酵母培养物对母猪生产性能的影响研究
朱鹤岩1，张功2
（1.北京华辰兴业科技有限公司，北京，100085；2. 美国Vi-Cor公司中国区产品经理，北京，100085）
摘要:本文通过应用酵母培养物饲料添加剂饲喂哺乳母猪的试验研究,发现酵母培养物能够
改善母猪窝产活仔数、仔猪断奶重、哺乳期间仔猪成活率等生产性能，并同时与前人的研究报告做了对比，其试验结果具有相似之处。因此，本试验具有指导生产实践提高母猪生产效率及猪场经济效益的作用。
关键词: 酵母培养物；母猪生产性能；母猪窝产活仔数；仔猪断奶重；断奶仔猪死亡率。ABSTRACT: A trial was carried out to study the effect of yeast culture on performance of lactating sows. The results indicate that yeast culture is able to increase the number of live littermate, weight of weaning pigs, rate of survival pigs during lactation etc. Furthermore, the results of this trial is to some extent similar to those of experiments carried out before. In conclusion, the results of this trial can be taken as practical guidance to improve efficiency of sow performance and profitability of swine farms.
Key words：Yeast Culture，performance of sow，number of live littermate，weight of weaning pigs，mortality rate of weaning pigs
改革开放30年以来，我国养猪业在品种引进、饲料营养技术等的研究与应用方面越来越接近于国外先进水平，但是在母猪的生产性能方面我国尚有较大差距，尤其是在母猪乳腺发育和代谢的营养调控、母猪胎儿生长的营养调控（宫内生长迟缓）、改善母猪生产性能的饲料添加剂研制等方面尚待进一步探索（蒋宗勇，2007）。因此，本文从饲料营养角度对如何提高哺乳母猪生产性能做了一个试验探讨，并同时与前人所做的相关试验做一个比较研究。
1我国母猪生产性能的差距与原因
1.1差距
表1 母猪繁殖性能国内外差距
指标欧洲先进的水平﹡﹡国内一般水平国内较好水平
窝产活仔数＞11.7 10.1﹡11.1﹡
死胎率＜6% 10% ＜10%
断奶到配种间隔＜6天7 ＜6-7天
配种率＞85% 80% ＞80%
母猪平均生产周期143-150 天160天148-158天
分娩窝数/头年＞2.35 1.9 2-2.2
每年每头母猪提供的
＞24.7 19.7﹡23.5﹡
断奶仔猪数
断奶后死亡率＜1.5% 10% 5%
﹡：陈代文，2006; ﹡﹡: Prof.dr.ir.Leo A.den Hartog,2006
由上可见，我国在窝产活仔数、死胎率、每头母猪每年分娩窝数及提供的断奶仔猪数、断奶后仔猪死亡率等与国外均有较大的差距。仅以每头母猪每年提高的断奶仔猪数量相差5头计算，500头基础母猪规模的场将每年少提供2500头断奶仔猪，大约相差25万元的经济收益。这说明母猪的生产效率指标，直接决定着养猪生产的效益。
1.2 核心差距的主要原因
导致差距的原因涉及管理、技术、品种、疫病、环境条件等诸多方面，本文仅从影响母猪体内环境进而影响母猪的生产性能的角度综述前人的工作，供读者参考。
1.2.1 死胎率高的主要原因
（1）分娩过程：分娩时仔猪死亡的主要原因是窒息，这是由于子宫缺氧引起的(Randall , Can J Comp Med,1971），缺氧症是母猪分娩时遭受到的主要危害(Dawkins,1966)。所以，改善分娩过程中的缺氧状况，是改善死胎率的途径之一。
（2）肠道大肠杆菌：由于食糜流动，大肠中大肠杆菌数量不会很多；但是，如果产前突然减少饲喂量，会使食糜流动速度减慢，肠中大肠杆菌数量急剧上升，这些大肠杆菌会直接进入子宫，导致子宫感染，进而影响胎儿的健康状况。（Dr.Bert van Gils, 2007）
（3） 妊娠期激素作用：配种后1周内是受精卵在子宫内着床阶段，此时母猪开始分泌妊娠激素。母猪的日增重速度过快会产生大量生长激素，与血液中妊娠激素(孕酮)拮抗，对胚胎发育不利。所以，从饲喂技术入手，一般控制饲喂量为1.6—2.0公斤,初产母猪饲喂量要更低些，否则胚胎死亡率高。（Dr.Bert van Gils, 2007）
1.2.2 配种率低的主要原因
1.2.2.1氨浓度影响青年母猪的发情率（Malayer et al 1987）
从上图中可以看出，在青年母猪24--30周龄之间，圈舍中氨气浓度对青年母猪的发情率有较大的影响，浓度高于22ppm 时将推迟青年母猪配种使用的时间，这将降低母猪使用的效率。
1.2.2.2哺乳期间的母猪失重情况影响再次发情的时间
母猪在泌乳期间应该失重。在泌乳期间损失２０公斤的体重(不包括乳猪出生重、胎盘和
102030405060
发情率
%
羊水重)是比较正常的。如果母猪在泌乳期间增重，那在泌乳期它们就可能发情，这将导致断奶后2周内它们不会再发情，从而延长了配种间隔期，降低母猪年产仔窝数。（Dr.Bert van Gils, 2007）
1.2.3 乳猪成活率低的主要原因
初乳中免疫球蛋白的含量在分娩后的6小时内下降50%，如果母猪分娩的时间延长,这样后出生的乳猪从初乳中得到的免疫球蛋白就少,被动免疫力下降，抵抗疾病的能力下降，乳猪就容易感染疾病；另外，如果母猪产后食欲不振，或者肠道中大肠杆菌多，其分泌内毒素，内毒素会使促进泌乳的激素失去活性，使泌乳量下降，母乳不足，影响出生后的乳猪体况,就容易出现弱仔被压死、饿死、或患病死亡的现象（Dr.Bert van Gils, 2007）。.
2. 提高母猪生产性能的途径
从分析死胎率高、发情率低、乳猪成活率低的原因中可以发现，提高母猪年产断奶仔猪数量和体增重的途径可以有以下几种：
2.1改善母猪肠道健康状况
母猪在妊娠与哺乳阶段是母猪生理负担较重的时期，一方面要保持自身的正常体况，同时还要满足胎儿和乳猪的健康成长需要，而胎儿所需营养物质均通过肠道的正常功能而获得，所以，有“养好母猪就是养好母猪的肠子”的观点。目前，从营养技术角度维护或改善母猪肠道健康的产品已经成为热点，如酵母培养物、微生态活菌制剂、植物提取物等，这些产品都具有改善母猪肠道健康状况的作用。
2.2 提高哺乳母猪的采食量
哺乳母猪采食量的提高具有重要的实践意义。有研究证明,哺乳母猪采食量影响哺乳效果(Kokestu.Y,Dial.G.D,1997),详见下表2:
日采食量（kg）断奶窝重（kg）窝产仔数
3 50.0 10.85
4 51.3 10.80
5 51.8 11.00
6 53.0 11.03
>6 54.4 11.17 另外,哺乳母猪采食量影响下次繁殖性能(Eastham.PR Smith,WC Whittemore, CT Phillips.P,1998),研究结果如下表3:
采食量高采食量低差异
再次发情天数（天） 5.1 9.0 3.9
妊娠率（%）84.5 65.5 19
排卵率（%）16.4 17.2 0.8
胎儿生存率（%）81.4 67.2 14.2
2.3 提高蛋白质利用率
通过提高对饲料中蛋白质的利用率，如微生态制剂产品、消化类酶制剂等，降低肠道
中氨气的产生量和氮的排出量。肠道中氨气浓度的降低将增加氧气在肠道中的浓度，也增加对胎儿的氧气供给量，从而减少胎儿因缺氧而造成的死亡率；环境中氨气浓度的降低，将减少对母猪发情率和呼吸道的影响，也降低对乳猪生长的危害，从而降低乳猪的发病概率。2.4 科学饲喂妊娠母猪
妊娠母猪的饲喂技术，即影响胎儿的着床、成长，也影响母猪哺乳期的哺乳能力。如果母猪分娩时太肥，会发生分娩过程慢，死胎变多；母猪腿部有问题，压死乳猪数量增多；泌乳期间采食量下降，体重损失大，结果导致奶水少，繁殖性能下降；高淘汰率导致母猪有效生产时间缩短。另外还要注意母猪的便秘问题，如果母猪发生便秘和排出很硬的粪便，那产后乳房炎、奶水不足和子宫炎的发生机率升高。
表4 妊娠期采食量影响泌乳期采食量
妊娠期饲养水平高中低
泌乳期每天饲料摄入量（kg） 3.4 4.5 4.9 (Mullen; Williams,1989)
3 改善母猪生产性能的试验
3.1 试验目的
为剂产品，配成全价料饲喂妊娠后期和哺乳期的母猪了研究如何能够改善母猪的生产性能，在了解影响其的原因和途径之后，作者选择了酵母培养物作为饲料添加，以探讨饲喂酵母培养物能否改善母猪肠道内环境，并了解其效果状况。
3.2 试验分组与试验材料
选择健康、遗传背景相同，胎次、体况和预产期相近的妊娠母猪24头，在胎次、体况和预产期等条件平衡的前提下随机分为对照组（12头）和试验组（12头）。试验组母猪产前7天开始按2.5kg/公斤/吨全价料的添加比例饲喂酵母培养物（麦可食产品，美国Vi-Cor 公司制造）至乳猪断奶（30日龄）结束，合计饲喂37天。试验时间为2007-7-1至2007-8-7，地点在北京大兴种猪场。
酵母培养物由美国Vi-Cor公司制造，在中国市场上的商品名为麦可食，其产品是采用酵母细胞经过特定生产工艺三级发酵制造形成，主要为酵母细胞的代谢产物。有效成分为：活性肽、有机酸、免疫多糖、酶类、酵母细胞、维生素、代谢活性物质、未知营养因子等。金褐色，烤香味，流动性和稳定性好，粗蛋白21%，粗脂肪1.6%,粗纤维13%,葡聚糖30-35%。
3.3 试验日粮
两组的基础日粮成分完全一致。对照组母猪基础日粮不添加酵母培养物。试验组母猪全价料基础日粮添加2.5kg/吨的酵母培养物。
3.4 饲喂与记录
妊娠母猪按预产期提前7天入圈，按膘情每天投喂3.5-2.0公斤，分3次饲喂；哺乳母猪每日7：00、11：00和17：00三次饲喂，潮拌料随意采食；哺乳仔猪7日龄开始提供教槽料，全期自由采食和饮水，环境、温度、免疫和驱虫等按猪场的常规饲养管理进行，在相
同日龄（30日龄左右）给仔猪断奶，清晨空腹测体重。记录母猪每天的采食量；仔猪10日龄及30日龄断奶时称个体重（窝重），记录死亡率，计算乳猪哺乳期日增重。每天观察并记录猪舍的温度、湿度和空气情况。
表5 怀孕及泌乳期母猪基础日粮配方
日粮组成%怀孕母猪泌乳母猪营养成分 %怀孕母猪泌乳母猪
玉米%
豆粕
%麸皮 %
鱼粉/%
预混料 % 60. 0
20. 0
16. 0
—
4. 0
63. 5
22. 5
8. 0
2. 0
4. 0
粗蛋白质%
粗纤维 %
能量MJ·kg-1
赖氨酸 %
钙/%
磷 %
15. 12
3. 5
12. 33
0. 61
0. 77
0. 75
17. 5
3. 0
13. 17
0. 85
0. 78
0. 75
3.5试验数据
试验结束后记录结果如下：
表6 对母猪饲喂酵母培养物的试验数据
项目对照组试验组
试验窝数（即母猪头数）12 12
母猪平均胎次 3.1 3.1
哺乳母猪平均日采食量 5.0﹡ 5.5﹡
平均窝产仔数(头) 10.5 10.2
平均窝产活仔数(头) 9.4 9.6
平均死胎率（％）10.5﹡ 5.9﹡
10日龄乳猪存栏头数(头/窝) 9.2 9.6
10日龄乳猪平均窝重（kg/窝）25.59 27.26
10日龄乳猪平均体重（kg/头） 2.78 2.84
平均断奶日龄（天）30 30
断奶时平均仔猪存栏数（头/窝）8.5﹡9.0﹡
仔猪哺乳期间死亡率（％）9.6﹡ 6.1﹡
断奶平均窝重（kg）57.72﹡63.95﹡
断奶仔猪平均体重（kg） 6.79﹡7.11﹡
右角标有“*”表示差异显著（P<0.05）
3.6 试验结果
(1)试验组每天每头哺乳母猪比对照组多采食0.5kg，提高幅度为10%。
(2)试验组断奶窝重明显比对照组高6.23公斤；断奶仔猪平均体重比对照组高0.32kg/头；
10日龄至30日龄期间的仔猪平均日增重比对照组高14克/天。
(3) 试验组死胎率比对照组低4.6%，窝产活仔数比对照组高0.2头/窝；哺乳期间仔猪死亡
率比对照组低3.5%；每头母猪平均每批多提供断奶仔猪0.5头。
3.7 结果讨论
(1) 与对照组相比，每头母猪每天多采食0.5kg，缓解了夏天热应激造成母猪采食量下降的
现象。分析认为，酵母培养物中富含大量的酵母代谢产物，是酵母细胞吸收利用培养基的营养素后排出的物质，这些物质包括多肽、二肽、三肽、各种酶类、维生素、矿物元素和其他未知营养因子及代谢活性物质,其作为一种营养添加物，提供有益菌发酵因子，可刺激消化道有益微生物生长繁殖，改善动物胃肠功能，这是酵母培养物改善母猪产后体质虚弱、增强抗病能力、采食量提高的重要原因。
(2) 试验可见，哺乳母猪日粮中添加酵母培养物后提高了断奶仔猪体重及平均窝重。分析认
为，饲喂酵母培养物添加剂之后，试验组的母猪泌乳能力得到了增强，从而通过乳汁促进了乳猪的增重。在邢宝松(2004)的研究试验中也获得了相同的结论,详见下表7:
项目酵母培养物组对照组
平均出生体重/kg 1.52 1.37
平均断奶体重/kg 7.75* 7.00
平均日增重/kg 222.7 211.8
平均断奶窝重/kg 70.76* 61.1
平均哺乳期窝增重/kg 55.18** 44.67
平均断奶体重/kg 7.75* 7.00 仔猪成活率% 91.9 89.43
同一行中，右角标有“*”表示差异显著（P<0.05）；右角标有“**”表示差异极显著（P<0.01）(3) 哺乳母猪日粮中添加酵母培养物后提高了试验组的窝产活仔数及哺乳期的成活率,这说
明试验组的乳猪更加健康,提高了机体抵抗疾病的能力,从而提高了母猪的生产效率。这与邢宝松(2004)的试验结果是一致的，他的试验表明，使用酵母培养物后提高窝产活仔数0.6头，降低死胎率1.5%。
(4) 在邢宝松(2004)的试验中发现使用酵母培养物组,平均出生窝重非常显著地高于对照组,
每窝相差3公斤;而在本试验中因为管理规定没有测定出生窝重,但从本试验10日龄的窝重结果看,试验组每窝高于对照组1.67公斤, 邢宝松(2004)试验结果详见下表8:
项目酵母培养物组对照组
平均窝产仔数，头10.8 10
平均窝产活仔数，头10.1 9.5
平均出生体重，kg 1.52* 1.37
平均出生窝重，kg 15.88** 12.88
同一行中，右角标有“*”表示差异显著（P<0.05）；右角标有“**”表示差异极显著（P<0.01）3.8 酵母培养物的作用机制
酵母培养物属于微生态制剂的范畴 ,其生产的关键过程是菌种选择、深度发酵和产生细胞外代谢产物。一般来讲 ,它可以通过滋养和刺激动物胃肠道内的微生物菌群 ,促进微生物
体系的相对平衡和调整体内微生态环境等自然手段 ,能够使动物从饲料中吸取更多的养分 ,从而改善动物的消化功能 ,提高饲料的适口性和利用率 ,增加抵御不良应激反应的能力等。
关于酵母培养物对猪繁殖性能影响的研究目前知之较少 ,其对母猪产仔数的影响可能与其增加母猪抵御不良应激反应的能力有关;对仔猪生长发育的影响主要是通过改善母猪的消化吸收能力 ,提高母猪的泌乳能力来实现。Sung Woo Kim（2006）研究报告认为，酵母培养物主要是通过提高母猪的泌乳能力途径提高窝增重和窝断奶重。但是这些作用并不排除酵母及其培养物中未知因子的特殊作用 ,酵母培养物中一般存在大量的细胞外代谢物质 ,在这些代谢物质里 ,只有少数能够与小肽、氨基酸、维生素、有机酸、寡糖和芳香类物质对号入座 ,绝大多数则是酵母在发酵过程中产生的生物化合物和合成物质 ,这些未知因子亦可能通过乳汁对仔猪的生长性能起促进作用。目前这些物质的成分及其作用机制尚待进一步的研究。
4．结束语
由中国农大等单位完成的“猪高产仔数FSHβ基因的发现及其应用研究”（2003年获国家技术发明奖二等奖）报告中表明，利用FSHβ基因进行选种提高了产仔数0.5~1.5头/窝；由江西农业大学等单位完成的“猪重要经济性状功能基因的分离、克隆及应用研究”（2005年获国家科技进步二等奖）报告中，采用分子选择技术对7个核心群的母猪经3-4世代的分子选育，提高产仔数0.4~1.0头/窝（彭中镇,2007），从育种的研究工作中可见，提高母猪的产仔数一直是研究的重点和难点，提高的幅度仅在0.4—1.5头范围之内。
本文及前人研究结果说明，采用酵母培养物饲料添加剂的营养技术,能够使每头母猪多产活仔数大约0.2-0.6头，断奶仔猪数0.5头，按此结果推算一个基础母猪在500头规模的猪场,可以全年多获得大约500头的断奶仔猪,按照每头断奶仔猪市场价格100元人民币计算,大约每年可以多获得5万元的收益。因此，初步结论，酵母培养物作为饲料添加剂使用在妊娠和哺乳母猪料中，能够通过改善母猪的肠道健康等途径而改善母猪的生产性能，进而提高其生产利用效率，提高猪场的经济效益.
参考文献:
1．邢宝松，王修启，酵母培养物对母猪繁殖性能的影响，粮食与饲料工业，2004（11）：37-38 2．蒋宗勇，改革开放30年我国猪营养研究回顾与展望，中国养猪改革开发30年文集，2007 3．荷兰Prof.dr.ir.Leo A.den Hartog, Nutreco Agriculture R&D，中国畜牧兽医学会年会报告, 2006
4．陈代文，营养对母猪繁殖性能的影响，2006，全国母猪营养与饲养管理技术研讨会5．Dr.Bert, 荷兰泰高集团猪研究中心，荷兰与中国政府“从饲料到食品”的POSM合作培训项目，母猪的饲养技术，2007
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of manure gases on puberty in gilts.(journal article) Journal of Animal Science. 1987 64:5 1476-1483. 43 ref.
12. 彭中镇，教授，华中农业大学动物科技学院，30年来我国猪育种工作进展与展望，中
国养猪改革开放30年文集,2007，
养猪生产指标 表1.生产技术指标 表2.猪舍参考温度 表3.不同阶段的猪群饲养密度 表4.各类猪群的饮水及设施 表5. 母猪、仔猪和生长育肥猪的生产性能指标 表6.仔猪生产性能的建议目标水平 表7.断奶后仔猪达到预期生长性能的途径或措施 表8. 在良好的商业条件下生长育肥猪的建议目标 表9. 生长速度降低的预测成本（20-100kg体重） 表10. 优化生长育肥猪生产性能的建议 表11 影响母猪生产性能的主要因素 表12. 举例计算空怀或非生产日期的天数所带来的经济损失表13. 优化母猪生产能力的饲养管理策略 表14不同阶段猪群投料规则 表15 猪只体温参数 表16 猪场免疫参考程序
表1. 生产技术指标
表2. 猪舍参考温度 表3.不同阶段的猪群饲养密度
表4.各类猪群的饮水及设施
表5. 母猪、仔猪和生长育肥猪的生产性能指标 表6.仔猪生产性能的建议目标水平 表7.断奶后仔猪达到预期生长性能的途径或措施
表8. 在良好的商业条件下生长育肥猪的建议目标 现代的肉猪品种生长速度和瘦肉率的遗传潜力都高。在理想状况下生长育肥阶段的生长速度超过了1.2kg/天，蛋白质的沉积超过了200g/天。 虽然这些指标在实际中很少达到，但生长潜力高过目前许多猪场实际的水平，如果这些生长水平没有达到，那么就要多消耗饲料，而且达到屠宰重所需要的时间也要增加。 所造成的生产成本的增加如表9所示 表9. 生长速度降低的预测成本（20-100kg体重） * 按生长速度1000g/天、平均采食量23kg/天进行比较 * 饲料成本2000元/吨，每多一天消耗1元/天 不同国家费用可能会不同
影响母猪产仔数与出生重的十大原因分析 窝产仔数除与母猪的营养有关系外，还与胎盘形状有很大的关系。抓好泌乳母猪的饲养管理是实现初生重的重要因素。 、遗传的影响 出生体重是影响仔猪质量和存活的一个重要的性状，平 均出生体重和总出生体重等性状有非常高的遗传力，分别为 0.25 和0.15. 大多数生产者都知道，仔猪出生重低（<800g） 和窝产仔猪不均匀是决定一窝仔猪断奶前损失的主要因素，这些因素的遗传力也相当高，分别为0.10 和0.07, 表明这些性状有遗传改善的潜力。单纯追求窝产仔数显然可能导致比 较低的出生体重和均匀度下降，因为窝产仔数和仔猪品质性促进对其他性状的反向选择。总之，遗传选择的重点应当在出生时创造出由优质仔猪构成的更大的窝重。 状呈负相关。这意味着，单纯追求其中种性状可能会间接随着对影响多产性能的基因的研究越来越深入，虽然养 猪业的平均窝产仔数可能还会不断增加。但是，窝产仔数的遗传力较低（0.1?0.15 ）,因此，在群内对窝产仔数进行选
育的效果很差。许多遗传育种学家试图通过遗传选育来提高猪的窝产仔数，但只取得了有限的遗传进展，而且成本很高。 、环境、营养和管理的影响 环境因素中对窝产仔数影响最大的是温度，高温高湿可 以降低母猪的窝产仔数、窝产活仔猪数和初生窝重。母猪的营养状态显著影响母猪的生理状态，受精、胚胎着床、胚胎 发育等生理过程都离不开良好的营养状态。这些生理过程又开始饲喂高质量日粮，自由采食，可以最大限度地增加排卵 是影响窝产仔数的主要因素。青年母猪应至少在配种前10d 率和窝产仔数。但如果在配种后2?3d内给青年母猪饲喂过多（超过2.5kg/d ）, 又会降低胚胎存活率。以往的研究发现， 妊娠40d 时特别明显，在这个阶段， 精氨酸对胚胎发育与存活起着至关重要的作用。美国德克萨斯大学的一组科学家发现，在妊娠期的关键时期调整日粮精氨酸水平可使活产仔数增加2 头，活产出生窝重可提高24%. 在成群饲养的情况下，当猪群的数量过大（多于20 头）时，会降低窝产仔数，尤其是青年母猪。配种选择在母猪排卵前0-24h （最佳为12h）可得到最多的窝产仔数。 三、配种管理的影响
146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)
毕赤酵母表达的培养基配制［5］ 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存。用于培养pPICZαA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Y east Extract 0.5％ NaCl 0.5％ PH 7.0 制作平板时加入2％琼脂粉。121℃高压灭菌20min。可于室温保存数月。用于培养pPICZαA 原核宿主菌TOP10F’时，加入Zeocin 25ug / ml，可以4℃条件下保存1～2周。 2.3 YPD （又称YEPD） Y east Extract Peptone Dextrose Medium，（Y east Extract Peptone Dextrose Medium，酵母浸出粉/胰蛋白胨/右旋葡萄糖培养基） Trypton 2% dextrose (glucose) 2% +agar 2% +Zeocin 100 μg/ml 液体YPD培养基可常温保存；琼脂YPD平板在4℃可保存几个月。加入Zeocin 100ug / ml，成为YPDZ培养基，可以4℃条件下保存1～2周。 2.4 YPDS + Zeocin 培养基（Y east Extract Peptone Dextrose Medium）： yeast extract 1% peptone 2% dextrose (glucose) 2% sorbitol （山梨醇）1 M +agar 2% + Zeocin 100 μg/ml 不管是液体YPDS培养基，还是YPDS + Zeocin 培养基，都必须存放4℃条件下，有效期1～2周。 2.5 MGY Minimal Glycerol Medium （最小甘油培养基） （34%YNB；1%甘油；4*10-5%生物素）。将800ml灭菌水、100ml的10*YNB母液、2ml 的500*B母液和100ml的10*GY母液混匀即可，4℃保存，保存期为2个月。 2.6 MGYH Minimal Glycerol Medium + Histidine （最小甘油培养基+ 0.004%组氨酸） 在1000ml的MGY培养基中加入10ml的100*H母液混匀，4℃保存，保存期为2个月。2.7 RD Regeneration Dextrose Medium （葡萄糖再生培养基） （含有：1mol/L的山梨醇；2%葡萄糖；1.34%YNB；4*10-5%生物素；0.005%氨基酸） 1. 将186g的山梨醇定容至700ml，高压灭菌；
10×DO（-His，-Leu，-Trp，-Ura）溶液： 不含-His，-Leu，-Trp，-Ura等成分的10×Dropout溶液： 氨基酸10×浓度（mg/L）称重(g)（1 L）称重(g)（500 mL）L-Isoleucine 异亮氨酸300 0.3 0.15 L-Valine 缬氨酸1500 1.5 0.75 L-Arginine HCl 精氨酸200 0.2 0.1 L-Lysine HCl 赖氨酸300 0.3 0.15 L-Methionine 蛋氨酸200 0.2 0.1 L-Phenylalanine 苯丙氨酸500 0.5 0.25 L-Threonine 色氨酸2000 2.0 1.0 L-Tyrosine 酪氨酸300 0.3 0.15 加ddH2O定容后4℃保存 100×氨基酸储备液： 每100ml溶液中分别含有下列成分，配制后保存于4℃氨基酸储备液100 mL中含量 100×His L-histidine HCl monohydrade 200 mg 100×Trp L-Trytohan 200 mg 100×Leu L-eucine 1 g 100×Uracil 200 mg 100×Adenine 400 mg SD 培养基： Yeast Nitrogen Base 0.17 g (without amino acid and Ammonium Sulfate) Ammonium sulfate 0.5 g 葡萄糖 2 g 10×DO(-His –Leu –Trp –Ura)10 ml 加ddH2O定容至100ml。如果配固体培养基加入2％的琼脂粉。 SD相应的缺失培养基：加上除了缺失的氨基酸之外的其他的氨基酸储备液，100 ml S D+1 ml 100×氨基酸储备液。 例如：SD/-Leu：SD+100×His 、100×Trp、100×Uracil、100×Adenine各1 ml。
酵母菌、霉菌常用培养基得配制 一、目得要求 了解合成培养基、半合成培养基与天然培养基得配制原理、学习与掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基与察氏培养基得配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基与马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌与霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也就是培养酵母菌及霉菌得一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基,马铃薯葡萄糖培养基与豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基,而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现得自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现得ｐH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HＰ０4、KCl、ＭｇSO4·７H2O,ＦｅＳ04、琼脂。(二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其她物品 药匙、ｐH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基得配制 １、培养基成分 新鲜麦芽汁一般为1０—15波林、 2.配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡６—1２h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒得两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。 (２)取一份麦芽粉加四份水,在６5℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法就是取0。5mｌ得糖化液,加２滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。 (3)糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)、 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到１0—15波林,调ｐH 至6、4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花得新鲜麦芽汁,加水稀释到1０—1５波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。 (６)分装、加塞、包扎、 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 ｍｉｎ。 (二)马铃薯葡萄糖培养基得配制 1、培养基成分 马铃薯20ｇ 葡萄糖 2 g 琼脂1、5—２g 水100mｌ自然ｐH 2.配制方法 (1)配制２0％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g,切成小块,加水１000m１。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积、10０Pａ灭菌２0 min。即成20％马铃薯浸汁,贮存备用、
影响猪窝产仔数与出生重的主要因素 窝产仔数除与母猪的营养有关系外，还与胎盘形状有很大的关系。抓好泌乳母猪的饲养管理是实现初生重的重要因素。 一、遗传的影响 出生体重是影响仔猪质量和存活的一个重要的性状，平均出生体重和总出生体重等性状有非常高的遗传力，分别为0.25和0.15。大多数生产者都知道，仔猪出生重低(<800g)和窝产仔猪不均匀是决定一窝仔猪断奶前损失的主要因素，这些因素的遗传力也相当高，分别为0.10和0.07，表明这些性状有遗传改善的潜力。单纯追求窝产仔数显然可能导致比较低的出生体重和均匀度下降，因为窝产仔数和仔猪品质性状呈负相关。这意味着，单纯追求其中一种性状可能会间接促进对其他性状的反向选择。总之，遗传选择的重点应当在出生时创造出由优质仔猪构成的更大的窝重。 随着对影响多产性能的基因的研究越来越深入，虽然养猪业的平均窝产仔数可能还会不断增加。但是，窝产仔数的遗传力较低(0.1～0.15)，因此，在群内对窝产仔数进行选育的效果很差。许多遗传育种学家试图通过遗传选育来提高猪的窝产仔数，但只取得了有限的遗传进展，而且成本很高。 二、环境、营养和管理的影响 环境因素中对窝产仔数影响最大的是温度，高温高湿可以降低母猪的窝产仔数、窝产活仔猪数和初生窝重。母猪的营养状态显著影响母猪的生理状态，受精、胚胎着床、胚胎发育等生理过程都离不开良好的营养状态。这些生理过程又是影响窝产仔数的主要因素。青年母猪应至少在配种前10d开始饲喂高质量日粮，自由采
食，可以最大限度地增加排卵率和窝产仔数。但如果在配种后2～3d内给青年母猪饲喂过多(超过2.5kg/d)，又会降低胚胎存活率。以往的研究发现，猪的胚胎中富含精氨酸，妊娠40d时特别明显，在这个阶段，精氨酸对胚胎发育与存活起着至关重要的作用。美国德克萨斯大学的一组科学家发现，在妊娠期的关键时期调整日粮精氨酸水平可使活产仔数增加2头，活产出生窝重可提高24%。 在成群饲养的情况下，当猪群的数量过大(多于20头)时，会降低窝产仔数，尤其是青年母猪。配种选择在母猪排卵前0—24h(最佳为12h)可得到最多的窝产仔数。 三、配种管理的影响 青年母猪初配时的体重可以明显影响第1窝的产仔数、仔猪出生重、成活率和断奶重，这反过来又决定以后的窝产仔数。配种选择在母猪排卵前0～24h(最佳为12h)可得到最多的窝产仔数。为了根据排卵来确定配种时间，应搞清楚母猪和青年母猪的发情持续时间，应在70%发情期进行配种。 在配种的时候，对于青年母猪来说，性成熟(经历的发情周期数)对窝产仔数的影响比日龄和体重更重要。与首次发情配种相比，在第2个发情期给青年母猪配种可增加0.7个窝产仔数。如果在首次发情时先用结扎输精管的公猪给青年母猪交配，第2次发情再用正常公猪配种，这样得到的窝产仔数比第1次发情不配种的情况高0.7。但目前还不清楚这两个数字之间有没有加性效应。对青年母猪来说，自然交配和人工授精相结合比仅做人工授精获得的窝产仔数更高。 对成年母猪来说，如果人工授精和自然交配都做得很好的话，二者所得的窝产仔数没有差别。母猪断奶7d后发情比例的增加会导致分娩率和窝产仔数降低。至少85%的母猪应在断奶后第4～6d返情。
母猪生产性能带来经济效益的对比 针对近几年来客户对法系二元猪、法系原种猪生产性能的认可，对于部分省市养猪户在种猪选择方面还存在误区，过分重视体形外貌、注重高瘦肉率，从而造成生产上操作困难，造成经济损失，现对母猪生产性能对养猪经济效益举例分析如下： 序：现代工厂化养猪以周为单位安排生产 1)母猪的繁殖周期为：21.5周1.妊娠期：16.5周2.哺乳期：4周3.待配期：1周2)母猪年产窝数1.按繁殖周期测算：每头母猪年产窝数为2.42 2.按受胎率测算:A.母猪断奶后第一情期受胎率为80%B.第二情期受胎率为60%C.第二情期未受胎者淘汰实际生产中每头母猪年产仔窝数为2.18窝 一.料肉比对养猪经济效益的影响例：A猪B猪料肉比:2.12 料肉比：2.221相差0.1每头猪生长到100公斤可以节约饲料:0.1×100公斤=10公斤可以节约资金:10公斤×1.8元/公斤=18元饲养100头母猪的猪场年可节约资金:1600头/年出栏×18元/头=28800元饲养600头母猪的猪场年可节约资金:10000头×18元/头=180000元 二、繁殖性能对养猪经济效益的影响例： A猪产健仔：9.5头B猪产健仔：9头，每窝相差0.5头，每头母猪每年可以多产：每头2.18窝/年×0.5头=1.09头 饲养100头母猪年可多产:100头×1.09=109头 A.增加效益 1.可以降低仔猪成本:2000元（耗料）+2000元×0.2（其他费用）=2400元 备注：2000元为母猪的饲料成本。 2400元/（2.18×9.5头）=115.89元2400元/（2.18×9头）=122.33元 每头仔猪可以降低成本:122.33元-115.89元=6.44元 每窝仔猪可以降低成本:6.44元×9.5头=61.18元 每养100头母猪年可以降低成本：100头×2.18窝×61.18元=13337.24元 B.可以增加获利每饲养100头母猪年可产窝数:100头×2.18窝/头=218窝 每饲养100头母猪年可增效:可多出栏：218×0.5=109头109×100元/头=10900元 每饲养100头母猪可多获利：13337.24元+10900元=24237.24元 若饲养600头母猪可获利:24237.24×6=145423.44元 结论高繁殖性能低料肉比的母猪会产生高效益。 每饲养100头高性能母猪会增效:28800元+24237.24元=53037.24元 若饲养600头高性能母猪会增效:180000元+145423.44元=325423.44 建议养殖户引种时应选择健康的、高性能的母猪。
毕赤酵母常用培养基与载体 一、毕赤酵母表达常用载体： 典型的巴斯德毕赤酵母表达载体载体包含醇氧化酶－1（AOX1）基因的启动子和转录终止子（5'AOX1和3'AOX1），它们被多克隆位点（MCS）分开，外源基因可以在此插入。此载体还包含组氨醇脱氢酶基因（HIS4）选择标记及3'AOX1区。当整合型载体转化受体时，它的5'AOX1和3'AOX1能与染色体上的同源基因重组，从而使整个载体连同外源基因插入到受体染色体上，外源基因在5'AOX1启动子控制下表达。毕赤酵母本身不分泌内源蛋白，而外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。而由89个氨基酸组成的酿酒酵母的分泌信号—α交配因子(α-factor)引导序列已经成功地引导了几种外源蛋白的分泌。分泌表达载体主要有：pPIC9，pPIC9K，pHIL-S1，pPICZα A，pYAM75P等。胞内表达载体主要有：pHIL-D2，pA0815，pPIC3K，pPICZ，pHWO10，pGAPZ，pGAPZa(Invitrogen)，pPIC3.5K等。工程菌株Y11430，MG1003，GS115 （AOX1），KM71，SMD1168。毕赤酵母宿主菌常用的有GS115和KM71两种，都具有HIS4营养缺陷标记。其中，GS115茵株具有AOX1基因，是Mut＋，即甲醇利用正常型；而KM71菌株的AOX1位点彼ARG4基因插入，表型为Muts，即甲醇利用缓慢型，两种菌株都适用于一般的酵母转化方法。多拷贝表达菌株的获得方式：与自主复制的质粒型表达载体不同，整合型表达载体的拷贝数可以有很大的变化。含多拷贝外源基因的表达菌株合成蛋白的量也较多。体内整合可通过高遗传霉素抗性，筛选可能的多拷贝插入；而体外整合可通过连接产生外源基因的串联插入。多拷贝表达菌株的获得方式有两种：一种是利用SDS-PAGE 电泳、免疫杂交或菌落点杂交方法在大量的转化子中进行自然筛选。得到产量高的表达菌株。另一种在转化前将多个表达盒拷贝插入到单个载体中，而后再通过交换整合到受体染色体上。表达蛋白纯化方法：酵母系统表达的蛋白一般都具有活性，所以都采用较温和的纯化方式来纯化目的蛋白，分泌型表达的蛋白有利于纯化，可用硫酸铵沉淀，然后用离子交换，凝胶过滤层析，疏水层析等方法进一步纯化。具体的方法和操作应按所处理的目的蛋白的性质选择。 二．毕赤酵母表达的培养基配制和用途 2.1 LB（Luria－Bertani）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％ NaCl l％ PH 7.0 制作平板时加入 2％琼脂粉。121℃高压灭菌 20min。可于室温保存。用于培养pPICZ αA原核宿主菌TOP10F’时可加入Zeocin 25ug / ml。 2.2 LLB（Low Salt LB）培养基： Trypton l％ Yeast Extract 0.5％
提高母猪产仔数量和质量 在养猪生产中，只有通过科学的饲养管理，达到母猪多产仔以及仔猪多活、快长、体壮的目标，充分发挥母猪的生产潜力，才能提高养猪生产水平和经济效益。那么如何做才能提高母猪产仔数量和质量呢? 一、提高母猪产仔数量方法 1、选择优质母猪杂交繁育 仔猪的初生体重遗传力很强，如果仔猪初生体重轻、窝产仔猪不均匀，就会严重影响一窝仔猪断奶前的成活率和断奶体重，并直接影响育肥猪的出栏体重和经济效益。 引进优良品种和体型较大的种母猪进行繁殖，可提高仔猪初生体重。在选配过程中，要选择组建优质高效的杂交生产繁育猪群，并进行合理的异质交配，充分利用杂交优势，防止体型较小的公、母猪进行交配，保证猪群具备较高的生产潜力，并保证所产仔猪具有较高的抵抗力和免疫力，降低死亡率。 要适当对母猪群进行更新。4胎以下母猪窝产仔数较少，仔猪的初生体重轻，对疾病的抵抗力和免疫力较差，影响育成率与断奶体重。因此，要提高猪群的窝平均产仔数，就应控制母猪群内1胎～3胎的母猪数，应保持在50%以下，提高4胎以上繁殖母猪的数量，并在生产7～8个胎次后严格进行淘汰。 2、改善母猪的生活环境 环境因素中对窝产仔数影响最大的是温度、湿度和通风条件，特别是湿热的环境对母猪繁殖性能影响极大。 当母猪舍内温度在32℃以上时，大约20%的母猪不孕或重复发情，流产率提高;高温还使母猪配种后8天内的胚胎存活数显著减少;妊娠期母猪遭受湿热应激，夏季窝产仔数和活仔数可减少1头以上，母猪泌乳量降低，哺乳仔猪生长不良，断奶体重轻。 因此，猪舍要减少阳光照射，降低环境及猪舍内气温;加强通风换气，排除有害气体。母猪妊娠28天前不要轻易转移，要保持母猪生活环境安静，不受外界干扰，避免生人靠近，禁止出现过强的噪声，更不能轰赶、抽打母猪。 3、加强配种管理 青年母猪初配时的体重明显影响第一窝的产仔数以及仔猪的初生体重、成活率和断奶体重，并影响以后的窝产仔数。成年母猪人工授精和自然交配的时机把握、操作技术等，都直接影响母猪的受胎率和产仔数。要适时配种。 母猪妊娠早期限制饲喂量，保持母猪适当膘情。另外，还要注意防控母猪繁殖障碍性疾病。
(一)麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 （二)马铃薯葡萄糖培养基的配制 1、培养基成分 马铃薯20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH 2．配制方法 (1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 （2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 (3)分装、加塞、包扎。 (4)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 (三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制 1．培养基成分 黄豆芽10g 葡萄糖5g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH 2．配制方法 (1)称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 m1水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。
酵母菌、霉菌常用培养基的配制 一、目的要求 了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。 学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。 二、基本原理 麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 三、实验材料 (一)药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O，FeS04、琼脂。 (二)仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 (三)玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 (四)其他物品 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。 四、实验内容 (一)麦芽汁培养基的配制
1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH 至6．4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 （二)马铃薯葡萄糖培养基的配制 1、培养基成分 马铃薯20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水100ml 自然pH
浅谈怎样提高母猪生产性能 在养猪生产中，常常出现母猪受胎率低、产仔少、泌乳量低等现象，这和养殖户没有注重母猪的选择、饲养管理、适时配种等直接相关。 一、母猪的选择 养殖户选用的母猪要具有以下特点：抗病力强，省料，生长快，瘦肉率高，排卵多，产仔多，所产仔猪初生重大，乳头数多，泌乳能力强。 二、母猪的饲养管理 1. 科学建造栏舍。母猪的栏舍应设有运动场，让母猪充分运动，以增加发情次数。 2. 合理选用饲料。后备母猪阶段应精、粗饲料合理搭配，不能将母猪养得过肥或过瘦。如采用商品饲料饲喂，配种前用后备母猪饲料饲喂，配种后用妊娠母猪饲料饲喂，产仔后用哺乳母猪饲料饲喂。特别要注意不能用育肥猪的配合饲料喂母猪，这样可能会导致母猪不发情或产仔少。 3. 做好防疫工作。母猪除接种国家强制免疫的疫苗外，还必须接种易造成繁殖障碍的疾病疫苗。栏舍必须每天清扫冲洗1次，每周消毒两次。 4. 加强妊娠期管理。妊娠母猪必须单栏饲养，防止大群
饲养时因挤压或打斗而导致流产或死胎。妊娠母猪临产前必须消毒好产床，产床还应有保温设施。 三、母猪的适时配种 1. 母猪性成熟与配种时间。地方优良品种母猪性成熟较早，一般3~4月龄、体重30~50千克时就达到性成熟，而引进的良种母猪及其杂交种母猪5~6月龄、体重60~80千克时才会达到性成熟。早熟的地方良种母猪在6~8月龄、体重50~60千克时配种较为合适；引进的良种母猪及其杂交种母猪在8~9月龄、体重达到80~110千克时配种较为合适。 2. 母猪的发情表现。地方优良品种母猪多发情明显，而引进的良种母猪及其杂交种母猪发情表现不明显。发情表现可归纳如下：①精神状态。母猪发情时，对周围环境十分敏感，表现东张西望、早起晚睡、扒圈跳圈、追人追猪、食欲下降、发呆等。②外阴部变化。母猪发情时，外阴充血肿胀并有黏液流出，阴道黏膜颜色多由浅变深再变浅。 3. 最佳输精时间。结合上述发情表现，结合以下几点掌握最佳输精时间：①掌握“老配早，少配晚，不老不少配中间”的原则。②母猪发情后，手压其臀部静止不动，3~4小时后即可输精。③母猪发情后，翻开外阴察看其黏膜颜色变化。初产母猪，阴道黏膜颜色稍微呈苍白色即可配种；经产母猪，阴道黏膜呈粉红色即可配种；如果是老龄母猪，阴道黏膜稍呈粉红色就可配种。
酵母菌的培养技术 一.酵母菌的培养基的配方 1.麦芽汁培养基的配制 培养基成分:新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 配制方法:(1)用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 (2)取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全) (3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 m1，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 (4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6.4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 (5)如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 (6)分装、加塞、包扎。 (7)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 2.马铃薯葡萄糖培养基的配制 培养基成分:马铃薯20g 葡萄糖2 g 琼脂1.5-2g 水100ml 自然pH 配制方法:(1)配制20％马铃薯浸汁取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000m1。80℃浸泡lh用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 （2)配制时，按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 (3)分装、加塞、包扎。 (4)高压蒸汽灭菌100 Pa灭菌20 min。 3.豆芽汁葡萄糖培养基的配制
如何提高优质母猪的产仔率 面对当前猪肉价格的上涨，使得生猪养殖行业目前很看好，甚至后劲十足。但是近几年来，猪病日趋繁杂，新病不断发生，旧病卷土重来。与此同时，食品安全已被提到重要日程，提倡绿色食品、限制抗生素的使用、加强食品中药物残留检测等，使传统的防治畜禽疾病的方法面临新的问题和挑战。又由于母猪是猪体的根本，母猪的生产性能品质好坏能够从一定程度上决定猪场的成败和养殖业的兴衰，所以要搞好畜牧业提高肉产品质量更应该从母猪的健康问题上抓起。但 今年夏季发现很多农户的母猪和有的猪场的母猪生产性能下降，产仔率低，表 现在断奶后屡配不孕、子宫炎、产前产后不食、产仔数少，流产等一系列繁殖障碍。现就母猪产生繁殖障碍的原因及如何提高母猪产仔率的繁殖性能提出自己的 以下几点看法。 一、小母猪的选种 猪场选种时要制定科学的引种计划，在引种前，要根据本场本地的实际情况制定科学的引种计划，应充分考虑到引种猪的日龄，要做到有层次，以便于猪场设施设备的有效应用，还要做好技术咨询。选用的新种母猪要用远缘杂种母猪生下的仔猪作种母猪，才能够提高经济效益，在选种时必须看其上一代母猪的生产性能，选留符合本品种特征、身体健壮、产仔数多、泌乳力强、护仔性能好，仔猪成活率高和采食力强的母猪。选种时要看猪的乳头排列是否整齐，两行乳头的排列应对称或呈品字形，无瞎乳头、翻乳头或无效乳头，同时还要重视乳头的形状，要选“通奶”，不选“钉子奶”。 二、后备母猪的饲养管理 对引进种猪到场后，要选用剌激性小的消毒药物对猪的体表及运输工具进行彻底消毒，再用清水冲洗干净后送入隔离舍内观察。不要急于给料先让猪群休息，要采用少量多次供给法种猪清洁的饮水；冬季可给予温水，夏季饮水要清凉；长途运输的种猪群，最好给种猪群饮用补液盐水，以补充电解汁，防止脱水。。 在饲喂上喂生料，生料喂猪多产仔。据资料报道，生料喂猪比熟料喂猪平均窝产仔猪增加2.4头，提高产仔数30%；成活率提高12%；平均每头断奶体重增加2.5千克；日增重提高14%。在母猪冬季的日粮中添加2-3公斤生马铃薯，饲喂1.5-2个月，然后给母猪配种，平均每窝比不喂生马铃薯者多产仔1.4头。这是因为生马铃薯中含有多酚氧化酶，有促性腺作用。母猪在配种前10-20天，多喂1-2公斤优质饲料，可以刺激母猪多排卵，从而在分娩时至少多产1头仔猪。用此法催情，在母猪配种之后，要把日粮减回到正常喂量，否则会造成胚胎死亡率提高。此法对纯种母猪、年龄较轻的母猪、断奶后体质较差的母猪较适宜。用青粗饲料喂后备母猪，可以锻炼其胃肠功能，到成年后能适应繁殖力高、泌乳力高的需要。豆科牧草含有雌性激素，能提高母猪的繁殖力，饲喂后备母猪的青粗饲料以豆科牧草为佳。为保证营养全面，还应适当地
主要试剂及培养基的配置 1、40％葡萄糖：121℃灭菌15min。 2、YPDA液体培养基(1L)： 20g/L peptone 10g/L yeast extract 定容至935ml，PH调至5.8(调之前大约6.6左右)，121℃灭菌15min， 待冷却至55℃时，加入50ml 40％葡萄糖及15ml Ade。 ●YPDA固体培养基另加18g/L agar。 3、－Trp－Leu液体培养基（100ml）： 0.67g 基础培养物（w/o） 0.154g －Trp－Leu 定容至95ml，PH调至5.8，121℃灭菌15min，待冷却至55℃时， 加入5ml 40％葡萄糖。 ●固体培养基另加入1.2-1.5% Agar，以下同上。 注：配缺陷型培养基时，加入缺陷型氨基酸具体的量还要参考药品商标的注明，不同厂家及批次的药品加入的量不同。 4、－Trp液体培养基（100ml）： 0.67g 基础培养物（w/o） 0.154g －Trp－Leu 定容至93ml，PH调至5.8，121℃灭菌15min，待冷却至55℃时， 加入5ml 40％葡萄糖及2ml 50×Leu。 5、－Trp－Leu－His固体培养基（100ml）： 0.67g 基础培养物（w/o） 0.062g －Trp－Leu－His 1.2-1.5% Agar 定容至95ml，PH调至5.8，121℃灭菌15min，待冷却至55℃时， 加入5ml 40％葡萄糖。 6、－Trp－His固体培养基（100ml）： 0.67g 基础培养物（w/o） 0.062g －Trp－Leu－His 1.2-1.5% Agar 定容至93ml，PH调至5.8，121℃灭菌15min，待冷却至55℃时， 加入5ml 40％葡萄糖及2ml 50×Leu。 7、鲑鱼精DNA（ssDNA）：5mg/ml
146种常用培养基配方 THE COMPOSITION OF MEDIA 培养基及成分 1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1g Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml
一种抗菌肽基因及其制备方法和该基因在毕赤酵母载体中的表达质粒的构建 2.2.7 酵母表达常用缓冲液 10×YNB(13.4%无氨基酸酵母氮源)，13.4gYNB粉末溶于100mL蒸馏水，0.22μm 过虑除菌，4℃保存； 500×B(0.02%生物素)，生物素20mg/100mL水，0.22μm过滤灭菌，4℃保存；10×D(20%葡萄糖)，200gD-葡萄糖溶于1L水中，0.22μm过滤灭菌，4℃保存；10×M，5mL甲醇与95mL灭菌水混匀，0.22μm的有机滤膜灭菌，4℃保存； 10×GY(10%的甘油)，100mL甘油溶于900mL水，过滤灭菌，4℃保存； 1M的磷酸缓冲液(pH6.5)，将132mL 1M的磷酸氢二钾(K2HPO4)和868mL的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用磷酸和氢氧化钾pH值到6.5，过滤灭菌，4℃保存； 2.2.8 酵母转化常用培养基 YPD完全培养基： Yeast Extract 10g/L Bacteriological peptone 20g/L Glucose 20g/L (固体培养基1.5%琼脂)115℃ 20min； 100mL选择固体培养基MD平板的配制： 向80mL水中加入琼脂粉1.5g，121℃灭菌20min然后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 10×D (20g/L)，500×B 0.2mL(4×10-4) 100mL选择固体培养基MM平板的配制： 向80mL水中加入琼脂粉1.5g，121℃灭菌20min然后待温度降至60℃在无菌超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 10×M(5%的甲醇)，500×B 0.2mL(4×10-4) 2.2.9 酵母诱导培养基 100mL诱导表达培养基BMGY的配制： 70mL水中加入1g Yeast Extract，2g Bacteriological Peptone，高压灭菌20min 后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 1M的磷酸盐缓冲液PH6.5，10mL 10×GY，500×B 0.2mL(4×10-4)； 100mL诱导表达培养基BMMY的配制： 70mL水中加入1g Yeast Extract，2g Bacteriological peptone，高压灭菌20min 后待温度降至60℃在超净台上加入10mL 10×YNB(134g/L)，10mL 1M的磷酸盐缓冲液PH6.5，10mL 10×M，500×B 0.2mL(4×10-4)；