抗菌作用○2抗病毒作用○3利胆保肝作用○4抗心脑血管疾病作用○5抗肿瘤 作用 2、药材介绍 穿心莲内酯又称穿心莲乙素，清热解毒，凉血，消肿。用于感冒发热、咽喉肿痛、口舌生疮、顿咳劳嗽、泄泻痢疾、热淋涩痛、痈肿疮疡、毒蛇咬伤。 二、实验部分 总内酯的提取：
穿心莲内酯的提取分离鉴别与 亚硫酸氢钠加成物的制备 穿心莲系爵床科植物穿心莲Andrographis Paniculata （Burm.f.）Ness的全草。主产于我国南方各省，具清热解毒、抗菌消炎、消肿止痛功能，用于治疗急性菌痢、肠胃炎，感冒发热、咽喉炎、尿路感染等。穿心莲中含有多种苦味素，属二萜类化合物，主要为穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯等，前二者是穿心莲抗菌消炎的主要有效成分。据报道，穿心莲内酯能抑制肺炎球菌、甲链球菌及卡那球菌。对细菌性痢疾，上呼吸道感染、扁桃体炎等有显著疗效。临床上将穿心莲内酯制成亚硫酸氢钠加成物、丁二酸半酯的钾盐或磺酸钠衍生物，以增加它们在水中的溶解度，用于制备浓度较高的注射剂，提高疗效。 一、实验目的： 1．掌握从穿心莲中提取分离穿心莲内酯的原理和操作方法； 2．熟悉去除叶绿素的方法； 3．熟悉α,β-不饱和内酯类成分的识别反应与薄层鉴定； 4．了解穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的制备。 二、仪器与试药 （一）仪器 RE-52旋转蒸发仪 SHB-循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅 超声提取器玻璃仪器气流烘干器圆底烧瓶（50mL） ZF-2型三用紫外仪 电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL） （二）试药 穿心莲叶粗粉 80％乙醇活性炭氯仿 95％乙醇中性氧化铝柱无水乙醇中性氧化铝色谱柱（1.8 cm×28 cm）蒸发皿硅胶H-CMC-Na板正丁醇 穿心莲内酯、脱氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯对照品亚硫酸氢钠异羟肟酸铁盐酸羟胺氢氧化钾盐酸三氯化铁试液亚硝酰铁氰化钠氢氧化钠 三、穿心莲中主要的有效成分： 表8－1 黄芩中主要成分的物理性质
穿心莲内酯为天然植物穿心莲的主要有效成份，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。该品为二萜类内酯化合物，均难溶于水，通常仅能口服给药。 药理作用 1. 抗病原微生物作用 动物实验表明：穿心莲内酯及新穿心莲内酯均有抑制和延缓肺炎双球菌或溶血性乙型链球菌所引起的体温升高作用，但穿心莲内酯比新穿心莲内酯的作用较强。 体外实验表明：穿心莲有一定抗HIV作用。(穿心莲有望成为抗艾滋病天然药物新原料) 2. 解热作用穿心莲内酯对家兔内毒素发热、肺炎球菌或溶血性链球菌所致发热有不同程度的解热作用。穿心莲甲、乙、丙、丁素对伤寒、副伤寒菌苗所致发热家兔或2,4-二硝基苯酚所致发热大白鼠的解热作用依次减弱。 3. 抗炎作用穿心莲甲、乙、丙、丁素均有不同程度的抗炎作用,1g/kg 灌服能抑制二甲苯或醋酸所致小鼠皮肤或腹腔毛细血管通透性的增高，减少Selye肉芽囊中巴豆油所致急性渗出液量，但对肉芽组织增生无明显影响。能抑制蛋清性大鼠脚肿的发展，但切除肾上腺后作用消失。丁素的抗炎作用最强，丙素、甲素、乙素次之。 4. 对机体免疫功能的影响有报道认为，穿心莲可能对细胞免疫的某些环节有作用。其水煎剂在体外能提高人白细胞吞噬金黄色葡萄球菌的能力，口服穿心莲能使人对旧结核菌素所致的皮肤延缓型超敏反应增强。穿心莲制剂新炎得平（内含酯和酮），可提高小鼠血清溶菌酶水平，增强腹腔巨噬细胞和中性粒细胞的吞噬能力。连续给家兔或小鼠以穿心莲内酯磺化物，可明显增加外周血吞噬细胞对肺炎球菌或金黄色葡萄球菌的吞噬能力，穿心莲甲素注射液及喜炎平注射液亦能增强吞噬细胞功能。脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对2,4-二硝基氯苯所致小鼠迟发型超敏反应也有抑制作用。(注射剂居多) 5 抗生育作用穿心莲有明显的中止妊娠作用。穿心莲口服能使小鼠避孕、孕兔流产。水煎剂腹腔注射对小鼠的着床、早孕、中孕、晚孕等不同时期均有显著的中止作用。肌注、皮下注射、灌服、腹腔注射、静脉注射及宫腔内注射均能产生抗早孕效果，其中以腹腔、静脉和宫内注射效果最好。宫腔内注射，用量既小，效果又佳。若将外源性孕酮或黄体生成素释放、激素(LH-RH)与穿心莲同时注射，则可防止流产，这提示，穿心莲可能有对抗体内孕酮的作用，从而引起流产。有人认为，穿心莲对体外培养的胎盘绒毛滋养层细胞的生长有一定的抑制作用。研究表明：穿心莲内酯的一些半合成衍生物亦有不同程度的抗早孕效果，脱水穿心莲内酯衍生物-穿-4对小鼠和大鼠均有良好的抗早孕作用，是值得进一步研究的一个避孕新药，该药对胎盘滋养叶细胞有显著的影响，可使胎盘绒毛萎缩、细胞数目减少，合体细胞和朗罕细胞消失、间