培养基
MS培养基 (Sigma公司)
B5培养基 (pH 5.5)
Content mg/L Content mg/L Content mg/L
KNO3 2500
ZnSO47H2O 2.0
Nicoti nic
1
CaCl22H2O 150 H3BO3 3.0 Thiami ne HCl 10 MgSO47H2O 250 KI 0.75 Pyri ndox ine 1 NaH2PO4'H2O 150 Na2MoO42H2O 0.25 m-I no sitol 100 FeSC47H2O 27.8 CoCl26H2O 0.025 Glyci ne 200 MnSO4H2O 10 Na2EDTA 37.3 Ki netin 0.1 CuSO45H2O 0.025 IAA 0.1-1
改良的1/4 Hoagland 培养液(mM, pH6.0):
Content mM Content mM
KNO3 1.25
Zn SO40.002
Ca(NO3)2 1.50 H3BO3 0.050
MgSO40.75 KCl 0.050
KH2PO4 0.5 (NH4)6Mo7°24 0.075
FeSq
0.072 CuSO40.0015
Na2EDTA 0.072 Na2SiO30.1
2植物材料的常规种植
拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌
o
发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。置于23 C，16/8 h的光照培养间中生长。
3拟南芥种子的表面灭菌处理
1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天
2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟
3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。
4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。
5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。
6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。
7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。
4植物材料的水培体系
拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/ 皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。
水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagla nd培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。塑料膜覆盖，2-3天后揭去。整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换
一次培养液。
5拟南芥T-DNAS入突变体的筛选方法
到网站输入salk号设计引物LP、RP
T-DNA LB : LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACT
LBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG
用于PCR扩增。采用双引物法，分别用LP + RP, BP+ RP扩增基因组DNA
方法:
1）将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。
2） DNA提取缓冲液的配制：
Genome\ /Flankira SaaiifincfiL
Pa
N
pZme Exl5Ext3pZcne
EPa
w
3）剪取一片叶于1.5 ml Eppendof管中，液氮充分研磨。
4）加40 I提取缓冲液，涡旋充分混匀。
5） 95C中水浴20分钟，间或混匀几次。
6） 12,000 rpm 离心15 分钟。
7）吸取上清于一新的Eppendof管，取10 I稀释50倍。然后取稀释后的DNA 用于PCR扩增。
PCR扩增体系为（25 l体系）：
PCR反应程序:
农杆菌侵染拟南芥花序的转化方法 制备转化用的农杆菌菌液 准备： 1．灭菌试管 400毫升细长烧杯2瓶，离心瓶4-6个（250ml）。 2．试剂：YEP 1200ml（每瓶300ml 共4瓶）+Kan 1;1000，Rif1:500。 1/2MS+2%蔗糖（灭菌115度20分钟），Silwet在-20℃贮存。 3．步骤： 共转化农杆菌：于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当菌液达到OD600为1.5~3.0之内时，可收集菌体于250ml离心瓶（灭菌）,4℃，4000g 离心10min 。用10%蔗糖（含0.02%silwet）稀释至OD600 约为0.8-- 1.0左右即，用10%蔗糖作对照。转化时将花在溶液中浸泡50s左右，于弱光下生长。 4．浇水：转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。 （注意：选取上述配好的溶液2ml，充分打碎管底部的菌体，在将混匀的菌体溶入600ml溶液中，混匀后再加入Silwet(100%)120ul终浓度为0.02%）。 2．先将浇透水用于转化的苗子的夹全部剪掉，再用宽胶带把花盆的土封好。3．转化的准备工作：2个400细长烧杯，宽胶带，记号笔，表等。 4．转化过程略，视苗的长势弱 0.8 Pa 3`，长势好的0.8 Pa 5`。 5．标记好，将转化好的苗平放于盒子内，上盖封口膜封好，避光培养24hrs 2天后，将植株立起正常培养，浇水，3天1次。 花序浸泡(flower-dipping)法转化拟南芥
野外试验方案-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
试验方案 一、试验目的 近年来，有关利用合理的水稻种植模式，尤其是水稻品种间栽或混作来增加稻田的生物多样性，从而控制水稻病虫害的研究报道不断增多，这方面的研究已成为国内外的一个热点，本次实验就是为了探究增加稻田生物多样性对害虫飞虱的影响，通过观察稻田生物多样性对飞虱繁殖力、抗药性、致害型、天敌数量、对水稻病虫害的等影响，从而去研究其中的相关影响机制。以期能减少化学农药的施用，减少环境污染，更好地去发展生态农业。 二、试验材料 由广东田联种业有限公司提供水稻种子，选取以下两种： 植优523：感温型三系杂交稻组合。早造平均全生育期130～132天。科高～106.3厘米，株型中散，分蘖力中强，穗大粒多。中抗稻瘟病，全群抗性频率%～%，对中B群、中C群的抗性频率分别为%～75%和85%～%；中抗白叶枯病（IV型菌3级、V型菌7级）。丰产性较好，中抗稻瘟病和白叶枯病，耐寒性中弱。 特优816：感温型三系杂交稻组合。早造平均全生育期131～132天。科高～115.6厘米，植株较高，株型中集，分蘖力和抗倒力中弱，剑叶较宽、长，穗大粒多，后期熟色好。高抗稻瘟病，全群抗性频率%，对中C群、中B群的抗性频率分别为%和%，田间监测结果表现抗叶瘟、高抗穗瘟；感白叶枯病，对C4菌群、C5菌群分别表现感和中感。 田间均无抗飞虱抗性表现。 三、试验设计 试验设三个处理，分别为A：单作植优523、B：单作特优816、混作植优523和特优816，其比例A：B=5：1设三次重复，每小区面积200 m2，总面积大概3亩左右。如下图所示
培养基 MS培养基 (Sigma公司) B5培养基 (pH 5.5) Content mg/L Content mg/L Content mg/L KNO3 2500 ZnSO47H2O 2.0 Nicoti nic 1 CaCl22H2O 150 H3BO3 3.0 Thiami ne HCl 10 MgSO47H2O 250 KI 0.75 Pyri ndox ine 1 NaH2PO4'H2O 150 Na2MoO42H2O 0.25 m-I no sitol 100 FeSC47H2O 27.8 CoCl26H2O 0.025 Glyci ne 200 MnSO4H2O 10 Na2EDTA 37.3 Ki netin 0.1 CuSO45H2O 0.025 IAA 0.1-1 改良的1/4 Hoagland 培养液(mM, pH6.0): Content mM Content mM KNO3 1.25 Zn SO40.002 Ca(NO3)2 1.50 H3BO3 0.050 MgSO40.75 KCl 0.050 KH2PO4 0.5 (NH4)6Mo7°24 0.075 FeSq 0.072 CuSO40.0015 Na2EDTA 0.072 Na2SiO30.1 2植物材料的常规种植 拟南芥种子均匀地播撒于1/3 B5液体培养基浸润的蛭石上，塑料膜遮盖至种子萌 o 发，揭开膜，让其自然生长，适当间苗，烤苗至蛭石表面干燥后加水。置于23 C，16/8 h的光照培养间中生长。 3拟南芥种子的表面灭菌处理 1）拟南芥种子在4 C下春化3-5天
2）在超净台上用70%酒精处理种子2-5分钟 3）弃去酒精，用无菌水洗1-2次。 4）将种子用15% Bleach （KAO公司）处理15分钟，间歇振荡。 5）用无菌水洗4-6次，每次充分振荡混匀。 6）将种子悬浮在灭菌的0.1% Agar中。 7）均匀地将种子播撒在B5培养基平皿中。 4植物材料的水培体系 拟南芥种子经表面灭菌处理后均匀播撒于1/2 MS固体培养基上，10-15粒/ 皿，生长2周后，小心地将其转入水培体系中。 水培体系是由培养皿及起支撑作用的锡箔纸组成。培养皿中盛适当的液体培养基（通常用上述改良的1/4 Hoagla nd培养液）；锡箔纸上留出相距适当的小洞后，盖于培养皿之上。将拟南芥幼苗的根小心地经由锡箔纸上的小洞浸入培养液中。塑料膜覆盖，2-3天后揭去。整个体系置于光照培养间中生长，每3-6天更换 一次培养液。 5拟南芥T-DNAS入突变体的筛选方法 到网站输入salk号设计引物LP、RP T-DNA LB : LBb1: GCGTGGACCGCTTGCTGCAACT LBa1: TGGTTCACGTAGTGGGCCATCG 用于PCR扩增。采用双引物法，分别用LP + RP, BP+ RP扩增基因组DNA 方法: 1）将拟南芥突变体种子播种于MS培养基平皿中，生长2周后，将其转入蛭石中，待长至抽苔期准备DNA的提取。 2） DNA提取缓冲液的配制： Genome\ /Flankira SaaiifincfiL Pa N pZme Exl5Ext3pZcne EPa w
年广西水稻品种实验实施方案 广西区种子管理局 广西农科院水稻研究所 一、实验目的 为了鉴定评价新选育的水稻品种(组合，下同)在我区的丰产性、稳产性、适应性、抗逆性、品质及其它重要特征特性表现，为我区品种审定、推荐参加全国南方区试等提供科学依据，根据《广西壮族自治区农作物品种管理实施办法》有关规定，特制定年广西水稻品种区域实验、生产实验和预备实验实施方案。 二、参试品种 （一）区域实验和生产实验 年开展早稻桂中、桂北早熟组(以金优和株两优为对照)、中熟组(以优和五丰优为对照)、桂南迟熟组(以特优为对照)、常规优质稻组(以柳沙油占为对照)；晚稻设桂中、桂北中熟组(以优和五丰优为对照)、桂中中迟熟组(以天优华占为对照)、桂南感光组(以博优为对照)；高寒山区一季中稻组(以中浙优号为对照)； （二）预备(筛选)实验 开展早稻桂中、桂北早熟组(以株两优为对照)、中熟组(以五丰优为对照)、桂南迟熟组(以特优为对照)；晚稻设桂中、桂北中迟熟组(以天优华占为对照)、桂南感光组(以博优为对照)、常规优质稻组(以柳沙油占为对照)； 各熟组参试品种安排详见附件表～、表～。附件上没有参试品种安排的，请不要寄种子，否则当废种处理。 实验方案在“广西种业信息网()”上公布，不再印发。 三、供试种子要求 年所有参试品种(包括对照品种)在实验过程中实行实验编号管理，要求供种单位统一把参试品种的种子提供给广西农科院水稻所，进行编号后再分发到各承试点(包括抗性鉴定点)。分组编号情况报广西区种子管理局备案，对实验点和供种单位一概保密。各实验点不需再重新编号，以免发生错误。 (一)供种量 区域实验公斤个，生产实验早稻中熟组、晚稻中熟组和中迟熟组公斤个，其它熟组公斤个，预备(筛选)实验公斤个。
拟南芥植物组织培养 WTD standardization office【WTD 5AB- WTDK 08- WTD 2C】
拟南芥组织培养 一、种子消毒： 方法一：将拟南芥种子置于1 .5 ml eppendorf 管(微量离心管)中，加入1 ml 蒸 馏水，4C春化3 d，70 %（v／v ）乙醇1mi n、7 %（v／v ）次氯酸钠10 mi n 浸泡消毒，并用无菌水冲洗5 次。 方法二：在超净工作台内，用无菌蒸馏水浸泡1 min，然后用80％乙醇消毒90s，最后用无菌蒸馏水冲洗3～5次备用。 消毒完毕的种子可以用200ul的tips吸去洗涤液，然后在超净工作台上挥发掉残余水分、洗涤液。 方法三、取野生型拟南芥种子放人离心管内，75％乙醇清洗后，无菌蒸馏水清洗1—2次，转入无菌离心管；5％次氯酸钠溶液浸泡5—6 min，用无菌蒸馏水清洗3～4次，加入1 ml无菌水，用移液枪接种。 二、选用的培养基 选用1/2MS培养基对种子进行培养。（MS和1/2MS都可以，1/2MS就是大量元素减半，其他东西和ms培养基是一样的量。糖可以加，会长得比较好，但是也很容易污染。如果在平板上要生长时间比较长，需要做一些实验的，比如根的发育，最好不要加。）也可以用MS+30 g／L蔗糖的固体培养基。（我想两种培养基都接种上，比作对比确定好坏）。 MS培养基配料表： 三：接种方法 拟南芥种子消毒后，用移液枪吸取拟南芥种子和水的混合物，均匀地在MS 生长培养基的培养皿平板上滴落，并使之形成两条平行的直线。（如不行，可适当添加琼
脂）。 四、培养得无菌苗 接种后置于光照培养箱(型号：GXZ．500C；培养光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度为22℃中竖直培养。3天后即可取材用于器官离体再生实验。萌发5天后，在超净工作台中，用镊子将苗移栽到装有1／2 MS培养基的50ml三角瓶中（每瓶4--6棵，视情况而定），于短日照条件下培养30天左右获得无菌苗。（短日照光照条件8小时光照，16小时黑暗，长日照光照条件为16小时光照，8小时黑暗，培养温度均为22℃。）此处获得无菌苗的时间有异议，应该为2--3周？ 五、外植体的选取 B5 + 5 mg／L2 ，4-D+ 0 .5 mg／L KT 培养基上诱导愈伤组织,莲座叶作外植体出愈慢，出愈率低，愈伤组织质量较差；叶柄、下胚轴和根作外植体出愈快，且愈伤组织质量好，后期易分化。 由于叶柄、下胚轴相对较短，难于收集，为了便于操作，减少污染，试验中采用根作为外植体诱导愈伤组织和诱导分化试验。 所取外植体的大小为5mm左右，不宜过大或过小。 滴落种子形成的两条直线位于平皿的上半部，可以避免伸长的根被培养基中渗出的水分所淹。无菌苗的苗龄太短不易得到足够多的外植体，苗龄太长则外植体脱分化的时间明显延长，最适苗龄以2 --3 周为宜。 六、胚性和非胚性愈伤组织的诱导 1、以MS 为诱导培养基, 附加2, 4一D 2mg/L,KT、NAA各L,水解酪蛋白300mg/L，6%蔗糖，琼脂， 2、接种幼穗长度为1--2cm 左右, 置于2 8 ℃恒温箱内暗培养。
拟南芥种植方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
培养基上点种子： 1.种子处理 1.1 种子消毒处理 在培养基中点样前，必须对种子进行消毒，防止感菌，具体方法为：先将种子倒在干净的纸上，挑去大的杂质，再将种子倒入EP管中，加入1mL70%酒精，振荡10min，将种子放在超净台中吹干。 1.2 点样 将消毒处理后的种子，可以利用牙签点到培养基上，每次仅点一粒种子，根据培养皿的大小，确定一个里面能够点多少个种子，每个90mm培养皿上大约种30粒种子，防止植株长大后影响根与子叶的发育。 1.3 春化 种子点样完毕后，将培养基密封，置于4℃冰箱里放置72h后，放回温室。 土培法： 1.种种子前，要将营养土用自来水混匀后，121℃灭菌30min，待土冷却后，装入种植拟南芥的方盒中，再将方盒放入红色托盘中。 2.将要点的种子平铺在称量纸上，用牙签蘸取一粒种子点在营养土上,每点一个小盒时都用牙签做标记，以免遗种某个盒子。（每个小盒子种5粒种子，每个大方盒子种9粒种子） 3.将点了拟南芥种子的托盘置于22℃温室，并用一个干净的托盘盖在上面，大约两天后
就可以打开上面的托盘，待植物长出4片叶子时，可以根据自己的实验需求对植物的幼苗进行取舍。 4.植株生长条件的控制 幼苗移植后将花盆置于温室内，保证温室温度恒定在22℃，空气湿度70—80%，光照强度100—150μmol/m2/s，每天浇两次纯净水，上午9点左右一次，下午5点左右一次；一周浇一次营养液（1平匙溶于1L水中），营养液要灌在盆底。 浇水注意事项： 1）水不可以浇的过多或过少，用手捏起一些土能挤出水来说明就有点太湿； 2）水要浇均匀，托盘四个角的方向如果喷壶喷不到，可以用挤瓶均匀地喷一些水； 3）用喷壶浇水时，喷壶的水柱不可以太大，以免把植物连根拔起； 4）当植株出现花芽时，一定要保证水分的供应，促进果实的发育。当植株结有豆荚时，可以适当的减少供水量，每两三天浇一次水便可，以利于种子的成熟。开花后的植物不能再用喷壶浇水，要从盆底灌水，但不可以一次性灌太多水； 5）在盆底灌水后，待植物吸收完水后，可以将盆底多余的水分倒出来； 6）拟南芥受到胁迫判断标准：叶柄发紫，叶片发黄，开花期提前等； 7）如果做生理实验，植物一旦受到胁迫，需要把植物丢弃，重新种植，以免实验数据不准确。 注：温室202光照时间：9:00—19:00为短日照，有利于营养生长
一个水培还有就是土培 水培就是放在水里让他们发芽的土培就是种在土里保持土层湿润就好了 种子播在准备好的秧田上，当苗龄为20～25天时移植到周围有堤的水深为5～10公分(2～4吋)的稻田内，在生长季节一直浸在水中。 耕种方式 稻米的种植技术，包括稻田和插秧，是在中国发明的。传说中是神农氏教导人们如何种稻。 目前稻的耕种除传统的人工耕种方式，亦有高度机械化的耕种方式。但仍不失下列步骤： 整地： 种稻之前，必须先将稻田的土壤翻过，使其松软，这个过程分为粗耕、细耕和盖平三个期间。过去使用兽力和犁具，主要是水牛来整地犁田，但现在多用机器整地了。 育苗： 农民先在某块田中培育秧苗，此田往往会被称为秧田，在撒下稻种后，农人多半会在土上洒一层稻壳灰；现代则多由专门的育苗中心使用育苗箱来使稻苗成长，好的稻苗是稻作成功的关键。在秧苗长高约八公分时，就可以进行插秧了。 插秧： 将秧苗仔细的插进稻田中，间格有序。传统的插秧法会使用秧绳、秧标或插秧轮，来在稻田中做记号。手工插秧时，会在左手的大拇指上戴分秧器，帮助农人将秧苗分出，并插进土里。插秧的气候相当重要，如大雨则会将秧苗打坏。现代多有插秧机插秧，但在土地起伏大，形状不是方型的稻田中，还是需要人工插秧。秧苗一般会呈南北走向。还有更为便利的抛秧。 除草除虫： 秧苗成长的时候，得时时照顾，并拔除杂草、有时也需用农药来除掉害虫（如福寿螺）。 施肥： 秧苗在抽高，长出第一节稻茎的时候称为分蘖期，这段期间往往需要施肥，让稻苗成长的健壮，并促进日后结穗米质的饱满和数量。 灌排水： 水稻比较倚赖这个程序，旱稻的话是旱田，灌排水的过程较不一样，但是一般都需在插秧后，幼穗形成时，还有抽穗开花期加强水份灌溉。 收成： 当稻穗垂下，金黄饱满时，就可以开始收成，过去是农民一束一束，用镰刀割下，再扎起，利用打谷机使稻穗分离，现代则有收割机，将稻穗卷入后，直接将稻穗与稻茎分离出来，一粒一粒的稻穗就成为稻谷。 干燥、删选： 收成的稻谷需要干燥，过去多在三合院的前院晒谷，需时时翻动，让稻谷干燥。删选则是将瘪谷等杂质删掉，用电动分谷机、风车或手工抖动分谷，利用风力将饱满有重量的稻谷自动筛选出来。
模式植物拟南芥 个体特征 拟南芥英文名Thale Cress拉丁名Arabidopsis thaliaba,又名鼠耳芥，阿拉伯芥，阿拉伯草。是一种细长而直立的植物，羽状多叶，茎高度达40厘米。二年生草本，基生叶有柄呈莲座状，叶片倒卵形或匙形；茎生叶无柄，披针形或线形。总状花序顶生，花瓣4片，直径约3毫米，白色，匙形，雄蕊6枚，花药黄色，雌蕊圆柱状，花柱短，柱头凹陷；花期3～5月。 拟南芥是在植物科学，包括遗传学和植物发育研究中的模式生物之一。其在植物学中所扮演的角色正仿佛小白鼠在医学和果蝇在遗传学中的一样，其原因主要基于该植物具有以下特点： ●植株形态个体小，高度只有30cm左右，1个茶杯可种植好几棵； ●生长周期快，每代时间短，从播种到收获种子一般只需6周左右； ●种子多，每株每代可产生数千粒种子； ●形态特征简单，生命力强，用普通培养基就可作人工培养； ●基因与大多数植物基因具有很高的同源性，能代表大多数的特点。 ●拟南芥的基因组是目前已知植物基因组中最小的。每个单倍染色体组（n=5） 的总长只有7000万个碱基对，即只有小麦染色体组长的1/80，这就使克隆 它的有关基因相对说来比较容易。 ●拟南芥是自花受粉植物，基因高度纯合，用理化因素处理突变率很高，容易 获得各种代谢功能的缺陷型。例如用含杀草剂的培养基来筛选，一般获得 抗杀草剂的突变率是1/100000。 由于有上述这些优点，所以阿拉伯芥是进行遗传学研究的好材料，被科学家誉为“植物中的果蝇”。[ 在植物形态建成研究中，经典的例子是花发育的ABC模型。在结构上，拟南芥的花与大多数开花植物相似，由四轮基本的花器官组成：从外向里分别为花萼、花瓣、雄蕊及雌蕊。ABC模型中的A、B、C分别指的是控制不同花器官发育的三大类基因，其中A类基因决定了花萼的特征；A类+B类基因共同作用决定了花瓣特征；B类+C类基因共同作用决定了雄蕊特征；C类基因单独作用决定了雌蕊心皮的特征，同时也终止花器官在第四轮形成之后继续分化(A)。在野生型花器官中，这三类基因的表达产物大体按照它们所各自决定的花器官位置，分布于相应的区域。当其中某个基因发生突变之后，它所控制的区域则会发育出其他类型的花器官。A、B、C三大类基因都编码转录因子，在花原基的发育过程中会由外到
溶液配制 1、纤维素酶解液：
2、PEG4000溶液（一次配置可以保存五天，但是最好现用现配，每个样品需100μl PEG4000溶液，可根据实验样品量调整溶液配置总量）
3、W5 溶液 4、MM G溶液
5、WI溶液 拟南芥原生质体制备转化方法整理 一、土培室播种种植的拟南芥。 二、生长良好情况下在未开花前用于取材叶片制备原生质体。 三、剪取中部生长良好的叶片用刀片切成0.5 -1 mm宽的叶条。 四、将切好叶条掷入预先配置好的酶解液中（每5-10 ml酶解液大约需10-20片叶子）。并用镊子帮助使叶子完全浸入酶解液。
五、用真空泵于黑暗中抽30分钟。（此时可配制PEG4000溶液，200和1000 ul 枪头去尖使操作时吸打缓和。） 六、在室温中无须摇动继续黑暗条件下酶解至少3个小时。当酶解液变绿时轻轻摇晃培养皿促使原生质体释放出来。（此时预冷一定量W5溶液） 七、显微镜下检查溶液中的原生质体，拟南芥叶肉原生质体大小大约30-50 um。 八、在过滤除去未溶解的叶片前用等量的W5溶液稀释含有原生质体的酶液。 九、先用W5溶液润湿35-75 um的尼龙膜或60-100目筛子，然后用它过滤含有原生质体的酶解液。 十、用30毫升的圆底离心管100g，1-2分钟离心沉淀原生质体。尽量去除上清然后用10ml 冰上预冷的W5溶液轻柔重悬原生质体。 十一、在冰上静至原生质体30分钟。 以下操作在室温23℃下进行
十二、100g离心八至十分钟使原生质体沉淀在管底。在不碰触原生质体沉淀的情况下尽量去除W5溶液。然后用适量MMG溶液（1m）重悬原生质体，使之最终浓度在2X105个/ml。 十三、加入10 ul DNA（10-20微克约5-10kb的质粒DNA）至2ml离心管中。 十四、加入100 ul原生质体（2x104个），轻柔混合。 十五、加入110 ul PEG溶液，轻柔拍打离心管完全混合（每次大约可以转化6-10个样品）。 十六、诱导转化混合物5-15分钟（转化时间视实验情况而定，要表达量更高也许需要更高转化时间）。 十七、室温下用400-440 ul W5溶液稀释转化混合液，然后轻柔颠倒摇动离心管使之混合完好以终止转化反应。 十八、室温下用台式离心机100g离心2分钟然后去除上清。再加入1ml W5溶液悬浮清洗一次，100g离心两分钟去上清。
2019年鉴别水稻种子优劣的方法有何些篇一：水稻种子的正确选种方法 水稻种子的选种方法 种子质量是决定水稻质量的重要因素，关系到农业生产的安全。 在选种时，了解需要掌握的事项，能为水稻安全生产提供保障。 1.坚持品种选定原则 根据《中华人民共和国种子法》第十七条规定，未经审定的品种 任何单位和个人不得宣传、销售和推广。凡政府允许大面积推广的品种，必须是由国家或省级农作物品种审定委员会审定通过的水稻品种。不要购买未经审定而先行推广的品种，而且最好不要选择那些没有大面积普及的品种。谨慎购买新品种，遇到从来没有种植过的新品种，要向经营者询问该品种是否通过引种测试，其结果如何，最好不要盲目购买。 2.选择具有合法资格的种子供应商 不要在无证经营的门店、街头巷尾摆摊及走街串巷叫卖的种子商 贩手里购买种子，避免买到假冒、伪劣和陈年的种子。应该选择经营
证照齐全、具有合法资格的种子供应商。购种时注意要供应商开具有效发票（或种子质量信用卡），并妥善保管购种发票和种子包装袋，以备种子出问题时有据可查。 3.确保其品种特性和所种植区域自然条件相吻合 选择的品种要和自身的用种目的、栽培条件相匹配。不同品种的抗逆性、丰产性、成熟期、商品性等各不相同；不同使用者的用种目的、栽培条件、肥力条件、上下茬口安排、管理水平等也不尽相同。所以，在选种时，要根据自身条件和用种目的，结合品种的特征属性，有目的地选择品种。 4.善于分析种子的标签等信息 购种时要选择正规包装正规生产单位生产的原包装种子，包装物上印有醒目图案及文字说明，有的还有防伪标志。要注意查看稻种说明书或品种简介，内容包含适宜种植地域、特征特性、栽培措施等。还要注意查看包装是否规范，如所装数量、质量指标、生产商、经营许可证号码、产地及联系电话等明确标识。同时要注意查看种子包装袋上标注的种子生产日期，隔年生产的陈年种子不要买，没有注明生产日期的种子也不要买。诚邻粮食选用优质种子公司提供的高品质品种，比如稻花香2号选用的是稻花香之父“田永太”培育的种子，确
拟南芥培养Protocol 拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2(6支36W日光灯下35cm处测得)。幼苗期不耐高光强,可适当遮荫.光质也较重要,应选用植物生长专用的日光灯(如荷兰产TLD型Philip豪华直管荧光灯).拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳 1.准备发苗培养基:1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿. 2.种子消毒:种子放在1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸). 3.播种:用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了,密封盖子,4℃暗处理两天后,移到光照培养箱(22℃,光周期12h),若种子较密,则在光照培养箱中生长1周后即可移苗,否则根长太长后易缠在一起,但太小的苗移栽后,需适当遮荫.最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗:将蛭石与珍珠岩按(3:1)的比例混好,装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根拉出小苗,把根平放在蛭石表面,用镊子把根轻轻压下.移苗结束后,用保鲜膜覆盖3-4天后揭膜.从苗期直至开花,可在塑料周转框中始终保持1-3cm的水层,在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔2-3天浇一次水即可.整个生长期可浇3-4次拟南芥营养液. 5.收籽:在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中.
拟南芥转化—浸花法 实验步骤： 关键记录： a浸染的最好阶段是一个花盆里有20-30个花絮以及一些成熟的果夹，这些果夹浸染之前需要剪掉。 b/颠倒植株将植株浸入农杆菌细胞悬浮液10s。 c.塑料膜包裹保持黑暗高湿度16-24h。一周后可再次侵入农杆菌细胞悬浮液浸染。
d.移去塑料膜，让植株在温室中生长一个月。 e.干燥成熟的果夹用小袋套住。 f.筛选主要转基因植株在筛选培养基上。
说明： 如果转化实验要延迟或者构建没有准备好又或者想要植株有很多的花序，可以剪掉植株第一次的抽苔，使其长出更多的分支和花序，在剪去第一个抽苔的6-8天后，开始农杆菌悬浮液浸染。 如果希望增强营养来支持转化的细胞，同时又减少野生型种子（即增加转化效率）以及减少筛选主要转基因植株期间真菌病害。去掉用于转化植株上的果夹。 具体步骤： 1.已转化的农杆菌在含抗生素筛选培养基上长出单克隆，对鉴定后确定转化成功的单克隆于5ml液体YEP培养基（含抗生素）28℃活化培养16h。 2.取适量（1:50）活化培养的菌液于50ml液体YEP培养基（含抗生素）中28℃扩大培养6h。 注意：在此要鉴定是否为正确的转化农杆菌，酶切、PCR均可。确认后，为了下次转化浸染，可以在这一步将农杆菌甘油管-70℃保存或者将菌液密封保存于4℃,高达1个月。 3.将20ml农杆菌细胞悬浮液于4000g、10min室温离心，加入1倍体积的10mM MgCl2,5%蔗糖溶液（即100ml H2O中加MgCl2·6H2O 0.202g，蔗糖 5g）。 浸染前加表面活性剂使其终浓度为0.02%（20ml加4uL）。混匀，转移至50ml离心管。 注意：表面活性剂浓度过高有毒害。为了产生含两种独立载体的转化植株，我们要用两种农杆菌细胞，各含有一种载体，分别加入30mL 10mM MgCl2,5%蔗糖溶液，浸染前加入适量表面活性剂，将它们混合在一个大烧杯里。在双转化试验中我们至少要用48株植株。间隔7天进行第二次浸染植株。 小心：戴手套及口罩防止表面活性剂的毒害。 4.浸染时将农杆菌悬浮液倒满50mL离心管的小盖子，将拟南芥横放使花序浸入小盖子中的悬浮液10s，轻微晃动小盖，20ml农杆菌悬浮液至少有效用于转化30株拟南芥， 150个花序以上，这一步骤要保证能在植株上看到菌液。 注意：确定所有花盆都已浸染，有时很有必要浸染整个植株确保浸染更短更多的花芽。将过多的农杆菌液移除也很重要。否则长时间
拟南芥的基础探索 生科二班 李俊龙 20131678 一、拟南芥属的种类及分布 拟南芥属拥有众多种类，包括拟南芥、大夏拟南芥、短茎拟南芥、毛果拟南芥、柔拟南芥、直立拟南芥、西藏拟南芥等等。 这里就不介绍世界范围拟南芥属的分布了，下图标出了中国国内拟南芥属的分布[1]。 二、拟南芥的形态 拟南芥Arabidopsis （L.） Heynh ，拟南芥属，十字花科，白花菜目。双子叶植株，叶片互生，总状花序，花萼、花瓣各4片，雄蕊6枚，4长2短，子房 有两层心皮，中间是假隔膜，高度只有3Ocm 左右[2]。 拟南芥 拟南芥花样 拟南芥果实
三、拟南芥的培育 拟南芥生长的适宜温度白天为22℃-24℃,夜温最好比日温低2℃,适宜的湿度为60-70%,生长期适宜的光强为150μmol·s-1·m-2.拟南芥在日照长于12小时下才会开花,一般拟南芥生长室的日照长度定于14-16h为佳。 1．准备发苗培养基: 1/2 MS,Sucrose:10g/L,pH5.7,agar:0.7-0.8%.灭菌后,在超净台上分装入培养皿. 2．种子消毒有两种方法： 一种是湿法NaClO水溶液消毒:种子放在 1.5ml试管中, 加入1ml10%NaClo,混匀,消毒5min,用无菌水洗5次以上(用移液枪吸)，湿法消毒后的种子要马上播；另一种是干法8%NaClO 酒精溶液，此时需用95%的酒精来配制8%NaClO 酒精溶液。在8%NaClO 酒精溶液中消毒6-8min。然后用无水酒精洗种子5次以上，吸干无水酒精后，在超净工作台上吹干透后再密闭保存。 3．播种： 对湿法NaClO水溶液消毒种子用移液枪将种子吸到培养皿上,可多加些水,将种子铺均匀(不要太密,太密根缠在一起不好移苗),用移液枪吸干水,在超净台上让培养皿干了；对干法消毒的种子，用无菌牙签将种子点播到培养基上。用Parafilm密封盖子后,请用牙签或镊子在上下两处各打4个小孔以通气。最好是在每皿<30株这样的密度下,让其生长两周后再移苗. 4.移苗及后续管理: 如果培养基质用花泥，将花泥装入花盆,将花盆放入有水的塑料周转框中,框中的水就会通过花盆底部的孔渗上来,待花盆中的基质湿透后即可移苗.小心轻轻用镊子从培养皿中连根取出小苗,把苗种入花泥中.移苗结束后,用保鲜膜覆盖1-2天后揭膜，如果苗很弱，则在此基础上还需多覆盖1天.在花泥中种植时，苗期不需要添加营养液，开始抽苔时请及时添加营养液，一般需要添加2次，每次加入1升拟南芥营养液，2次添加最好间隔一段生长时期（7-10天），由于花泥有较好的吸附缓释能力，对间隔时间长短没有严格要求。如果盆栽密度较大或框中花盆数量较多则需要多加一次营养液。对于花泥种植来说，不要在塑料周转框中始终保持水层,一次吸足水分后，可以隔4-6天后再加水让其吸足水分，在开始收籽期,不再需要过多的水分,可保持塑料周转框干燥,此时每隔7-10天加一次水即可. 5．收籽: 在种荚变黄,变干时可以收籽.将种子抖落在纸上,用金属滤网过一下以除去杂质,将种子装入写了标记的小纸袋中,放于干燥的环境中让种子进一步干燥后,封存于1.5ml试管中，切记越干越好，长期保存的种子必需要干燥保存到4℃[3]。 拟南芥作为一种模式植物，它的研究将会对植物界乃至生物界都将产生很大程度的影响。 参考文献 [1]《石河子大学学报（自然科学版）》2001期02版王绍明李学禹 [2]《拟南芥》2004.6 曹仪植 [3]《植物学通报》2004年02期李俊华张艳春徐云远种康王辉
HANDLING ARABIDOPSIS PLANTS AND SEEDS Methods used by the Arabidopsis Biological Resource Center GROWTH OF PLANTS Growth of plants in sterile conditions Growth of plants on soil ?Planting on soil ?Growth conditions ?Control of pests ?Plant isolation and harvesting SEED HANDLING AND PRESERVATION Threshing Seed drying Seed moisture content determination Seed packaging for storage Seed storage and preservation Seed viability The methods used by the ABRC for handling plants and seeds are outlined below. These procedures are designed to generate healthy plants that give maximum set of pure seeds and to preserve these in the safest and most convenient manner. Many other approaches may be equally as good, especially in specific experimental situations. GROWTH OF PLANTS Arabidopsis can be grown in a variety of environmental settings including growth rooms, window ledges, outdoors, growth chambers and greenhouses. Peat moss-based mixes, commercial greenhouse mixes, relatively inert media watered with nutrient solutions, and defined agar media can all be employed as plant substrates. Our focus will be on growth of plants on agar and soil in growth chambers and greenhouses. The plant and seed management methods are discussed in the chronological order in which they would normally be utilized. Growth of plants in sterile conditions It is necessary to use sterile conditions to grow Arabidopsis for specific experiments such as selection of transformed plants, drug resistant plants, early root and shoot phenotypes, lethal mutants, etc. Otherwise, contaminants can essentially take over plant cultures. Various shapes and sizes of containers such as petri dishes, 'Magenta' boxes, or culture tubes can be used, depending on the required length of the growing time (2-3 weeks or to maturation) and characterization of phenotypes (shoot or roots). We will emphasize the
拟南芥原生质体的提取和转化 (1)取4周后抽薹前的叶片，切成1mm宽的长条，置于甘露醇溶液（称1.82g D-甘露醇于 20ml双蒸水中）；共需叶片约90片； (2)将步骤1中细条捞出，置于酶解液中；避光，23℃,40-50rpm摇床上酶解3小时； (3)酶解液过100-200目的筛子，收集滤液，置于15ml离心管中，均分为两管；于4℃， 60g，离心15min； (4)原生质体用冰冷W5溶液轻柔洗涤，每管4ml；4℃，100g，离心1min； (5)弃上清，沉淀用冰冷的W5溶液轻柔悬浮，每管4ml；冰上放置30min； (6)23℃，100 g离心1min；弃上清，每管沉淀用0.5ml MaMg重悬； 以下操作均在23℃下进行： (7)取约10-20ug 质粒于1.5ml EP管中，加100ul 步骤6中的原生质体；用200ul 枪头（剪 去前端）轻柔混匀； (8)加入110ul PEG/Ca 溶液，轻柔混匀；放置20-30min； (9)加入0.44ml W5 溶液，来回颠倒混匀；23℃，100 g，1min，brake 设为4-5； (10)弃上清，加100ul W5，混匀；加900ul W5，混匀； (11)上述混合液体置于六孔板内，23℃，避光，孵育6-18小时。 (1)酶解液： cellulose R10 15% Macerozyme R10 0.3% Mannitol 1.09g KCl 0.3M MES 0.3M 调节pH值到5.7，55℃加热10min，冷却到室温再加入下列溶液 CaCl20.15M β-巯基乙醇0.75mM (2)PEG溶液（40%，v/v） PEG4000 1g 0.8M Mannitol 0.625ml 1M CaCl2 0.25m (3)W5溶液
不同浇水频率对拟南芥生长的影响
作 学
者：罗玉玲 号：20102501014
专业班级：生物科学 10 生物科学 4 班 课程名称：植物生理学实验 指导老师：叶庆生、黄胜琴、冷佳奕 实验时间：2012-12-6 至 2013-1-10
不同浇水频率对拟南芥生长的影响
罗玉玲
(华南师范大学 生命科学学院 生物科学 10 科学四班 广州天河 510631) 摘要：本实验主要探究三个不同浇水频率对拟南芥生长的影响，实验结果表明：处理一、二即分别隔 2 天、4 天浇水一 次，拟南芥生长良好，植株根系发达，茎秆硬直，叶鲜绿、大，含水量高，脯氨酸含量在正常范围之内，无干旱胁迫. 处理三即隔 6 天浇水一次，植株生长明显受到抑制，根系极其不发达，叶片软、薄，含水量少，脯氨酸含量超出正常水 平 3 倍，受到严重胁迫.由此知隔 2~4 天浇水一次有利于拟南芥生长，隔 6 天浇水一次则严重影响拟南芥的生长. 关键词：拟南芥，脯氨酸，浇水，干旱
The influence of different watering frequency to Arabidopsis’s growth
Luo Yu-Ling (South China Normal University college of life science Guangdong Guangzhou 510631)
Abstract: This study explores the influence of three different watering frequency to Arabidopsis’s growth, and the experimental results show that processing one and two namely every 2 days or 4 days watering once, Arabidopsis growth is good. The plant root system developed, stalks hard straight, green, big, high water content and the Proline content in the normal range, no drought stress. Processing three namely every 6 days a water, plant growth obvious is restrained, the root underdeveloped, blade soft, thin, water content, and the Proline content less than normal level 3 times, serious stress. We know every 2 ~ 4 day watering a conducive to Arabidopsis growth, and every 6 days watering is seriously affect the growth of Arabidopsis thaliana. Key words: Arabidopsis thaliana; Proline; watering; drought 水是生命之源，是一切生物赖以生存的基础。植物的一切正常活动也只有在含有一定量水分的条件下 才能进行， 否则就会受到阻碍， 甚至死亡.陆生植物主要由根部吸收水分， 然后通过地上部分 （尤其是叶片） 的蒸腾作用散失水分，以保持稳态，而叶与根系之间的水势梯度是植物从土壤中吸取水分的动力，当土壤 水势小于叶片水势时，植物便不能从土壤中获得水分，从而影响生长，因此控制植物生长环境中土壤的湿 [1-4] 度很重要 . 拟南芥是十字花科拟南芥属植物，近年来拟南芥以其个体小、生长周期短以及基因组小等特点而成为 分子遗传学研究的模式植物.拟南芥的另一个优点是容易被诱发，目前已经从拟南芥中分离出几千种突变 体，这些突变的获得为揭示植物生长规律起了非常重要的作用 . 然而，水分供给对拟南芥的光合作用影 响很大，影响植物有机物的积累，植株的生长。而当受到干旱胁迫时，植物体内脯氨酸的含量会显著增加。 植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，因此可以测定脯氨酸含量作为抗旱育种的生理指 标
[6-8] [5]
.根据以上分析，我们设计了本实验，主要想通过观察不同浇水频率下拟南芥的形态以及测定植物体
内的一些生理生化值（含水量、叶面积、叶绿素含量、根长、株高、脯氨酸含量等）来确定最佳的浇水周 期，从而制定出合理的供水方案。
1.
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材料与方法
本科毕业论文(设计)文献综述 题目模式植物拟南芥的初步研究 姓名刘云慧学号062101033 专业生物工程 指导教师陈春丽职称副教授 中国·武汉 二○一○年五月
模式植物拟南芥的初步研究 摘要：拟南芥（Arabidopsis thaliana）属于十字花科(Brassicaceae)。由于其具有其他植物无法替代的特点，拟南芥是一种著名的研究有花植物的遗传、细胞、发育、分子生物学研究的模式植物。另外，拟南芥基因组是第一个经过完全测序的高等植物基因组,这就奠定了拟南芥研究的必要性和重要性。在过去的20年中，拟南芥作为模式植物广泛用于植物生命科学研究。 关键词：拟南芥；模式植物；基因组；研究 拟南芥(Arabidopsis thaliana)属十字花科，与白菜、油菜、甘蓝等经济作物同属一科。拟南芥本身并无明显的经济价值，但拟南芥的全基因组测序工作于2000年完成，是个其成为植物界第一个被完整测序的物种[1]，使得它越来越多地被作为一种模式生物加以研究。 拟南芥的研究历史 在自然界中，拟南芥主要分布于温带，一般生长在野外干燥的土壤中。历史上对拟南芥科学研究的记载最早可追溯至16世纪，由德国学者Thal在德国北部的哈茨山区中首次发现并记录了这个物种。19世纪分类学家Heynhold将其命名为Arabidopsis thaliana。现在人们在世界各地共收集到750多个拟南芥生态型，这些生态型在形态发育、生理反应方面存在很大差异。在拟南芥的众多生态型中最常用的三种是Landsberg erecta(Ler)、Columbia(Col)、Wassilewskija(Ws)。在1873年，Braun报道了他在柏林郊外发现的一种拟南芥突变体，这可能是拟南芥研究历史中所发表的最早一项在分类学之外的研究工作。Laibach在1907年首次报道的对拟南芥染色体的研究并最终确定了拟南芥具有5条染色体。Laibach于1943年详细阐述了拟南芥作为模式生物的优点，并在他之后的工作中大力推动了对拟南芥的研究。1986年，Meyerowitz实验室首次报道了对拟南芥中一个基因的克隆。同年，Horsch实验室报道了根癌农杆菌介导的T-DNA对拟南芥进行的遗传转化[2]。在之后的几年中，相继报道了T-DNA插入突变基因的克隆、基于基因组图谱的基因克隆。这些突破使人们逐渐认识到拟南芥作为实验材料对植物生命进行探索的价值。 1.拟南芥的特点 拟南芥作为一种模式植物,具有其它植物无法替代的优点:(1)生长周期短, 整个生长周期,从发芽、莲座叶的长成,到主花序的形成、第一粒种子的成熟可在6周内完成;(2)基因组小,125Mbp(水稻基因组430Mb,玉米基因组4500Mb),约25900个基因;(3)基因组仅有5条染色体,113亿个碱基对,其染色体数量是玉米的1/20;(4)具有双子叶植物的所有特性,整个生命周期同样经过细胞的分裂、生长发育、分化、衰老、死亡等一系列生物学现象;(5)有效的农杆菌介导转化途径,易获得大量的突变体和基因组资源;(6)在有限的空间内可大量种植，体形小,占地少，成熟植株一般15cm～20cm高,莲座叶长度不超过5cm；(7)收获大量的种子每株拟南芥可产生多达5000粒种子；(8)生活力强，用普通培养基就可作人工培养[3]。由于有上述这些优点，所以拟南芥是进行遗传学研究的好材料。