蛋白质分离纯化及鉴定综合实验
一、实验内容：
1将昆虫（或鱼、鸡）总蛋白通过匀浆的方法溶解于磷酸氢二钠/磷酸二氢钠缓冲液中，离心取上清液作为蛋白质粗提液；
2用考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质浓度；
3将粗提液通过硫酸铵盐析进行分离（15%、30%、45%饱和度的硫酸铵分别沉淀），得到不同的组分，测定不同组分的蛋白质浓度；
4将蛋白粗提液和收集到的各组分进行SDS-PAGE分析，比较粗提液和各组分中蛋白质的成分，分析分离效果。
二、实验中需要主要仪器：
容量瓶：1000mL、250mL、100mL
玻璃棒、研钵、分析天平（食品509）、
量筒：500mL、50mL、5mL
离心机（食品310）、离心管（（记号笔、标签纸、称量纸、一次性手套）分光光度计（含比色皿）（食品510）
1mL、5mLEP管（每组至少25个*8=200个）
漏斗、棕色瓶
滤纸（或多层纱布）、半透膜（透析用）、大培养皿（脱色用）
移液枪：100-1000uL,0.5-20ul
大烧杯、小烧杯
搅拌器、电炉
电泳仪垂直板电泳槽、电泳板、微量进样器（50μL）、染色/脱色摇床（电泳在食品311B做）
三、实验中需要的主要试剂：
磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、蒸馏水、牛血清白蛋白（BSA）（生化有）、考马斯亮蓝G-250蛋白试剂（生化有）、90%的乙醇溶液、85%的磷酸、硫酸铵、Tris碱、甘氨酸、SDS、蒸馏水、甲醇、冰乙酸、考马斯亮蓝R250、ddH2O、AP(过硫酸铵)、TEMED（(四甲基乙二胺））
物质的分离与提纯 补充习题 一、选择题 1．下列分离混合物的操作中，必须加热的是（） A. 过滤B．分液C．结晶D．蒸馏 2．用天然水制取纯度较高的水通常采用的方法是( ) A.煮沸并加入石灰纯碱 B. 加明矾搅拌 C. 进行多次过滤 D.蒸馏 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39％的乙醇溶液⑧氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是（） A . 分液、萃取、蒸馏 B. 萃取、蒸馏、分液 C . 分液、蒸馏、萃取 D. 蒸馏、萃取、分液 4下列从混合物中分离出其中的一种成分，所采取分离方法正确的是（）A．由于碘在酒精中的溶解度大，所以，可用酒精把碘水中的碘萃取出来。 B．水的沸点是100℃，酒精的沸点是78.5℃，所以，可用加热蒸馏方法使含水酒精变成无水酒精。 C．氯化钠的溶解度随着温度下降而减少，所以，用冷却法从热的含有少量氯化钾浓溶液中得到纯净的氯化钠晶体。 D．在实验室中，通常采用加热氯酸钾和二氧化锰的混合物方法制取氧气。我们可以用溶解、过滤的方法从反应产物中得到二氧化锰。 5．下列化学实验操作或事故处理方法不正确的是（）A．不慎将酸溅到眼中，应立即用水冲洗，边洗边眨眼睛 B．不慎将浓碱溶液沾到皮肤上，要立即用大量水冲洗，然后涂上硼酸 C．酒精灯着火时可用水扑灭 D．配制硫酸溶液时，可先在量筒中加入一定体积的水，再在搅拌条件下慢慢加浓硫酸 6．在“粗盐提纯”的实验中，蒸发时正确的操作是（）A．把浑浊的液体倒人蒸发皿内加热
B．开始析出晶体后用玻璃棒搅拌 C．蒸发时液体不超过蒸发皿容积的1/3 D．蒸发皿中出现大量固体时即停止加热 ＊7．过滤后的食盐水仍含有可溶性的CaCl2、MgCl2、Na2SO4等杂质，通过如下几个实验步骤，可制得纯净的食盐水：①加入稍过量的Na2CO3溶液；②加入稍过量的NaOH溶液；③加入稍过量的BaCl2 溶液；④滴入稀盐酸至无气泡产生；⑤过滤正确的操作顺序是（）A．③②①⑤④B．①②③⑤④ C．②③①④⑤D．③⑤②①④ 二、填空题 8．粗食盐中除含有钙离子、镁离子、硫酸根离子等可溶性杂质外，还含有泥砂等不溶性杂质。我们食用的精盐是用粗食盐提纯而得到的。通过教材中“粗盐的提纯”及你做过的该实验回答下列问题。 （1）实验室进行NaCl溶液蒸发时，一般有以下操作过程①放置酒精灯； ②固定铁圈位置；③放上蒸发皿（蒸发皿中盛有NaCl溶液）；④加热搅拌;⑤停止加热。其正确的操作顺序为 （2）如何运用最简方法检验溶液中有无SO42－离子？。如果有，应该如何除去SO42－离子？。 （3）在粗盐经过溶解→过滤后的溶液中滴加饱和Na2CO3溶液，直至不再产生沉淀为止。请问这步操作的目的是。 （4）将经过操作（3）后的溶液过滤。请问这一操作能除掉哪些杂质？ 。 （5）实验室里将粗盐制成精盐的过程中，在溶解、过滤、蒸发三个步骤的操作中都要用到玻璃棒，分别说明在这三种情况下使用玻璃棒的目的：溶解时：。 过滤时: 。 蒸发时：。 9．就有关物质的分离回答下面的问题 （1）分离沸点不同但又互溶的液体混合物，常用什么方法？试举例说明。
常用仪器使用与试剂保存及化学实验安全练习 一、常用仪器 1、中学化学常见化学仪器的识别： 填写上述仪器的名称： 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、 2 3、24、25、26、27、28、
2、基本化学仪器及其使用: ①试管：用作少量试剂的或的仪器，可直接，加热时外壁要 ，用夹住或用铁夹固定在上；加热固体时，管口倾斜，固体在管底；试管盛液量不超过容积的，加热时不超，加热液体时，管口倾斜，与桌面成，切忌管口向着人。试管夹持位置离管口为全长的处； ②烧杯：配制、浓缩、稀释溶液，也可作反应器、水浴加热器，加热时垫，液体不超过； ③烧瓶：用作加热或不加热条件下较多液体参加的反应容器，圆底烧瓶加热（“需要”或“不需要”）垫石棉网，或水浴加热； ④蒸馏烧瓶：作液体混合物的或，也可装配气体发生器，加热 （“需要”或“不需要”）垫石棉网； ⑤集气瓶：收集气体，装配洗气瓶，气体反应器，固体在气体中燃烧的容器。加热，作固体在气体中燃烧的容器时，要在瓶底加或一层； ⑥坩埚：用于灼烧固体使其反应可加热至高温，放在上，用 夹取，不可骤冷。 （2）计量仪器 ①滴定管（酸式和碱式）：进行滴定反应；准确量取液体体积。酸式滴定管盛性、 性溶液，碱式滴定管盛溶液，二者不能互相代替，使用前要洗净并，先润洗再装溶液，‘0’刻度在，自而，刻度值由小变大，精确度为。 ②量筒：用于量取一定体积液体的仪器。使用量筒来量取液体时，首先要选用与所量取液体体积的量筒。量筒加热，不能量取的液体，它不能作为化学反应和配制溶液的仪器。零刻度，自下而上，刻度值由变。 ③容量瓶：用于准确配置一定物质的量浓度的溶液，瓶身标有三个标志：、 、。要在所标下使用，加液体用引流，不能长期存放溶液。使用前要。检漏的操作： 。 ④托盘天平：用来称量固体物质质量的仪器，它的精确度是克。使用托盘天平称量前，先要，然后左、右两盘各放大小相同的同种纸。易潮解、腐蚀性药品放在称量，称量时要遵循“”的原则。取用砝码要用，绝对
一、疾病预防控制中心实验室仪器设备清单 1 气相色谱仪：定性定量分析 2 阿贝折射仪：测透明半透明液体或固体的折射率和平均色散 3 氨气分析仪：测样品中氨的含量 4 测汞仪：测固、体液体样品中汞含量 5 电导率仪：测电解质溶液电导率值 6 二氧化硫测定仪：大气环镜中二氧化硫浓度的自动监测 7 二氧化碳测定仪：大气环镜中二氧化碳浓度的自动监测 8 离子交换纯水器：使用离子交换法制纯水 9 粉层采样器：该采样器适用于煤矿及其它粉层作业环镜中进行粉层采样 10 光电浊度仪：测量浊度 11 光照度计：测定光照强度 12 火焰光度计：监床化验用病理研究 13 激光粉层仪：检测粉层浓度 14 紫外可见分光光度计：测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度、定量分析 15 紫外辐射照度计：紫外辐射照度测量 16 自动量程照度计：测定光照强度 17 自动旋光仪：测物质旋光度，分析物质的浓度、纯度、含糖量 18 酶标仪：定性定量 19 冷原子荧光测汞仪：专用测贡仪器，测痕量贡 20 离子计：测离子浓度 21 CO分析仪：测大气环镜中一氧化碳含量 22 双道原子荧光光度计：固、液体中汞、砷、硒、锑、锗、锡含量测定析 23 手持糖量计：测体的含糖量 24 生化分析仪：测定样品的浓度，酶反映速率和酶的活性等数十种生化参数 25 洗板机：与酶标仪配套使用 26 微量可调移液器：移微量液体 27 显微镜：观察微小物质 28 荧光分光光度计：分析和测试各类微生物，氨基酸、蛋白质、核酸及多种监床药物 29 医用净化工作台：提供无尘无菌高洁净工作环镜 30 便携式红外线人析器：测定公共场所中的CO2浓度 31 电子微风仪：适用于工厂企业通风空调，镜污染览测动压平衡自动跟踪等速烟尘采样器的采样 32 放射性污染计量仪：测试放射性污染是否超标 33 热敏电阻（测辐射热计）：用于辐射探测 34 紫外光功力计：测试检测紫外光功率 35 热球式电风速仪：测定室内外或模型的气流速度时，是一种测量低风速的基本仪器 36 红血蛋白仪：检测血红蛋白
一、中考初中化学除杂分离和提纯 1．下列实验方案能达到实验目的的是（） A．A B．B C．C D．D 【答案】D 【解析】 【详解】 A、除去KCl溶液中的K2CO3，加入适量的硝酸钙溶液，硝酸钙与碳酸钾反应生成硝酸钾和碳酸钙沉淀，过滤可除去碳酸钙，但引入了新的杂质硝酸钾，故A不正确； B、除去BaCl2溶液中的HCl，加入过量Ba(OH)2溶液，除去了杂质但引入了新杂质Ba(OH)2（过量的），故B不正确； C、稀盐酸和稀硫酸都属于强酸，不能通过比较溶液的pH来区分，故C不正确； D、氢氧化钠固体加水溶解会放出大量的热，溶液温度升高；硝酸铵固体加水溶解会吸收热量，溶液温度降低，可鉴别二者，故D正确。故选D。 2．下表中，除去物质所含少量杂质的方法和反应类型归类均正确的是
A．A B．B C．C D．D 【答案】A 【解析】 【分析】 【详解】 A、铜和氧气加热生成氧化铜，反应为化合反应，氧化铜和氧气加热不反应，可以除去铜粉，故A正确； B、一氧化碳和氧化铜反应生成铜和二氧化碳，反应不属于置换反应，故B不正确； C、盐酸和氢氧化钠反应生成氯化钠和水，反应类型为复分解反应，故C不正确； D、硫酸钾和硝酸钡反应生成硫酸钡和硝酸钾，引进新杂质硝酸钾，故D不正确。 故选A。 3．下列依据实验目的所设计的实验方案正确的是（） A．A B．B C．C D．D 【答案】C 【解析】 【分析】 【详解】 A、除去CO2中的HCl气体，将混合气体通入足量NaOH溶液中，NaOH不仅与杂质氯化氢反应，还与原物质二氧化碳反应，不符合除杂的“原物质不减少”原则，不能用于除氯化氢杂质，选项说法错误，故不符合题意； B、区分尿素CO(NH2)2、NH4Cl和NH4NO3，加熟石灰研磨闻气味，只能区分出尿素，NH4Cl 和NH4NO3都与熟石灰反应产生刺激性气味的氨气，无法区分，选项说法错误，故不符合题意； C、区分稀HCl( 酸性)、Na2CO3溶液（碱性)、NaCl溶液（中性)，滴加紫色石蕊溶液，紫色石蕊遇稀HCl显红色，遇Na2CO3溶液显蓝色，遇NaCl溶液显紫色，可以通过观察颜色
蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤： （一）材料的预处理及细胞破碎 分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有： 1. 机械破碎法 这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。 2. 渗透破碎法 这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。 3. 反复冻融法 生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。 4. 超声波法 使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。 5. 酶法 如用溶菌酶破坏微生物细胞等。 （二）蛋白质的抽提 通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100 等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。（三）蛋白质粗制品的获得选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法： 1.等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。 2.盐析法 不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。 3.有机溶剂沉淀法 中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。 （四）样品的进一步分离纯化
高中实验专题——1、高中化学实验常用仪器1、反应容器 仪器图形与名称主要用途使用方法及注意事项 试管用作少量试剂的溶解 或反应的仪器，也可 收集少量气体、装配 小型气体发生器 （1）可直接加热，加热时外壁要擦干，用试管夹夹 住或用铁夹固定在铁架台上；（2）加热固体时，管 口略向下倾斜，固体平铺在管底；（3）加热液体时 液体量不超过容积的1／3，管口向上倾斜，与桌面 成45°，切忌管口向着人。装溶液时不超过试管容 积的1／2。 烧杯配制、浓缩、稀释、 盛装、加热溶液，也 可作较多试剂的反应 容器、水浴加热器 加热时垫石棉网，外壁要擦干，加热液体时液体量 不超过容积的1／2，不可蒸干，反应时液体不超过 2/3，溶解时要用玻璃棒轻轻搅拌。 圆底烧瓶平底烧瓶用作加热或不加热条 件下较多液体参加的 反应容器 平底烧瓶一般不做加热仪器，圆底烧瓶加热要垫石 棉网，或水浴加热。液体量不超过容积的1／2。 蒸馏烧瓶作液体混合物的蒸馏 或分馏，也可装配气 体发生器 加热要垫石棉网，要加碎瓷片防止暴沸，分馏时温 度计水银球宜在支管口处。 不溶性块状固体与液 体常温下制取不易溶 于水的气体 控制导气管活塞可使反应随时发生或停止，不能加 热，不能用于强烈放热或反应剧烈的气体制备，若 产生的气体是易燃易爆的，在收集或者在导管口点
启普发生器 锥形瓶滴定中的反应器，也 可收集液体，组装洗 气瓶。 同圆底烧瓶。滴定时只振荡，因而液体不能太多， 不搅拌。 2、盛放容器 集气瓶收集贮存少量气体，装 配洗气瓶，气体反应器、 固体在气体中燃烧的容 器 不能加热，作固体在气体中燃烧的容器时，要在瓶 底加少量水或一层细沙。瓶口磨砂（与广口瓶瓶颈 磨砂相区别），用磨砂玻璃片封口。 试剂瓶（广口瓶、细口 瓶）放置试剂用。可分广口 瓶和细口瓶，广口瓶用 于盛放固体药品（粉末 或碎块状）；细口瓶用 于盛放液体药品。 都是磨口并配有玻璃塞。有无色和棕色两种，见光 分解需避光保存的一般使用棕色瓶。盛放强碱固体 和溶液时，不能用玻璃塞，需用胶塞和软木塞。试 剂瓶不能用于配制溶液，也不能用作反应器，不能 加热。瓶塞不可互换。 滴瓶盛放少量液体试剂的容 器。由胶头滴管和滴瓶 组成，滴管置于滴瓶内， 滴瓶口为磨口，不能盛放碱液。有无色和棕色两种， 见光分解需避光保存的（如硝酸银溶液）应盛放在 棕色瓶内。酸和其它能腐蚀橡胶制品的液体（如液 溴）不宜长期盛放在瓶内。滴管用毕应及时放回原
2009生化分离工程实验（闭卷考试） 2012生化工艺实验 简答题（23选6题，每个实验选一题） 1.在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO？ 2.索氏提取装置由哪几部分组成（画图）？工作原理？ 3.咖啡因升华过程中用到了什么装置？咖啡因的升华结晶应注意哪些操作？ 4.茶叶咖啡因的提取实验中，浓缩去除乙醇的过程中用到了哪些设备？ 5.动物脏器DNA提取实验中，蛋白质是如何去除的？ 6.动物脏器DNA提取实验中，如何鉴定DNA的纯度？ 7.动物脏器DNA提取实验中，RNA是怎样去除的？ 8.动物脏器DNA提取实验中，氯仿-异戊醇的作用是什么？离心后分哪几层？ 9.动物脏器DNA提取实验中，为什么用0.1M NaCl-SSC间歇式的搅拌猪肝？ 10.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上半部），粗提过程中用哪种试剂去除杂蛋白？用哪种试剂沉淀得到粗黏蛋白？ 11.鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中，所用树脂是哪种？树脂为什么预处理，如何预处理？ 12.DEAE-纤维素是哪种类型离子交换剂，如何预处理DEAE-纤维素？ 13.在鸡卵黏蛋白离子交换层析实验中固定相、流动相分别是什么？ 14.简要画出离子交换层析系统中所用设备组成图。 15.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（上），为什么提取液的pH在3.5左右？ 16.离子交换层析分离鸡卵黏蛋白实验（下），pH6.5的用意何在？ 17.简述反胶团萃取甘薯中淀粉酶的实验原理 18.栀子黄提取实验中，栀子苷是如何去除的？为什么用此方法去除？ 19.栀子黄提取实验中，如何鉴定藏花红素中栀子苷的去除情况？ 20.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液稀释至240mL乙醇？ 21.栀子黄提取实验中，吸附前为什么将滤液pH调至3 22.大蒜SOD提取实验中，是如何去除杂蛋白的？PBS与丙酮的作用分别是什么？ 23.大蒜SOD提取实验中，用哪种方法测定SOD活性？其原理是什么？ 1. 在咖啡因的提取实验中，为什么加CaO? 答:吸取水分，防止咖啡因蒸汽溶于水； 中和鞣酸； 2. 索氏提取装置有哪几部分组成？（画图）
实验所需的仪器和试剂 ①溶解氧（DO）——碘量法 一次实验 硫酸锰溶液；碱性碘化钾溶液；硫酸；硫代硫酸钠溶液；淀粉溶液。 ㈠试剂：480g硫酸锰，500g氢氧化钠，150g碘化钾，2ml（1+5）硫酸溶液，1g可溶性淀粉，0.1g水杨酸，1.2258g重铬酸钾，3.2g硫代硫酸钠，0.2g碳酸钠。 ㈡仪器：棕色瓶，1000ml容量瓶，250ml碘量瓶，250ml锥形瓶。 ②化学需氧量（COD）——重铬酸钾法 一次实验 重铬酸钾溶液，硫酸-硫酸银溶液，重蒸馏水，试亚铁灵指示液，硫酸亚铁铵标准溶液，硫酸汞。 ⑴试剂：12.258g重铬酸钾，1.458g邻菲啰啉，0.695g硫酸亚铁（7H2O），39.5硫酸亚铁铵,520mL浓硫酸，5g硫酸银，0.4g硫酸汞。 ㈡仪器：250ml锥形瓶的全玻璃回流装置，加热装置，50ml酸式滴定管，1000ml容量瓶，棕色瓶，500ml锥形瓶。 ③磷——钼锑抗分光光度法
一次实验 10%抗坏血酸溶液，（1+1）硫酸，钼酸盐溶液，浊度—色度补偿液， 磷酸盐标准溶液，磷酸盐贮备溶液。 ⑴试剂：（1+1）硫酸，10g抗坏血酸，13g钼酸铵，0.35g酒石酸锑氧钾，0.2197g 纯磷酸二氢钾。 ⑵仪器：分光光度计，7个50ml具塞比色管。 ④总氮-------紫外分光光度法 一次实验： l硝酸钾标准溶液；碱性过硫酸钾；（1+9）盐酸. ⑴试剂：无氨水；35g氢氧化钠；40g过硫酸钾；（1+9）盐酸；硝酸钾标准溶液 （0.7218g硝酸钾,2ml三氯甲烷）。
⑵仪器：紫外分光光度计，民用压力锅，25ml具塞玻璃磨口比色管，聚乙烯瓶。 ⑤氨氮——纳氏试剂光度法 一次实验：铵标准使用液，酒石酸钾钠溶液，钠氏试剂，1mol/L氢氧化钠溶液，按标准贮备液。 ⑴试剂：27g碘化钾，10g二氯化汞，60g氢氧化钾, 16g氢氧化钠, 10g碘化汞，50g酒石酸钠，3.819g纯氯化铵。 ⑵仪器：分光光度计；PH计。 ⑥生化需氧量（BOD5）——碘量法 一次实验：磷酸盐缓冲溶液；硫酸镁溶液；氯化钙溶液；氯化铁溶液；0.5mol/L 盐酸溶液；0.5mol/L氢氧化钠溶液；0.025mol/L亚硫酸钠溶液;葡萄糖-谷氨酸标准溶液。 试剂：8.5g磷酸二氢钾；21.75g磷酸氢二钾；33.4g七水合磷酸氢二钠；1.7g 氯化铵；22.5g七水合硫酸镁；27.5无水氯化钙；0.25g六水合氯化铁；40ml （1.18g/ml）盐酸；20g氢氧化钠；1.575g亚硫酸钠；150mg葡萄糖； 150mg谷氨酸.
(本栏目内容，在学生用书中以活页形式分册装订！) 一、选择题 1．(2009年海淀高一检测)下列实验操作中错误的是() A．使用分液漏斗分液时，应将漏斗颈上的玻璃塞打开 B．蒸馏实验必须使用温度计 C．用CCl4萃取碘水中的碘 D．过滤(如图)时，可将悬浊液从烧杯直接倒入漏斗中 【解析】制蒸馏水时，因水的沸点是100 ℃，即沸腾产生的气体为水蒸气，故不需温度计。过滤要用玻璃棒引流。 【答案】BD 2．下列分离物质的方法中，不正确的是() A．利用分馏的方法从石油中分离出汽油和煤油 B．利用分液的方法将水和酒精分离开来 C．利用结晶的方法除去硝酸钾中混有的少量氯化钾 D．利用过滤的方法除去水中的泥沙 【解析】水和酒精互溶，不分层，故无法分液。 【答案】 B 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39%的乙醇溶液③氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是() A．分液、蒸馏、萃取B．萃取、蒸发、分液 C．分液、萃取、蒸馏D．蒸馏、萃取、分液 【解析】①分层，②互溶，乙醇与水的沸点不同，③单质溴能溶于水，更易溶于有机溶剂，故分离以上三种混合液应选A。 【答案】 A 4．通过溶解、过滤、蒸发等操作，可将下列各组混合物分离的是() A．硝酸钠、氢氧化钠B．氧化铜、二氧化锰 C．氯化钾、二氧化锰D．硫酸铜、氢氧化钙 【解析】A项，NaNO3和NaOH都溶于水，无法用过滤法分离；B项，CuO和MnO2都不溶于水；D项CuSO4、Ca(OH)2溶于水后两者会发生反应；而KCl和MnO2可用过滤法分离，然后蒸发滤液即可得到KCl。 【答案】 C 5 A．萃取法B．过滤法 C．蒸馏法D．分液法 【解析】两种物质的熔点都很低，在常温下都是液体，二者都溶于水，说明甲和乙可以
蛋白质提取、纯化、鉴定的方法（二） 一、层析技术 1.离子交换层析的亲和洗脱这种技术结合了离子交换与亲和层析。如在某一pH时，目的蛋白质带正(负)电荷，用阳(阴)离子交换剂吸附，这一过程去除了很大一部分不吸附的杂蛋自。然后用该目的蛋白质的配体来洗脱，该配体特异性地结合目的蛋白质并使之洗脱，但不洗脱其他吸附的蛋白质，达到纯化的目的。注意，该配体需带有一定量的阴(阳)电荷，有效降低目的蛋白质与阳(阴)离子交换剂之间的电荷相互作用。 2.固相金属亲和层析重组蛋白质可在C-或N-端引入组氨酸标签，一般为6个组氨酸残基(His-tag)。这些组氨酸残基与过渡金属(transitionalmetals)Ni2+或Co2+形成配位键。用固相化的Ni2+或Co2+(如商品化的树脂，Ni-NTA)可吸附带有His-tag的重组蛋白质，用含有咪唑(imidazole)的缓冲液可洗脱重组蛋白质。注意，有些含有较多组氨酸的蛋白质也可与吸附剂结台，但较弱，因此可用低浓度的咪唑洗脱；在层析过程中不能引入金属螯合剂如EDTA；避免使用还原剂如DTT或DTE，但可用低浓度的巯基乙醇。 该技术也用于提取磷酸化的蛋白质。将螫合剂交联到树脂，螯合三价铁或三价镓，该亲和吸附剂可吸附混合物中的磷酸化的蛋白质。洗去不吸附的非磷酸化蛋白质后，用磷酸缓冲液即可将磷酸化蛋白质从该亲和吸附剂上洗脱。要注意的是酸性蛋白质也可被不同程度地吸附。 3.凝胶过滤该技术过去也被称为分子筛。构成凝胶的小珠(bead)中有大小不一的孔，分子量大的分子能进入较大的孔而不能进入小的孔，分子量小的则不仅能进入较大的孔也能进入小的孔，因此在层析过程中，小分子经过的路程较长而大分子经过的路程较短，如此就可分离分子量不同的蛋白质。然而，分子量相近的蛋白质非常多，因此，用这种技术得到的蛋白质是分子量相近的混合蛋白质。然而这种技术在某些研究中很有用，如丙酮酸激酶M2(PKM2)由四个相同的亚基组成，PKM2在细胞中以三种形式存在——单体、二聚体、四聚体，这三种形式的功能不同，若要鉴定细胞中PKM2的各种形式的量，先用凝胶过滤技术分离细胞裂解液中的PKM2的三种形式，之后用Western blot对每一种形式的PKM2做相对定量。 4.反相层析该技术是指用疏水固相的一种层析技术。“反相”是相对“正相”而言，正相是指亲水的固相如硅胶表面带有硅羟基(silanol group)，硅羟基可与被分离的化台物相互作用，被分离的化合物的亲水性越强，则滞留在正相
物质的分离与提纯练习 题及答案解析 LEKIBM standardization office【IBM5AB- LEKIBMK08- LEKIBM2C】
(本栏目内容，在学生用书中以活页形式分册装订！) 一、选择题 1．(2009年海淀高一检测)下列实验操作中错误的是() A．使用分液漏斗分液时，应将漏斗颈上的玻璃塞打开 B．蒸馏实验必须使用温度计 C．用CCl4萃取碘水中的碘 D．过滤(如图)时，可将悬浊液从烧杯直接倒入漏斗中 【解析】制蒸馏水时，因水的沸点是100 ℃，即沸腾产生的气体为水蒸气，故不需温度计。过滤要用玻璃棒引流。 【答案】BD 2．下列分离物质的方法中，不正确的是() A．利用分馏的方法从石油中分离出汽油和煤油 B．利用分液的方法将水和酒精分离开来 C．利用结晶的方法除去硝酸钾中混有的少量氯化钾 D．利用过滤的方法除去水中的泥沙 【解析】水和酒精互溶，不分层，故无法分液。 【答案】 B 3．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39%的乙醇溶液③氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是() A．分液、蒸馏、萃取B．萃取、蒸发、分液 C．分液、萃取、蒸馏D．蒸馏、萃取、分液 【解析】①分层，②互溶，乙醇与水的沸点不同，③单质溴能溶于水，更易溶于有机溶剂，故分离以上三种混合液应选A。 【答案】 A 4．通过溶解、过滤、蒸发等操作，可将下列各组混合物分离的是() A．硝酸钠、氢氧化钠B．氧化铜、二氧化锰 C．氯化钾、二氧化锰D．硫酸铜、氢氧化钙 【解析】A项，NaNO3和NaOH都溶于水，无法用过滤法分离；B项，CuO和MnO2都不溶于水；D项CuSO4、Ca(OH)2溶于水后两者会发生反应；而KCl和MnO2可用过滤法分离，然后蒸发滤液即可得到KCl。 【答案】 C 5 物质熔点沸点密度 水中溶解 性 甲－ 98 ℃ ℃ g·cm－3可溶 乙－ 84 ℃ 77 ℃ g·cm－3可溶 A．萃取法B．过滤法C．蒸馏法D．分液法
高中实验专题——1、高中化学实验常用仪器 1、反应容器 仪器图形与名称主要用途使用方法及注意事项 试管用作少量试剂的溶解或 反应的仪器，也可收集 少量气体、装配小型气 体发生器 （1）可直接加热，加热时外壁要擦干，用试管夹夹住或用 铁夹固定在铁架台上；（2）加热固体时，管口略向下倾斜， 固体平铺在管底；（3）加热液体时液体量不超过容积的1 ／3，管口向上倾斜，与桌面成45°，切忌管口向着人。装 溶液时不超过试管容积的1／2。 烧杯配制、浓缩、稀释、盛 装、加热溶液，也可作 较多试剂的反应容器、 水浴加热器 加热时垫石棉网，外壁要擦干，加热液体时液体量不超过 容积的1／2，不可蒸干，反应时液体不超过2/3，溶解时要 用玻璃棒轻轻搅拌。 圆底烧瓶平底烧瓶用作加热或不加热条件 下较多液体参加的反应 容器 平底烧瓶一般不做加热仪器，圆底烧瓶加热要垫石棉网， 或水浴加热。液体量不超过容积的1／2。 蒸馏烧瓶作液体混合物的蒸馏或 分馏，也可装配气体发 生器 加热要垫石棉网，要加碎瓷片防止暴沸，分馏时温度计水 银球宜在支管口处。 启普发生器不溶性块状固体与液体 常温下制取不易溶于水 的气体 控制导气管活塞可使反应随时发生或停止，不能加热，不 能用于强烈放热或反应剧烈的气体制备，若产生的气体是 易燃易爆的，在收集或者在导管口点燃前，必须检验气体 的纯度。 锥形瓶滴定中的反应器，也可 收集液体，组装洗气瓶。 同圆底烧瓶。滴定时只振荡，因而液体不能太多，不搅拌。 2、盛放容器
集气瓶收集贮存少量气体，装配洗 气瓶，气体反应器、固体在 气体中燃烧的容器 不能加热，作固体在气体中燃烧的容器时，要在瓶底加少 量水或一层细沙。瓶口磨砂（与广口瓶瓶颈磨砂相区别）， 用磨砂玻璃片封口。 试剂瓶（广口瓶、细口瓶）放置试剂用。可分广口瓶和 细口瓶，广口瓶用于盛放固 体药品（粉末或碎块状）； 细口瓶用于盛放液体药品。 都是磨口并配有玻璃塞。有无色和棕色两种，见光分解需 避光保存的一般使用棕色瓶。盛放强碱固体和溶液时，不 能用玻璃塞，需用胶塞和软木塞。试剂瓶不能用于配制溶 液，也不能用作反应器，不能加热。瓶塞不可互换。 滴瓶盛放少量液体试剂的容器。 由胶头滴管和滴瓶组成，滴 管置于滴瓶内， 滴瓶口为磨口，不能盛放碱液。有无色和棕色两种，见光 分解需避光保存的（如硝酸银溶液）应盛放在棕色瓶内。 酸和其它能腐蚀橡胶制品的液体（如液溴）不宜长期盛放 在瓶内。滴管用毕应及时放回原瓶，切记！不可“串瓶”。 干燥器用于存放需要保持干燥的 物品的容器。干燥器隔板下 面放置干燥剂，需要干燥的 物品放在适合的容器内，再 将容器放于干燥器的隔板 上。 灼烧后的坩埚内药品需要干燥时，须待冷却后再将坩埚放 入干燥器中。干燥器盖子与磨口边缘处涂一层凡士林，防 止漏气。干燥剂要适时更换。开盖时，要一手扶住干燥器， 一手握住盖柄，稳稳平推。 贮气瓶用做实验中短期内贮备较 多量气体的专用仪器。 贮气瓶等所有容器类玻璃仪器均不能加热,使用时也 切记骤冷骤热。 贮气前要检查气密性。 3、测量仪器 托盘天平称量药品（固体）质量，精 度≥0.1g。 称前调零点，称量时左物右码，精确至0.1克，药品不能 直接放在托盘上( 两盘各放一大小相同的纸片)，易潮解、 腐蚀性药品放在玻璃器皿中（如烧杯等）中称量， 温度计测定温度的量具，温度计有 水银的和酒精的两种。常用 的是水银温度计。 使用温度计时要注意其量程，注意水银球部位玻璃极薄 （传热快）不要碰着器壁，以防碎裂，水银球放置的位置 要合适。如测液体温度时，水银球应置于液体中；做石油 分馏实验时水银球应放在分馏烧瓶的支管处。
一、中考初中化学除杂分离和提纯 1．要除去氯化钠溶液中含有的少量碳酸钠，可采用的方法是①通入适量的二氧化碳②加入适量的氯化钡溶液③加入适量的稀盐酸④加入适量的石灰水（） A．①或③B．②或③C．②或④D．③或④ 【答案】B 【解析】 【分析】 【详解】 ①二氧化碳不和碳酸钠溶液反应，不能除去杂质，此项错误； ②氯化钡能和碳酸钠反应生成碳酸钡沉淀和氯化钠，反应时不会带入新的杂质，故此项正确； ③盐酸能和碳酸钠反应，且生成氯化钠，不会带入新的杂质，此项正确； ④氢氧化钙溶液能和碳酸钠反应，但反应时会生成氢氧化钠，带入新的杂质，此项错误，故选B。 2．除去下列物质中混有的少量杂质（括号内为杂质），拟定的实验方案可行的是 （） A．木炭粉（CuO）——在空气中灼烧 B．KCl溶液（CaCl2）——通入过量的CO2气体，过滤 C．NaCl溶液（Na2CO3）——加入适量的澄清石灰水，过滤 D．H2气体（HCl气体）——依次通过足量的NaOH溶液和浓硫酸 【答案】D 【解析】 【分析】 除杂质的要求是：要把杂质除去，但不能除去需要的物质更不能带入新的杂质。 【详解】 A、木炭粉会与氧气反应生成二氧化碳，不但氧化铜没有除去，还把需要的物质除去了，选项A不正确； B、通入的二氧化碳不能与氯化钙反应，不能除去氯化钙，选项B错误； C、氢氧化钙与碳酸钠反应生成碳酸钙沉淀和氢氧化钠，虽然把碳酸钠除去了，但是带入氢氧化钠这种新的杂质，选项C错误； D、氯化氢气体溶于水形成盐酸，盐酸与氢氧化钠溶液反应生成氯化钠和水，水蒸汽通过浓硫酸后会被浓硫酸吸收，选项D正确。故选D。 3．除去下列物质中的少量杂质，所选用的试剂和操作方法都正确的是()
化学实验常用仪器的主要用途和使用方法 ①烧瓶：主要用于溶液之间或液、固之间的反应，可加热，但需垫石棉网，还可组装气体发生装置。 ②烧杯：主要用于液体之间的反应，溶解固体，配制溶液组装过滤器，可以加热，但需要垫石棉网。 ③锥形瓶：可用于反应容器，例如中和滴定；蒸馏实验中承接各种馏分，组装气体发生装置，可以加热，但需垫石网。 ④蒸发皿：用于浓缩溶液或去掉结晶水合物中的结晶水。可以直接加热。 ⑤试管：少量物质间的反应容器，组装简易气体发生装置，收集少量气体，可直接加热。 ⑥集气瓶：用于气体与其它物质的反应，收集气体。 ⑦广口瓶：用于组装气体发生装置 ⑧量筒：粗略量取液体的体积，不能用于反应容器，读取液体体积时应注意视线与凹液面的最低点相切。 ⑨容量瓶：用于准确量取一定体积的液体，或配制一定物质的量浓度的溶液。不能用做溶解的容器。 ⑩滴定管：中和滴定的主要仪器，也可用于准确量取液体。酸式滴定管不能盛放碱性试剂，碱式滴定管不能盛放酸性试剂和氧化性试剂。 胶头滴管：滴加少量液体用，不能倒置，滴加时尖嘴不能伸入容器内部（个别例外），应在接受容器上口边缘0.5cm处垂直滴加。 托盘天平：粗略称量质量用，使用前应先调好零点，使指针指在标尺中间，两边托盘放大小相同的纸，若称取有腐蚀性的药品时，应放在玻璃容器中称量，左盘放称量物，右盘放砝码。 酒精灯：需加热的实验中做热源。酒精灯中酒精的容量在 1/4～2/3 之间。用外焰加热，用完后用灯盖盖灭 漏斗：向小口容器内倾倒液体，制出有刺激性气味的极易溶于水的气体时用于组装尾气吸收装置，组装过滤装置。 分液漏斗：滴加液体时需控制滴加速率时用到，组装气体发生装置，分液、萃取。 长颈漏斗：添加液体，组装气体发生装置（用于形成液封）。 温度计：在需要控制温度的实验中用于测量温度，不能代替玻璃棒。 玻璃棒：搅拌，引流
混合物的分离和提纯练习题 1．能够用来鉴别BaCl2、NaCl、Na2CO3三种物质的试剂是()。 A．AgNO3溶液B．稀硫酸C．稀盐酸D．稀硝酸2.实验室进行NaCl溶液蒸发时，一般有以下操作过程：①放置酒精灯；②固定铁圈位置；③放置蒸发皿；④加热搅拌；⑤停止加热，余热蒸干。其正确的操作顺序为() A．①③②④⑤B．①②③④⑤C．②③①④⑤D．②①③④⑤3.提纯下列物质除去其中的杂质(括号中为杂质)，所用试剂和方法正确的是() A．H2SO4(HCl)：AgNO3溶液、过滤B．KNO3(K2SO4)：Ba(NO3)2溶液、过滤 C．Cu(CuO)：盐酸、过滤D．CaCO3(CaO)：水、过滤 4．某溶液中含有较大量的Cl－、CO2－3、OH－等三种阴离子，如果只取一次该溶液就能够分别将三种阴离子依次检验出来，下列实验操作顺序正确的是() ①滴加Mg(NO3)2溶液②过滤③滴加AgNO3溶液④滴加Ba(NO3)2溶液 A．①②④②③B．④②①②③C．①②③②④D．④②③②① 5．现有三组溶液：①汽油和氯化钠溶液②39％的乙醇溶液③氯化钠和单质溴的水溶液，分离以上各混合液的正确方法依次是()。 A．分液、萃取、蒸馏B．萃取、蒸馏、分液C．分液、蒸馏、萃取D．蒸馏、萃取、分液 6．某溶液中含有较大量的Cl－、 2 3 CO、OH－3种阴离子，如果只取一次该溶液就能够分别将3种阴离子依次检验出来，下列实验操作顺序中，正确的是()。 ①滴加Mg(NO3)2溶液；②过滤；③滴加AgNO3溶液；④滴加Ba(NO3)2溶液A．①②④②③ B．④②①②③C．①②③②④D．④②③②① 7. 除去下列物质中的杂质，所用试剂和方法不正确的是（） 物质杂质除杂所用试剂和方法 A．H 2SO 4 HCl AgNO 3 溶液、过滤 B．KNO 3 K 2 SO 4 Ba（NO 3 ） 2 溶液、过滤 C．Cu CuO 盐酸、过滤 D．CaCO 3 CaO H 2 O、过滤 8.下列离子检验的方法正确的是() A．某溶液中加硝酸银溶液生成白色沉淀，说明原溶液中有Cl－ B．某溶液中加BaCl2溶液生成白色沉淀，说明原溶液中有SO2－4 C．某溶液中加NaOH溶液生成蓝色沉淀，说明原溶液中有Cu2＋ D．某溶液加稀硫酸生成白色沉淀，说明原溶液中有Ba2＋ 9.可用于分离或提纯物质的方法有：（） A．过滤B．升华C．加热分解D．洗气法 10．下列分离混合物的操作中，必须加热的是（）
蛋白质的表达、分离、纯化和鉴定 来源：易生物实验浏览次数：2704网友评论0 条第一部分蛋白质的表达、分离、纯化克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作 结构与功能的研究。 第二部分蛋白质的鉴定电泳可用于分离复杂的蛋白质混合物，研究蛋白质的亚基组成等。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，凝胶的孔径，蛋白质的电荷，大小，性质等因素共同决定了蛋白质的电泳迁移率。 关键词：蛋白质蛋白质表达克隆基因聚丙烯酰胺凝胶电泳氯霉素酰基转移酶十二烷基硫酸钠SDS聚丙烯酰 胺凝胶 第一部分蛋白质的表达、分离、纯化 目的要求 （1）了解克隆基因表达的方法和意义。 （2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MC AC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材
一、试剂 [1] LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL. [2] 氨苄青霉素：100mg/mL [3] 上样 缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 [4] Washing Buffer：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3 [5] Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH 8.0 [6] IPTG 易生物仪器库：.ebioe./yp/product-list-42.html 易生物试剂库：.ebioe./yp/product-list-43.html 二、器材 摇床，离心机，层析柱（1′10 cm） 操作方法 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中（含100ug/mL 氨苄青霉素），37℃震荡培养过夜。 2. 转接1mL过夜培养物于100mL（含100ug/mL 氨苄青霉素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。 3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h.
一、中考初中化学除杂分离和提纯 1．下列除去杂质的方法中，不正确的是（） A．①②B．②③C．③④D．②④ 【答案】D 【解析】 【分析】 【详解】 ①氯化钠易溶于水，泥沙难溶于水，可采取加水溶解、过滤、蒸发的方法进行分离除杂，故选项所采取的方法正确； ②二氧化碳能与氢氧化钠固体反应生成碳酸钠和水，氢氧化钠固体具有吸水性，不但能把杂质除去，也会把原物质除去，不符合除杂原则，故选项所采取的方法错误； ③铁粉能与CuSO4反应生成硫酸亚铁和铜，再过滤除去不溶物，能除去杂质且没有引入新的杂质，符合除杂原则，故选项所采取的方法正确； ④Na2CO3能与过量的Ca(OH)2溶液反应生成碳酸钙沉淀和氢氧化钠，能除去杂质但引入了新的杂质氢氧化钙，不符合除杂原则，故选项所采取的方法错误，故②④方法不正确，故选D。 【点睛】 本题为除杂题，是中考的重点，也是难点，解决除杂问题时，抓住除杂的必需条件（加入的试剂只与杂质反应，反应后不能引入新杂质）是正确解题的关键。 2．除去下列物质中的杂质，所用试剂和方法不正确的是（）
A．A B．B C．C D．D 【答案】D 【解析】 【分析】 【详解】 A、KC1易溶于水，泥沙难溶于水，可采取加水溶解、过滤、蒸发的方法进行分离除杂，选项A正确； B、CO2能与氢氧化钠溶液反应生成碳酸钠和水，CO不与氢氧化钠溶液反应，能除去杂质且没有引入新的杂质，符合除杂原则，选项B正确； C、盐酸能与过量的碳酸钙反应生成氯化钙、水和二氧化碳，再过滤除去过量的碳酸钙，能除去杂质且没有引入新的杂质，符合除杂原则，选项C正确； D、Ca(OH)2能与过量碳酸钠溶液反应生成碳酸钙沉淀和氢氧化钠，能除去杂质但引入了新的杂质碳酸钠（过量的），不符合除杂原则，选项D不正确。故选D。 【点睛】 除杂质至少要满足两个条件：①加入的试剂只能与杂质反应，不能与原物质反应；②反应后不能引入新的杂质。 3．下列选项中的除杂方法不能达到目的的是（） A．A B．B C．C D．D 【答案】D 【解析】 【分析】 除杂（提纯），是指除去杂质，同时被提纯物质不得改变。 【详解】
实验十蛋白质的表达、分离纯化和鉴定 第一部分蛋白质的表达、分离纯化 目的要求 （1）了解重组蛋白表达的方法和意义。 （2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 目的基因在宿主细胞中的高效表达及表达的重组蛋白的分离纯化对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时目的基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白N端带有6个连续的组氨酸残基，可通过固相化的镍离子（Ni2+）亲和层析介质加以分离纯化，称为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材 一、试剂 [1] LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL。 [2] 氨苄青霉素：100mg/mL。 [3] 上样缓冲液(GLB)：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 1 mM β-巯基乙醇, pH8.0。 [4] 清洗缓冲液(UWB)：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3。 [5] 洗脱液缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 500 mM 咪唑, pH8.0。 [6] IPTG 二、器材 摇床，离心机，层析柱（1 10 cm），蠕动泵 操作方法 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白表达载体的大肠杆菌BL21（DE3）菌株于5mL
课时作业(五) 一、选择题 1．以下实验装置一般不用于分离物质的是() 解析：D为配制溶液。 答案：D 2．用分液漏斗可以分离的一组液体混合物是() A．苯和CCl4B．溴和戊烷 C．溴苯和水D．汽油和煤油 解析：溴苯和水互不相溶，分层析出。 答案：C 3．下列说法不正确的是() A．蒸馏是分离，提纯液态有机物的常用方法 B．重结晶的首要工作是选择适当的溶剂 C．萃取包括液—液萃取和固——液萃取 D．研究有机化合物可首先进行元素定量分析，再分离、提纯 解析：研究有机化合物的基本步骤首先应该是分离、提纯然后再进行元素定量分析，所以D不正确。 答案：D 4．天然色素的提取往往应用到萃取操作，现在有用大量水提取的天然色素，下列溶剂不能用来萃取富集这些天然色素的是()
A．四氯化碳B．苯 C．乙醇D．直馏汽油 解析：乙醇极易溶于水。 答案：C 5．下列萃取与分液结合进行的操作(用CCl4为萃取剂，从碘水中萃取碘)中错误的是() A．饱和碘水和CCl4加入分液漏斗中后，塞上上口部的塞子，用一手压住分液漏斗上口部，一手握住活塞部分，把分液漏斗倒转过来振荡 B．静置，待分液漏斗中液体分层后，先使分液漏斗内外空气相通(准备放出液体) C．打开分液漏斗的活塞，使全部下层液体沿盛接液体的烧杯内壁慢慢流出D．最后继续打开活塞，另用容器盛接并保存上层液体 解析：萃取后，分液漏斗中的下层液体从下端放出，上层液体应从上口倒出。 答案：D 6．下列关于物质的分离、提纯实验中的一些操作或做法，正确的是() A．在组装蒸馏装置时，温度计的水银球应伸入液面下 B．用96%的工业酒精制取无水乙醇，可采用的方法是加生石灰，再蒸馏C．在苯甲酸重结晶实验中，粗苯甲酸加热溶解后还要加少量NaOH溶液D．在苯甲酸重结晶实验中，待粗苯甲酸完全溶解后，要冷却到常温才过滤解析：用生石灰吸水，利用乙醇沸点低加热蒸出。 答案：B 7．现有一瓶乙二醇和丙三醇的混合物，已知它们的性质如下表。据此，将乙二醇和丙三醇相互分离的最佳方法是() C．分液法D．分馏法 解析：混合物的分离方法，取决于组成混合物的各物质的性质差异。萃取法适用于同一种溶质在两种互不相溶的溶剂中的溶解度差异，将混合物分离；结晶