脱氢表雄酮在大鼠胃上皮细胞中的免疫定位

第14卷　第2期医学研究生学报V o l.14　N o.2　2001年4月Jou rnal of M edical Po stgraduates A p r.2001脱氢表雄酮在大鼠胃上皮细胞中的免疫定位梁　涛1,　方泰惠1,　梁　卫2(1.南京中医药大学药理教研室,江苏南京210029;2.解放军南京空军医院中医科,江苏南京210002)摘要:　目的:研究脱氢表雄酮(DH EA)在大鼠胃上皮细胞中的定位。

　方法:采用免疫组织化学SABC法。

　结果:大鼠胃小凹上皮细胞、胃底腺壁细胞呈DH EA免疫反应阳性,阳性物质分布于胞质内,胞核阴性。

胃底腺其他细胞呈免疫反应阴性。

　结论:以上结果提示,胃小凹上皮细胞、胃底腺壁细胞含有DH EA,DH EA对消化道可能具有重要的调节功能。

关键词:　脱氢表雄酮;　大鼠;　免疫组织化学;　定位中图分类号:　R446.62 文献标识码:　A 文章编号:　100828199(2001)022*******ΞI mmunohistochem ical study of dehydroepi a ndrosterone i n rat gastric epitheli a l cellsL I AN G T ao1,　FAN G T ai2hu i1,　L I AN G W ei2(1.D ep a rt m en t of P ha r m acology,U n iversity of T rad itiona l Ch inese M ed icine,N anj ing210029,J iang su Ch ina;　2.D ep a rt m en t of T rad itiona l Ch inese M ed icine,454th H osp ita l of PL A,N an2 j ing210002,J iang su,Ch ina)Abstract:　O bj ectives:To study the localizati on of dehydroep iandro sferone(DH EA)in rat gastric ep ithelial cells.　M ethods:T he i m m unoh istochem ical SABC w as u sed.　R esu lts:T he p arietal cells in gastric ep ithelial cells app eared DH EA po sitive i m m une reacti on.T he po sitive sub stance w as distribu ted in the cytop las m and negative in the nuclei.　Conclusions:Parietal cells had DH EA,w h ich m igh t p lay an i m po rtan t ro le in the regu lati on of digestive functi on.Key W ords:　I mm unoh istochem ical;　L ocalizati on;　DH EA;　R at0　引 言 脱氢表雄酮(DH EA)是一种类固醇激素,是合成雌激素的前体物质,具有引起肾上腺功能初现、提高细胞色素P450的水平及使过氧化物体增殖等多种生理功能1。

已有研究证明,DH EA可存在于大鼠的肾上腺、子宫、睾丸等部位2。

消化器官中的胃是否有DH EA的存在,其免疫定位如何,未见报道。

本文用免疫组化法研究胃中DH EA细胞的分布,为进一步研究DH EA对胃的生理调节功能提供形态学依据。

1　材料和方法1.1　试剂　兔抗DH EA抗体由第四军医大学姚兵博士惠赠。

链酶亲合素2生物素化过氧化物酶试剂盒(strep t avidin bi o tin2peroxidase comp lex,SABC)为武汉博士德生物工程公司产品,R PM I1640培养基为美国Sigm a公司产品,小牛血清为浙江四季青生物制品公司产品。

1.2　组织材料　雄性SD大鼠5只,体重250g左右(本校实验动物中心提供),动物经断颈处死后,立即取出胃,投入Bou in液固定12h左右,常规石蜡包埋,切成6Λm厚的切片,用于免疫组化研究。

1.3　免疫组化程序　石蜡切片,脱蜡水化后,按免疫组化ABC法程度进行染色,第1抗体为兔抗DH EA抗体1∶100稀释。

第2抗体为生物素化的羊抗兔IgG抗体1∶200稀释,SABC复合物的稀释度为1∶100,加第1抗体后在4℃冰箱内孵育过夜,加第2抗体后在室温下孵育1h,加ABC复合物后在室温下孵育45m in。

以上各步骤之间均用0101 m o l L磷酸缓冲液(PB S,pH714)洗5m in×3遍。

最后用015g L DAB20101%H2O2新鲜混合液滴・511・Ξ收稿日期:　2000211202 作者简介:　梁　涛(1973-),女,江苏南京人,南京中医药大学药理教研室,硕士研究生,从事心血管方面研究。

片显色10m in ,镜下控制显色程度,常规脱水,透明封片。

染色结果用O lym p u s BH 22显微镜观察并摄片。

阴性对照分别用正常兔血清取代第1抗体及用PB S 取代第1抗体进行孵育。

2　结 果 免疫组化反应的结果显示,DH EA 免疫反应产物呈棕色,背底不着色,反差明显,易于识别,阴性对照试验均呈阴性反应。

石蜡切片的免疫组织化学结果显示,胃小凹上皮细胞及胃底腺壁细胞呈DH EA 免疫反应阳性,阳性物质分布在胞质内,胞核阴性(图1)。

胃底腺壁细胞呈DH EA 免疫反应阳性,阴性物质分布在胞质内,胞核呈阴性反应(图2)。

胃底腺的其他细胞呈DH EA 免疫反应阴性。

图1　胃小凹上皮细胞呈DH EA 免疫反应阳性,阳性物质分布在胞质,胞核阴性(400×) F igu re 1　T he ep ithelium of gastric p it w ere show nDH EA i m m uno reactivity in cytop las m w ith negative nuclei (400×) 图2　胃底腺壁细胞呈DH EA 免疫反应阳性,阳性物质分布在胞质,胞核阴性(400×) F igu re 2　Parietal cells in gastric gland w ere show nDH EA i m m uno reactivity in cytop las m w ith negative nuclei (400×)3　讨 论 DH EA 是甾体类激素,是合成性激素(睾酮和雌醇十九碳类固醇)的前体。

已有研究发现,DH EA 及其结合物可存在于被切除肾上腺和阉割的雄性大鼠脑中,提示其可由中枢神经系统局部生物合成。

最近的研究发现,下颌下腺内存在DH EA ,且由下颌下腺上皮细胞自身合成。

大鼠消化道也具有使孕烯醇酮转化为DH EA 的能力,说明生物体的许多器官均可合成DH EA 3。

传统理论认为,胃壁细胞具有分泌胃酸的功能,胃小凹上皮细胞具有分泌消化酶的功能,但最近的一系列研究发现,胃小凹上皮细胞及胃底腺壁细胞可产生促性腺激素释放激素(GnRH )及GnRH 受体4,5。

本实验观察到胃小凹上皮细胞及胃底腺壁细胞含有DH EA ,提示这两种细胞的功能比较广泛。

M o rfin 2R (1994)发现,在给小鼠注射溶菌酶前2h 注射DH EA ,血清中抗溶菌酶IgG 的含量明显高于没有加DH EA 组,提示DH EA 参与了机体免疫应的调节6。

R as m u ssen 等7也认为DH EA 在肠道寄生虫疾病的防治中充当了有效的预防因子,是一种升调免疫的参数。

Sh ibata 8的研究发现:①DH EA 可参与糖代谢的调节,使肝中62磷酸葡萄糖脱氢酶的含量增加;②DH EA 可参与内分泌的调节,降低血清中的T 4的含量,而使T 3的含量增加。

本实验证明,DH EA 可在胃小凹上皮细胞及胃底腺壁细胞合成,提示DH EA 可能参与消化功能的调节,这可能为胃病的治疗提供一条新的途径,而且也为研究中药治疗胃病的机制提供良好的实验指标。

但是,DH EA 在消化系统中具体参与哪些功能的调节,尚待进一步探讨。

参考文献:1　M esiano S ,Jaffe RB .D evelopm ental and functi onal bi o logy ofthe p ri m ate fetal adrenal co rtex[J.Endoc R ev,1997,18(3):378.2　Pelletier G ,D upont E ,Si m ard J ,et al .O ntogeny and subcel 2lular localizati on of 3beta 2hybroxystero id dehydrogenase in hum an and rat adrenal ,ovary and testis [J .J Stero id B i ochem M o l B i o l ,1992,43(5):451.3　C laudu L e Goascogne ,N ico le Sananes ,Bernard Eychenne ,etal .A ndrogen bi o synthesis in the stom ach :Exp ressi on of cy 2toch rom e P 45017(2H ydroxylase17,20lyase m essenger ri 2bonucleic acid and p ro tein ,and m etabo lis m of p regneno lone and p rogesterone by parietal cells of the rat gastric m uco sa [J .Endocrino logy ,1995,136(4):1744.4　姚　兵,黄威权,孙　岚.大鼠消化道促性腺激素释放激素受体的免疫组织化学研究[J.解剖学报,1999,30(2):152.5　姚　兵,黄威权,莆若蕾,等.大鼠消化道促性腺激素释放激素受体mRNA 的原位杂交的研究[J .解剖学报,2000,31(4):72.6　M o rfin 2R ,Courchay 2G .P regneno lone and dehydroep iandro 2sterone as p recurso rs of native 72hydroxylated m etabo lites w h ich increase the i m m une response in m ice [J .J Stero id B i ochem M o l B i o l ,1994,50(122):91.7　R as m ussen KR ,M artin EG ,H ealey M C .Effects of dehy 2droep iandro sterone in i m m uno 2supp ressed rats infected w ith cryp to spo ridium parvum [J .J Parasito l ,1993,79(3):364.8　Sh ibata M ,H asegaw a R ,I m aida K ,et al .1995Chemop re 2venti on by dehydroep iandro sterone and indom ethacin in a rat m ulti o rgan carcinogenesis model [J.Cancer R es,1995,55(21):4870.(本文责任编辑　石　东)・611・医学研究生学报2001年4月　第14卷　。