新吉尔灭消毒剂消毒验证实验报告
一目的
根据实际生产与微生物实验操作过程中，选用消毒剂（75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液）符合使用要求而进行的检验及现场验证，验证对代表菌种有效消灭情况进行确认。
二实验准备
2.1 消毒剂：75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液
2.2 代表菌种：大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌
2.3 缓冲液：0.9%生理盐水：称取9g氯化钠，溶解于1000ml纯化水中，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。
2.4 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂、乳糖胆盐培养基
三菌悬液配制
3.1 菌悬液的制备（菌种不得超过5代，采用适宜的方法保存）
3.1.1取金黄色葡萄球菌加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种脱落，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml)。
3.1.2取白色念珠菌新鲜培养物少许至马铃薯葡萄糖琼脂上，在26℃生化培养箱中培养2天，加入10ml0.9%无菌氯化钠溶液，将菌种洗脱。然后吸出菌液至无菌试管内，制成均匀的菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml）。
3.1.3 取大肠埃希菌加入100ml双料乳糖胆盐中在37℃培养箱
中培养2天制得悬菌液，吸出菌液至无菌试管内，制成均匀菌液（菌液浓度不得低于10-6cfu/ml）。
3.1.4将上述培养物用稀释液稀释至所需浓度备用，以生长菌落每平板为100cfu以内者为宜。
3.2 消毒剂的验证
3.2.1 验证消毒剂的配制与准备工作
75%酒精：根据公司实际情况采购备用。
0.5%新吉尔灭消毒液：根据试剂说明取原液，加入纯化水溶解，分装，121℃、15min压力蒸汽灭菌后备用。
取10ml消毒剂（75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液）分别注于无菌试管中。每组平行两管。
3.2.2试验步骤
3.2.2.1 大肠杆菌实验步骤
取大肠杆菌增值培养物0.2ml，接种于已有消毒剂试管中，轻轻摇动，作用10min，十分钟后，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45℃的溶化营养琼脂培养基，混匀，36±1℃培养48h后计数，平行2组。
重复上述操作，完成3次试验
3.2.2.2 按照上述方法进行金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的操作,但白色念珠菌操作时，应使用马铃薯葡萄糖培养基，并且在26±1℃培养3天计数。
四阴性、阳性对照
4.1 阴性：按要求浓度的消毒剂10ml和已灭菌10ml 0.9%氯化钠混合液，吸取此混合液1ml加入无菌培养皿中，注入15-20ml温度不超过45℃的溶化营养琼脂培养基/马铃薯葡萄糖培养基。
4.2 阳性:菌悬液稀释至所需浓度，接种于平皿中，平行两组。五培养及计数
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌接入营养琼脂培养基中，白色念珠菌接入马铃薯葡萄糖培养基。含菌膜向上。放入所需恒温培养箱中培养3-5天后计数。
试验菌稀释级数为10-6能肉眼读数并且符合标准。每块平皿含菌量不低于106cfu/ml，符合验证要求。
5.2菌落计数表
消毒液消毒效果验证结果：
混合液
结果
大肠杆菌白色念珠菌金黄色葡萄球菌试验一0 0 0
试验二0 0 0
试验三0 0 0
阴性对照0 0 0
杀菌率100 100% 100%
试验菌
结果
金黄色葡萄球菌大肠杆菌白色念珠菌平皿一（10-6cfu/ml) 59 52 43
平皿二（10-6cfu/ml) 64 43 26
平均值（10-6cfu/ml) 61.5 47.5 34.5 菌落总数61500000 47500000 34500000
杀灭率=
%100*-阳性对照回收菌数
试验组回收菌数
阳性对照回收菌数=100%
实验证明新吉尔灭消毒液具有杀菌抑菌效果
六 现场验证
6.1 墙面、地面验证 6.1.1准备工作
(1) 卵磷脂吐温80营养琼脂培养基按比例(见商标的标注)
配制后分装于500ml 三角瓶中，灭菌后放入46±1℃水浴箱中备用，或经预培养阴性后置于冰箱中冷藏备用(用前先溶化)。预培养在每个灭菌好的平皿中倒入15ml 左右的上述培养基，待凝固后翻转平皿置35±2℃培养箱中培养24h,24h 后经观察无菌,可移入冰箱、冷藏备用。
(2)消毒剂：75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液 6.1.2 试验步骤
（1）对照组：选一间未清洁的作业车间将平皿均匀的放置在车间内，每处放置2个培养皿且均匀放置在车间内，打开上盖并放在下盖的一个边缘上。做好标识。开始计时，30分钟后盖好上盖收起平皿，并翻转平皿，放在35±2℃培养箱中培养48±2h ，同时记录所放平皿的位置。
阴性对照：将同批卵磷脂吐温80营养琼脂作为阴性对照组培养。
（2）用75%酒精、0.5%新吉尔灭消毒液对墙面、地面进行擦拭消毒，作用10min 后，每处地点放置培养皿2个，将平皿均匀的放置在车间内，打开上盖并放在下盖的一个边缘上。做好标识。开始计时，30分钟后盖好上盖收起平皿，并翻转平皿，放在35±2℃培养箱中培养48±2h ，同时记录所放平皿的位置。
阴性对照：将同批卵磷脂吐温80营养琼脂作为阴性对照组养。
6.1菌落计数表
6.2 设备验证
6.2.1 试验准备
将营养琼脂培养基按比例(见商标的标注)配制后分装于500ml三角瓶中，灭菌后放入46±1℃水浴箱中备用，或经预培养阴性后置于冰箱中冷藏备用(用前先溶化)。
在每个灭菌好的平皿中倒入15ml左右的上述培养基，待凝固后翻转平皿置36±2℃培养箱中培养24h,24h后经观察无菌,可移入冰箱、冷藏备用
6.2.2 试验步骤
对照组：选择一台未清洗的机器设备，用高压灭菌后的棉签沾取高压灭菌后的生理盐水擦拭设备表面和灌装口，用剪刀将棉签擦拭那头剪入10ml高压灭菌后生理盐水试管中。充分振荡，用移液枪吸取1ml 液体注入平皿中，倒入15ml左右的营养琼脂，待凝固后翻转平皿置37℃培养箱中培养48h后观察并计数。
阴性对照：将同批卵磷脂吐温80营养琼脂作为阴性对照组培养。
