检定菌管理规程
1目的：
规范药品微生物学检定用菌的管理，确保检定菌正确发放、使用，销毁。
2范围：
适用于检验用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁。
3职责：
检定菌保管、使用人员及各有关部门对本规程的实施负责。
4参考文献：
4.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）
4.2《中国药典》（2015年版四部）
5定义：
5.1检定菌：是指微生物测定和其它检查用的标准菌种。
5.2标准菌株：来自认可的国内或国外菌种保藏机构。
5.3标准贮备菌株：标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，分装于
菌种冻存管，采用低温冷冻干燥、液态贮存、超低温冷冻（低于-30℃）
等方法保存。
5.4工作菌株：采用标准贮备菌株制备转种或实验用的菌株。
6规程
6.1检定菌的申购：检定菌由质量管理部根据使用情况（包括临时检验需要）
，列出计划，相关领导审批。
6.2由采购部向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌（标准菌
种），或直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确
定菌种的代数，以便传代时控制代数。
6.3标准菌株的接收
6.3.1对新购进的标准菌株应仔细核对菌种标签、包装完整性及随菌种附
有的说明书。
6.3.2包装破损的应彻底进行消毒、灭菌处理，使其不得污染其它物品。
6.3.3符合要求的，应点清数量，同时将检定菌的所有信息，填写《检定
菌接收、使用、销毁记录》。
6.4检定菌的保存
6.4.1购买的标准菌株直接存放于2-8℃冰箱保存。
6.4.2工作菌种的保存：工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在
适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱
中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，菌种保存人员应定期
检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，应经灭活处理后销
毁。
6.4.3标准贮备菌株的保存：采用甘油冷冻管保藏法。
6.4.4菌种保存应贴菌种标签。
6.5标准贮备菌株的制备（复苏、保藏）
6.5.1菌珠的复苏
6.5.1.1将标准菌株冻干管从冰箱中取出，放至室温后使用。
6.5.1.2菌珠在打开前仔细核对标签上的内容，注意一株菌株使用一
套用具，严防交叉污染。
6.5.1.3应参照标准菌株复苏说明书进行菌种复苏。用适宜的方法打
开标准菌株的安瓿瓶。
6.5.1.4取少量适宜的液体培养基加至菌种管内，轻轻振摇使冻干菌
块溶解。
6.5.1.5随即吸出管内菌液，接种划线到琼脂培养基上或接种到液体
培养基中，在规定的温度和时间下培养，使菌种得以复苏。
6.5.2标准贮备菌株的保藏
6.5.2.1将复苏后的培养物转种至液体培养基内，在适宜的温度和时
间下进行培养。
6.5.2.2取培养好的菌悬液与甘油1:1比例进行混合，振摇均匀，用冻
存管进行分装，按工作需要每种菌种分装成若干支。
6.5.2.3置冰箱超低温冷冻（低于-30℃）保存，作为标准贮备菌株。
6.5.2.4在冷冻管外贴上《检定菌标签》并及时在《检定菌接收、使
用、销毁记录》上登记。
6.6工作菌株的制备
6.6.1甘油冻存管标准贮备菌株制备工作菌株
从冰箱取出冻存管标准贮备菌株移入生物安全柜内，在室温放置20
分钟后，将冻存管内的菌液接入适宜的液体培养基或琼脂培养基上，
在规定的温度和时间下进行培养，作为工作菌株。
6.6.2工作菌株的传代
从冰箱中取出传代用斜面工作菌株，用无菌接种环挑取适量培养物
接种至适宜的液体培养基或琼脂培养基上，在规定的温度和时间下
进行培养，作为下一代工作菌株。
6.6.3所有新制备的菌种管外均应贴上标签，并及时填写《检定菌传代记
录书》。
6.7检定菌的编号
6.7.1从中国食品药品检定研究院购买的CMCC系列冻干粉标准菌株为0
代菌株，其菌种编号为标准菌株标签上编号，如0代金黄色葡萄球
菌标准菌种编号为“26003-4a”。
6.7.2将上述0代标准菌株转种至适宜的培养基上为复苏，复苏得到的菌
种为第1代菌种。其编号为：0代标准菌株编号+复苏日期，如
“26003-4a-170520”表示由第0代编号为“26003-4a”的金黄色葡
萄球菌标准菌株，于2017.05.20复苏得到的第1代菌种。
6.7.3第1代复苏后的菌种转种至液体培养基制成第2代菌种为标准贮备
菌株，用甘油冻存管保存。其编号为：第1代复苏后的菌株编号+G
流水号（分装支数）。如 “26003-4a-170520-G1”表示由编号为
“26003-4a-170520”的第1代菌种传代分装的第1只金黄色葡萄球
菌甘油冻存管标准贮备菌株。
6.7.4从第2代标准贮备菌株转种至琼脂培养基上制成第3代工作菌株，
其编号为：标准贮备菌株+A流水号（传代支数）；从第2代标准贮
备菌株转种至液体培养基上制成第3代工作菌株，其编号为：标准
贮备菌株+B流水号（传代支数）。
6.7.5可挑选斜面工作菌种长势较好的一只，在其菌种编号前特殊标记，
作为传代用斜面工作菌种制备下一代工作菌种；第4代；第5代工
作菌种的编号规则均遵循6.7.4编号规则。
