当前位置：文档之家 › 细胞凝集反应实验报告.

细胞凝集反应实验报告.

  • 格式：doc
  • 大小：1.73 MB
  • 文档页数：5

【实验题目】
细胞凝集反应

【实验目的】
1、了解细胞的表面结构。
2、掌握细胞凝集的原理。
3、掌握细胞凝集实验的操作方法。

【实验材料与用品】
1. 试剂：PBS缓冲溶液、0.9%的氯化钠溶液（生理盐水）
2. 器具：酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管
3. 材料：兔子静脉血

【实验原理】
1. 凝集素
凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集
细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动
物、脊椎动物、人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集
素，通常以其被提取的植物命名，凝集素为它们的总称。
在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。凝集素
使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素
互补的糖可以抑制细胞的凝集。
2. 细胞凝集
细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团，目前认为，细胞间的联
系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。
3. 细胞凝集的反应技术
（1）直接凝集反应技术
颗粒性抗原与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝
集成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集
原。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状
态。抗原和抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在相互对应的化学基团，因而发生特异
性结合，称为抗原抗体复合物，由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的排斥力，抗原表
面的亲水基团减少，此时已有凝集趋势，在电解质参与下，中和了抗原抗体复合物的大部分
电荷，使之失去了经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见的凝集
反应。
（2）间接凝集反应技术
可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒表面上，当这些致敏的颗粒与相应
的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质的参与下，这些颗粒就会发生
凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应技术。
4. 载体
具有吸附抗原（抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物
的红血球、某些细菌等。
良好的载体有以下几点基本要求：
（1）在生理盐水或缓冲液中无自凝现象；
（2）大小均匀；
（3）比重与介质相似，短时间内不沉淀；
（4）无化学或血清学活性；
（5）吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性；
目前使用最广泛的是人的O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广，因其来源方便，另外绵
羊红血球的表面有大量的糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一
致。
【实验步骤】
一、大体流程

二、具体操作
1、称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡24小时，浸出的粗提液中即含有可溶性
土豆凝集素。（老师已做好）
2、抽取兔子静脉血液（加抗凝剂）1ml，加生理盐水3ml，在1000r/min条件下，离心5min，
重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞悬液。
3、分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞悬液各一滴，置双凹片左孔内，充分混匀。
4、同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右孔内，充分混匀，
做对照实验。
5、摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。

【实验结果与分析】
I
.如图1、图2所示：刚开始计时时，两侧溶液均无凝集现象；4min左右时，可看到双凹片
左侧溶液中出现凝集现象，一部分血细胞在中央聚集呈沙粒状，溶液周围较澄清；而右侧溶
液无凝集现象。说明土豆凝集素可以使血液发生凝集，而PBS缓冲液则不能。

图1: 刚开始时双凹片两侧溶液对比图 图2：4min时双凹片两侧溶液对比图
II.如图3、图4所示：在10×10显微镜下观察，可看到左侧溶液中血细胞聚集，凝结成块状，

土豆凝集素+红
细胞悬液 混合
PBS+红细胞悬

液 混合（对照）

摇晃5-10min
观察
显微镜下观察

取兔子静脉
血配置1％
红细胞悬液
而右侧溶液中血细胞分散均匀，呈透明状。

图3: （10×10）显微镜下观察图（左侧） 图4：（10×10）显微镜下观察图（右侧）
III
. 在高倍镜下观察如图5所示，可较清楚的看到血细胞聚集在一起，还可看到少数未发生

凝集的血细胞；

由以上的观察可知：细胞凝集的时间较快，4min左右就可以发生明显凝集现象；细胞凝
集的时间也受到土豆凝集素的浓度，以及血细胞的浓度影响，一般来说，凝集素的浓度越高，
血细胞的浓度越高，细胞凝集的时间也会越短，凝集现象也越明显，但在本次实验中未进行
不同浓度对凝集时间的影响的实验； 从空白对照还可以看出，细胞发生凝集时凝集素必不可
少的，没有细胞凝集素，细胞几乎不发生凝集。

实验反思
：

第一次滴加完溶液后，在晃动双凹片的过程中因操作不熟练，使两个孔中的液体混到了
一起，因此重新滴加了一次；在使用双凹片时要注意摇动的技巧，不可前后或左右单一地摇
动，应该一手固定，一手成环形方向摇动，使凹槽内的液体转动起来，同时注意滴加的液体
不宜过多，若加多了可用吸水纸吸掉部分多余液体，避免两个凹槽内的液体相互接触；
【注意事项】

高倍镜下（10×40），
观察到的凝集现象
1. 实验前确定好双凹片的反正面，做好适当标记 ；
2. 注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免使双凹片的2个孔中的液体混合；
3. 摇晃双凹片时要注意摇动的技巧，不可前后或左右单一地摇动，应该一手固定，一手成
环形方向摇动，使凹槽内的液体转动起来；
4. 显微镜下观察时，注意淀粉球和细胞的区分；淀粉球呈白色球状，略大于细胞；
5. 实验过程中若凹槽内的水分蒸发过多，应及时补充PBS缓冲液，以免观察不到实验现象；
6. 换用高倍镜下观察时，注意避免污染镜头，若液体过多，应用吸水纸吸取部分液体在进
行高倍镜下的观察；

合集下载

细胞生物学实验报告——凝血

细胞生物学实验报告——凝血

图1. 凝集素介导的细胞与分子或细胞间相互作用模型（引自Chapman and Hall 1989）。

A. 同种细胞间相互作用。

B. 不同种细胞间相互作用。

在本实验中，土豆块茎凝集素介导的红细胞凝集属于A 类中由上至下数第二种类型，即凝集素可溶，可以同时与两个红细胞表面的糖蛋白寡糖链结合，在两个红细胞之间形成连接。

山东大学细胞生物学实验报告植物凝集素介导的红细胞凝集反应姜政 2012/10/6实验目的：观察凝血的过程和凝血后红细胞的聚集状态，理解细胞间凝集反应与细胞膜表面结构的关系，了解植物凝集素使红细胞凝集的基本原理和凝集素的应用领域。

实验原理：凝集素（Lectins ）是一种能与细胞膜表面糖蛋白寡糖链特异性结合的蛋白质，多数含糖，广泛存在于植物提取物、动物组织、各种微生物包括病毒中，其中以植物凝集素（Phytohemagglutinin ，PHA ）分离到的种类最多。

植物凝集素在植物体内主要参与防卫机制[1]，识别入侵微生物和愈合伤口，在豆类植物中，凝集素还与植物与特定固氮菌形成共生有关[2]；在体外，凝集素最典型的效应是引起细胞凝集。

通常认为，凝集素介导细胞凝集的基本原理是：可溶性凝集素分子能与细胞膜表面的糖蛋白寡糖链特异性结合，使不同细胞的糖蛋白通过凝集素分子彼此连结，进而引起细胞间凝集（图1）。

红细胞膜表面有大量糖蛋白，其中一些糖蛋白具有特异性，比如人类A 型红细胞表面的α-N -乙酰-D-半乳糖胺和O 型红细胞表面的α-L-海藻糖就分别决定了人类的A 血型和O 血型[3]。

本实验就是利用植物凝集素与红细胞表面糖蛋白受体的特异性结合实现红细胞凝集。

土豆块茎凝集素（potato tuber lectin ）是一种能结合几丁质的富含羟脯氨酸的糖蛋白，单体分子量约50, 000，包含至少三个不同的结构域，其中富含胱氨酸的区域与麦胚凝集素（wheat germ agglutinin ，WGA ）等几丁质结合蛋白具有同源性[1, 4]。

凝集实验报告

凝集实验报告

凝集实验报告篇一：细胞凝集反应实验报告细胞生物学实验报告一．二．实验名称：细胞凝集反应实验原理：细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。

目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。

凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。

常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。

凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。

血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。

三．实验用品：土豆块茎显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2.4.2%的红细胞四．实验步骤：1. 称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。

2. 以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。

3. 分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充分混匀。

细胞凝集反应实验

细胞凝集反应实验

细胞凝集反应王玉琼201005232142 齐鲁医学班一实验目的：1了解细胞膜的表面结构2了解血细胞凝集原理3学习研究细胞凝集反应的方法二实验原理：细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。

目前认为，细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。

凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集细胞核刺激细胞分裂的作用。

凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

三实验用品：PBS缓冲液显微镜双凹载玻片滴管土豆凝集素土豆凝集素的提取：去皮土豆块茎2g，加10mLPBS缓冲液浸泡24h，所得粗提液中既含有可溶性土豆凝集素.1%兔血红细胞2.1%兔血红细胞制备：抽取兔静脉血1mL加抗凝剂，加入3mL生理盐水，1000r/min离心5min，重复洗涤三次。

按红细胞压积配成1%红细胞悬浊液。

四实验步骤：1．分别用滴管吸取土豆凝集素和1%兔血红细胞各一滴，置于双凹片左孔混匀。

2．吸取PBS缓冲液各一滴置于双凹片右孔混匀。

3．摇晃5-10min观察，并以低倍镜镜检。

五实验结果：反应前反应后（左为混合了PBS的兔血红细胞，右为混合了土豆凝集素的兔血红细胞）发生凝集的细胞未发生凝集的细胞图2 低倍镜（*10）下混合了了土豆凝集素（左）和PBS缓冲溶液（右）的兔血红细胞观察结果分析：混合土豆凝集素9分钟时细胞开始发生凝集，可以观察到细小沙粒状的细胞团，随时间流逝小细胞团变大。

如图1可看到，混合了土豆凝集素的兔血红细胞（右侧）聚集成块，周围液体较澄清；而混合了PBS缓冲溶液的兔血红细胞（左侧）未发生凝集，液体浑浊。

低倍镜下镜检（图2）可看到，凝集了的细胞聚成一簇不规则的团，而未发生凝集的红细胞很均匀。

实验4 细胞凝集反应

实验4 细胞凝集反应


不同饱和度硫酸胺沉淀蛋白质表
五、实验报告及作业
1.绘图表示血细胞凝集现象，并说明原因。 2.植物细胞凝集素在鸡红细胞凝集过程中起 什么作用？
3.哪些因素影响细胞凝集反应？
（3） 称取韭菜叶片5g，切成小片 5 mL 生理盐水 ↓ 研磨，过滤， 离心（5000r/min）20 min，留上清液 ↓
上清液加相应硫酸铵至60%饱和度（边加入边用玻璃棒搅 拌至完全溶解），离心（5000r/min）20 min，沉淀用1ml 磷酸缓冲液溶解 ↓ 载玻片上滴一滴韭菜凝集素 ↓ 再滴一滴2％红细胞液，充分混匀 ↓ 静置10 min ↓ 低倍显微镜下观察血球凝集现象
仪器与器材：
• 离心机，光学显微镜 • 研钵，药匙，纱布，离心管，带刻度, 滴管， 烧杯，玻璃棒，量桶，载玻片，盖玻片， 滤纸，吸水纸。
四、实验方法
① 2% 鸡红细胞悬液制备
以无菌方法抽取鸡翅下静脉血液（5mL注射器
用1%肝素溶液浸润）1mL，用生理盐水洗3次，
每次1500 r/min，离心5 min，最后按沉淀压积的
实验4 细胞凝集反应
一、实验目的
1、学习研究细胞凝集反应的方法
2、了解细胞发生凝集反应的原因
二、实验原理
凝集素 :一类可逆结合特异糖基的蛋白质，与糖的 运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞 分裂的调控有关。 细胞凝集：凝集素与细胞表面的糖分子连接，在细 胞间形成“桥”，加入与凝集素互补的糖分子可 以抑制细胞间的凝集反应
性质：
为糖蛋白(少数例外) 凝集反应所必需的金属离子：Ca2+和Mg2+ 所含糖种类在动物、植物和微生物中不同
特异性：
一种凝集素具有对某一种特异性糖基专一性结合