扫描电镜制样经验分享---生物样品

１７２　实　验　室　研　究　与　探　索　第３２卷　

（上接第５３页）　参考文献（Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ）：　

［２］　［３］　［４］　［５］　［６］　［７］　

［８］　［９］　郭素枝．扫描电镜技术及其应用［Ｍ］　２００６：７４—８４．　徐柏森，杨静．实用电镜技术［Ｍ］　２００８：６７—７１，９３－９６．　厦门：厦门大学出版社　南京：东南大学出版社　曹君迈，贝盏临，江涌，等．枸杞花蕾扫描电镜制样方法的探　讨［Ｊ］．北方园艺，２０１０，２０１０（３）：３０－３２．　孙京田，谢英渤．生物医学扫描样品制备中几种干燥方法的比　较［Ｊ］．实验室研究与探索，１９９９，１８（３）：５２　５５．　郭素枝，季清娥．昆虫扫描电镜样品干燥法［Ｊ］．福建农业大学　学报，２００１，３０（２）：２６２・２６５．　李蕾，刘奇志，王玉柱，等．线虫扫描电镜样品制备技术的比　较［Ｊ］．电子显微学报，２００８，２７（３）：２５５—２６０．　钱天乐，周逸卿，邹珍友，等．微生物扫描电镜样品清洗方法的　改进与固定干燥方法比较［Ｊ］．安徽农业科学，２００９，３７（２３）：　１０８８６—１０８８８．　郭素枝，章淑玲，陈玉芬，等．甘薯茎线虫的扫描电镜制样方法　［Ｊ］．福建农林大学学报（自然科学版），２００５，３４（１）：４３－４５．　孔祥林，骆荣，刘鲜林，等．贵阳腐霉菌丝体及无性繁殖阶段　的扫描电镜形态学观察［Ｊ］．电子显微学报，２００８，２７（４）：３３１．　３３５．　蔡秀珍，刘克明，刘锦辉，等．凤仙花属两种植物花粉的扫描电　镜制样研究［Ｊ］．激光生物学报，２００７，１６（１）：１０９—１１１．　陈新芳，刘春玲，杨秉耀．五指毛桃花粉扫描电镜样品的制备　［Ｊ］．仲恺农业技术学院学报，２００４，１７（４）：５５．５８．　浦卫琼，王扬，喻盛甫，等．柑桔寄生线虫扫描电镜制样技术　比较研究［Ｊ］．电子显微学报，２００３，２２（６）：６６４￣６４．　王响英，吴淑燕，李苏安，等．叔丁醇脱水干燥法在游离细胞扫　描电镜样品制备中的应用［Ｊ］．苏州大学学报（医学版），２００５，　２５（５）：８３４－８３５．　路菊，陶忠芬，黄文琪，等．Ｃｙｔｏｄｅｘ．３微载体负载人骨髓问　充质于细胞的培养及扫描电镜样品的制备与观察［Ｊ］．电子显　微学报，２００６，２５（８）：２４３－２４４．　王丽，闫　静，张连威，等．杯状细胞扫描电镜的观察［Ｊ］．　电子显微学报，２００８，２７（４）：３１９－３２１．　王响英，吴淑燕，李苏安，等．叔丁醇干燥微波超快扫描电镜样　品的制备方法［Ｊ］．电子显微学报，２００５，２４（４）：４４３－４４３．　张献彩，张雷．糖尿病小鼠小肠黏膜扫描电镜的观察［Ｊ］．重　庆医学，２０１１，４０（２８）：２８１５－２８ｌ６．　

１ 相关仪器的信息：

透射电镜：JEOL(公司) JEM-1230（型号） TEM，产地：日本

超薄切片机：Reichert-Jung Ultracut E ultramicrotome，产地：奥地利

扫描电镜：Philips XL30 ESEM，产地：捷克

临界点干燥仪：Hitachi HCP-2 Critical point dryer，产地：日本

真空喷镀仪：Eiko IB5 ion coater，产地：日本

包埋剂：SPI-CHEM Spurr resin，产地：USA

TEM样品包埋块制作有关注意事项

一、 取材：

1、动作迅速：组织离体后，应将其快速放入固定液中，使组织细胞尽可能保持原来的生活状态；

2、减少损伤：选择锋利切割器械，减少牵拉或挤压组织；

3、组织块大小：一般要小于1mm3。

二、固定：固定是指用化学固定剂或一些物理方法迅速杀死细胞

的过程，目的是尽可能保持细胞的原有生活状态，不发生位移，减少组织结构变化。固定剂的主要作用是使蛋白质、脂质等生物大分子发生某种交联。

1、用固定液固定的样品若漂浮在溶液表面，应通过抽真空的方法让样品沉入溶液中

2、使用锇酸的注意事项

I 通风橱中的锇酸溶液为2%的储备液，使用之前需用0.2MPBS或 ２ 二甲砷酸盐缓冲液稀释成1%的锇酸溶液。

II 锇酸为剧毒、极易挥发的试剂，必须在通风橱中操作，废液必须收集在密闭容器中。第一次使用锇酸的同学，请务必获得老师或其它熟悉操作人员的指导。

三、漂洗：应彻底漂洗干净，减少固定液与固定液或与脱水剂之间的反应。

四、脱水：脱水是将组织中的游离水彻底清除的过程。由于常用的包埋剂大都是非水溶性树脂，只有将生物组织中的游离水清除干净，包埋剂才能浸入组织。

脱水过程中应注意：

I 逐级脱水而不能急剧脱水；

II更换溶液时动作要快，特别是不要让组织离开溶液，否则会在组织内外产生气泡；

III脱水过程中若要长时间停留或过夜，应放在70%脱水剂中，并在

1：扫描电镜观察时，找准一个样品先用低倍镜观察团聚体总体的形貌，然后寻找一个好一点单颗粒的总体形貌，然后在这单颗粒上用高倍镜观察它的细节。然后在寻找另外一个区域去观察样品，仍按上述方法观察。

2：对于不导电的样品，最好还是要喷金或者是喷碳，不然拍出来的图片不会很光滑，很模糊，就不好看。

3：

这是有机室SEM：

SU800：日立仪器的型号

1.5KV：加速电压

2.6mm：镜头距样品的距离

3.50K：表示放大了3500倍

SE(U):二次电子接收器型号

4：可以用PS调节一下图片的亮度和对比度。（仪器上面有两个按钮brightness

contrast）

5：弱磁性样品制样时应选用荧胶法制样，然后用磁铁将上面的颗粒吸一下，SEM的样品台是铝制的。

6：加速电压越高，分辨率越高，如果样品不导电，则荷电现象严重，拍出来有比较黑的地方。

扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法

扫描电镜是一种常用的高分辨率显微镜，广泛应用于科研、医学、材料科学等领域。要想获得清晰的成像结果，除了设备本身的性能外，样品的处理和成像参数的设置也十分关键。下面将介绍扫描电镜的样品处理技巧和成像参数设置方法。

一、样品处理技巧

1. 表面清洁：在进行扫描电镜观察之前，首先要保证样品表面的干净和整洁。可以使用超声波清洗仪或一些特定的溶液进行清洗，去除可能存在的灰尘、油脂等污染物。

2. 干燥处理：为了避免样品表面的水分干扰成像结果，可以通过空气吹干、真空干燥或冷冻干燥等方法进行处理。不同的材质和尺寸可能需要不同的干燥处理方法，要根据具体情况选择合适的方式。

3. 导电涂层：扫描电镜通常对导电性要求较高，因此对于非导电性的样品，需要进行导电涂层处理。常用的导电涂层材料有金、铂、铜等，可以使用溅射、喷镀等方式进行涂层。涂层的厚度应该适中，过厚会影响成像的清晰度。

4. 极性处理：对于有生物学样品，如细胞、组织等，常常需要进行极性处理。极性处理可以通过化学固定、盐水处理等方式进行，使样品保持其原有的形态和结构。

5. 切片制备：对于一些需要进行截面观察的样品，如材料样品或生物样品的超薄切片等，需要使用显微切片机进行切割。切片的厚度和质量直接影响到成像结果的清晰度和分辨率。

二、成像参数设置方法 1. 加速电压：扫描电镜的成像主要依靠电子束与样品表面的相互作用。电子束的加速电压是成像参数中的重要参数，不同的样品需要不同的电压。一般来说，低电压会使成像清晰度增加，但是对于一些厚度较大的样品，需要较高的电压穿透进而成像。

2. 样品离子束扫描电流：样品受到离子束扫描电流的刺激时，会发生荧光反应或散射，产生成像信号。这个参数需要根据具体样品的离子束离散化程度进行调整，影响着样品的信号强度和噪声水平。

3. 探测器设置：扫描电镜中常用的探测器有二次电子探测器和透射电子探测器。二次电子探测器对于表面形貌的观察很有帮助，而透射电子探测器可以获得材料内部的结构信息。选择合适的探测器对于获得不同层次的成像结果具有重要意义。