实验一槐花米中芸香甙的提取、精制和检识
芸香甙亦称芦丁（Rutin），广泛存在于植物界，已发现的芦丁植物至少在70种以上，以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。槐花米系豆科植物Sophora joponia L的未开放花蕾，其中芦丁含量高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外，还含有白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）和多糖粘液质等。
芸香甙的结构
一、槐花米主要成份的理化性质
1. 芦丁：是槲皮素3位羧基与芸香糖（Rutinose）脱水缩合成的甙。浅黄色粉末或极细的针状结晶，含3分子结晶水（C27H36O16·3H2O），mp ll7~178℃。在110℃ 10mmHg下真空干燥12小时变成无水物，无水物易吸湿，可从大气中吸收约
2.5分子水份。无水芦丁在125℃变褐，在190~192℃变成胶状，当温度升至214~215℃发泡分解。
芦丁溶解度在冷水中1∶10000，热水中1∶200，冷乙醇中1∶300，热乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。UV λmax nm：259，266（sh），299（sh）。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时，往往在加入少量硼砂，就是保护芦丁减少氧化分解。
2．槲皮素：从稀醇中结晶出来为黄色针状结晶，含2分子结晶水（C15H10O7⋅2H2O），在95~97℃变为无水物，失水的槲皮素在空气中可重新获得失去的结晶水。含2分子结晶水的分解点为313~314℃，无水物的分解点为316~317℃。
槲皮素溶于碱水，乙酸和沸醇，在无水醇中的溶解度：冷时1∶290，沸时1∶23，200mg 槲皮素在20℃时溶于5ml丙酮或吡啶；在50℃时溶于20ml甲醇，不溶于苯、乙醚、石油醚。在常温下不溶于水，也难溶于热水。UVλmax nm（㏒ε）：258（2.75），375（2.75）。
3．皂甙：粗制品为白色粉末，分解点为210~220℃。易溶于起水、吡啶，能溶于甲醇。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇、葡萄糖醛酸和葡萄糖醛酸内酯。
4．白桦醇酯：无色针状结晶，mp251~252℃，能溶于乙酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、苯等中，难溶于水、石油醚中。
5．槐二醇：无色针状结晶，mp219~220℃或224℃，能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
6．槐花米甲素：青黄色针状结晶，熔点不定，181~182℃开始发泡，186℃变形发泡完，198~203℃透明有质变色，244~245℃分争融熔。溶解度：冷水中1∶60000，热水中1∶167，冷甲醇中1∶108，热甲醇中11.2%，冷乙醇中1∶290，热乙醇中3.5%，冷二氧六环中1∶30，热二氧六环中1∶15，易溶于吡啶，微溶于乙醚、乙酸乙酯，不溶于冰乙酸、石油醚和氯仿。
7．槐花米乙素：无色六面体结晶，mp272~274℃，易溶于浓硫酸，难溶于85%磷酸，
略溶于热甲醇及乙醇，但冷时难溶，在其它非极性溶剂中均不溶，也不溶于水、5%盐酸、5%氢氧化钠溶液。
8．槐花米丙素：无色棒状结晶，mp235~237℃，易溶于甲醇、乙醇及二氧六环，稍溶于乙醚及丙酮，不溶于水、沸水、5%盐酸、5%氢氧化钠、85%磷酸。溶于浓硫酸中呈红色，放置后转变为紫色。
二、目的要求
1．掌握用槐花提取，精制芸香甙的原理和方法。
2．熟悉芸香甙的主要性质、检识方法和含量测定。
三、实验原理
根据芸香甙具弱酸性易溶于碱水，加酸分化后又析出结晶的特性进行提取；又利用芸香甙对冷水或热水的溶解度相差较大的特性进行精制。
四、实验器材
槐花、0.4%硼酸水溶液、（2%）石灰乳、6N盐酸、PH试纸、2%硫酸溶液、l%氢氧化钠、1%盐酸、镁粉、1%芸香甙乙醇溶液、1%槲皮素乙醇溶液、三氯化铝试剂、500mL烧杯、1000mL圆底烧瓶、抽滤装置、玻璃漏斗、脱脂棉、250mL圆底烧瓶、冷凝管、循环水泵、试管。
五、实验内容
（一）芸香甙的提取
取槐花米20g，置于500mL圆底烧瓶中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下加石灰乳调pH=8-9，加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调pH=4~5，放置（一夜以上）抽滤，得粗芦丁（滤饼用水洗3~4次），放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率，并作黄酮含量分析（黄酮含量的测定—分光光度法）和纯度分析（红外光谱法）。
芦丁的提取与分离流程图
（二）精制
取1-2g加蒸馏水400mL，加热煮沸溶解，趁热抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制芸香甙，烘干。并作黄酮含量分析（黄酮含量的测定—分光光度法）和纯度分析（红外光谱法）。
（三）芸香甙的检识反应
1．成盐反应：取芸香甙10mg左右，置试管中加蒸馏水2ml，振摇，观察试管有无变
化，滴加1%氢氧化钠溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色澄明溶液，然后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性反应，溶液则由澄明转为混浊状态（若当时不出现混浊时可放置片刻或放置冰箱中冷冻一定时间后再观察）。
2．盐酸镁粉反应：取芸香甙少许，置试管中，加乙醇2ml置热水浴中至溶解后，加入
金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，即产生剧烈的反应，并逐渐出现红色至深红色。
（四）芸香甙的水解
取芸香甙1g，置250mL圆底烧瓶中2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时，开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结晶，即为槲皮素，抽滤得结晶，沉淀物
