哺乳期大鼠正畸牙移动中牙周组织血管内皮生长因子的表达

中国临床研究２０１５年１０月第２８卷第１０期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１５，Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１０　１２７７　

・论　著・　

哺乳期大鼠正畸牙移动中牙周组织血管内皮　

生长因子的表达　

陈娟娟，　李金源，　张彬，　袁荃，　陈丽　

华北理工大学口腔医学院，河北唐山０６３０００　

摘要：目的研究，Ｊ￣ｇＬ期大鼠牙周组织中血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在哺乳不同阶段的表达，探讨ｎ￣Ｌｘ＠ＶＥＧＦ　

表达的影响。方法选择５０只成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，随机抽取５只作为正常对照组，剩下４５只建立哺乳期大鼠　正畸牙移动动物模型，随机分成哺乳加力组、正常加力组、哺乳不加力组，每组１５只。每组按ＮｇＬ或加力７、１４、　

２１　ｄ时间段又均分为３组，每小组各５只。于各时间段的最后一天将各组大鼠处死，取静脉血采用电化学免疫分　

析法检测血清雌二醇水平；取大鼠上颌第一磨牙及附近牙槽骨组织块，进行ＨＥ染色和免疫组化染色，应用半定量　

分析牙周组织中ＶＥＧＦ的表达。结果哺乳能引起大鼠血清雌激素水平下降，加力能引起哺乳期及正常大鼠雌激　

素水平升高。哺乳加力组大鼠在不同，Ｊ￣－ｇＬ时间ＶＥＧＦ表达水平均高于哺乳不加力组和正常对照组，差异有统计学　

意义（Ｐ均＜０．０５）。哺乳加力组大鼠不同加力时间ＶＥＧＦ表达水平均高于正常加力组，差异有统计学意义　（Ｐ均＜０．０５）。结论哺乳期大鼠正畸牙移动过程中牙周组织中ＶＥＧＦ的表达增高，提示哺乳期牙周组织改建活　

跃，临床治疗宦采用轻力。　

关键词：Ｎ－％期；大鼠；正畸牙移动；血管内皮生长因子　

中图分类号：Ｒ一３３　Ｒ　７８３．５　文献标识码：Ａ文章编号：１６７４—８１８２（２０１５）１０—１２７７—０４　

Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　

ｔｏｏｔｈ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｒａｔｓ　

ＣＨＥＮ　Ｊｕａｎ—ｊｕａｎ，ＬＩ　Ｊｉｎ—ｙｕａｎ，ＺＨＡＮＧ　Ｂｉｎ，ＹＵＡＮ　Ｑｕａｎ，ＣＨＥＮ　Ｌｉ　Ｏｒａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｈｏｏｌ，Ｎｏｒｔｈ　Ｃｈｉｎａ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＳｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｎｇｓｈａｎ，Ｈｅｂｅｉ　０６３０００，Ｃｈｉｎａ　

Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＬＩ　Ｊｉｎ—ｙｕａｎ．Ｅ—ｍａｉｌ：ｋｏｕｑｉｎｇｘｉ２００８＠１６３．ｃｏｒｎ　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ（ＶＥＧＦ）ｉｎ　ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　

ｄｕｒｉｎｇ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｔｏｏｔｈ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｉｍｐａｃｔ　ｏｆ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　

ＶＥＧＦ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｆｉｆｔｙ　ｆｅｍａｌｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｌｅｃｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ．Ｆｉｖｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｒｖｅｄ　ａｓ　ｎｏｒｍａｌ　ｃｏｎｔｒｏｌｓ（ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）；　

ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｒａｔ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｔｏｏｔｈ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｒｅｍａｉｎｉｎｇ　４５　ｒａｔｓ，ｗｈｏ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　

ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　ｇｒｏｕｐ，ｎｏｒｍａｌ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１　５　

ｅａｃｈ）ａｎｄ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｒｅ・ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　７　ｄ，１４　ｄ　ａｎｄ　２１　ｄ　ｓｕｂｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝５　ｅａｃｈ）ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｒ　ｆｏｒｃｉｎｇ　

ｔｉｍｅ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｋｉｌｌｅｄ　ａｆｔｅｒ　７　ｄａｙｓ，１４　ｄａｙｓ　ａｎｄ　２１　ｄａｙｓ．Ｔｈｅ　ｓｅｒｕｎｌ　ｅｓｔｒａｄｉｏｌ（Ｅ２）ｌｅｖｅｌ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　

ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｂｌｏｃｋｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｍｏｌａｒ　ｏｆ　ｍａｘｉｌｌａｒｙ　ａｎｄ　ｎｅａｒｂｙ　ａｌｖｅｏｌａｒ　ｂｏｎｅ　ｗｅｒｅ　ｔａｋｅｎ　ｆ（】　ｐｅｒｆｏｒｍｉｎｇ　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｅｍｉ—ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　

ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｃａｎ　ｌｅａｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｒｕｍ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｏｆ　ｒａｔｓ，ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｉ）ｒｅｅ　ｃａｎ　ｌｅａｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｏｆ　ｓｅｒｕｌｎ　ｅｓｔｒｏｇｅｎ　ｌｅｖｅｌ　ｉｎ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｒａｔｓ　ａｎｄ　ｎｏｒｎｌａｌ　ｒａｔｓ．ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　

ｔｉｍｅｓ　ｉｎ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ａｌｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　

ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（ａｌｌ　Ｐ＜０．０５）．ＶＥＧＦ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｏｒｃｉｎｇ　ｔｉｍｅｓ　ｉｎ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　

ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ａｌｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｏｓｅ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ（ａＩ１　Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｈｉｇｈ—ｅｘｐｒｅｓ—　ｓｉｏｎ　ｏｆ　ＶＥＧＦ　ｉｎ　ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｔｏｏｔｈ　ｎｌｏｖｅｍｅｎｔ　ｏｆ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｒａｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｅｒｉｏ—　

ｄｏｎｔａｌ　ｔｉｓｓｕｅ　ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｉｎ　ｌａｃｔａｔｉｏｎ　ｒａｔｓ　ｉｓ　ａｃｔｉｖｅ，ａｎｄ　ｓｏ　ｌｉｇｈｔ　ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｆｏｒｃｅ　ｓｈｏｕｌｄ　ｂｅ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｉｎ　ｃｌｉｎｉｃ　ｔｈｅｒａｐｙ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌａｃｔａｔｉｏｎ；Ｒａｔ；Ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｃ　ｔｏｏｔｈ　ｍｏｖｅｍｅｎｔ；Ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　

ＤＯＩ：１０．１３４２９／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｊｃｒ．２０１５．１０．００４　通讯作者：李金源，Ｅ—ｍａｉｌ：ｋｏｕｑｉａｎｇｘｉ２００８＠１６３．ｃ

ｏｍ　中国临床研究２０１５年１Ｏ月第２８卷第１Ｏ期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１５，Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１０　

正畸牙移动是一个复杂的牙周组织改建过程，其　

改建过程受系统因素、激素、生长因子、机械力等诸多　

因素的调控。血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）是一种血　

管内皮细胞特异性有丝分裂原，能特异性地促进血管　

增殖，诱导血管新生　。已有研究表明，ＶＥＧＦ对成　

骨细胞的增殖能力有明显提高作用　，而且促进牙　

周膜细胞生长与功能活动　，骨形成过程的重要部　

分是ＶＥＧＦ调控下的血管发生　。Ｋｏｈｎｏ等　研究　

发现正畸加力后大鼠牙周组织中成骨细胞增多，　

ＶＥＧＦ的表达增强。本实验旨在研究在哺乳的内环　

境下，正畸牙移动过程中牙周组织ＶＥＧＦ的表达。　

１材料与方法　

１．１主要试剂与仪器　Ｉ抗：兔抗鼠ＶＥＧＦ抗体；　

ＡＢＣ试剂盒；二氨基联苯胺（Ｄｉａｍｉｎｏｂｅｚｉｄｉｎ，ＤＡＢ）显　

色试剂盒（以上均为武汉博士德生物工程有限公司　

产品）。　

１．２　实验分组选择成年雌性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只及　

雄性大鼠２０只（购Ａ北京维通利华实验动物技术有　

限公司），４月龄，体重（２２０±２０）ｇ，ＳＰＦ级。成年雌　

性Ｗｉｓｔａｒ大鼠５０只，随机抽取５只作为正常对照组，　

剩下４５只随机分成哺乳加力组、正常加力组、哺乳不　

加力组，每组１５只。每组按７、ｌ４、２１　ｄ时间段又均　

分为３小组，每小组５只。　

１．３模型制备采用阴道涂片法确定大鼠所处的动　

情周期的不同阶段，定期称重，在大鼠的下一个动情　

前期按雄、雌性１：Ｉ进行合笼，以查到孕栓为妊娠第１　

天，立即给予其单笼饲养，怀孕２１　ｄ后自然分娩。将　

仔鼠控制在６只，仔鼠于分娩后２１　ｄ断奶。　

１．４实验方法采用Ｋｉｎｇ提出的方法，稍有改动。　

加力装置包括：在大鼠上颌右侧第一磨牙和切牙颊　舌、近中侧牙冠近颈部磨一深约０．５　Ｈ１Ｈ１的沟，结扎　

丝（中０．０２５　ｍｍ）分别绕过磨牙和切牙颈部结扎，并　

用ＮｉＴｉ（　０．１２　ｍｍ）螺旋拉簧将两端连接。弹簧拉　

伸，赋加力值为５０　ｇ＿６　拉右侧上颌第一磨牙向近中做　

倾斜移动。　

１．５　指标检测　检测所有组别大鼠于加力或不加力　

７、１４、２１　ｄ后取静脉血应用电化学发光免疫分析法　

（ＥＣＬＩＡ）检测血清雌二醇水平。取上颌第一磨牙及　

其牙槽骨的组织块，行ＨＥ染色和免疫组化染色分　

析，切片以压力侧牙周组织中ＶＥＧＦ表达阳性染色的　

平均光密度值（ｍｅａｎ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｄｅｎｓｉｔｙ，ＭＯＤ）为参数进　

行半定量测定。　

１．６统计学分析采用ＳＰＳＳ　１７．０软件处理数据。　

对实验结果采用多变量重复测量方差分析比较各组　

各时问点之间的差异采用ＬＳＤ—ｔ检验进行两两比较。　

Ｐ＜０．０５表示差异有统计学意义。　

２结果　

２．１　各组大鼠血清雌激素变化的比较随着哺乳时　

间的延长，哺乳不加力组和哺乳加力组血清雌激素水　

平逐渐升高，不同时间点两两比较均有统计学差异　

（Ｐ均＜０．Ｏ１）。正常加力组各加力时间点血清雌激　

素水平两两比较均无统计学差异（Ｐ均＞０．０５）。哺　

乳加力组大鼠雌激素不同加力时间血清雌激素均高　

于哺乳不加力组（尸均＜０．０５），哺乳加力组大鼠雌　

激素不同加力时间均低于正常加力组（Ｐ均＜　

０．Ｏ１）。见表１。哺乳不加力组大鼠不同哺乳时间血　

清雌激素水平均低于正常对照组（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜　

０．Ｏ１）。见表２。正常加力组大鼠不同加力时间血清　

雌激素均高于正常对照组（Ｐ均＜０．Ｏ１）。见表３。