名词解释：
1.反义RNA：反义RNA：碱基序列正好与有意义的mRNA互补的RNA称为反义RNA。可以作为一种调控特定基因表达的手段。
2.生物芯片：
3.基因诊断：是以DNA和RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。
4.增强子：顺式作用元件，增强邻近基因的转录。
5.基因表达：指基因转录及翻译的过程，基因表达的最终产物是蛋白质或者rRNA、tRNA 等。管家基因是组成性表达，而可调节基因的表达具有时空特异性。
6.核酸探针：
7.反式作用因子: 指能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，其主要特点包括三个功能结构域（DNA识别结合域、转录活性域、结合其它蛋白的结合域）、能识别并结合上游调控区的顺式作用元件、对基因表达有正性和负性调控作用。其活性调节方式：表达式调节，共价修饰，配体结合及蛋白质-蛋白质相互作用。作用方式:成环、扭曲、滑动、Oozing。DNA结构域包括：锌指、螺旋—转角—螺旋、亮氨酸拉链和螺旋—环—螺旋。转录激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺
8.粘粒:
9. YAC
10.转基因动物：是细菌细胞内携带的染色体外的DNA分子，是共价闭合的环状DNA分子，能独立进行复制。质粒只有在宿主细胞内才能够完成自己的复制。
11.蛋白激酶：
12.基因敲除
13.基因诊断，是以DNA和RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。
14.G蛋白，
15.克隆：是指把一个生物体的遗传信息（基因片段）转入另一个生物体内进行无性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又称DNA克隆
16.基因组：细胞或生物体中，一套完整单倍体的遗传物质的总和。
17.开放阅读框，
18.质粒：细菌细胞内的、染色体外的DNA分子，是共价闭合的环状DNA分子，能够独立于细胞的染色质DNA而进行复制。
19.RNA干涉，
20.蛋白质组学，
21.生物信息学，
22.顺式调控元件，是指那些与结构基因表达调控相关，能被基因调控蛋白异性识别和结合的DNA序列,抱括启动子.上游启动子元件.增强子.加尾信号和一些反应元件
23.端粒：是位于真核生物染色体末端的、由DNA和蛋白质组成的一膨出结构。端粒DNA 由短的高度重复序列组成，不同生物的重复序列不同。
24.RFLP，分析限制性片段长度多态性
25.原癌基因：是细胞内控制细胞生长和分化的基因，具有潜在的诱导细胞恶性转化的特性，它的结构异常或表达异常，可以引起细胞癌变。
26.核酶；指具有催化活性的RNA，其作用底物是RNA，主要参与RNA的加工成熟。
17.启动子；是RNA聚合酶特异性识别和结合的DNA序列,启动子具有方向性，真核生物的启动子必须与转录因子结合后，才能被DNA聚合酶识别和结合，真核生物的启动子元件是
TATA盖,TATA盒的核心序列是TATA(A/T)A(A/T)，位于转录起始点上游—25bp处,启动子决
定转录方向.模板链及转录效率。上游启动子元件包括：CAAT盒，CACA盒和GC盒。
28.SD序列
问答：
1.简述基因治疗的基本程序。
2.简述Rb基因产物的抑癌机制。
3.简述膜受体的功能与特性。
4.试述cAMP信息传递途径。
5.试述PCR基本原理；PCR的原理是根据待测DNA片段两端的核苷酸序列，设计并人工合成两个分别与DNA片段两端互补的寡聚核苷酸引物，在有过量的引物、过量的底物（4种dNTP）、DNA聚合酶以及模板（待扩增片段的DNA分子）的反应体系中，经过高温变性（使DNA链解开）、低温退火（使引物与模板结合）和适温延伸（新合成的DNA片段）三个阶段的循环周期，对DNA分子进行扩增。特点:极强的扩增能力,度高灵敏性,高度特异性，只需微量模板,只需数小时,扩增产物量大,变性.复性.延伸三个步聚循环进行,操作简便，适用广泛，但可出现假阳性.
6.原癌基因激活机制；
7.IP3、DG在信号转导中的作用；
8.真核生物和原核生物基因组的特点：真核生物基因组的特点：真核生物的基因组庞
大，出了结构基因的结构与原核生物大不相同以外，还存在大量的非结构基因区域。真核细
胞基因组具有结构基因呈断裂基因形式、以单顺反子转录、结构基因在基因组中所占比例小
于非编码区域的特点。真核细胞基因组存在大量重复序列，可以分为高度重复序列、中毒重
复序列和单拷贝或低度重复序列等3种。真核基因组的另一特点是存在多基因家族。
原核生物基因组的特点
原核生物的基因组主要是染色体DNA。
特点：1、基因组中很少有重复序列；2、编码蛋白质的结构基因多为单拷贝基因，但编码
rRNA的基因仍然是多拷贝基因；3、结构基因在基因组中所占的比例远远大于真核基因组，
但小于病毒基因组；4、许多结构基因在基因组中以操纵子为单位排列。
9.反式作用因子结构域模式极其特点；
10.DNA 聚合酶的功能；主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP
等的情况下）及其相辅的活性。
11.以乳糖操纵子例，说明细菌基因表达的调控原理；
12.胰岛素介导的信号转导途径；
13.DNA损伤因素及机制。
14.良好载体的条件
15.酵母双杂交原理：：将2个目的蛋白分别与AD和BD融合产生新的融合蛋白，
如果这2个目的蛋白能够互相作用，则该相互作用会促使AD和BD互相靠近而
产生有活性的转录因子，进而激活事先构建到酵母基因组中的报告基因的转录。
16.何谓基因工程？试述其产生的背景与研究内容。基因工程（gene engineering）：又
称为重组DNA技术，是指将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，并使其能在受体细胞
内复制和表达的技术。
17.当DNA损伤后，P53如何发挥其潜在的抑癌作用。
掌握上述题目可至少得70分。童鞋们一人整一题，共享答案吧。
分子生物学实验思考题答案 实验一、基因组DNA的提取 1、为什么构建DNA文库时，一定要用大分子DNA 答、的大小(即数目)取决于基因组的大小和片段的大小，片段大则文库数目小一些也可以包含99%甚至以上的基因组。而文库数目小则方便研究人员操作和文库的保存。所以构建文库要用携带能力大的载体尽量大的DNA片段. 2、如何检测和保证DNA的质量？ 答、用看，有没有质白质和RNA等物质的污染，还可以测OD，用OD260/280来判断，当OD260/OD280< ，表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> ，表示RNA含量较高当OD260/OD280=～，表示DNA较纯。 实验二、植物总RNA的提取 1、RNA酶的变性和失活剂有哪些？其中在总RNA的抽提中主要可用哪几种？ 答、有DEPC,Trizol，氧钒核糖核苷复合物，RNA酶的蛋白抑制剂以及SDS，尿素，硅藻土等；在总RNA提取中用PEPC,Trizol 2、怎样从总RNA中进行mRNA的分离和纯化。 答、、利用成熟的mRNA的末端具有polyA尾的特点合成一段oligo(dT)的引物，根据碱基互补配对原则，可将mRNA从总RNA中分离出来 实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备 1、感受态细胞制备过程中应该注意什么？ 答、A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备的菌液。细胞生长密度以刚进入时为宜，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600为时，细胞密度在5×107 个/mL左右，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 B）所有操作均应在无菌条件和冰上进行；实验操作时要格外小心，悬浮细胞时要轻柔，以免造成菌体破裂，影响转化。 C）经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；D）化合物及的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）； E）所使用的器皿必须干净。少量的或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率； 2、感受态细胞制备可用在哪些研究和应用领域？ 答、在中将导入受体细胞是如果受体细胞是细菌则将它用Ca2+处理变为质粒进入。 实验五、质粒在大肠杆菌中的转化和鉴定 1、在热激以后进行活化培养，这时的培养基中为什么不加入抗生素？ 答、活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入会细胞会死亡。 2、什么是质粒？根据在细菌中的复制，质粒有几种类型？用于基因重组的主要用到哪些质粒？ 答、是细菌体内的环状。
选择题 1．证明DNA 是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2 噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是（C ）。 A．从被感染的生物体内重新分离得到DNA 作为疾病的致病剂 B．DNA 突变导致毒性丧失 C．生物体吸收的外源DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能 D．DNA 是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子 E．真核心生物、原核生物、病毒的DNA 能相互混合并彼此替代 2.1953 年Watson 和Crick 提出（A ）。 A．多核苷酸DNA 链通过氢键连接成一个双螺旋 B．DNA 的复制是半保留的，常常形成亲本-子代双螺旋杂合链 C．三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D．遗传物质通常是DNA 而非RNA E．分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变 3．DNA 双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对DNA 的解链温度的正确描述？（C,D ） A．哺乳动物DNA 约为45℃，因此发烧时体温高于42℃是十分危险的 B．依赖于A-T 含量，因为A-T 含量越高则双链分开所需要的能量越少 C．是双链DNA 中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值 D．可通过碱基在260nm 的特征吸收峰的改变来确定 E．就是单链发生断裂（磷酸二酯键断裂）时的温度 4．Watson和Crick提出的经典DNA双螺旋结构属于(B) A．A型B．B型C．Z型 5．多种密码子编码一个氨基酸的现象，称为密码子的(B) A．连续性B．简并性C．通用性D．摆动性 6．真核基因经常被断开（B,D,E ）。 A．反映了真核生物的mRNA 是多顺反子 B．因为编码序列外显子被非编码序列内含子所分隔 C．因为真核生物的DNA 为线性而且被分开在各个染色体上，所以同一个基因的不同部分可能分布于不同的染色体上 D. 表明初始转录产物必须被加工后才可被翻译 E．表明真核基因可能有多种表达产物，因为它有可能在mRNA 加工的过程中采用不同的外显子重组方式 7．选出下列所有正确的叙述。（A,C ） A．外显子以相同顺序存在于基因组和cDNA 中 B．内含子经常可以被翻译 C．人体内所有的细胞具有相同的一套基因 D．人体内所有的细胞表达相同的一套基因 E．人体内所有的细胞以相同的方式剪接每个基因的mRNA 8．下列哪些基因以典型的串联形式存在于真核生物 基因组？（B,C ） A．珠蛋白基因B．组蛋白基因 C．rRNA 基因D．肌动蛋白基因 9．细胞器基因组（ A ）。
一、名词解释 1、基因组：细胞或生物体的一套完整单倍体遗传物质的总和。其结构主要指不同的基因功能区域在核酸分子中的分布和排列情况，功能是贮存和表达遗传信息。（P20） 2、胸腺嘧啶二聚体：在某种理化因素作用下，使得DNA分子中同一条链两相邻胸腺嘧啶碱基（T）间以共价键连接形成胸腺嘧啶二聚体结构（TT）,或称为环丁烷型嘧啶二聚体。（P40） 3、操纵子：是原核生物基因组构的基本单位，也是基本转录单位，至少由启动子、调节这些结构基因表达的操纵元件、几个串联的结构基因区和转录终止信号组成。（P25） 4、点突变：是突变的一种类型，会使单一个碱基核苷酸替换成另一种核苷酸，一般也包括只有作用于单一碱基对的插入或删除，点突变可依发生位置对基因功能的影响而分为无义突变、错义突变和同义突变等。（P129） 5、RNA干扰：是指在进化过程中高度保守的，由双链RNA诱发的、同源mRNA 高效特异性降解的现象。 由短双链RNA诱导的同源RNA降解的过程。（P244） 6、PCR(聚合酶链式反应)：利用DNA聚合酶在体外合成DNA的方法，基本步骤包括变性→退火→延伸。（P228） 7、单拷贝序列（低度重复序列）：在单倍体基因组中只出现一次或数次，大多数为蛋白质编码的基因属于这类，其两侧往往有散在分布的重复序列。（P23） 8、移码突变：在正常DNA分子中，碱基缺失或增加非3的倍数，造成这位置之后的一系列编码发生移位错误的改变，这种现象称为移码突变。（P130） 9、管家基因：有些基因参与生命的全过程，因此必须在一个生物体的所有细胞
中持续地表达，这样的基因称为管家基 因。（P75） 10、细胞癌基因：存在于正常的细胞基因组中，与病毒癌基因有同源序列，具有促进正常细胞生长、增值、分化和发育等生理功能，在正常细胞内未激活的细胞癌基因叫原癌基因。若受到某些条件激活时，结构及表达发生异常，能使细胞发生恶性转化。（P141）11、基因克隆：将一个生物体的遗传信息通过无性繁殖转入另一个生物体的过程。（P233） 12、抑癌基因：一类编码产物起抑制细胞增殖信号传导、负性调节细胞周期的作用，从而抑制细胞增殖和抑制肿瘤生成的基因。（P140） 二、问答题 1、简述乳糖操纵子的正负调控机制(P77) ⑴乳糖操纵子包含3个结构基因（编码β—半乳糖、β—半乳糖苷通透酶和转乙酰基酶）、3个调控元件（启动子、操纵基因和CAP结合位点）和1个调节基因（编码阻遏蛋白）。 ⑵阻遏蛋白的负调控：无乳糖时，阻遏蛋白结合操纵基因，妨碍RNA聚合酶结合启动子，抑制结构基因转录。有乳糖时，生成别位乳糖（诱导剂）结合阻遏蛋白，不能封闭操纵基因，结构基因可以转录。 ⑶cAMP—CAP复合物的正调控:无葡萄糖时，cAMP浓度高，形成的cAMP—CAP复合物结合于CAP结合位点，增强启动子转录活性。有葡萄糖时，cAMP浓度低，cAMP —CAP复合物形成受阻，影响转录活性。 ⑷正、负调控机制相辅相成。cAMP—CAP 复合物是转录必需的，同时阻遏蛋白进一步控制转录启动。综上，乳糖操纵子最强的表达条件是有乳糖而无葡萄糖。 2、简述质粒的基本特征（P25） ①是细菌细胞内一种自我复制的环状双链DNA分子，能稳定独立存在于染色体外，并传递到子代，不整合到宿主染色体DNA 上； ②只有在宿主细胞内才能完成自己的复制，一旦离开宿主就无法复制和扩增； ③携带遗传信息，赋予细菌特定的遗传性状，如耐药质粒有耐药基因； ④质粒在宿主菌中具有不相容性； ⑤是基因工程中常用的载体。 3、简述基因克隆的基本步骤（P233）
一、名词解释 1、广义分子生物学：在分子水平上研究生命本质的科学，其研究对象是生物大分子的结构和功能。2 2、狭义分子生物学：即核酸（基因）的分子生物学，研究基因的结构和功能、复制、转录、翻译、表达调控、重组、修复等过程，以及其中涉及到与过程相关的蛋白质和酶的结构与功能 3、基因：遗传信息的基本单位。编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的RNA病毒而言则是RNA序列)。 4、基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA 所必需的全部核苷酸序列。 5、功能基因组学：是依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解影响发育和整个生物体的特定序列表达谱。 6、蛋白质组学：是以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。 7、生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和转输 8、蛋白质组：指的是由一个基因组表达的全部蛋白质 9、功能蛋白质组学：是指研究在特定时间、特定环境和实验条件下细胞内表达的全部蛋白质。 10、单细胞蛋白：也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。 11、基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 12、C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg或Mb表示。 13、C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 14、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。 15、基因重叠：同一段核酸序列参与了不同基因编码的现象。 16、单拷贝序列：单拷贝顺序在单倍体基因组中只出现一次，因而复性速度很慢。单拷贝顺序中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。 17、低度重复序列：低度重复序列是指在基因组中含有2～10个拷贝的序列 18、中度重复序列：中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。 19、高度重复序列：基因组中有数千个到几百万个拷贝的DNA序列。这些重复序列的长度为6~200碱基对。 20、基因家族：真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因，可能由某一共同祖先基因经重复和突变产生。 21、基因簇：基因家族的各成员紧密成簇排列成大段的串联重复单位，定位于染色体的特殊区域。 22、超基因家族：由基因家族和单基因组成的大基因家族，各成员序列同源性低，但编码的产物功能相似。如免疫球蛋白家族。 23、假基因：一种类似于基因序列，其核苷酸序列同其相应的正常功能基因基本相同、但却不能合成功能蛋白的失活基因。 24、复制：是指以原来DNA（母链）为模板合成新DNA（子链）的过程。或生物体以DNA/RNA
第二章染色体与DNA 1、染色体包括DNA和蛋白质两大部分 2、由于细胞内的DNA主要在染色体上，所以说遗传物质的主要载体是染色体 3、下列哪一项对于DNA作为遗传物质是不重要的:（B） A.DNA分子双链且序列互补 B.DNA分子的长度可以非常长,可以长到将整个基因组的信息都包含在一条DNA分子上 C.DNA可以与RNA形成碱基互补 D.DNA聚合酶有3` 5`的校读功能 4、下列有关C值的叙述正确的是:（C） A.生物的进化程度越高,其C值就越大 B.C值与有机体的形态学复杂性成反比 C.每一个生物门中的C值与有机体的形态学复杂性大致成比例 D.C值与有机体的形态学复杂性成正比 5、人是最高等生物,其基因组碱基对数目(2.9×109)是动物界最大的.（×） 6..以下DNA(只写出一条链的序列)中,解链温度最高的是:（C） A.TTCAAGAGACTT (4个GC对) B.TCACAGTACGTC (6个GC对) C.GGACCTCTCAGG (8个GC对) D.CGTAGAGAGTCC (7个GC对) 7、一个复制子是:（C） A.细胞分离期间复制产物被分离之后的DNA片段 B.复制的DNA片段和在此过程中所需的酶和蛋白 C.任何自发复制的DNA序列(它与复制起始点相连) D.复制起点和复制叉之间的DNA片段 8、真核生物复制子有下列特征,它们:（B） A.复制元的大小都是一样的. B几个相邻的复制元可形成复制元簇 C.不同复制元簇在复制起始的时间上是同步的. D.复制时间比原核生物短. 9、下列有关冈崎片段的描述中,正确的是:（A） A.冈崎片段出现在DNA复制过程的滞后链中 B.冈崎片段的发现能证明DNA复制是以半保留复制方式进行的 C.冈崎片段只在原核生物DNA复制中出现 D.冈崎片段只在真核生物DNA复制中出现 10、原核生物DNA复制过程中,冈崎片段合成的方向与复制叉移动的方向相同.（×） 11、聚合反应的特点： (1) 以单链DNA为模板(2) 以dNTP为原料 (3) 引物提供3′-OH (4) 聚合方向为5′→3′ 12、大肠杆菌DNA聚合酶I的作用不包括:（D） A.5` 3`外切酶活性 B.3` 5`外切酶活性 C.5` 3`DNA聚合酶活性 D.3` 5`DNA聚合酶活性 13、真核细胞的DNA聚合酶和原核细胞的DNA聚合酶一样,都具有核酸外切酶活性.（×） A.DNA Helicase的生物学功能是:（C） A.缓解DNA复制时产生的twisting problem B.防止DNA的过度超螺旋 C.解开双螺旋DNA双链的配对 D.促进引物酶的结合 14、DNA复制过程,滞后链的引发是由引发体来完成的. 15、真核生物复制起始点的特征包括（B ） A、富含GC区 B、富含AT区 C、Z-DNA D、无明显特征
第八章细胞信号转导 自测题 （一）选择题 A型题 1.通过胞内受体发挥作用的信息物质为 A．乙酰胆碱 B．γ-氨基丁酸 C．胰岛素 D．甲状腺素 E．表皮生长因子 2.绝大多数膜受体的化学本质为 A．糖脂 B．磷脂 C．脂蛋白 D．糖蛋白
E．类固醇 3.细胞内传递信息的第二信使是 A．受体 B．载体 C．无机物 D．有机物 E．小分子物质 4.下列哪项不是受体与配体结合的特点 A．高度专一性 B．高度亲和力 C．可饱和性 D．不可逆性 E．非共价键结合 5.通过膜受体起调节作用的激素是A．性激素
B．糖皮质激素 C．甲状腺素 D．肾上腺素 E．活性维生素D3 6．下列哪项是旁分泌信息物质的特点A．维持时间长 B．作用距离短 C．效率低 D．不需要第二信使 E．以上均不是 7．胞内受体的化学本质为 A．DNA结合蛋白 B．G蛋白 C．糖蛋白 D．脂蛋白
8．下列哪种受体是催化型受体 A．胰岛素受体 B．生长激素受体 C．干扰素受体 D．甲状腺素受体 E．活性维生素D3受体 9．IP3与相应受体结合后，可使胞浆内哪种离子浓度升高A．K+ B．Na+ C．HCO3- D．Ca2+ E．Mg2+ 10．在细胞内传递激素信息的小分子物质称为 A．递质
C．第一信使 D．第二信使 E．第三信使 11．影响离子通道开放的配体主要是A．神经递质 B．类固醇激素 C．生长因子 D．无机离子 E．甲状腺素 12．cGMP能激活 A．磷脂酶C B．蛋白激酶A C．蛋白激酶G D．酪氨酸蛋白激酶
13．cAMP能别构激活 A．磷脂酶A B．蛋白激酶A C．蛋白激酶C D．蛋白激酶G E．酪氨酸蛋白激酶 14．不属于细胞间信息物质的是A．一氧化氮 B．葡萄糖 C．甘氨酸 D．前列腺素 E．乙酰胆碱 15．激活的G蛋白直接影响A．蛋白激酶A
2012浙江大学医学分子生物学（乙）回忆版： 一．名词解释（3分*5） 1.The Central Dogma 2.Telomere 3.nuclear localization signal, NLS 4.Protein Motif 5.Splicesome 二．简答题：（5分*9） 1.一个基因有哪些结构组成？ 2.基因、染色体、基因组的关系？ 3.表观遗传机制改变染色质结果的机制？ 4.内含子的生物学意义？ 5.什么是蛋白质泛素化？其生物学意义是什么？ 6.蛋白质纯化的方法？ 7.MicroRNA是什么？它如何发挥作用？ 8.什么是全基因组关联研究（Genome Wide Association Studies,GWAS）？其研究目的是什么？ 9.分子生物学研究为什么需要模式生物？ 三．问答题：（10分*4） 1.人体不同部位的细胞其基因组相同，为什么表达蛋白质的种类和数量不同？ 2.用分子生物学知识，谈谈疾病发生机制？ 3.有一块肿瘤组织及癌旁组织，设计一个实验证明细胞内蛋白质在肿瘤发生发展中的作用？ 4.目前，基因靶点研究已成为新药开发的用药部分，结合目前药物靶点在新药开发中的应用，谈谈你的建议和观点？
2011浙江大学博士入学考试医学分子生物学试题回忆 一、英文名解 1、冈崎片段： 2、反式作用因子： 3、多克隆位点： 4、micro RNA： 5、分子伴侣： 二、简答 1、蛋白质四级结构。 2、真核转录调控点。 3、表观遗传学调控染色质。 4、真核RNA聚合酶类型及作用。 5、基因突变。 6、组学概念及举例。 7、简述兔源多克隆抗体的制备。
医学分子生物学附加题 反式作用因子中的DNA结合结构域： a.螺旋-转折-螺旋(helix-turn-helix, HTH)： 至少有两个α螺旋，中间由短侧链氨基酸残基形成“转折”。一个α螺旋负责识别DNA的大沟，另一个 与DNA主链骨架非特异性结合。这类HTH蛋白以二聚体形式与DNA结合。 b.锌指(zinc finger)结构 一个α螺旋与一个反向平行β片层的基部以锌原子为中心，通过与一对半胱氨酸和一对组氨酸之间形成 配位键相连接，锌指环上突出的赖氨酸、精氨酸参与DNA结合。 Cys2/Cys2锌指：Cys-X2-Cys-X13-Cys-X2-Cys c.亮氨酸拉链结构(basic-leucine zipper, bZIP)（图7-20，-21） 蛋白质分子的肽链上每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基，结果就导致这些亮氨酸残基都在α螺旋的同 一个方向出现。两个相同结构的两排亮氨酸残基就能以疏水键结合形成拉链型二聚体。 该二聚体的氨基端的肽段富含碱性氨基酸残基，借其正电荷与DNA双螺旋链上带负电荷的磷酸基团结 合。 d.螺旋-环-螺旋结构(basic-helix/loop/helix, bHLH) 羧基端100-200aa形成两个α螺旋被非螺旋的环状结构所隔开；氨基端是碱性区。该类蛋白形成同源 或异源二聚体后，通过它们的碱性区与DNA相结合。 e.同源域蛋白(homeo domains):分子中含有约60个氨基酸的保守序列，这些序列参与形成了DNA的结合区。C 端有螺旋-转角-螺旋（HTH）样结构。 生物技术四大支柱：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程。 原癌基因的激活机理： 1. DNA重排：a.插入具有高活性的启动子或增强子(内源性或外源性)，使原癌基因持久、过量地表达。染色体易 位是原癌基因DNA重排的典型例子 b.负调控区的失活或丢失 2. 基因放大：基因扩增，可导致基因过量表达。原癌基因扩增一般认为与恶性演进有关，未必是恶性早期的改变 3. 点突变 4. 其它调控的异常：反式（Trans）调控系统、转录后的调控异常 病毒基因组特点： 1.病毒基因组很小，且大小相差较大。 2.病毒基因组可以由DNA组成，或由RNA组成。 3.多数RNA病毒的基因组是由连续的RNA链组成。 4.基因重叠：即同一段DNA片段能够编码两种甚至三种蛋白质分子 5.基因组的大部分可编码蛋白质，只有非常小的一部份不编码蛋白质。 6.形成多顺反子结构（polycistronie）。 7.除了逆转录病毒以外，一切病毒基因组都是单倍体。 8.噬菌体（细菌病毒）的基因是连续的，而真核细胞病毒的基因是不连续的。 HIV感染过程： 捆绑――当HIV病毒的gp120蛋白捆绑到T-helper细胞的CD4蛋白时，HIV病毒附着到机体的免疫细胞上。滤过性病毒核进入到T-helper细胞内部，并且病毒体的隔膜融合进细胞壁。 逆转录――滤过性病毒酶，即逆转录酶，将病毒的RNA转化为DNA； 集成――新产生的DNA被病毒整合酶运送到细胞核中，并嵌入到细胞的DNA。HIV病毒被称之为前病毒； 复制――细胞核中的病毒DNA利用细胞自己的酶分裂产生信使RNA（mRNA）。mRNA含有制造新的病毒蛋白的指令序列； 翻译――mRNA由细胞的酶运送出细胞核。然后病毒就利用自然蛋白生成机制来生成病毒蛋白和酶的长链分子； 组装――RNA和病毒酶在细胞边缘聚集。一种被称之为蛋白酶的酶将多肽切成病毒蛋白。 发育――新的HIV病毒粒子从细胞壁中收缩出来并打破环绕他们的细胞壁。这就是封装的病毒从细胞中分离出来的过程。 基因组：(genome):泛指一个有生命体、病毒或细胞器的全部遗传物质；在真核生物，基因组是指一套染色体（单倍体）DNA。携带生物体全部遗传信息的核酸量。
第一章绪论 □ DNA重组技术和基因工程技术。 DNA重组技术又称基因工程技术，目的是将不同DNA片段（基因或基因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，在特左的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 DNA重组技术是核酸化学、蛋白质化学、酶工程及微生物学、遗传学、细胞学长期深入研究的结晶，而限制性内切酶DNA连接酶及苴他工具酶的发现与应用则是这一技术得以建立的关键。DNA重组技术有着广泛的应用前景。首先，DNA重组技术可以用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低的多肽，如激素、抗生素、酶类及抗体，提髙产量，降低成本。苴次， DNA重组技术可以用于左向改造某些生物的基因结构，使他们所具有的特殊经济价值或功能成百上千倍的提高。 □请简述现代分子生物学的研究内容。 1、DNA重组技术（基因工程） 2、基因表达调控（核酸生物学） 3、生物大分子结构功能（结构分子生物学） 4、基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二章遗传的物质基础及基因与基因组结构 □核小体、DNA的半保留复制、转座子。 核小体是染色质的基本结构单位。是由H2A、H2B、H3、H4各两分子生成八聚体和由大约200bp 的DNA构成的。核小体的形成是染色体中DNA压缩的第一步。 DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA 分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA,另一条链则是新合成的，这种复制方式被称为DNA的半保留复制。 转座子是存在染色体DNA上的可自主复制和移位的基本单位。转座子分为两大类：插入序列和复合型转座子。 □DNA的一、二、三级结构特征。 DNA的一级结构是指4种脱氧核昔酸的连接及其排列顺序，表示了该DNA分子的化学构成。DNA 的二级结构是指两条多核昔酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。分为左手螺旋和右手螺旋。DNA的髙级结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。超螺旋结构是DNA 高级结构的主要形式，可分为正超螺旋与负超螺旋两大类。 □DNA复制通常采取哪些方式？ 仁线性DNA双链的复制：复制经过起始、延伸、终止和分离三个阶段。复制是从5,端向3, 端移动，前导链的合成是连续的，后随链通过冈崎片段连接成完整链。 2、环状DNA双链的复制 （1）0型：是一种双向复制方式。复制的起始点涉及DNA的结旋和松开，形成两个方向相反的复制叉，复制从定点开始双向等速进行。 （2）滚环型：是单向复制的一种特殊方式，发生在噬菌体DNA和细菌质粒上，首先对正链原点进行专一性的切割，形成的5,端被单链结合蛋白所覆盖，3,端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。
假定你从一新发现的病毒中提取了核苷酸，请用最简单的方法确定：（1）它是DNA还是RNA？（2）它是单链还是双链？--类型：分析题 答：确定碱基比率。如果有胸腺嘧啶，为DNA，如果有尿嘧啶，则为RNA。如果为双链分子，那么A与T(或U)的量以及G与C的量应相等。 RNA 是由核糖核酸通过（）键连接而成的一种（）。几乎所有的RNA都是由（）DNA（）而来，因此，序列和其中一条链（）。--类型：填空题 --答案：磷酸二酯；多聚体；模板；转录；互补 多数类型的RNA是由加工（）产生的，真核生物前体tRNA的（）包括（）的切除和（）的拼接。随着（）和（）端的序列切除，3’端加上了序列（）。在四膜虫中，前体TRNA 的切除和（）的拼接是通过（）机制进行的。--类型：填空题 --答案：前体分子；加工；内含子；外显子；5’；3’；CCA；内含子；外显子；自动催化 Rnase P 是一种（），含有（）作为它的活性部位，这种酶在（）序列的（）切割（）。--类型：填空题 --答案：内切核酸酶；RNA；tRNA；5’端；前体RNA C0t1/2实验测定的是（）。--类型：填空题 --答案：41 RNA的复性程度 假定摆动假说是正确的，那么最少需要（）种TRNA来翻译61种氨基酸密码子。--类型：填空题 --答案：32 写出两种合成后不被切割或拼接的RNA：（）和（）。--类型：填空题 --答案：.真核生物中的5SrRNA；原核生物中的mRNA 原核细胞信使RNA含有几个其功能所必需的特征区段，它们是：( ) --类型：选择题--选择：(a)启动子，SD序列，起始密码子，终止密码子，茎环结构(b)启动子，转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和ORF 尾部序列，茎环结构(c)转录起始位点，尾部序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，茎环结构(d)转录起始位点，前导序列，由顺反子间区序列隔开的SD序列和0RF，局部序列 --答案：d
医学分子生物学习题集 第二章基因与基因组 一、名词解释 4.基因（gene） 5.断裂基因（split gene） 6.结构基因（structural gene） 7.非结构基因（non-structural gene） 8.内含子（intron） 9.外显子（exon） 10.基因间 DNA （intergenic DNA） 11.GT-AG 法则（GT-AG law） 12.启动子（promoter） 13.上游启动子元件（upstream promoter element） 14.反应元件（response element） 15.poly(A)加尾信号（poly(A) signal） 16.基因组（genome） 17.操纵子（operon） 18.单顺反子（monocistron） 19.多顺反子（polycistron） 20.转座因子（transposable element） 21.转座子（transposon） 22.基因家族（gene family） 23.基因超家族（gene superfamily） 24.假基因（pseudogene） 25.自私 DNA （selfish DNA） 26.反向重复（inverted repeat） 27.串联重复（tandem repeat） 28.卫星 DNA （satellite DNA）
8.大卫星 DNA （macro-satellite DNA） 9.小卫星 DNA （mini-satellite DNA） 10.微卫星 DNA （micro-satellite DNA） 11.可变数目串联重复（variable number of tandem repeat） 12.短串联重复（short tandem repeat） 13.基因组学（genomics） 14.物理图谱（physical map） 15.遗传图谱（genetic map） 16.转录图谱（transcriptional map） 17.序列图谱（sequence map） 18.结构基因组学（structural genomics） 19.功能基因组学（functional genomics） 20.比较基因组学（comparative genomics） 21.基因型（genotype） 22.表型（phenotype） 23.重叠基因（overlapping gene） 24.分段基因组（segmented genome） 25.逆转录病毒（retrovirus） 26.等基因（isogene） 27.同源多聚体（homomultimer） 28.异源多聚体（heteromultimer） 二、判断题 1. 所有生物的遗传物质都是 DNA。(） 2.通常一个基因编码一条多肽链。（） 3.一个基因编码一个同源多聚体的蛋白质。（） 4.所有的基因都编码蛋白质或多肽链。（） 5. 结构基因是指基因中编码蛋白质的 DNA 序列。（） 6.有的结构基因只编码 RNA。（） 7.真核生物的启动子元件是 TATA 盒，位于转录起始位点上游。（）
名词解释： 基因是核酸中贮存遗传信息的遗传单位，是贮存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。 基因组（gencme）：细胞或生物中，一套完整单倍体遗传物质的总和（包括一种生物所需的全套基因及间隔序列）称为基因组。基因组的功能是贮存和表达遗传信息。 SD序列(Shine-Dalgarno sequence,SD sequence) 是mRNA能在细菌核糖体上产生有效结合和转译所需要的序列。SD序列与16S rRNA的3’末端碱基(AUUCCUCCAC-UAG-5’)互补，以控制转译的起始 分子克隆：克隆（clone）：是指单细胞纯系无性繁殖，现代概念是将实验得到的人们所需的微量基因结构，引入适当的宿主细胞中去，在合适的生理环境中进行无性繁殖，从而利用宿主的生理机制繁衍人们所需要的基因结构，并进行表达。由于整个操作在分子水平上进行，所以称为分子克隆（molecular cloning）。 动物克隆(Animal cloning)就是不经过受精过程而获得动物新个体的方法. 基因诊断：就是利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法，直接检测基因结构 （DNA水平）及其表达水平（RNA水平）是否正常，从而对疾病做出诊断的方法。 基因治疗就是将有功能的基因转移到病人的细胞中以纠正或置换致病基因的一种治疗方法，是指有功能的目的基因导入靶细胞后有的可与宿主细胞内的基因发生整合，成为宿主细胞遗传物质的一部分，目的基因的表达产物起到对疾病的治疗作用。 转基因动物就是把外源性目的基因导入动物的受精卵或其囊胚细胞中，并在细胞基因组中稳定整合，再将合格的重组受精卵或囊胚细胞筛选出来，采用借腹怀孕法寄养在雌性动物（foster mother）的子宫内，使之发育成具有表达目的基因的胚胎动物，并能传给下一代。这样，生育的动物为转基因动物。 探针：在核酸杂交分析过程中，常将已知顺序的核酸片段用放射性同位素或生物素进行标记。这种带有一定标记的已知顺序的核酸片段称为探针。 限制性核酸内切酶：限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）是一类专门切割DNA 的酶，它们能特异结合一段被称为限制酶识别顺序的特殊DNA序列并切割dsDNA。 载体：要把一个有用的基因（目的基因-研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。 限制性片段长度多肽性分析(RFLP):DNA片段长度多态性分析（restriction fragment length polymer-phism,RFLP）基因突变导致的基因碱基组成或(和)顺序发生改变,会在基因结构中产生新的限制性内切酶位点或使原有的位点消失. 用限制酶对不同个体基因组进行消化时，其电泳条带的数目和大小就会产生改变，根据这些改变可以判断出突变是否存在。 简答题： 1.蛋白质的生物合成过程中的成分参与，参与因子，作用？ mRNA是合成蛋白质的“蓝图（或模板）” tRNA是原料氨基酸的“搬运工” rRNA与多种蛋白质结合成核糖体作为合成多肽链的装配机（操作台） tRNA mRNA是合成蛋白质的蓝图，核糖体是合成蛋白质的工厂，但是，合成蛋白质的原料——20种氨基酸与mRNA的碱基之间缺乏特殊的亲和力。因此，需要转运RNA把氨基酸搬运到核糖体中的mRNA上 rRNA 核糖体RNA（rRNA）和蛋白质共同组成的复合体就是核糖体，核糖体是蛋白质合成的场所。
第一章绪论 ?DNA重组技术和基因工程技术。 DNA重组技术又称基因工程技术，目的是将不同DNA片段（基因或基因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。 DNA重组技术是核酸化学、蛋白质化学、酶工程及微生物学、遗传学、细胞学长期深入研究的结晶，而限制性内切酶DNA连接酶及其他工具酶的发现与应用则是这一技术得以建立的关键。 DNA重组技术有着广泛的应用前景。首先，DNA重组技术可以用于大量生产某些在正常细胞代谢中产量很低的多肽，如激素、抗生素、酶类及抗体，提高产量，降低成本。其次，DNA重组技术可以用于定向改造某些生物的基因结构，使他们所具有的特殊经济价值或功能成百上千倍的提高。 ?请简述现代分子生物学的研究内容。 1、DNA重组技术(基因工程) 2、基因表达调控(核酸生物学) 3、生物大分子结构功能(结构分子生物学) 4、基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二章遗传的物质基础及基因与基因组结构 ?核小体、DNA的半保留复制、转座子。 核小体是染色质的基本结构单位。是由H2A、H2B、H3、H4各两分子生成八聚体和由大约200bp的DNA构成的。核小体的形成是染色体中DNA压缩的第一步。 DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA分子与原来DNA分子的碱基顺序完全一样。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式被称为DNA的半保留复制。 转座子是存在染色体DNA上的可自主复制和移位的基本单位。转座子分为两大类：插入序列和复合型转座子。 ?DNA的一、二、三级结构特征。 DNA的一级结构是指4种脱氧核苷酸的连接及其排列顺序，表示了该DNA分子的化学构成。DNA的二级结构是指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。分为左手螺旋和右手螺旋。 DNA的高级结构是指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。超螺旋结构是DNA 高级结构的主要形式，可分为正超螺旋与负超螺旋两大类。 ?DNA复制通常采取哪些方式？ 1、线性DNA双链的复制：复制经过起始、延伸、终止和分离三个阶段。复制是从5’端向3’端移动，前导链的合成是连续的，后随链通过冈崎片段连接成完整链。 2、环状DNA双链的复制 (1)θ型：是一种双向复制方式。复制的起始点涉及DNA的结旋和松开，形成两个方向相反的复制叉，复制从定点开始双向等速进行。 (2) 滚环型：是单向复制的一种特殊方式，发生在噬菌体DNA和细菌质粒上，首先对正链原点进行专一性的切割，形成的5’端被单链结合蛋白所覆盖，3’端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。
1、名词解释 基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。 基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg(10-12克) 或Mb表示。 C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 主要表现为： ☆ C值不随生物的进化程度和复杂性而增加 ☆亲缘关系密切的生物C值相差很大 ☆高等真核生物具有比用于遗传高得多的C值。 基因家族：真核生物基因组中来源相同、结构相似、功能相关的一组基因，可能由某一共同祖先基因经重复和突变产生。 基因簇：基因家族的各成员紧密成簇排列成大段的串联重复单位，定位于染色体的特殊区域。 超基因家族：由基因家族和单基因组成的大基因家族，各成员序列同源性低，但编码的产物功能相似。如免疫球蛋白家族。 半保留复制：DNA复制过程中，新合成的子代DNA分子中，一条链是新合成的，另外一条链来自亲代，这种复制方式称为半保留复制。 回环模型：DNA polII以异二聚体形式催化DNA双螺旋两条链同时进行复制，在复制叉处滞后链模板以一个催化中心形成一个环，使滞后链方向颠倒，但催化方向不变，以适应双链同步进行复制。 SOS反应：许多能造成DNA损伤或抑制DNA复制的过程能引起一系列复杂的诱导效应，这种效应称为应急反应。 同义突变（synonymous mutation ）：指突变改变了密码子的组成，但由于密码子的简并性没有改变所编码的氨基酸序列的突变。 错义突变（ missense mutation ）：指基因突变改变了所编码氨基酸的序列，不同程度地影响蛋白质和酶的活性。 无义突变（ nonsense mutation ）：指基因改变使代表某种氨基酸的密码子变为终止密码子，导致肽链合成过早终止。 同源重组（homologous recombination）:又称一般性重组，指发生在两条同源DNA分子之间，通过配对、链断裂和再连接，而产生片段交换过程。重组产物称为重组体。 Holliday中间体:同源重组中，两条同源的DNA分子经过配对、断裂和再连接，形成的连接分子，称为Holliday中间体。 转座子：转座元件(transposon or transposable element):基因组上中可以
1-6 说出分子生物学的主要研究内容。 1、DNA重组技术：它可用于定向改造某些生物基因组结构，也可用来进行基因研究。 2、基因表达调控研究： 3、生物大分子的结构功能研究----结构分子生物学； 4、基因组、功能基因组与生物信息学研究。 2-4 简述DNA的一、二、三级结构特征。 DNA一级结构：4种核苷酸的的连接及排列顺序，表示该DNA分子的化学结构。 DNA二级结构：指两条多核苷酸链反向平行盘绕所生成的双螺旋盘绕结构。 DNA三级结构：指DNA双螺旋进一步扭曲盘绕所形成的特定空间结构。 2-5 原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA的特征？ 1、结构简练原核生物DNA分子的绝大部分是用来编码蛋白质，非编码序列极少，这与真核DNA的冗余现象不同。 2、存在转录单元原核生物DNA序列中功能相关的RNA和蛋白质基因，往往丛集在基因组的一个或几个特定部位，形成功能单位或转录单元，其转录产物为多顺反子mRNA（能作为多种多肽链翻译模板的mRNA），而真核生物转录产物为单顺反子mRNA（只编码一个蛋白质的mRNA）。 3、有重叠基因重叠基因，即同一段DNA携带了两种或两种以上不同蛋白质的编码信息。主要有3种情况① 一个基因完全在另一个基因里面 ② 部分重叠 ③ 两个基因只有一个碱基对是重叠的. 2-6 简述DNA双螺旋结构及其在现代分子生物学发展史中的意义。 DNA的双螺旋结构模型是Watson和Cricket于1953年提出的。其主要内容是： 1、两条反向平行的多核苷酸围绕同一中心轴相互缠绕；两条链都是右手螺旋。 3，5-磷酸二酯键连接，2、脱氧核糖和磷酸交替连接，排列在双螺旋外侧，彼此通过，， 构成DNA分子的基本骨架；碱基排列在双螺旋的内侧，碱基平面与纵轴垂直。 3、双螺旋的平均直径为2.0nm，相邻碱基平面之间垂直距离为0.34nm，每10个碱基对旋转一圈，碱基对之间的螺距为3.4nm。 4、在双螺旋的表面分别形成大沟和小沟。 5、两条链借助碱基之间的氢键和碱基堆积力牢固结合，维持DNA结构的稳定性。 该模型的建立对促进分子生物学及分子遗传学的发展具有划时代的意义。对DNA本身的复制机制、对遗传信息的存储方式和遗传信息的表达。对生物遗传稳定性和变异性等规律的阐明起了非常重要的作用。 2-8 简述原核生物DNA的复制特点。 1、原核生物双链DNA都是以半保留方式遗传的，DNA的复制在整个细胞周期都能进行; 2、只有一个复制起点； 3、在起点处解开形成复制叉，可以连续开始新的DNA复制，一个复制单元多个复制叉； 4、复制叉移动速度很快； 5、是半不连续的复制，需要多种酶和蛋白质的协同参与； 6、DNA聚合酶在组成和功能上与真核生物有很大的不同。 3-1 什么是编码链？什么是模板链？ 编码链：DNA双链中与 mRNA 序列和方向相同的那条 DNA 链，又称为有意义链
1、原核生物DNA具有哪些不同于真核生物DNA得特征？ 真核生物：①真核基因组庞大.②存在大量得重复序列。③大部分为非编码序列(>９0％).④转录产物为单顺反子.⑤就是断裂基因，有内含子结构。⑥存在大量得顺式作用 元件（启动子、增强子、沉默子)。⑦存在大量得DNA多态性。⑧具有端粒（telomer ｅ)结构 原核生物:①基因组很小,大多只有一条染色体，且DNＡ含量少. ②主要就是单拷贝基因，只有很少数基因〔如ｒRNA基因〕以多拷贝形式存在。 ③整个染色体DＮA几乎全部由功能基因与调控序列所组成; ④几乎每个基因序列都与它所编码得蛋白质序列呈线性对应状态 １、试述基因克隆载体进化过程. ①pSC10１质粒载体,第一个基因克隆载体 ②CｏlE1质粒载体,松弛型复制控制得多拷贝质粒 ③pBR32２质粒载体，具有较小得分子量(４３6３bp)。能携带6-8ｋb得外源DNＡ片段，操作较为便利 ④pUＣ质粒载体，具有更小得分子量与更高得拷贝数 ⑤ｐGEM-３Z质粒，编码有一个氨苄青霉素抗性基因与一个lacZ’基因 ⑥穿梭质粒载体,由人工构建得具有原核与真核两种不同复制起点与选择标记，可在不同得寄主细胞内存活与复制得质粒载体 ⑦pBlueｓｃriｐt噬菌粒载体,一类从pUC载体派生而来得噬菌粒载体 2、试述PCR扩增得原理与步骤。对比DNA体内复制得差异. 原理：首先将双链DＮＡ分子在临近沸点得温度下加热分离成两条单链DNＡ分子，DNＡ聚合酶以单链DNA为模板并利用反应混合物中得四种脱氧核苷三磷酸、合适得Mg2+浓度与实验中提供得引物序列合成新生得ＤNA分子. 步骤:①将含有待扩增ＤNＡ样品得反应混合物放置在高温（〉94℃)环境下加热1分钟，使双链ＤNＡ变性,形成单链模板DNＡ ②降低反应温度(退火,约50℃)，约１分钟,使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA结 合在靶DNＡ区段两端得互补序列位置上 ③将反应混合物得温度上升到72℃左右保温1-数分钟，在ＤNA聚合酶得作用下，从 引物得3'-端加入脱氧核苷三磷酸,并沿着模板分子按5’→3'方向延伸，合成新生DN Ａ互补链 与体内复制得差别：①PＣR不产生冈崎片段②在高温条件下反应，不需要ＤＮA解旋酶③PCR可经过多个循环④在体外进行，可调控 第六章 1、基因敲除 原理：又称基因打靶，通过外源ＤＮＡ与染色体DNA之间得同源重组，进行精确得定点修饰与基因改造,具有专一性强、染色体DＮA可与目得片段共同稳定遗传等特点 方法：高等动物基因敲除技术,植物基因敲除技术 ２、完全基因敲除与条件型基因敲除 完全基因敲除就是指通过同源重组法完全消除细胞或者动植物个体中得靶基因活性,条件型基因敲除就是指通过定位重组系统实现特定时间与空间得基因敲除 3、基因定点突变 原理:通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码得氨基酸序列，用于研究某个（些）氨基酸残基对蛋白质得结构、催化活性以及结合配体能力得影响，也可用于改造DNA 调控元件特征序列、修饰表达载体、引入新得酶切位点等