华中科技大学博士学位论文
中药二黄散对实验大鼠宫颈炎的治疗效果及药物
作用机制的探讨（附临床研究）
博士研究生：徐又先
导师：濮德敏教授
中文摘要
研究背景：慢性宫颈炎是妇女常见病、多发病，发病率高达60%以上，其中以宫颈糜烂最为常见。由于其与宫颈癌的发生密切相关，因而对该病的防治应引起足够的重视。
目前，临床对于宫颈糜烂的防治尚无安全有效的方法，其治疗仍以物理疗法为主，主要通过冷、热等各种物理手段(激光、冷冻、红外线及微波等)，将宫颈糜烂面单层柱状上皮破坏，使其坏死脱落后，为新生的复层鳞状上皮覆盖。物理疗法治疗宫颈糜烂的疗效是肯定的，但存在术后阴道长时间分泌物增多，甚至有大量水样排液及脱痂时出血，创面愈合时间长，且在创面尚未愈合期间(4～8周)需禁止性生活等缺点，许多患者不愿接受物理疗法。因此寻找一种能有效治疗宫颈糜烂，又能避免物理治疗的副反应，对于防止宫颈癌变具有非常积极的意义。
近年来的研究认为，炎症和创伤修复受多种细胞因子和生长因子的调节和影响，其中血小板活化因子（PAF）、前列腺素E（PGE2）和表皮生长因子（EGF）、血小板源性衍生生长因子（PDGF）是目前研究最多、最深入、应用最广泛的细胞因子。现代医学研究发现，PAF和PGE2在组织炎症反应中起着重要的作用，促使炎症的发生、发展，对组织的愈合起着不利的作用；而EGF和PDGF是体内一种正常微量的物质，在人体组织内分布极为广泛，起着调节细胞DNA合成、促进细胞分裂和刺激血管生成
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的作用，对受伤后组织的快速修复起着十分重要的作用。正常情况下，EGF、PDGF 含量很低，因而组织的自身修复是一个缓慢的过程。
国内外学者在应用中草药防治组织器官炎症的大量研究中发现黄连、雄黄等中药对金黄色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌等有较强的抗菌作用，对炎症介质的作用也得到了普遍认可。黄连水煎液提取物对组织的修复再生有很好的作用。临床上含有黄连或雄黄的中药复方治疗宫颈糜烂有较好的疗效，我们前期的临床工作也表明，中药二黄散对宫颈糜烂也有很好的治疗效果。但目前局部用中药治疗宫颈炎的研究仍停留在药物的临床研究上，对中药组方及其药理作用的研究尚未见报道。
本研究根据中医辨证施治理论，将黄连、雄黄等五味中药合理配伍，并按一定比例配方，制成了散剂，取名为“二黄散”。通过对动物实验、临床治疗效果评估，并运用病理形态学、分子免疫学、分子生物学的方法，探讨中药二黄散治疗宫颈炎的药效学，以及药物的分子作用机制，为研制和开发治疗宫颈炎实用有效的中药新方剂提供实验依据。
本研究分为以下三部分，现分述如下：
第一部分大鼠宫颈炎模型的建立与鉴定
目的用低浓度苯酚胶浆（20%）制备大鼠宫颈炎模型。
方法取苯酚4ml，阿拉伯树胶4ml，加蒸馏水至20ml，配成20%的苯酚胶浆。除正常对照组15人外，其余54只均用导尿管向阴道深部注入苯酚胶浆，每只动物注入1.5ml,2天1次,共5次。观察实验大鼠的症状和体征，光学显微镜观察大鼠宫颈组织病理形态学变化，对制作的大鼠宫颈炎模型进行鉴定。
结果我们运用20%苯酚胶浆隔日给药5次,可见大鼠阴道口红肿、有的有脓性分泌物流出；阴道粘膜变性或脱落,形成溃疡,宫颈充血水肿、炎细胞浸润、炎性肉芽组织或纤维增生；大鼠食欲减退、活动减少、体重减轻。
结论采用20%苯酚胶浆隔日给药5次，能成功复制大鼠阴道及宫颈炎动物模型，
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且可重复性好。
第二部分中药二黄散对实验大鼠宫颈炎的治疗效果与作用机制目的运用中药二黄散对大鼠宫颈炎进行治疗，观察治疗效果，探讨其药物作用机制。
方法造模后第2天，开始阴道局部给药，正常对照组不处理，阳性对照组给消糜栓，阴性对照组给空白基质，二黄散Ⅰ组和二黄散Ⅱ组分别给予相当于人临床用量的30倍和45倍的二黄散。1次/天，隔日1次，共12次。治疗结束后次日处死动物，解剖子宫后取出观察,并记录肉眼所见。做常规石蜡切片,HE染色，镜下观察阴道至子宫组织形态学变化，评价组织愈合效果。采用放射免疫分析法测定PAF和PGE2含量，免疫组织化学技术，检测经二黄散治疗的实验大鼠宫颈炎组织中EGF和PDGF的蛋白表达，RT-PCR方法检测EGF和PDGFmRNA的表达，免疫印迹法检测EGFR蛋白的表达。
结果中药二黄散Ⅰ、Ⅱ组和消糜栓组（阳性对照组）与阴性对照组相应部位比较，病变及炎症程度明显减轻，炎症细胞浸润明显减少，未见出血和坏死，比较差异有显著意义（P<0.05）。中药二黄散Ⅰ、Ⅱ组与阳性对照组对宫颈组织形态学的影响无显著性差异（P>0.05）。
中药二黄散Ⅰ、Ⅱ组中PAF和PGE2含量减低，治疗前后的含量分别为: 745.22±153.10，624.55±70.21；614.65±128.53，594.52±143.46；治疗后PAF、PGE2接近正常对照组，与阴性对照组比较差异有显著意义（P<0.05）。
EGF、PDGF免疫组化学结果显示，中药二黄散Ⅰ、Ⅱ组蛋白表达均显著高于阴性对照组和正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05），中药二黄散Ⅰ、Ⅱ组EGFmRNA 平均灰度分别为（4.53±0.39），（4.88±0.28），显著高于阴性对照组和正常对照组（2.33±0.57、1.87±0.40）（P<0.05，P<0.01）；二黄散Ⅰ、Ⅱ组EGFR蛋白表达均显著高于阴性对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。而PDGFmRNA平均灰度分别为（2.94±0.42）,（3.51±0.29），高于正常对照组和阴性对照组（1.55±0.52）（1.43±0.45），差异有统计学意义（P<0.05）。阴性对照组EGF和PDGFmRNA与正常对照组相比，
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差异无统计学意义（P>0.05）。
结论二黄散能有效地改善实验大鼠宫颈炎炎症程度，宫颈炎大鼠用药后，炎性细胞数量明显减少，症状显著减轻，二黄散对实验大鼠宫颈炎有很好的治疗作用。二黄散能降低宫颈炎组织中PAF、PGE2的含量，促进宫颈组织中生长因子EGF和PDGFmRNA转录和蛋白合成，提高EGF受体蛋白的表达，促使宫颈鳞状上皮细胞的增殖、分化，有利于糜烂组织愈合。使损伤与修复因素趋于平衡，这可能是二黄散治疗宫颈炎的机制之一。
第三部分中药二黄散治疗慢性宫颈炎临床疗效评估
目的观察二黄散对不同类型宫颈糜烂的治疗效果及药物作用机制。
方法用二黄散治疗宫颈糜烂患者60例，其中轻度糜烂18例、中度23例、重度19例；单纯型26例，颗粒型21例，乳突型13例。将二黄散药粉喷敷于宫颈糜烂面上，隔日1次，7次为一疗程，连用2～4个疗程。观察治疗前后糜烂面的大小、病变的深浅以及患者的主观症状等。ELISA检测治疗前后宫颈分泌物中EGF、PDGF的含量变化。
结果（1）轻度糜烂有效率为94.4%，中度糜烂有效率为86.9%，重度糜烂有效率为73.7%；单纯型糜烂有效率为96.1%，颗粒型糜烂有效率为90.4%，乳突型糜烂有效率为53.8%。总有效率为85%。（2）治疗前后患者EGF宫颈粘液中含量为（41.56±16.51、97.45±20.12）；PDGF宫颈粘液中的平均含量分别为：（32.74±10.22、56.20±12.33）。治疗前后宫颈粘液中EGF和PDGF的含量明显增高，比较差异具有显著意义（P<0.05）。
结论中药二黄散能明显改善宫颈糜烂患者的临床症状，有效地治疗宫颈糜烂，促进宫颈上皮细胞的增殖和分化，有利于组织的修复，该药对宫颈糜烂治愈率高、操作安全、简便，无明显的毒副作用，患者乐于接受。
【关键词】中药；二黄散；宫颈炎；炎症介质；修复；病理形态学
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Study on the Molecule Mechanism and Curative Effect of Er HuanSan Therapy on Cervicitis in Rats
(Including Clinical Study)
Candidate for Ph.D: Xu YouXian
Supervisor: Prof.Pu DeMin
Abstract
Background Chronic cervicitis is one of the commonest disease of gynecology，It is often occurred in childbearing women with the incidence of more than 60%. And cervical erosion as a common pathological change is closely related to cervical carcinogenesis. So we should pay more attention to the pathogeny, diagnosis and treatment for it.
At present, routine clinical treatment remains as basic treatment and locally administered corrosive medicine. The mainstay treatment for chronic cervicitis is physiotherapy. It includes: laser therapy, cryotherapy, infrared light condensation therapy, microwave therapy, and etc. A common mechanism they shared is to destroy the simple columnar epithelium of area of the cervical erosion, and make the necrotic tissue desquamated, and then the area is recovered by regenerative stratified squamous epithelium. All the above physiotherapies bring some complications: increment of distinguishing discharge in vagina, water sample apocenosis, bleeding of decrustation, and prohibited sexual life before the healing of raw surface of the cervix (about four to eight weeks), so patiants with chronic cervicitis would not like to accept physiotherapy. Because of these reason, to seek an effective therapy is our duty as an accoucheur.
Recovery of inflammatary tissue is a complex course. It includes a series of stages: inflammatory of
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the tissue, formation of granulation tissue movement, formation of epithelium cell. Antiinfection enhancing nutrition and protecting local wound are main traditional therapeutic methods. platelet activating factor(PAF), mitogen-activated protein kinase(PGE2) , epidermal growth factor（EGF）and platelet-derived growth factor( PDGF) are the most widely distributed in human body. They widely exist in central nervous system and peripheral system. And it can nourish and diferentiate many kinds of cells which generated from mesoderm and nerve ectoderm. Current medical research shows that they play very important roles in the rapid repair of tissue. It can promote metabolism and mitosis of all kinds of cells normally. For the concentration of them in body is very low, the healing of inflammatary tissue is also a slow course.
Recently, herbal medicine plays an important role in the periodontal treatment， also the effect of inflammatory medium. Scholars found that Radix scutellariae and Realgar could inhibit many kinds of bacteria and virus. Researchers also found that Chinese medicine could promote proliferation and attachment to root surface of cultured. Nowadays, the research on the local use of Chinese herbal medicine still remains in medical effects of single medicine, whereas complex prescription and its pharmaceutical mechanisms are still unknown.
Based on the above backgrounds, we investigated Erhuansan of a new Chinese medicine. This study used diagnosis based on overall analysis of patients' condition, mixed Radix scutellariae and Realgar in the reasonable proportion, then made ustained release preparation.We evaluated Erhuansan sustained-release preparation's to eliminate inflammation and promote period on talregeneration in animal and in human body, and observed the activity of inhibiting inflammation animal experiment and clinical application. This research provided experimental evidence in developing effective and practical Chinese herbal preparation on cervical erosion treatment. It will contribute to the step research on effect and pharmaceutical mechanisms of Chinese drugs Erhuansan to the cervical erosion.and provide the theory instruction for pharmaceutical application.
The paper is divided into three parts as follows.
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Part one
Research on the Animal Model with Colpitis and Cervicitis in Wistar rats Objective T o build the model with colpitis and cervicitis in Wistar rats.
Methods 15 normal Wistar rats and 54 animal models were studied. Preparing animal models as following, 20%Phenol mucilage are made of Phenol 4ml, Arabia balbta 4ml and distilled water 12ml. In the pathological model of cervical inflammation in rats set up by deep injection of phenol mucilage 1.5ml into every rat vagina by catheter for every two days, total five times. The change of the pudendum is observed for ten days. Then the model rats were killed, the weight of the rat’s body and inflammatory cells of its cervix were taken and quantified, and its index examined and calculated by pathology.
Results In model groups, the rats lost their appetite, reduced movement and the weight of them. At the same time, we also found that perineum tissue swelled and excreted pusappeared in the vagina orifices. Putrescence or desquamation appeared in the vagina and cervical mucous membrane. Under the vagina and cervical mucous membrane, inflammation cells soakage and acestom a hyperplasia were discovered.
Conclusion W e could successfully establish the wistar rat model with colpitis and cervicitis by deep injection of 20% phenol mucilage 1.5ml into every rat vagina by catheter, five times. It was very convenient and done repeatedly.
Part two
Study on the curative effect and mechnism of Chinese medicine Erhuansan on the animal model with cervicitis
Objective To research on effect and pharmaceutical mechanisms of Chinese drugs Erhuansan to animal model with cervicitis.
Methods After injecting phenol slurry for five times, we operated to the rats. Five normal Wistar
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rats and six animal model rats were observed. The rats of the positive and negative control groups were
ⅠⅡtreated by Xiaomishuan and blank matrix suppository. The rats of Erhuansan and Erhuansan groups were treated by 30 and 45 times of normal clinical human dose. The expression of PAF and PGE2 were remarkably decreased by radiommunoassay. The protein levels and mRNA of EGF and PDGF were determined by immunohistochemistry and the reverse transcriptional polymerase chain reaction (RT-PCR). The expressions of EGFR were assessed by Western blot method.
Results The Pathomorphology of positive control group and Erhuansan, Erhuansan groups
ⅠⅡ
were all changed better than that of the negative ones (the model group). The inflammation cells were reduced significantly in the former. The configuration of squamous cells was normal. It also showed that Erhuansan could improve the degree of Wistar rat model with colpitis and cervicitis. It could alleviate the signs and symptoms of them, such as swelling, discharge in the vagina orifices and putrescence, desquamation appeared in the vagina and cervix mucous membrane.
After treatment, the contents of P AF and PGE2 were (745.22±153.10, 624.55±70.21; 614.65±128.53, 594.52±143.46). The level decreased significantly in the Erhuansan treated group in
Ⅰcomparison with the blank treated group（P<0.05）.The content of them in Erhuansan and Ⅱp.
Erhuansan groups were close to those of the normal control grou
ⅠⅡThe expressions of EGF and PDGF were significantly increased in Erhuansan and group compared to the normal ones（P<0.05）. There were no differences between the negative control group and normal one. The transcription levels of the EGF mRNA in Erhuansan and group were
ⅠⅡsignificantly higher than that of normal groups（4.53±0.39vs 1.87±0.40; 4.88±0.28 vs 1.87±0.40, P<0.01）. However, the expression levels of PDGF mRNA were higher in cervix tissue compared to control as assessed by RT-PCR（2.94±0.42vs 1.55±0.52; 3.51±0.29 vs 1.55±0.52, P<0.05）. In negative control groups EGF and PDGF in cervix tissues were all no significantly than those in normal one （2.33±0.57, 1.43±0.45, P>0.05). The concentrations of EGFR in Erhuansan groups were significantly higher than those in normal one and negative one.
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Conclusion Erhuansan can promote the healing of cervical erosion on rats. After treatment, the content of P AF and PGE2 were lower and the expressions of EGF, EGFR and PDGF in cervititis tissue were increased.The balance of inflammation medium was setted up.This was probably the mechanisms of Erhuansan on the animal model with cervicitis.
Part three
Clinical Study of Erhuansan of chines medicine preparation in cervical erosion Objective To study the curative effect of Erhuansan in cervical erosion .
Methods 60 women with cervical erosion were investigated. Every one was treated by Erhuansan for every two days, seven times for each period. On the basis of pathological changes, it was given two to four periods of treatment. During the treatment, the changes of cervix surface were watched by naked eye and colposcopy, and examined the content of EGF and PDGF in cervix secretion by enzyme linked immunosorbent assay.
Results The curative rates of mild, moderate and severe cervical erosion cases were 94.4%, 86.9%, 73.7% respectively. And the ones of three types were 96.1%, 90.4%, 53.8%. The total efficient rate was 85%. After treatment the content of EGF was increased (97.45±20.12)in cervix mucus. There was no change in serum.The same thing was to the content of PDGF. In cervix mucus, the content of EGF and PDGF in cervix tissues were all significantly higher than before（P<0.05）.
Conclusion The efficient rates of Erhuansan on cervical erosion cases were high. This method was safe, easy, efficient, Patients were taken pleasure in it. It can promote the re-epithelium.
【Key words】Chinese Medicine, Erhuansan, Chronic cervicitis , inflammation medium, repairation, Pathomorphology
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英文缩略词
缩略语英文全称中文全称
transaminase 谷丙转氨酶
ALT L-alanine
AP
碱性磷酸酶
alkaline phosohatase
AST Aspartate
transaminase 谷草转氨酶
pair 硷基对
bp base
CIN cervical intraepithelial neoplasia 宫颈上皮内瘤样病变
triphosphate 三磷酸脱氧核苷酸dNTP deoxyribonucleoside
EDTA ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸
EGF epidermal growth factor 表皮生长因子
EGFR
表皮生长因子受体epidermal growth factor receptor
ELISA enzyme linked immunoSorbent assay 酶连免疫吸附试验GAPDH glyceraldehyde phosphate dehydrogenase 甘油醛磷酸脱氢酶
papillomavirus 人乳头瘤状病毒
HPV human
HRP horseradish peroxidase辣根过氧化物酶
IFN Interferon 干扰素
KGF Keeratinocyte growth factor 角化细胞生长因子MDGF macrophage derived growth factor 巨噬细胞衍化生长因子
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缩略语英文全称中文全称
PAF platelet activating factor 血小板活化因子PDGF platelet-derived growth factor 血小板源性生长因子PGE2mitogen-activated protein kinase 2 前列腺素E2
RIA radiommunoassay 放射免疫分析RNase Ribonuclease RNA酶
RNasin ribonuclease
inhibitor RNA酶抑制剂
RT-PCR reverse transcriptional-polymerase chain
reaction
逆转录聚合酶链式反应
SCJ squamo-columnar
junction 鳞-柱交接
TGF-βtransforming growth factor-B转化生长因子-βVEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名：
日期：年月日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
保密□，在_____年解密后适用本授权书。
本论文属于
不保密□。
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学位论文作者签名：指导教师签名：
日期：年月日日期：年月日
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前言
慢性宫颈炎是妇科最常见疾病之一，约60%左右已婚妇女患有不同程度的慢性宫颈炎，主要表现为宫颈糜烂[1]。其所致白带过多、腰痛、下腹坠胀及不孕，是患者就诊的主要原因，对妇女的生殖健康构成很大威胁。众所周知，慢性宫颈炎与宫颈癌的关系密切，而后者是最常见的妇科恶性肿瘤，死亡率居妇科恶性肿瘤的首位。我国每年新发宫颈癌病例约计13万，占全世界宫颈癌新发病例的1/4以上，且患者年轻化趋势明显[2, 3]，对广大妇女的身心造成巨大损害。而从慢性宫颈炎到子宫颈的癌前病变，最后到宫颈癌，是一个相对较长时间的过程，早期干预和治疗成为可能[4, 5]。因此，治疗慢性宫颈炎症，最终达到根除宫颈癌，将是关系到重大疾病的攻克，造福于我国乃至全世界妇女健康的重大课题。
宫颈糜烂的生理愈合过程是在炎症病变减弱的情况下，邻近的鳞状上皮向糜烂面的柱状上皮下生长，逐渐向腺上皮推移，最后完全被鳞状上皮覆盖而痊愈[6]。目前治疗仍以各种物理手段为主[7- 9]，其治疗宫颈糜烂的主要原理：通过冷、热等效应，使组织蛋白变性，甚至使组织炭化、气化，病变组织凝固、变性、脱落后，通过周围正常组织再生修复，从而达到治愈宫颈糜烂的目的。物理疗法治疗宫颈糜烂疗效是肯定的，但存在术后阴道长时间分泌物增多，大量水样排液及脱痂时出血，创面愈合时间长，需禁止性生活，还可能引起子宫颈管狭窄、粘连甚至不孕等副作用；且物理疗法对于年轻未生育的妇女不宜，因物理治疗可使宫颈局部纤维化，弹性降低，导致日后宫颈机能不全和分娩时宫颈扩张困难；急性宫颈炎出现宫颈糜烂时也不宜做物理治疗，以免引起炎症扩散。手术治疗现多采用环形电切术，效果较好，但对手术者的要求较高，操作相对比较困难。因此许多慢性宫颈炎患者不愿接受物理和手术疗法。而西药制剂，虽有一定的疗效，但副作用大，病人顺应性低，且易产生复发等问题，不利于临床普及和应用。所以，在祖国医学宝库中，寻找疗效好，质量可控，副作用小的有效方药，也是当前研究的热点。
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中医药是我国的国萃，具有毒副作用小，标本兼治等优点。在宫颈糜烂的治疗方面，中药制剂疗效肯定，特别是含有黄连或雄黄的中药复方制剂[10, 11]对宫颈糜烂的治疗效果显著，治疗方法简单易行，且无阴道排液、出血、子宫颈管粘连等副作用，对机体组织损伤小，无手术恐惧感，患者易于接受，不失为一理想治疗方法。
随着分子生物技术的发展，大量的研究表明，中药在促进组织愈合、细胞增殖有重要作用[12- 14]。而中药在抗炎、提高机体的免疫力方面已有较多的报道[15, 16]，尤其是对细胞因子PAF、PGE2等的作用已得到普遍的认可。虽然近年来，大量的生长因子已运用于临床，特别是人重组表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长用于宫颈糜烂的治疗已有大量的临床报道[17- 19]，但中药促进宫颈糜烂的愈合的分子作用机制至今还鲜有研究。
为了寻求治疗慢性宫颈炎的良方，导师与同济医学院从事中医药理论和临床研究40余年、主持过国家重要中药研究项目的郭教授分别从西医和中医的角度充分交流了对该病的认识，根据中医“证、法、方、药”的组方原则，在研究了大量中药治疗宫颈病变的古方和验方的基础上，组成了新的方剂。制剂中含有黄连、雄黄等五味中药，取名为“二黄散”，用于宫颈局部。其成分均为常见中药材，成本低廉，易于推广。前期临床治疗宫颈糜烂的有效率达91.6%以上，未发现毒副作用[20]。本制剂可能是通过清热解毒、能抗菌消炎、去腐生肌，使糜烂面柱状上皮坏死脱落，鳞状上皮覆盖。同时增加局部血流量，促进炎症的康复，还可促进上皮再生，修复病变组织。因而，在良好的临床治疗效果的鼓舞之下，我们大胆推测用药后能否改善了局部微环境，对上皮细胞的修复是否有重要的作用。因此本课题拟用现代分子生物学及分子免疫学手段，基于已有的理论和我们合理的假设，探索药物对宫颈鳞状上皮修复的分子作用机制。
本研究分为三个相互联系的部分，从动物模型和临床实验观察二黄散的治疗效果，从病理形态学水平观察二黄散对模型动物和人宫颈组织中上皮细胞和炎性细胞的影响，从组织和细胞水平对PAF、PGE2、EGF、EGFR、PDGF五个指标，应用分子免疫学和分子生物学等方法进行对问题的解决和理论假设的验证。首先观察二黄散对
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大鼠宫颈炎组织形态、炎症细胞的作用；接着检测PAF、PGE2在正常大鼠、宫颈炎大鼠和二黄散治疗大鼠宫颈炎后大鼠宫颈组织中的表达，以分析二黄散对宫颈炎症组织中宫颈微环境的影响。然后以定性、定位和定量的角度，探讨EGF、EGFR、PDGF 对组织愈合、细胞修复和血管生成的影响，并进一步探讨二黄散对细胞增殖、分化和促进组织细胞分泌和释放EGF、EGFR、PDGF作用的分子机制。如果能够尽早了解二黄散作用及作用机制，将会对揭示二黄散药理作用有积极的意义，同时开发和研制预防和治疗宫颈糜烂的新的验方，推广二黄散制剂的使用，积极治疗慢性宫颈炎，阻断癌前病变的形成，防止其向宫颈癌演进，从而达到保护妇女健康、提高生活质量的最终目标。
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材料与试剂
1．动物
Wistar雌性、未孕，健康的大鼠，由武汉大学实验动物中心提供。动物许可证号，SYXK（鄂）2004-2006，SPF级。
2．主要生化试剂
2.1试剂盒：
（1）免疫组化SP试剂盒北京中山试剂公司
（2）PAF放免试剂盒上海森雄试剂公司提供
（3）PGE2放免检测试剂盒苏州大学血液研究室提供
（4）肝、肾功能试剂盒北京帮定生物技术工程有限公司
（5）ELISA试剂盒上海森雄试剂公司提供
（6）TRIzolTM Reagent Kit 提取细胞RNA，美国GIBCOL公司
（7）Revert Aid First Strand cDNA合成试剂盒深圳晶美生物工程有限公司
2.2 Western-blot所需试剂：
（1）三去污剂裂解缓冲液：50mmol/L Tris.cl (pH8.0)，150mmol/L NaCl， 0.025% NaN3（叠氮钠）， 0.1% SDS， 100μg/ml PMSF（苯甲基磺酰氟），1μg/ml Aprotinin，
0.5%去氧胆酸钠， 0.1%NP-40
（2）A液(凝胶储液)：称取丙烯酰胺29.0克，N，N—亚甲双丙烯酰胺1克，加H2O 至100ml，储于棕色瓶中，4℃避光保存，注意pH值不得小于7.0。配制溶液使用期一般不得超过两个月。如溶液有沉淀，可以过滤。
B液(浓缩胶缓冲液)：称取6g Tris溶于40ml H20中，用lmol/L HCl(约48ml)调至pH
6.8，再加水稀释到100ml的终体积，即成pH 6.8、0.5mol/L Tris-HCl缓冲液。过
滤后于4℃保存。
C液(分离胶缓冲液)：取36.6克Tris和48ml 1mol/L HCl混合，加水稀释至100ml
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终体积。即成pH 8.8、3mol/L Tris-HCl缓冲液。过滤后4℃保存。
D液(电极缓冲液储液)：称取30.3g Tris，144g甘氨酸，10g SDS，用蒸馏水溶解至100ml，即成0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸电泳缓冲储液。临用前稀释10倍。E液：1克SDS溶于10mlH2O中，即成10％SDS溶液。
F液：10％过硫酸铵(AP)，宜当天配制，最多不超过一周。
G液：TEMED原溶液。
③液12.8ml；④二
①液8ml；②甘油6.4 ml；E
H液(样品缓冲液)：按下方配制：B
巯基乙醇3.2ml；⑤ 0.05％溴酚蓝1.6ml；⑥蒸馏水32.0ml，混
匀备用。
（3）0.45μm硝酸纤维素膜：日本Amersham公司
（4）转移缓冲液： 3g Tris碱、1g SDS和14.4g甘氨酸，再加200ml甲醇，补充蒸馏水定容至1L。
（5）BCA蛋白检测所用工作液、标准液根据BCA检测试剂盒说明书要求，当天配制。
（6）脱色液：230ml甲醇，230ml蒸馏水，40ml冰乙酸，混合使用。
（7）封闭缓冲液：含5%脱脂奶粉、0.01%防沫剂， 0.025% NaN3 溶于TBS-T 缓冲液。
（8）5×TBS缓冲液：12.1g Tris碱，40g NaCL溶于双蒸水中，用浓HCL调pH值至7.6后，用双蒸水定容至1L。
（9）TBS-T漂洗液：含0.1%Tween-20的TBS。
（10）蛋白质Marker：美国MBI公司
（11）显影液、定影液：上海冠龙照相器材公司。
2.3 RT-PCR所需主要试剂：
（1）PCR引物北京奥科生物技术有限公司
（2）DEPC水美国Sigma公司
（3）DNA Marker和琼脂糖深圳晶美生物工程有限公司
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2.4主要抗体
（1）兔抗鼠EGF抗体北京中山试剂公司
（2）兔抗鼠PDGF抗体北京中山试剂公司
（3）β-actin抗体北京中山试剂公司
（4）兔抗鼠EGFR多克隆抗体武汉博士德生物技术有限公司2.5各种酶类及其它：
（1）Oligo(dT)及逆转录酶M-MLV 美国Promega 公司
（2）Taq DNA 聚合酶北京鼎国生物公司
（3）DAB显色剂北京中山试剂公司
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主要仪器和器材
离心机北京医用离心机厂LD4-2A型
低温离心机德国Heraeus公司
放射免疫γ计算器上海安亭科学仪器厂 FMJ-182型 倒置显微镜日本Olympus公司
电热手提式压力蒸汽灭菌锅上海医用核仪器厂YXQ SG41 28型 电热鼓风干燥箱上海沪南科学仪器厂科通101-2型 微量加样器美国Eppendorf公司
液氮罐四川金凤YSD－125型
恒温振荡式水浴箱上海安亭科学仪器厂
P H
值标定仪奥立龙公司
电泳仪美国Bio-Rad公司
水平电泳槽美国Bio-Rad公司
PCR
仪德国Biometra公司
紫外分光光度仪德国Beckman公司
低温冰箱日本三阳公司
普通冰箱中国海尔公司
阴道镜日本Olympus公司
石蜡切片机德国leitz 公司 Leitzl 512型
酶标仪 TECAN，USA
凝胶成像分析系统英国UVP公司 GDS-8000型
电子天平上海精科公司天平仪器厂JA1003型
蛋白图像分析系统德国Kontron公司IBAS2.0真彩图像分析仪
显微照相系统日本 Olympus光学有限公司
华中科技大学博士学位论文
第一部分
实验大鼠宫颈炎模型的建立与鉴定
宫颈糜烂是女性生殖器官常见的炎症之一，是慢性宫颈炎局部多见的病理特征，与宫颈癌的发生密切相关，故积极治疗宫颈糜烂对保障妇女健康及防治宫颈癌有重要意义。近年来一些应用中药制剂局部用药的报道表明[10, 11]，中药治疗宫颈糜烂有其独特的疗效。但大多数药物仅在抑菌、抗炎、止痒等方面进行考察，且多局限于宫颈炎的临床研究，因而缺乏足够的药效学探讨，特别是药物的动物实验研究。为此，我们参照范英昌[21]复制宫颈炎动物模型的基础上，以低浓度的苯酚胶浆复制大鼠宫颈炎模型，使宫颈炎模型更接近慢性宫颈炎的病理特征，为药物实验研究提供了良好的载体。也为佐证药物临床的治疗效果和探讨其治疗机理提供了科学方法和手段。
资料和方法
1. 药物
苯酚（化学分析纯，上海化学试剂厂）
阿拉伯树胶（UK进口分装）
巴比妥钠粉剂(化学分析纯，北京通县育才精细化工厂)
氯胺酮(江苏恒瑞制药厂)
2．方法
2.1 药物的配制
20%的苯酚胶浆取苯酚4ml，阿拉伯树胶4ml，加蒸馏水至20ml，配成20%的苯酚胶浆。
3%戊巴比妥钠注射液的制备无菌状态下将3g戊巴比妥钠粉剂溶于l00ml双蒸水中，分装为2ml大小备用。
2.2 模型复制方法Wistar雌性、未孕，健康的大鼠69只，体重200±20g，随机分
解热镇痛抗炎药是一类具有解热、镇痛，多数还有抗炎、抗风湿作用的药物。由于其化学结构和抗炎机制与糖皮质激素甾体抗炎药（NSAIDs）不同，故又称非甾体抗炎药（NSAIDs）。阿司匹林是这类药物的代表，故又称阿司匹林药物。 一、药理作用： 1.解热抑制下丘脑体温调节中枢的环氧酶（COX），减少PG（前列腺素）的合成，增强散热过程，致使体温下降或恢复常。该类药物的解热作用于氯丙嗪不同，它是通过抑制下丘脑体温调节中枢的环氧酶，使PG合成减少而退热，对正常体温几乎无影响；而氯丙嗪是直接抑制下丘脑体温调节中枢的调节功能，在物理降温的配合下，才能降低发热病人和正常人的体温。解热一般只是对症处理。 2.镇痛 NSAIDs产生中等程度镇痛，镇痛作用部位主要在外周，通过抑制炎症局部PG的合成，发挥镇痛作用。对慢性钝痛，如牙痛、头痛、神经痛、肌肉痛、关节痛及月经痛等有较好的镇痛效果，而对创伤引起的剧痛和内脏平滑肌绞痛无效。长期应用一般不产生耐受性和依赖性。 3.抗炎除苯胺类（对乙酰氨基酚）外，其他解热镇痛药均有抗炎作用。NSAIDs 过抑制PG的合成，抑制白细胞聚集，减少缓激肽的形成，抑制血小板的凝聚等发挥消炎作用。对控制风湿性和类风湿性关节炎的症状疗效肯定。 二、适应症 1、解热镇痛和抗风湿作用 （1）解热镇痛：感冒发热、头痛、牙疼、神经痛、关节痛、肌肉痛、月经痛等慢性疼痛 （2）抗风湿作用强，较大剂量治疗急性风湿性关节炎。 2、抑制血小板聚集，防止血栓形成。小剂量可用于预防脑血栓及心肌梗塞。 三、主要的副作用 1、胃肠道反应： PG（前列腺素）除了有促进炎症反应的作用外，还对出血的控制、保护胃粘膜方面有重要的作用。由于DSAIDs抑制PG的合成，因此在抗炎的同时，也造成了对胃肠道的副作用。其主要表现为胃、十二指肠引起的上消化道出血。还有恶心、呕吐。 2、凝血障碍：延长出血时间，对严重肝损害，凝血酶原过低，维生素K缺乏及血友病人可引起出血，术前一周的患者应停用，以防出血，产妇不宜使用，以免延长产程和增加产后出血。 3、过敏反应：以荨麻疹和哮喘最常见。哮喘的发生与抑制PG合成有关。肾上腺素对“阿司匹林哮喘”无效，可用糖皮质激素治疗。哮喘、鼻息肉和慢性荨麻疹患者禁用。 4、水杨酸反应：大剂量可出现眩晕、恶心、呕吐、耳鸣、听力下降等症状严重者看导致过度换气，酸碱平衡失调，高热，精神错乱，昏迷。处理：立即停药，并静滴碳酸氢钠，以促进药物排泄。 5、瑞夷综合症：其表现为开始短期发热等类似急性感染症状，继而惊厥、频繁呕吐、颅内压增高与昏迷等。水痘或流行感冒等病毒感染慎用阿司匹林可用对乙酰氨基酚代替。 6、肾损害
一、实验目的 （1）掌握一般散剂的制备方法。 （2）熟悉散剂等量递增的原则。 二、实验仪器、试剂和药材 1. 仪器：粉碎机、药筛（80目，100目）、瓷研钵、烧杯、天平 2. 药材：滑石30g，甘草5g,朱砂1.5g 三、实验内容 制法：（1）水飞朱砂成极细粉。（2）滑石、甘草各粉碎成细粉。（3）将少量滑石粉放于研钵内先行研磨，以饱和研钵的表面能。再称取朱砂极细粉 1.5g置研钵中，逐渐加入等容积滑石粉研匀，倒出。取甘草置研钵中再加入上述混合物研匀。 按每包3g分包。 四、思考题 1、等量递增法的原则是什么？ 当药物比例量相差悬殊时，取量小的组分及等量的量大的组分，置于混合器中混合均匀，再加入与混合物等量的量大的组分稀释均匀，如此直至加完全部量大的组分，混匀，过筛。 2、何谓共熔？处方中常见的共熔组分有哪些？ 共熔现象是指两种或更多种药物经混合后有时出现润湿或液化现象。 3、散剂中如含有少量挥发性液体及含有酊剂、流浸膏时应如何制备？ 散剂中如含有少量挥发性液体及含有酊剂、流浸膏时可视药物的性质、用量及处方中其他固体组分的多少而定。一般可利用其它固体组分吸收后研匀，若液体组分含量较大而处方中固体组分不能完全吸收时，可加入适当的赋形剂吸收。若含挥发性物质，可加热蒸去大部分水分后并进一步在水浴上蒸发，加入固体药物或赋形剂后，低温，干燥即可。 五、讨论 甘草因含有纤维性物质在粉碎过程中较难成细粉，总有残渣，粉碎好多次，最后还是没把甘草的细度粉碎成标准要求。因而，后面的研磨，总有粗颗粒无法研碎，制出的益元散中也可以明显看出甘草残渣。
、实验目的 掌握药酒、酊剂的制备方法。 二、实验仪器、试剂和药材 1. 仪器：粉碎机、药筛（20目，65目或60目）、渗漉筒、铁架台、铁夹、 烧杯（1000ml, 400ml） 2. 药材：蕲蛇（去头）12g，防风3g，当归6g，红花9g，羌活6g，秦艽6g, 香加皮6g，白酒加至1000ml。 三、实验内容 制法：以上七味，蕲蛇粉碎成粗粉，其余防风等六味共研碎成粗粉，与上述粗粉 混合均匀，置烧杯中，加入白酒适量，拌匀，浸润0.5小时，使其充分膨胀，装入底部填有脱脂棉的渗漉桶中，层层轻压，装毕后于药面覆盖滤纸一张，并压小 瓷片数块，加白酒使高出药面1?2cm盖上表面皿，浸渍48小时后，以白酒为溶剂，按渗漉法调节流速每分钟1?3ml渗漉，收集渗漉液900ml，加入蔗糖100g， 搅拌溶解后，过滤，制成1000ml，即得。本品含醇量应为44%?50%。 四、思考题 1、比较药酒、酊剂的异同点？ 相同点：药酒与酊剂同为浸出药剂。 不同点：（1）药酒溶剂为蒸馏酒，无一定浓度，制备方法有浸渍法和渗漉法， 常加入糖或蜂蜜作为矫味剂；（2）酊剂的溶剂为不同浓度的乙醇，有浓度规定，制备方法除上述两种还有溶解法和稀释法，一般不用添加矫味剂。 2、浸出药剂中哪些剂型需要测定含醇量？ 酊剂和流浸膏剂需测乙醇含量。 五、讨论 蕲蛇在粉碎过程中，蛇皮和蛇刺难以被粉碎，但是其他部分被粉的过细。在 装入渗漉桶中时，由于不小心，导致渗漉桶壁上粘上许多药材，造成实验误差。此外，时间有限，并没有浸渍48个小时，一个多小时后就开始渗漏，因为严格按照要
实验2 药物的抗惊厥作用 【目的要求】 ①学习动物惊厥模型的制备方法及抗惊厥药的实验方法。②观察抗癫痫药物苯巴比妥钠对动物电惊厥的保护作用和安定对士的宁惊厥的保护作用。 【教学内容】 （一）实验动物 小白鼠，雌雄不限，体重18-22g； （二）药品与仪器 苯巴比妥钠溶液，地西泮溶液，士的宁溶液，药理生理多用仪 一、苯巴比妥钠抗电惊厥作用 （一）实验方法 调机：将药理生理多用仪选择适宜参数：频率至“单”，波宽至“0.5ms”，微调至“X500”,电压调节旋钮置于适当位置（80～100V）。 动物筛选：将输出导线前两个鳄鱼夹用生理盐水浸湿，一只夹住小鼠耳部，另一只夹住小鼠下唇，按“启动”按钮，选择发生前肢屈曲、后肢伸直的强直性惊厥的小鼠为合格小鼠，记录下各只动物惊厥阈值。如动物未出现惊厥，将电压逐渐升高，再次刺激，如仍未出现惊厥，弃之不用。 实验步骤：将合格小鼠，称重并标记，随机分组。第一组小鼠腹腔注射生理盐水 0.1ml/10g，第二组小鼠腹腔注射5mg/ml苯巴比妥钠溶液0.1ml/10g，30min后，各只动物以原惊厥阈值给予刺激，记录各动物的反应。 （二）实验结果:将实验结果填于表中。 表：苯巴比妥钠抗电惊厥作用 组别剂量(mg/kg)致惊厥阈值（参数）再次通电后的反应 生理盐水/ 苯巴比妥钠 （三）注意事项 1、电压以能引起动物惊厥为准，不宜过大，以免引起动物死亡。 2、通电时两鳄鱼夹不能相互接触，以免短路。 3、动物惊厥可以分为5个时期：潜伏期、僵直屈曲期、后肢伸直期、阵挛期、恢复期。 （四）结论 （五）讨论：阐述苯巴比妥钠为什么能够抗电惊厥？ 二、安定抗士的宁惊厥作用 （一）实验方法 取小鼠，称重并标记，随机分为两组，分别腹腔注射生理盐水、地西泮溶液0.1ml/10g。30分钟后依次给每只鼠皮下注射0.2％士的宁0.015ml/10g。观察并记录动物的反应。 （二）实验结果：将实验结果填于表中。 表：地西泮对抗士的宁致小鼠惊厥的作用 组别剂量(ml)给士的宁后的反应 生理盐水/ 地西泮
实验1 附子炮制前后致小白鼠中毒表现得影响(6学时) 【目得】观察生附子与制附子致小白鼠得死亡数量,评价炮制对附子毒性得作用。【器材】1ml注射器、鼠笼、天平。 【药品】生附子水煎醇沉液(上清液)0、5g/ml、制附子水煎醇沉液(上清液)0、5g/ml。 【动物】小鼠,雌雄各半,体重18 ～22 g。 【方法】小鼠20只,雌雄各半,随机分为2组。按0、2ml/10g腹腔注射给药,第1 组给予生附子水煎醇沉液,第2组给予制附子水煎醇沉液。观察并记录30min内 各组小鼠死亡情况。 【结果】记录生附子水煎醇沉液组与制附子水煎醇沉液组动物死亡数,比较两者 毒性得大小。 【注意事项】生附子与制附子水煎液制备时均应煎煮4小时以上。 【思考题】 根据实验结果讨论炮制前后附子毒性作用差异得原因。 实验2 生大黄、制大黄以及大黄、芒硝配伍对小白鼠小肠运动 得影响(炭末法)(4学时) [目得]了解生大黄、制大黄对肠蠕动得影响以及大黄与芒硝配伍得药理意义。[原理]利用黑色炭末作为指示剂,观察炭末在肠道得推进距离。口服生大黄可刺激肠蠕动加速,有泻下作用,故对胃肠实热有“釜底抽薪”之功。大黄久煎或炮制之后,致泻成份分解,作用减弱,而芒硝在肠内不易被吸收,使肠内渗透压升高,大量水分保留在肠腔,机械性刺激肠壁而致泻。故生大黄与芒硝配伍有“增水行舟,润燥软坚”之功效,致泻作用增强。 [器材]手术剪、眼科镊、直尺、注射器、灌胃针头、天平,烧杯,搪瓷盘或蛙板。[药品] 炭末生理盐水混悬液0、1g/m(炭末为活性炭),生大黄水煎液1g/ml(含炭末0、1g/m1), 制大黄水煎液1g/ml(含炭末0、1g/ml,生大黄水煎液加芒硝(生大黄1g/ml+芒硝0、5g/ml+炭末0、1g/m1),苦味酸。 [动物]小白鼠。 [方法] 取禁食20~24h成年、体重相近得12只小白鼠,随机分为4组,每组3只,用苦味酸标记。分别用上述4种炭末液0、3ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死,打开腹腔分离肠系膜,剪取上端至幽门,下端至回盲部得肠管,置于托盘
实验1 附子炮制前后致小白鼠中毒表现的影响（6 学时） 【目的】观察生附子和制附子致小白鼠的死亡数量，评价炮制对附子毒性的作用。 【器材】1ml注射器、鼠笼、天平。 【药品】生附子水煎醇沉液（上清液）0.5g/ml、制附子水煎醇沉液（上清液） 0.5g/ml。 【动物】小鼠，雌雄各半，体重18?22 g。 【方法】小鼠20只，雌雄各半，随机分为2组。按0.2ml/10g腹腔注射给药，第 1 组给予生附子水煎醇沉液，第2组给予制附子水煎醇沉液。观察并记录30min 内各组小鼠死亡情况。 【结果】记录生附子水煎醇沉液组与制附子水煎醇沉液组动物死亡数，比较两者毒性的大小。 【注意事项】生附子和制附子水煎液制备时均应煎煮4 小时以上。 【思考题】 根据实验结果讨论炮制前后附子毒性作用差异的原因。
实验2生大黄、制大黄以及大黄、芒硝配伍对小白鼠小肠运动 的影响（炭末法）（4学时） ［目的］了解生大黄、制大黄对肠蠕动的影响以及大黄与芒硝配伍的药理意义。 ［原理］利用黑色炭末作为指示剂，观察炭末在肠道的推进距离。口服生大黄可刺激肠蠕动加速，有泻下作用，故对胃肠实热有釜底抽薪”之功。大黄久煎或炮 制之后，致泻成份分解，作用减弱，而芒硝在肠内不易被吸收，使肠内渗透压升高，大量水分保留在肠腔，机械性刺激肠壁而致泻。故生大黄与芒硝配伍有增 水行舟，润燥软坚”之功效，致泻作用增强。 ［器材］手术剪、眼科镊、直尺、注射器、灌胃针头、天平，烧杯，搪瓷盘或蛙板。 ［药品］炭末生理盐水混悬液0.1g/m （炭末为活性炭），生大黄水煎液1g/ml（含炭末 0.1g/m1）,制大黄水煎液1g/ml（含炭末0.1g/ml，生大黄水煎液加芒硝（生大黄1g/ml+芒硝0.5g/ml+炭末0.1g/m1），苦味酸。 ［动物］小白鼠。 ［方法］取禁食20~24h成年、体重相近的12只小白鼠，随机分为4组，每组3 只，用苦味酸标记。分别用上述4种炭末液0.3ml/10g体重灌胃。给药30min后脱颈椎处死，打开腹腔分离肠系膜，剪取上端至幽门，下端至回盲部的肠管，置于托盘上。轻轻将小肠拉成直线，测量肠管长度作为小肠总长度”。从幽门至炭 末前沿的距离作为炭末在肠内推进距离”。取各组3只小自鼠平均值，用公式汁算炭末推进百分率，并注意观察各组小肠容积是否增大。 炭末在肠内推进距离（cm） 炭末推进率= ---------------------------------------- X100% 小肠全长（cm） ［结果］按结果记录分析并填表。
《中药药理学》习题集 第01章绪论 一、选择题（在备选答案中只有一个最佳答案,将其选出并把它的标号填在题后的括号内）。 １．结合中医理论研究中药方剂的药理作用始于： Ａ．20年代Ｂ．40年代Ｃ．60年代Ｄ．80年代Ｅ．90年代 2．中药药理学的学科任务是： Ａ．提取中药的成分Ｂ．鉴定中药的种属Ｃ．研究中药的作用及作用机理等 Ｄ．确定中药有效成分的化学结构类型Ｅ．提取中药的有效部位 二、填空题 1．我国首先对麻黄的化学成分（）进行了药理活性研究，发现其有拟肾上腺素样药理作用。 2．中药药理学的研究内容包括（）和（）两个方面。 三、问答题 1．中药药理学的概念。 2．学习中药药理学的目的和任务。 3．简述中药药理研究的现状。 4．有人认为中药是天然产物，所以毒副反应低，请简述你对此的看法。 5．请例举几种具有较好抗肿瘤活性的中药或中药的活性成分，并简述其研究概况。 6．什么是中药药理学、中药药效学和中药药动学？ 第02章中药药性理论 一、选择题（在备选答案中只有一个最佳答案,将其选出并把它的标号填在题后的括号内）。 1．连续使用温热药会使下列何种机体的递质增加： Ａ．NA Ｂ．Ach Ｃ．5-HT Ｄ．GABA Ｅ．NO 2．辛味药主要含有以下何种相关成分： Ａ．挥发油Ｂ．生物碱Ｃ．无机盐Ｄ．有机酸Ｅ．糖类 二、填空题 1．有抗肿瘤活性的中药多属于药性( )的药物。 2．在中药中，( )、( )等对肝脏有一定的毒性。 三、问答题 1．中药“有病治病，无病健身，安全可靠“的观念是否正确？为什么？ 2．中药药动学与归经有什么关系？ 3．中药归经的实质是什么？举例说明。 4．简述四性与内分泌系统的关系。 5．中药四性的药理作用表现在哪些方面？ 6．“五味”所含成分与中药的“功效”、“归经”间有何规律性？ 7．简述中药五味所含的主要化学成分。 第03章中药药理作用与功效的关系、作用特点 一、选择题
解热镇痛抗炎药 一、最佳选择题 1、下列哪项对阿司匹林的叙述是错误的 A、最常见恶心、呕吐、胃出血等胃肠道反应 B、抑制血小板聚集 C、可引起“阿司匹林哮喘” D、儿童易引起瑞夷综合征 E、中毒时应酸化尿液，加速排泄 2、关于对乙酰氨基酚的叙述哪项是错误的 A、解热镇痛作用缓和持久 B、对中枢COX抑制作用弱 C、小儿首选解热镇痛药 D、抗炎、抗风湿作用弱是因为对外周COX抑制弱 E、无明显的胃肠刺激 3、下列哪项不属于阿司匹林的不良反应 A、瑞夷综合征 B、水杨酸反应 C、“阿司匹林哮喘” D、恶心、呕吐、胃出血 E、大剂量长期服用可刺激凝血酶原形成 4、以下哪种作用与解热镇痛抗炎药抑制PG 生物合成无关 A、解热、镇痛、抗炎、抗风湿 B、抑制血小板聚集 C、致胃出血、胃溃疡 D、“阿司匹林哮喘” E、水杨酸反应 5、对解热镇痛抗炎药的叙述哪项错误 A、对内热原引起的发热有效 B、可减少炎症部位PG合成 C、治疗浓度可抑制环氧酶，减少PG生成 D、镇痛作用部位主要在外周 E、能根治风湿、类风湿性关节炎 6、对解热镇痛抗炎药的叙述哪项是错误的 A、仅使高烧患者体温降低 B、中度镇痛作用 C、大多数解热镇痛药都有抗炎作用 D、对正常人体温无影响 E、此类药物均具有抗血栓形成作用 7、下列哪个药物几乎没有抗炎作用 A、保泰松 B、阿司匹林 C、对乙酰氨基酚
D、吲哚美辛 E 、尼美舒利 8、关于阿司匹林，下列哪项描述是错误的 A、防止血栓形成宜用大剂量 B、用量大于1g时，水杨酸的代谢从一级动力学转变为零级动力学进行 C、碱性尿促其排出 D、既抑希y COX-2，又抑希y COX-1 E、血浆t 1/2短，约15min 9、下列对解热镇痛抗炎药正确的叙述是 A、能降低发热者的体温 B、与氯丙嗪对体温的影响相同 C、镇痛作用部位主要在中枢 D、对各种严重创伤性剧痛有效 E、很容易产生耐受与成瘾 10、抑制环氧酶作用较强者为 A、阿司匹林 B、对乙酰氨基酚 C吲哚美辛 D、保泰松 E、氢化可的松 11、大剂量阿司匹林可用于治疗 A、预防心肌梗死 B、预防脑血栓形成 C、慢性钝痛 D、风湿性关节炎 E、肺栓塞 12、阿司匹林严重中毒时应首选何药处理 A、口服碳酸氢钠 B、口服氯化铵 C、静脉滴注碳酸氢钠 D、口服氢氯噻嗪 E、以上都不对 13、下列哪种药物是急性风湿热的首选药物 A、保泰松 B、阿司匹林 C、对乙酰氨基酚 D、甲芬那酸 E、吲哚美辛 14、过量引起肝坏死的解热镇痛抗炎药是 A、甲芬那酸 B、布洛芬 C、对乙酰氨基酚
抗癫痫药和抗惊厥药 考情分析 十二、抗癫痫药和抗 惊厥药 1.抗癫 痫药 （1）癫痫类型 （2）苯妥英钠、卡马西平、丙戊酸钠的药理作用、药动学特点、 临床应用及不良反应 （3）其它药物特点 （4）抗癫痫药的临床应用原则 2.抗惊 厥药 硫酸镁的药理作用、药动学特点、临床应用及不良反应 一、抗癫痫药 癫痫——是一组由大脑神经元异常放电所引起的短暂中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病。临床表现为：运动、感觉、意识、行为和自主神经等不同程度的障碍。 现有抗癫痫药的作用： 1. 作用于——病灶神经元的作用 →减弱或防止异常放电 2.作用于——病灶周围正常脑组织 →防止异常放电的扩散 （一）癫痫的分型了解 1.局限性发作 （1）单纯局限性发作 （2）复合性局限性发作（精神运动性） 2.全身性发作 （1）失神性发作（小发作） （2）强直-阵挛性发作（大发作） （3）癫痫持续状态 （4）肌阵挛性发作 （二）常用的抗癫痫药： 1.苯妥英钠（大仑丁） 2.卡马西平（酰胺咪嗪） 3.丙戊酸钠 4.乙琥胺 5.苯巴比妥 6.扑米酮（去氧苯比妥） 7.安定（地西泮）
（三）临床合理选药 （1）强直阵挛性发作（大发作）：首选苯妥英钠或苯巴比妥，如不能控制，加用扑米酮； （2）失神发作（小发作）：首选丙戊酸钠或乙琥胺，也可用硝西泮或氯硝西泮； （3）复杂部分性发作（精神运动性发作）：首选卡马西平，也可选用苯妥英钠或苯巴比妥； （4）单纯部分性发作：可选用苯妥英钠或卡马西平； （5）肌阵挛性发作：氯硝西泮或硝西泮； （6）癫痫持续状态：首选地西泮静脉注射，也可用苯巴比妥肌注或苯妥英钠缓慢静注。 --抗癫痫药--- 癫痫小发作，首选乙琥胺； 局限发作大发作，苯妥英钠鲁米那； 卡马西平精神性，持续状态用安定； 慢加剂量停药渐，坚持用药防骤停。 A.卡马西平 B.地西泮 C.乙琥胺 D.丙戊酸钠 E.硫酸镁 1.对精神运动性发作疗效较好的是 2.对小发作首选的药物是 3.对癫痫持续状态疗效较好的药物是 『正确答案』A、C、B 1.苯妥英钠（大仑丁） 【药动学】 口服吸收慢而不规则，需连服数日才开始出现疗效，吸收后可迅速分布于脑组织中。 不同制剂的生物利用度显著不同，且有明显的个体差异。因此应进行血药浓度监测，指导临床合理用药。 因呈强碱性（pH＝10.4），刺激性大，不宜肌内注射，癫痫持续状态可作静脉注射。 血浆蛋白结合率约90%——高！ 60%～70%经肝药酶代谢，由肾排泄；
第一组 题目：延胡索提取物的镇痛作用 班级： 成员： 指导老师： 延胡索提取物的镇痛作用（方法的研究） 一、延胡索镇痛的历史[1] 罂粟科紫堇属延胡组植物延胡索的块茎。根据南北朝以来直到明清的医案记载和现代科学研究，可把延胡索的临床应用分为三类：1.镇痛作用：延胡索中多种生物碱对胸部疼痛、胃肠疼痛、腹部疼痛、跌打扭伤等有显著的止痛作用;2.治疗心血管疾病：延胡索对心血管疾病有肯定的药效，能扩张冠脉，治疗心率失常;3.用于妇产科通经、行气：可治疗痛经和产妇产后宫缩痛。 现代药理实验证明，延胡索对中枢神经系统具有明显的抑制作用，能使肌肉松弛，并具有解痉作用。口服延胡索可产生类似吗啡及可待因的效果，能缓解一般神经痛、头痛、腰痛、关节痛、月经痛、肿疡疼痛等。延胡索对轻度痉挛性疼痛的有效率大致与杜冷丁相当。另外，延胡索还有镇静、催眠、抗惊厥的功效。 延胡索的研究新发现 以中科院上海药物研究所金国章院士为代表的药理学家以中西医结合的方式对延胡索进行了系统、深入的研究，发现其主要成分延胡索乙素的镇痛、镇静机理与传统的麻醉性镇痛或消炎解热镇痛机理不同，延胡索乙素是属于植物中枢多巴胺受体抑制剂，是一种增强内源抗痛系统功能的新作用机制，具有良好的镇痛、镇静作用，且安全性好，无成瘾性。二、延胡索的主要功效及化学成分[2] 功效：延胡索有活血、理气、止痛功效和镇痛、抗心肌缺血、抑制血小板聚集 化学成分：延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素、延胡索丁素、延胡索戊素、延胡索己素、延胡索辛素、延胡索壬素、延胡索癸素、延胡索子素、延胡索丑素、淀粉、黏液质、挥发油及树脂 三、延胡索乙素的镇痛机理[3] 延胡索乙素生物活性最强，其左旋四氢巴马汀对脑内多巴胺（DA）受体有亲和力起通过阻断多巴胺DI受体增加脑内纹状体亮氨酸脑啡肽含量而产生镇痛作用。 四、提取方法[4]
镇痛药 定义：镇痛药——减轻或消除疼痛，但不影响意识和其他感觉。 分类： （1）麻醉性镇痛药（阿片类镇痛药、成瘾性镇痛药）——吗啡、可待因、哌替啶等 （2）非麻醉性镇痛药——阿司匹林、布洛芬等 PS： 疼痛：是多种原因引起的使患者痛苦的一种症状，是伤害性刺激通过痛觉神经传至中枢，经大脑皮质综合分析产生的一种感觉。 疼痛的分类： 镇痛药的分类： 一、吗啡及其相关阿片受体激动药 吗啡、可待因、哌替啶等 二、阿片受体部分激动药： 喷他佐辛、布托啡诺、丁丙诺啡 三、其他镇痛药： 罗（颅）痛定、曲马朵、布桂嗪（强痛定） 吗啡及其相关阿片受体激动药（一）——吗啡 一、体内过程 1、p.o，首关消除大（生物利用度F约为25%），皮下和肌肉注射吸收较好。15-30min起效、镇痛维持4-6h 2、血脑屏障通过率较低，但足以发挥作用。 二、作用机制 激动中枢神经系统的阿片受体，激活中枢“抗痛系统”而产生镇痛作用，使得P物质减少。 属麻醉药品，具有 成瘾性，注意与麻 醉药区别。
三、药理作用——中枢作用和外周作用 （一）中枢作用 （二）外周作用 四、临床应用 1.镇痛：除晚期癌症以外，一般短期用于其他镇痛药无效的剧烈疼痛，剂量需个体化 （1）胆绞痛和肾绞痛：与阿托品合用。 （2）心肌梗死性心前区剧痛 — 镇静和扩血管 （3）神经性疼痛疗效差（神经压迫性疼痛） 2.急性肺水肿所致心源性哮喘 急性左心衰竭引起肺水肿，导致呼吸困难。需强心、利尿、平喘药等综合治疗。
3.止泻：使推进性胃肠蠕动减慢，用于非细菌性、消耗性腹泻，对急、慢性腹泻均有效。细菌感染需加用抗生素。用阿片酊/复方樟脑酊。 五、不良反应 1）治疗量： 恶心、呕吐、眩晕、呼吸抑制、便秘、排尿困难（老年人多见）、胆绞痛、体位性低血压，偶见烦躁不安等情绪改变 2）耐受性和依赖性： 戒断症状：停药后出现兴奋、失眠、流泪、流涕、出汗、震颤、呕吐、腹泻、甚至虚脱、意识丧失等。《麻醉药品管理条例》，连续用药不得超过1周。 3.急性中毒 表现：昏迷、针尖样瞳孔、呼吸抑制、血压下降、少尿、体温下降，甚至呼吸麻痹。 抢救：阿片受体拮抗药——纳洛酮 人工呼吸，给氧。 4.禁忌症 分娩止痛、支气管哮喘、肺心病、颅内压高、肝功能严重减退、哺乳期妇女、新生儿、婴儿。 吗啡及其相关阿片受体激动药（二）——可待因 特点： 口服，F约为60%较吗啡高 其镇痛作用约为吗啡的1/101/12，但镇咳作用为吗啡的1/4，无明显镇静，呼吸抑制较轻 用于中等程度疼痛的止痛和剧烈干咳（伴胸痛） 无明显便秘、尿潴留及直立性低血压等不良反应，欣快感及成瘾性的发生率也低于吗啡。 吗啡及其相关阿片受体激动药（三）——哌替啶（度冷丁） 一、作用特点： 1）镇痛作用为吗啡的1/10，作用时间短 2）镇静、扩血管、呼吸抑制作用与吗啡相当 3）无镇咳作用 4）兴奋胃肠平滑肌作用时间短，不止泻，不便秘 5）对子宫平滑肌无影响，不对抗催产素，不影响产程 6）成瘾较慢，戒断症状持续时间较短 二、临床应用 1.镇痛 1）各种剧痛（多i.h或i.m,起效快，替代吗啡） 2）胆肾绞痛（合用阿托品） 3）分娩止痛（产前2-4h禁用） 2.麻醉前给药 3.心源性哮喘的辅助治疗（弱于吗啡） 4.人工冬眠
巴比妥类药物抗惊厥作用 1. 立题依据与实验内容 惊厥是由于中枢神经系统过度兴奋而引起的全身骨 骼肌呈强直 性或阵挛性抽搐，强烈的持续性惊厥可导致呼吸和循环衰竭， 甚至死亡，因此应及时用抗惊 厥药如苯巴比妥类药物救治。巴比妥类( barbiturates )药物能促进中枢 GABA 对GABA a 受 体的结合，增加GABA 介导的CI-1内流，延长CI-1通道的开放时间，引起超极化抑制性突触 效应，从而产生抗惊厥作用。尼克刹米( Nikethamide )为中枢兴奋药，过量中毒可以兴奋 脊髓引起惊厥，甚至死亡。本实验研究巴比妥类药物抗惊厥作用。 2. 试验路线与指导 (1) 实验动物：小鼠40只。 (2) 实验指标：30只小鼠有无惊厥发生，惊厥发生的时间、程度、结果。 (3) 试验路线： 1) 取小白鼠30只，称重，分组，编号，并放入烧杯内，观察正常活动。 2) 甲组小鼠腹腔注射 1%苯巴比妥钠0.1ml/10g 体重。 3) 10分钟后，30只小鼠均分别按组腹腔注射 5% 尼可刹米溶液0.1ml/10g 体重。 4) 乙组小鼠发生惊厥后，立即腹腔注射 0.5%异戊巴比妥 钠溶液 0.1ml/10g 体重。 5) 丙组小鼠发生惊厥后，立即腹腔注射生理盐水 0.1ml/10g 体重。 6) 比较3组小鼠有无惊厥发生，惊厥发生的时间、程度、结果。 7 )试验结果填入表1-1。 3. 试验器材与药品 天平，注射器(1ml ),大烧杯，1%苯巴比妥钠溶液，5%尼可刹米溶液，生理盐水，0.5% 异戊巴比妥钠溶液。 4. 可行性分析 本实验所需的实验器材与药品均简单易获得；在实验过程中可能遇到小 鼠 异常躁动不安现象，但小鼠较为温驯易抓获，且组员操作娴熟，能及时处理此问题。 5. 预期实验结果 巴比妥类药物具有抗惊厥作用。 6. 实验记录图表 谢远喜 201240010 周李 201240038
《中药药理学》实验教学大纲 课程名称：中药药理学 英文名称：Pharmacology of Traditional Chinese Medicine 课程性质：专业课、独立开课 适用专业：中药学 课程简介：该课程是中药学专业本科生教学的必修课程， 中药药理学是采用现代科学方法研究中药与机体的相互作用的一门学科。本门课是中药专业的专业方向课，总学时为54，其中课堂讲授22学时，实验32学时共8个实验。实验课的教学目的是验证课堂理论，使学生掌握中药药理实验的基本操作技能和科研方法，培养实事求是的科学作风，以及分析和解决问题能力，为中药事业和新药开发打下基础。 考核方式：单个实验考核：预习报告（设计方案）占30%，操作过程与结果占50%，实验报告项目占20%。 综合成绩：平时成绩占20%，试验考核占80%。 实验教材及参考书：张大方主编的《药理与中药药理试验》， 上海科技出版社2006年9月第二版。 实验一中药药理实验设计及基本实验技能训练 一、类别： 验证性实验 二、实验目的要求 1. 掌握中药药理实验设计的基本知识 2. 中药药理实验报告的基本要求 3. 中药药理实验样品的注意事项 4. 中药药理实验制剂的浓度表示法 5. 中药药理基本实验技能 中药药理实验研究设计和基本实验技能训练（2学时） 三、实验内容 1．实验动物的称重、标识。 2．大鼠、小鼠的灌胃、皮下注射、腹腔注射、静脉注射、采血方法的基本
技能。 3．动物给药剂量的计算和药物的配制方法。 4. 实验设计的基本原则、分组方法和原则。 四、学时安排 2学时 实验二祛风湿中药的实验设计方法及 秦艽对蛋清致大白鼠足肿胀、耳肿胀的影响 一、类别： 验证性实验。 二、实验目的要求： 1．熟悉中药抗炎相关实验的实验设计 2．掌握抗炎实验常用的实验方法及各自的特点及适用条件 3．掌握秦艽对小鼠足肿胀（蛋清法）的影响 4．掌握秦艽对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响 5．掌握中药药理实验的基本技能 三、实验内容 1．实验动物的称重、标识。 2．大鼠、小鼠的灌胃、皮下注射、腹腔注射、静脉注射、采血方法的基本技能。 3．动物给药剂量的计算和药物的配制方法。 4．中药抗炎相关实验的实验设计及常用实验方法的选择。 5．蛋清法和二甲苯法制造急性炎症模型的方法。 6．足趾部皮下注射的方法、肿胀率的测定和计算方法。 四、学时安排： 4学时 实验三药物对消化系统的作用实验设计及实验研究 一、类别： 验证性实验。 二、实验目的要求： 1．熟悉中药消化系统相关实验的实验设计。
药理学——解热镇痛抗炎药与抗痛风药 一、解热镇痛抗炎药（非甾体抗炎药） （一）共同特点 【共同作用机制】 抑制前列腺素合成所必需的环氧酶（COX），干扰前列腺素合成。 补充：COX有两种同工酶，即COX－1和COX－2。 补充：解热镇痛消炎药的分类 1.非选择性环氧酶抑制药： ——对COX－1和COX－2均有抑制作用。 2.选择性环氧酶抑制药： ——选择性抑制COX－2，而对COX－1的抑制作用弱。 意义：胃肠道不良反应减轻。 代表药：尼美舒利、塞来昔布、美洛昔康、罗非昔布等。 【共同药理作用】 一、解热作用 机制：抑制中枢COX，使PG合成减少； 特点：NSAIDs只能降低发热者的体温，但不能降至正常体温以下，而且不影响正常人的体温。 二、镇痛作用 机制：抑制外周病变部位的COX 特点：对慢性钝痛有效，对急性锐痛、严重创伤的剧痛、平滑肌绞痛无效。无成瘾性。 三、抗炎作用 机制：抑制炎症局部的COX； 特点：对抗炎症早期的红肿热痛，不能防止炎症发展和后遗症 （二）常用药物 1.阿司匹林（乙酰水杨酸）
【药动学】 ◇吸收：口服后易从胃和小肠上部吸收。 吸收过程中和吸收后，可被胃肠黏膜、血浆、红细胞和肝脏的酯酶迅速水解，产生水杨酸，故阿司匹林的t1/2仅有15min左右。 水杨酸以盐的形式存在，具有药理活性。 ◇分布： 水杨酸与血浆蛋白结合率为80%～90%； “阿依水、抢蛋白” 格列类、华法林、 被抢劫、被游离； 易过量、易中毒、 低血糖、低凝血。 游离型可分布于全身组织，也能进入关节腔、脑脊液、乳汁和胎盘。 ◇代谢：主要经肝药酶代谢。 ◇排泄： ①约25%以原形由肾脏排泄，其余与甘氨酸和葡萄糖醛酸结合后随尿液排出。 ②改变尿液的PH值，使碱化尿液，可加速排泄。 【药理作用】 一、解热镇痛作用 较强。适用于：感冒发热、肌肉痛、关节痛、痛经、神经痛和癌症患者的轻、中度疼痛等。 二、抗炎抗风湿作用 三、抑制血栓形成 二、抗炎抗风湿作用 ◇作用较强，但用量要比解热镇痛剂量大1～2倍，最好用至最大耐受量（口服每日3～4g）。 ◇急性风湿热患者服用后24～48h内退热，缓解关节红肿及剧痛，血沉减慢——因控制急性风湿热疗效确切，故用于该病的鉴别诊断。 ◇治疗类风湿关节炎——只是对症，可使关节炎症消退，疼痛减轻。 三、抑制血栓形成： 注意：小剂量（100mg/日） 机制：抑制血小板中的COX－1，减少TXA2（血栓素A2）的生成。 应用：心血管恶性事件的一级预防，可降低心梗、脑梗发生率。 【不良反应】 乙酰水杨酸，抑制COX（PGE） 解热又镇痛，抗炎抗风湿； 抑制血小板，防治血栓塞； 不良反应多，为您扬名易。 “为”——胃肠反应 “您”——凝血障碍 “扬”——水杨酸反应 “名”——过敏反应 “易”——瑞夷综合征 1.胃肠道反应： 原因：直接刺激胃黏膜； 抑制COX-1，抑制胃黏膜PGs合成。 表现：上腹部不适，恶心、呕吐及畏食常见。
抗癫痫药和抗惊厥药 一、概述 1. 癫痫发作的分类。 2. 抗癫痫药物的治疗机制 （1）电生理：抑制异常放电、抑制异常放电的扩散； （2）分子水平：增强GABA能神经元的功能，抑制兴奋性神经元的功能，抑制Na+、Ca2+通道的功能，增强K+、Cl-通道的功能。 二、常用抗癫痫药物及作用机制 1. 主要抑制钠通道的药物 1）Phenytoin Sodium（苯妥英钠，大仑丁） （1）药理作用：抑制异常放电的扩散，但对异常放电的形成无效； （2）作用机制：主要作用机制是在治疗量时即阻滞Na+通道，减少Na+内流，所以对各种组织的可兴奋膜，包括神经元和心肌细胞膜，有稳定作用，降低其兴奋性。还抑制神经元的快灭活型Ca2+通道，较大浓度时能抑制神经末梢对GABA的摄取。
（3）主要用途：①抗癫痫，是治疗大发作和部分性发作的首选药，但对小发作无效。②治疗中枢疼痛综合征，使疼痛减轻，发作次数减少。③抗心律失常，主要用于室性心律失常及强心苷类药物中毒所致的心律失常。 （4）不良反应：①胃肠道刺激；②神经症状，如眩晕、共济失调、精神错乱甚至昏迷；③牙龈增生；④叶酸吸收及代谢障碍，甚至发生巨幼细胞性贫血；⑤其他不良反应，如过敏等。 （5）体内药动学特点：口服吸收慢而不规则，不同制剂的生物利用度显著不同，且有明显的个体差异。多数在肝内质网中代谢为无活性的对羟基苯基衍生物，少数以原形由尿排出。消除速率与血浆浓度有密切关系，低浓度时按一级动力学消除；高浓度时，则按零级动力学消除，血药浓度可明显升高，容易出现毒性反应。 （6）药物相互作用：①竞争血浆蛋白高的结合；②异烟肼、氯霉素等肝药酶抑制剂可降低苯妥英钠的代谢；③苯巴比妥、卡马西平等肝药酶诱导剂可加快苯妥英钠的代谢；④苯妥英钠可加快皮质激素和维生素D的代谢。 2）Carbamazepine（卡马西平）：抑制Na+、Ca2+通道，增强GABA的作用，对精神运动性发作和大发作有效，并可用于治疗躁狂、抑郁症及神经痛。 3）Lamotrigine （拉莫三嗪）：新型抗癫痫药，抑制Na+、Ca2+通道，对部分发作及大发作（包括失神发作）。 2. 主要影响氯离子通道的药物 1）Valproate sodium（丙戊酸钠） 增加GABA合成，抑制降解、摄取，增强对GABA的反应性，可抑制Na+、Ca2+通道，为广谱抗癫痫药. 2）Phenobarbital（苯巴比妥） （1）抑制异常放电、抑制异常放电的扩散。 （2）作用机制：增加突触后Cl-内流，使膜超极化；抑制突触前Ca2+ 内流，导致NE、Ach和谷氨酸释放减少。 （3）主要用途：镇静、催眠、抗癫痫。 3. 主要作用于谷氨酸受体的药物
实验一附子炮制前后致小鼠中毒死亡的情况比较 实验目的：用小鼠死亡数观察附子炮制前后毒性的不同 实验原理：附子的有毒成份主要是乌头碱。它的性质不稳定，经长时间用水浸泡和加热煎煮炮制，都可使乌头碱水解成毒性较小的苯甲酰乌头胺和乌头胺。生附子中乌头碱含量高，经过炮制后乌头碱含量减少，毒性也降低，引起动物中毒死亡的剂量就比生附子大得多。实验器材：小鼠笼（或罐）、电子天平、注射器（1ml），小鼠灌胃针头。 药品：生附子和熟附子水煎液1g/1ml、苦味酸。 材料：小白鼠。体重18-22g，雌雄不拘。 实验方法 1，取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生附子和炮制后的附子水煎液灌胃。30min后观察两组小鼠中毒症状和死亡数有无不同。 2，生附子灌服后约20min动物出现腹部收缩，身体摇摆，步态不稳和不安静等现象；30min 左右可能死亡。而炮制附子水煎液灌服后则无此中毒现象。观察结果并记录。 实验结果： 思考题： 1.中药炮制后对临床有何指导意义 2.为预防附子中毒，应如何降低其毒性
延胡索炮制前后镇痛作用的影响 实验目的：通过醋酸扭体法观察延胡索炮制前后镇痛作用的变化 实验原理：延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱但优于复方阿司匹林，对钝痛的作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。生品中游离生物碱难溶于水，煎液中有效成分低，醋制后生物碱成盐，易溶于水，镇痛作用增强。 左旋四氢巴马汀是一个多巴胺受体阻断剂，其镇痛作用机制可能与阻断脑内多巴胺D1 受体，使纹状体亮氨酸脑啡肽含量增加有关。 实验方法： 取4只小白鼠，称重，用苦味酸标记后随机分为两组，分别0.2ml/10g的生延胡索和炮制后的延胡索水煎液灌胃。45分钟后分别腹腔注射0.7％冰醋酸溶液。15min后观察小鼠们15分钟内扭体的次数。 实验结果： 思考题： 1.炮制后延胡索镇痛作用增强的原因
镇痛与抗惊厥实验 一抗惊厥实验 摘要目的苯巴比妥钠具有良好的抗癫痫和抗惊厥作用，故其可以用于惊厥的治疗。而尼可刹米可以提高机体神经中枢的兴奋性，从而造成机体惊厥，故用尼可刹米复制惊厥模型后用苯巴比妥钠进行治疗，从而观察苯巴比妥钠的抗惊厥作用。方法分别前后腹腔注射苯巴比妥钠和尼可刹米后，观察惊厥发生的情况从而观察苯巴比妥钠的抗惊厥作用。结果与分析用苯巴比妥钠的小鼠惊厥率为0，而没有用的小鼠惊厥率高达100%，死亡率达50%，比较可以发现苯巴比妥钠具有良好的抗惊厥作用。 惊厥是由于中枢神经系统过度兴奋而引起的全身骨骼肌强烈的不随意收缩，出现强直性或者阵挛性抽搐。苯巴比妥钠属于苯巴比妥类药物，具有良好的中枢抑制作用，故具有抗癫痫和抗惊厥作用。本实验观察其抗惊厥作用。尼可刹米是一种呼吸兴奋剂，中毒剂量时可以造成机体惊厥甚至是死亡。由于尼可刹米的作用比较强而且本实验使用的是中毒剂量，故而应先腹腔注射一定量的苯巴比妥钠后，经过一定时间后再腹腔注射一定量的尼可刹米，观察有无惊厥的出现从而确定苯巴比妥钠的抗惊厥作用。 1 实验材料
1）实验动物：小白鼠 2）实验药品：苯巴比妥钠，尼可刹米，生理盐水 3）实验用具：注射器，电子称，小白鼠笼 2 实验步骤 1）每组取四只小鼠，称重，并分别编号为1,2,3,4号。 2）1,2两只小鼠腹腔注射苯巴比妥钠，0.1ml/10g，3,4两只小鼠腹腔注射生理盐水作为对照组，0.1ml/10g。 3）15min后，分别为四只小鼠注射尼可刹米，0.1ml/10g，并记录号时间。 4）观察并记录四只小鼠是否出现惊厥或者死亡。 3 实验结果 经过如上实验可以得到如下结果：表1 表1 组别实验组/只对照组/ 只 实验组惊 厥/只 对照组惊 厥/只 实验组死 亡/只 对照组死亡 /只 1 2 2 0 2 0 1 2 2 2 0 2 0 1 3 2 2 0 2 0 1 4 2 2 0 2 0 1 总数8 8 0 8 0 4 注：实验组为注射苯巴比妥钠的小鼠，对照组为注射生理盐水的小鼠 通过计算百分率可得表2 表2 实验惊厥百分率对照惊厥百分率实验死亡率对照死亡率0% 100% 0% 50% 4 实验分析 由以上实验结果可以看到，注射苯巴比妥钠的小鼠没有出现惊厥，也没有死亡。而注射生理盐水的小鼠惊厥出现百分率高达100%，
安定的抗惊厥作用 【实验目的】观察安定的抗惊厥作用，联系其临床用途。 【实验原理】惊厥系物理、化学或精神性的刺激所引发的全身骨骼肌不自主的强烈收缩，常见于小儿高热、破伤风、癫痫大发作、子痫和中枢兴奋药中毒等。 本实验所用的致惊厥药为尼可刹米，用量较大时可导致惊厥。抗惊厥药为安定，其用量大于镇静催眠量，故给完药后小鼠可能进入睡眠。 尼可刹米(可拉明)，对延脑的呼吸中枢有直接的兴奋作用。对神经系统的其他部位，在一般剂量时影响较小。对血管运动中枢虽无直接作用，但当呼吸中枢解除抑制后，可间接地加强心血管的功能。尼可刹米用于药物中毒或疾病所致的中枢性呼吸抑制，解除吗啡所致的呼吸抑制效果较好。 大剂量引起血压升高、心悸、出汗、呕吐、震颤及肌僵直，若出现以上症状应立即停止用药，以防惊厥。 小鼠惊厥的表现 阵挛性惊厥：出现弓背跳跃，触摸刺激后头部高频率颤动，之后四肢阵挛而倒地。 强直性惊厥：四肢伸直，身体僵硬。 惊厥模型的制备： 1．物理方法：⑴电休克法：以强电流通过角膜电极或耳电极，对动物脑部进行短时间刺激，引起惊厥发作。⑵听觉刺激。⑶光刺激。 2．化学方法：应用大剂量的化学药物使动物中枢神经系统过度兴奋，常用的药物有硝酸士的宁，戊四唑，印防己毒素和氨基脲等。 常用的抗惊厥药： 1．苯二氮卓类：如地西泮，为镇静催眠药，随剂量增大，相继出现抗焦虑、镇静催眠和抗惊厥作用。 2．巴比妥类：如苯巴比妥、异戊巴比妥、硫贲妥属镇静催眠药，随剂量增大，相继出现镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用。 3．硫酸镁，i.v.具有抗惊厥作用，Mg2+可拮抗Ca2+的作用，抑制神经递质传递和骨骼肌收缩，从而使肌肉松弛，临床常用于妊娠子痫。 【实验材料】器材：架盘天平、注射器、5#针头、玻璃钟罩。 药品：2.5%尼可刹米溶液、0.5%安定溶液、生理盐水。 动物：小白鼠。 【实验方法】 取小白鼠2只，称体重，编号，置于玻璃钟罩中观察小鼠正常活动。分别腹腔注射2.5%尼可刹米溶液0.2ml/10g，然后一只接着腹腔注射0.5%安定溶液0.05ml/10g，另一只注射等容量生理盐水，观察比较两鼠反应情况。 【实验结果】 将结果记录于下表中。
中药药理学实验指导中药教学部姚干编 重庆邮电学院生物信息学院
2005年02月10日 前言 我国中医中药历史悠久，理论体系完整，在历代临床实践中积累了丰富的药效学经验。中药和方剂是祖国医学的精华，其药理作用需要不断地加以研究与探索。中药药理学是采用现代科学技术方法来研究中药的组方、成分、作用机理及用途的一门前沿科学，而中药药理实验和中药药理学是不可分割的一门学科的两个组成部分，缺一不可。中药药理实验以中医药理论为指导，以中药功效为主线，运用现代药理学实验方法进行单味中药与经典方剂的研究，对继承、发扬祖国医药学这一伟大宝库的历史使命和实现中药现代化，有着非常重要的作用。 本实验指导是以中药专业培养计划为依据，按照《中药药理学》实验课程（本科）教学大纲的要求编撰而成的，主要供我院中药专业本科学生实验教学使用。 本实验指导首先对中药药理实验的基础知识与基本技术进行了简要介绍，选择的实验项目力求内容经典、实用，既与理论课有密切联系，又有实验课的独特体系；既有整体动物实验，又有器官水平实验；既有定性实验，又有定量实验；既有验证性实验，又有设计性实验。从而使学生初步具备对客观事物进行观察、比较、分析、综合和解决问题的能力，并验证、巩固和加深理解基本理论，从而初步掌握中药药理学实验的基本方法。
目录 中药药理学实验须知 3 中药药理实验的基础知识与基本技术 5 实验一生大黄、制大黄对小鼠排便时间和数量的影响17 实验二生大黄、制大黄对小鼠小肠运动的影响17 实验三秦艽对蛋清致大鼠后跖肿胀的影响18 实验四青皮对家兔离体肠平滑肌的影响19
实验五金铃子对小鼠的镇痛作用20 实验六人参对小鼠耐常压缺氧的作用20 实验七人参对小鼠游泳时间的影响21 中药药理学实验须知 一、中药药理学实验课的目的和要求 ㈠目的 中药药理学实验课的目的在于通过实验，使学生掌握中药药理学实验的基本方法，了解获得中药药理学知识的科学途径，验证中药药理学中的重要理论，更牢固地掌握中药药理学