脂质体的制备方法
王臻涛
（江苏盐城师范学院黄海学院生物技术086班，08418837）
指导老师：喻樊
【摘要】探讨制备脂质体的不同工艺。主要介绍主动载药与被动载药这两大类制备方法，根据其不同的优缺点进行比较。
【关键词】脂质体主动载药被动载药
前言
脂质体（liposome）是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径25~1000nm不等。脂质体可用于转基因，或制备的药物，利用脂质体可以和细胞膜融合的特点，将药物送入细胞内部。
脂质体作为一种重要载体，具有保护药物，提高药效，减少制剂对机体的毒性和提高药物的靶向性等方面的优越性。概述了薄膜分散法，高压乳匀法，逆向蒸发法，乙醇注入法，微乳冷却法，冻融法和冷冻干燥法等几种脂质体的制备方法，以及脂质体的评价指标。三十年来，人们就其制备方法进行了大量的研究，脂质体是由磷脂分子在水相中通过疏水作用形成的，因此制备脂质体所强调的不
是膜组装，而是如何形成适当大小，包封率和稳定性的囊泡。制备的方法不同，脂质体的粒径可以从几十纳米到几微米，并且结构也不尽相同。目前，制备脂质体的方法较多，常用的有薄膜法，反相蒸发法，溶剂注入法和复乳法等，这些方法一般称为被动载药法，而PH梯度法，硫酸铵梯度法一般被称为主动载药法。
1.被动载药法
脂质体常用的制备方法主要有薄膜分散法，逆相蒸发法，注入法，等。在制备含药脂质体时，首先将药物溶于水相或有机相中，然后按适宜的方法制备含药脂质体，该法适于脂溶性强的药物，所得脂质体具有较高包封率。
1.1薄膜分散法
这是一种经典的制备方法，它可以形成多室脂质体，经过超声处理后得到小单室脂质体。此方法的有点是操作简便，脂质体结构典型，但包封率较低。将磷脂，胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于氯仿（或其他有机溶剂中）然后将氯仿溶液在一玻璃瓶中旋转蒸发，在瓶内壁上形成一薄膜；再将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中，加入烧瓶中不断搅拌，即得脂质体。
例如，氟尿嘧啶脂质体，就是用磷脂(卵磷脂或脑磷脂)和胆固醇与磷酸二鲸蜡脂，按摩尔比7：2：1或4．8：2．8：1配成氯仿溶液，真空蒸发除去氯仿，使在器壁上形成的薄膜加入等渗的缓冲液(pH为6．0，0．01mol／L磷酸盐)，其中含氟尿嘧啶77 mmol／L，类脂质在缓冲液中的浓度为50～70mmol／L，加玻璃珠数枚，搅拌2min，在25℃放置2h，使薄膜吸胀；再在25℃搅拌2h，得到脂质体，粒径为0．5～5μm。
1.2冷冻干燥法
将磷脂经超声处理，然后高度分散于缓冲盐溶液中，并加入冻结保护剂(如甘露醇、葡萄糖、海藻酸等)，冷冻干燥后，将干燥物分散到含药物的缓冲盐溶液或其他水性介质中，即可形成脂质体。对遇热不稳定的药物尤为适宜。目前，该法已成为较有前途的改善脂质体制剂长期稳定性的方法之一。
例如，维生素B。脂质体的制备，取卵磷脂2．89分散于100mmol／L 磷酸盐缓冲液(pH为7)与0．9％氯化钠溶液(1：1)的混合液中，超声处理后与甘露醇混合，于真空下冷冻干燥，随即用含l2．5mg维生素Bt。
的上述缓冲盐溶液进行分散，进一步超声处理，即可得到均匀脂质体混悬液。
1.3超声波分散法
将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液中，磷脂、胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂，搅拌蒸发除去有机溶剂。残液以超声波处理，然后分离出脂质体再混悬于磷酸盐缓冲液中，制成脂质体的混悬型注射剂。经超声波处理大多为单室脂质体。
例如，氨基酸脂质体的制备，取氨基酸50mg溶于pH为7．1的磷酸盐缓冲液中，加入到由磷脂25mg、胆固醇4．2mg、磷酸二鲸蜡脂2．8mg，溶于5．5ml氯仿环己烷制成的溶液中，蒸发除去环己烷，残液经超声分散，分离出脂质体，重新混悬于磷酸盐缓冲液中。该脂质体在4℃能贮存一个月，可供口服或注射给药，具缓释作用。
1.4冻融法
采用此法制备的多相脂质体，其物理稳定性好，可加热灭菌。此法首先制备包封有药物的脂质体，然后冷冻。在快速冷冻过程中，由于冰晶的形成，使形成的脂质体膜破裂，冰晶的片层与破碎的膜同时存在，此状态不稳定，在缓慢融化
过程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成脂质体。
1.5复乳法
此法第1步将磷脂溶于有机溶剂，加入待包封药物的溶液，乳化得到W/O 初乳，第2步将初乳加入到10倍体积的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，然后在一定温度下去除有机溶剂即可得到脂质体。用乳化法制得脂质体的包封率比较
高，但是粒径较大。
1.6注入法
将磷脂与胆固醇等类脂质及脂溶性药物溶于有机溶剂中（一般多采用乙醚），然后将此药液经注射器缓缓注入加热至50℃（并用磁力搅拌）的磷酸盐缓冲液（或含有水溶性药物）中，加完后，不断搅拌至乙醚除尽为止，即制得大多孔脂质体，其粒径较大，不适宜静脉注射。再将脂质体混悬液通过高压乳匀二次，则所得的成品。
例如：亚油酸脂质体，取磷酸盐缓冲液100ml，在磁力搅拌器上搅拌加热至约60℃；再称取1g精制大豆磷脂、1g胆固醇、1g亚油酸及2g 油酸山梨坦溶于30ml乙醚中，然后滴注于上述60℃缓冲盐溶液中，继续
搅拌，加适量缓冲盐溶液至100ml即得。
1.7逆相蒸发法
将水溶性药物溶于磷酸盐缓冲液磷脂、胆固醇与脂溶性药物共溶于有机溶剂，混合，超声处理直至形成稳定的W/O乳剂减压蒸发除去有机溶剂达到胶态后，加入磷酸盐缓冲液，旋转使器壁上凝胶脱落，继续减压蒸发除去有机溶剂，得到脂质体水性混悬液。本法特点是包封的药物量大，体积包封率可大于超声波分散法30倍，适合于包封水溶性药物及大分子生物活性物质。如各种抗生素、胰岛素、免疫球蛋白、碱性磷脂酶、核酸等。
例如：超氧化物歧化酶(SOD)脂质体的制备，将卵磷脂lOOmg和胆固醇50mg溶于乙醚中，加入用4mmol／L磷酸盐缓冲溶液(PBS)配成的SOD 溶液，超声处理2min(每处理0．5min，间歇0．5min)，立即在水浴中减压旋转蒸发至呈现凝胶状，旋涡振荡使凝胶转相，再继续蒸发除尽乙醚，超速离心(35000r／min，30min)分离除去未包人的SOD，沉淀用水洗2次，离心，得沉淀，，用10mmol／L PBS稀释即得。
1.8超临界法
传统的脂质体制备方法，必须要使用氯仿，乙醚、甲醇等有机溶剂，这对环境和人体都是有害的。超临界二氧化碳是一种无毒、惰性且对环境无害的反应介质。用超临界法制备了头孢唑林钠脂质体，将一定量的卵磷脂溶解于乙醇中配得卵磷酯乙醇溶液，与头孢唑啉钠溶液一起放入加入高压釜中，将高压釜放入恒温水浴中，通入CO2。在其超临界态下孵化30min，制备脂质体。采用超临界CO2法制备的包封率高、粒径小，稳定性增强。
2.主动载药
对于两亲性药物，如某些弱酸弱碱，其油水分配系数介质pH和离子强度的影响较大，用被动载药法制得的脂质体包封率低。主动载药是利用两亲性的药物，能以电中性的形式跨越脂质双层，但其电离形式却不能跨越的原理来实现的。通过形成脂质体膜内、外水相的pH梯度差异，使脂质体外水相的药物自发地向脂质体内部聚集。
脂质体主动载药法是在制备脂质体的传统方法上引入pH梯度法等而形成的一种新的制备方法,使得制备高包封率脂质体成为可能,较好地改变了难以制备
