实验一母种培养基的配制与菌种分离与培养

实验报告实验名称实验室平菇栽培法班组姓名学号日期成绩教师签名一、实验目的1.掌握平菇基本栽培方法及其原理。

2.掌握平菇栽培中器械和培养基的灭菌方法及原理，如高压蒸汽灭菌法、干热灭菌、灼烧灭菌和紫外灯灭菌法等。

3.了解食用菌母种扩大繁殖生产的基本原理,掌握斜面母种的接种和培养方法。

4.掌握平菇栽培中原种、栽培种培养基的制备方法。

5.培养学生自行设计出菇的方案。

二、基本原理1.平菇是木质腐生菌，生长发育所需各种营养物质均从木屑、棉籽壳、稻草等培养料中获得。

平菇生长周期短，从播种到第一批采收一般为30天到40天，栽培方法简便，成功率高。

本实验在实验室条件下，用袋装方法出菇。

2.食用菌生产中，培养基、器皿及接种工具的消毒灭菌，是防止杂菌污染，提高食用菌产量的关键措施，灭菌和消毒法主要有物理方法（高温灭菌和紫外线灭菌）、化学灭菌法。

干热灭菌是在保持恒温的电烘箱中进行的,适用于各种耐热的玻璃器皿、棉塞、滤纸、以及不能与蒸汽充分接触的液体的灭菌.一般在160摄氏度持续1.5—2小时,就可达到灭菌的目的.灼烧灭菌可直接在酒精灯外火焰灼烧灭菌,酒精灯所用的酒精浓度要在百分之95以上.紫外灯灭菌是接种室(箱)最常用的方法之一,每次在使用前开灯20—30分钟.紫外线可导致细胞内核酸和酶发生变化而使细胞死亡,还可使空气中氧气产生臭氧,臭氧也具有杀菌作用.因其透射力差只适用于空气及物体表面的灭菌,有效距离为1.5—2米,以1.2米内为最好.3.食用菌母种培养基和分离菌种时用斜面培养基，适用于一般食用菌的母种分离与培养用的培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基（即PDA培养基），配成后用加压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。

4.食用菌菌种生产一般按母种——原种——栽培种进行。

母种数量少，要进行试管移接扩大培养才能进行生产。

5.原种由母种繁殖而成，由原种扩大培养成栽培种。

原种和栽培种生产一般包括配料——装瓶（袋）——灭菌——接种——培养等流程。

食用菌原种筛选与扩繁实验原理食用菌原种筛选与扩繁实验原理「篇一」食用菌制种与栽培教案实验一食用菌形态结构的观察一、实验目的认识和掌握常见的栽培的食用菌形态特征二、实验原理常见的栽培的食用菌主要是担子亚门层菌纲和腹纲的一些种类，它们由双核菌丝分化形成子实体，子实体是有性孢子着生的器官，其孢子外生在担子上，并聚集成一层子实层，但它们的子实体形状因种类不同而有很大差别，是认识食用菌类别的主要标志。

三、实验器材1、新鲜的食用菌，浸、干制标本。

2、解剖刀。

四、实验方法识别香菇、双孢蘑菇、平菇、猴头、口蘑、木耳、竹荪、草菇、银耳、金针菇等形态特征。

取平菇、香菇，首先观察其子实体的组成部分及其形态特征。

再用解剖刀纵切子实体观察其菇盖组成。

菌肉的颜色、质地、菌褶形状和着生情况(离生、延生、直生、弯生)。

再观察其菌柄的组成，菌柄的质地，中空或中实。

五、作业绘制香菇子实体形态及纵剖面简图，并注明各部位名称。

实验二食用菌母种培养基的制备与灭菌一、实验目的1、掌握食用菌母种培养基的配制方法。

2、熟练掌握高压蒸汽灭菌锅的使用方法。

二、基本原理培养基是按照食用菌生长发育所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。

其中含有碳源、氮源、矿质元素、生长因子和水分等物质。

由于食用菌在生长发育过程中，还必须在适宜的酸碱条件下，才能表现最大的生活力。

因此，对不同种类食用菌还须将培养基调节到一定的PH值范围。

食用菌的培养基可分为母种培养基、原种培养基和栽培种培养基。

对于母种培养基一般多采用固体培养基，因此需在培养基中加入一定量的凝固剂。

三、实验器材马铃薯(去皮)200g，琼脂16-18g，葡萄糖20g，大试管、棉塞、灭菌锅、漏斗、铁架台、胶管。

四、实验步骤1、选好马铃薯洗净去皮(挖去芽眼)，切成薄片，取200g放在铝锅中，加水1000mL，煮沸20分钟，双层纱布过滤，取滤液并补足水至1000mL，加琼脂，小火加热，玻璃棒搅拌至琼脂全部溶解，再加入葡萄糖使其溶化。

《微生物菌种选育实验》是一门涉及食品理化分析、微生物学实验且由学生自行设计实验方案的综合性、设计性实验课程，集中三周时间开课。

一、实验目的通过本环节训练，加深对发酵工程上游技术中菌种筛选的认识；学会常规选种方法；掌握微生物诱变育种的方法；掌握常规工业微生物菌种保藏法；树立科学认真仔细的态度，培养科研协作精神。

二、实验内容实验一工业微生物菌种分离根据一定的生产目的如产酶、产酸、产酯等，建立不同的筛选模型，并从特定的样品如曲药、酸乳、土壤中筛选出高产适宜的菌株。

1、分离培养基的配制2、无菌器材的准备3、菌悬液的制备4、接种5、培养6、初步鉴定(1) 菌落形态(2) 个体形态7、斜面接种培养实验二工业微生物菌种复筛通过摇瓶培养对实验一所得的菌株的生产性能进行精确的定量测定。

1、发酵培养基的配制；2、目的菌株的摇瓶培养；3、发酵液的生理活性测定。

实验三微生物的诱变育种用紫外线对实验一所得的高产菌株进行诱变，并测定诱变后的菌株的生产能力。

1、单细胞(或单孢子) 悬液的制备；2、致死曲线的测定；3、诱变处理；4、初筛；5、复筛；6、菌种保藏。

三、实验要求1．学生自行设计具体实验方案，在教师指导下由学生自主完成实验。

2．实验结束后，要求学生完成一篇微型小论文。

论文的撰写应本着实事求是的原则，对所做实验过程和数据进行认真、严格的记录和处理，并进行独立分析，不得抄袭他人的数据。

四、考核办法1、考核内容：实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等。

2、考核办法：按照实验方案、实验态度、操作技能、实验报告等内容综合考核学生，得到学生该门实验课程的成绩。

成绩考核采用优秀、良好、中等、及格、不及格五级记分制。

3、考核标准：以实际操作技能和分析解决问题的技能为主，实验考核内容各单项所占分数比例为实验方案20%、实验态度10%、操作技能40%、实验报告30%。

微生物菌种选育概述微生物的菌种对进行微生物工作来讲是非常重要的。

没有“种”无法进行微生物的科学研究；没有良种，不能进行发酵工业的生产。

微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快..利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制..2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株..3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌..4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用..四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等..2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml..配制方法：1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁..2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种..3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上;但不加琼脂而加乳酸;按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入;并分装试管..五、实验设计l、接种：取一小块果皮;不需冲洗;直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中;置28-30℃;培养24小时;可见培养液变混浊..2、培养;用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml;注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中;置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出..3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中;混匀后加盖玻片制成水浸片;先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况..活酵母菌可使美蓝还原;从而使菌体不着色;用此方法可判断酵母菌的死活..4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板..用划线法分离酵母菌培养液;从而得到单个菌落..挑取单个菌落反复再次划线分离纯化;最终可获得纯培养..六、实验注意事项1.配制培养基时;应注意琼脂的加量;不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定;不能照搬书上的加量..2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸..3.灭菌锅操作时;首先应注意水一定要加足够;排气要彻底;其次灭菌期间不要离开人;灭菌结束后;关闭电源;拔掉插头;最后放气一定要缓慢;均匀;气放彻底才能开锅;取锅内物品;应小心;防止烫伤..4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌;接种时应注意手与接种工具的消毒..七、实验结果的观察及记录1.24小时;观察试管内培养液的情况并作记录;每组转接2支试管..2.48小时;观察试管内培养液的情况;镜检培养液内菌的数量;粗略判断是否为酵母菌并作记录;每人蘸取培养液进行划线分离;并作记录..3.72小时后;观察培养皿内菌的生长的情况;挑取单个菌落进一步划线分离;直到为纯菌落..4.每组转接10支斜面试管;备用..八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒;葡萄酒、猕猴桃酒..七实验报告要求1.实验完毕后;每位同学都应独立作出实验报告;实验报告应类似于小型论文格式..2.实验报告内容包括：1立题意义..2实验设计..3实验步骤详细记录..4对实验结果的分析讨论和总结..5实验延伸..6实验心得体会..附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理;学习苹果酒酿制技术..二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料..它是用含一定糖分和水分的果实压汁;经微生物发酵而成..其生化作用;除酒精发酵的主产物外;还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时;陈酿期中;各种酸类与醇类的酯化反应;赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉;使酒液澄清、风味增浓..各种果酒以原料而称名..除坚果外;所有栽培果;野生果均可做酿果酒的原料..本实验以苹果酒为例;学习其酿制方法..三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母s.cerevisae ellipsoieleus..2、器材苹果汁培养基;7°Be’麦芽汁培养基;10ml／管、100ml／三角瓶等装量;白糖;食用酒精;亚硫酸;果胶酶;发酵缸;破碎机;果汁分离器等..a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be;酸度0.5%以下1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后;加热煮沸3～5分钟;静置10小时以上;过滤、分装;0.7Kg／cm2灭菌20分钟..四、实验步骤一酒母培养1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支;按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环;混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上;镜检酵母繁殖良好;无杂菌即可..2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中;接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液;于28℃下培养2～3天;当培养液表面有气泡产生;嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用..3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同;只是采取更大的容器..一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐;盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液;灭菌冷却后;按10％接种量接人母发酵剂;在25～28℃下培养24～48小时;待发酵正常;镜检无杂菌方可使用..4、如果使用活性干酵母;添加量为20g/L发酵醪;复水用水量是干酵母重量的5～10倍..复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃;将酵母静置5～10min后搅拌;酵母在水中的时间不能超过30min..然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃;然后直接加入发酵醪..二果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品..2～3次操作要点：1、分选取成熟苹果;除去腐烂、干疤和伤果..2、清洗清水充分洗涤;除去果皮上的污物、杂质及药剂;以保证原料干净卫生..3、破碎为易于压榨;提高出汁率;需进行破碎..用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右;并除去果籽..4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离..分离出的果汁中不得夹带果肉;同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L;并加入0.1～0.15g／L的果胶酶;促进果胶分解;使果汁澄清并提高酒的风味..由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化;故需加SO2还原剂抑制酶活性;同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用..SO2来源;除工厂应用液态SO2外;实验室常加入亚硫酸钠Na2SO3和偏重亚硫酸钾K2S2O5;其用量为果汁量的0.02％即可..5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中;装量占缸容积的4／5;按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵;保持品温在18～22℃之间;最高勿超过25℃;发酵应在7～12天内结束..一般苹果汁糖分约为11％;经发酵后;酒精含量约达6％以上;前发酵结束后;原酒酒度应大于8％V;残糖＜20g／L;总酸苹果酸＞5g／L..6、后发酵前发酵结束后;迅速将酒液与皮渣分离;酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中;进行后发酵;使残糖继续分解..期间;控制品温在18～22℃之间;不要超过25℃;时间1个月;即得原酒..要求残糖含量小于2g／L以下;挥发酸以醋酸计小于0.6g／L;总酸以苹果酸计大于5g／L..7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离;以免酒脚产生异味而影响酒质;故需进行换桶缸..换桶次数新酒每年换三次..8、贮存陈酿应满桶贮存..陈酿即酒的老熟;经长期密闭贮存;可使酒质澄清、风味醇厚..贮存室温8～16℃;存期半年以上..9、配制原酒贮存半年后可开始配制..配制时;按工艺规定将不同原酒按一定配比相混;然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上..10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清;即于-4℃左右存放7天;然后冷过滤..澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀;或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格..11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌;即在63℃下处理15分钟;冷却后封口保存..五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法..2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么2、果酒酿制中为何要加入果胶酶实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种;生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等..酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的..在分类前将菌体细胞进行分离纯化;得到由单细胞长成的菌落;然后再进行形态特征和生理生化鉴定..一形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上;让它长成菌落;观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征..把它再接种到液体麦芽汁培养基中;观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环;培养液中是否产生沉淀、混浊程度等..另外;还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等.. 二生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力..同时;还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精;利用硝酸盐还是硫酸盐;发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力..最后;根据以上得出的形态特征和生理生化特征;查阅有关资料;把具有相同特征的一类酵母菌;就可以归属于某一属..怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中;放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时;取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在;各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成;最后取出各个不同时期的样液;注入酵母细胞计数器--血球计中;放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等;并测定其酒精和二氧化碳的生产量..然后根据不同的反应情况;作好详细的原始记录;便于以后培养菌种时比较和参考..酵母菌生理生化试验一、酵母菌糖发酵试验一实验目的了解鉴别酵母菌的实验方法..二实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类;产生各种有机酸、气体和其它产物..酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异..因此;这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据..酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH6.8-5.2由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH7.6-6.0由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定..产气可由发酵管气泡的产生予以证实..三材料糖发酵基础液;1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液;葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖;啤酒酵母斜面菌种..四实验内容1、糖发酵基础液配制好后;按培养液容量的1%加入糖;分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米;再在试管内加入倒置的小玻管约0.4×2.0－2.5厘米一支..每种糖设三个重复管;<121℃>高压灭菌15分钟..2、将酵母分别接入上述各发酵管中;置<30℃>下培养48-72小时;另以不接种者作对照3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气;则必先产酸;并在杜氏小管顶端出现气泡..4、结果记录..以“”表示产酸;“<0”>表示产气;“＋”表示产酸产气;“－”表示无变化;“碱”表示产碱..二、酵母菌碳源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种碳源的利用情况..二实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分;约占酵母菌体重量的50%;为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质..酵母菌对各种碳源的利用;因种类不同而异..这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据..三材料无碳基础培养基;啤酒酵母斜面菌种;0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液.. 四实验内容1、液体试管法1每管加无碳基础培养基5毫升;加被测试的某种碳源;并以葡萄糖作为对照..2接入啤酒酵母;<28℃>下培养1-2周;观察结果..2、生长图谱法1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂;融化后冷却至45<-50℃>;到至平板..2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内;搅匀后倒入上述未凝平板内;摇匀待凝..3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记..4用不锈钢匙;按标记加入相应的米粒大小的碳源;并以葡萄糖作对照..5<28℃>下培养24-48小时后观察结果..3、结果观察1液体试管中是否形成醭;环岛等..2生长图谱中测量菌落大小;说明对碳源的利用情况..三、酵母菌氮源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种氮源的利用情况..二实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外;故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用;酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致..三材料无氮基础培养基;啤酒酵母斜面菌;0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液..四实验内容1、液体试管法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮源作空白对照..2、生长图谱法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮化物作空白对照..3、结果观察1液体试管中溶液pH值的变化..2生长图谱中测量形成菌落的大小;说明对各种氮源的利用情况..四、酵母菌生长曲线的测定试验一实验目的掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法..二实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物;把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中;在适宜的温度下培养时;它的生长过程具有一定的规律性..在其生长过程中;定时取样测定酵母菌细胞数量;然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标;生长时间作横坐标;绘制所得的曲. . .线叫生长曲线..此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期..三材料酵母菌增殖培养基;苹果酒酵母斜面菌种..四实验内容1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种;用无菌水洗下菌苔;以3000转/分的速率离心;得菌体..将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后;制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升;测数备用..2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中;<25℃>下培养;以此为起始时间;记录起始溶液的细胞数..并在培养1;2;4;6;8;9;10;11;12;14;16;20;22;24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量..3、酵母菌细胞数量的检测方法①：活菌计数法..此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;取一定量体积在0.1-1毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内;在<25℃>下培养24小时左右;计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量..方法②：血球计数板计数法..此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;使菌落数约为105-106个/毫升;取一滴稀释液滴于血球计数板内;在显微镜下直接计算细胞总数..4、绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标;以培养时间作为横坐标;画出酵母菌的生长曲线..并分析酵母菌群体的生长规律..五、实验结果的观察及记录见表1－2六、思考题1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响. . ...........附1麦芽汁培养基的制备：麦芽汁制备俗称糖化..所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程..溶解于水的各种干物质称为浸出物;糖化后未经过滤的料液称为糖化醪;过滤后的清夜称为麦芽汁;麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率..方法一1取50g麦芽;在EBC标准磨上粉碎；2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中;加200mL46℃水;不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃..此时杯内加入100mL70℃水;保持恒温..45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴;置于白滴板上;再加碘液1滴;混合后观察碘液颜色变化..直到碘液呈纯黄色不再变色;停止保温;糖化结束..5在10~15min内急剧冷却到室温；6冲洗搅玻璃棒拌器;擦干糖化杯外壁;加水使其内容物准确称量为450g；7用玻璃棒搅拌糖化杯;并注于漏斗中进行过滤;即获得麦芽汁..方法二称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉;按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水3.5—4kg..于55—60℃保温糖化3-4小时;用碘液检查;然后4层纱布过滤;过滤液中加鸡蛋白加水20 mL;调匀之生出丰富的泡沫为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤;即得到澄清、透明的麦芽汁;灭菌后方可备用..附2 酵母菌鉴定常用培养基1.酵母菌生孢培养基1麦氏琼脂葡萄糖 1gKCL 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠 8.2g琼脂 12g蒸馏水 1000ml115℃灭菌20min2胡萝卜培养基将葫萝卜切成的6~7cm的长条;下后上薄;装入培养管中;加水1ml;杀菌;即成..3Gorodkowa氏培养基消化蛋白 1g葡萄糖 0.1g氯化钠 0.5g琼脂 1.2g水 100ml2.12.5％豆芽汁培养基黄豆芽125g加1L;煮沸半小时;过滤后补足水至1L..115℃灭菌30min3.0.6％酵母浸汁加60g干酵母粉于1L水中;必要时加入一些蛋清以澄清滤液;121℃灭菌15min;趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min..4.同化碳源基础培养基NH42SO40.5%;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..115℃灭菌15min同化碳源液体培养基NH42SO40.5%;KH2PO4;MgSO4-7H2O0.05%;CaCl2-2H2O0.01%.NaCl0.01%;酵母膏0.02％;糖或其它碳源0.5％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装小试管;每管3 ml; 115℃灭菌20min..5. 同化氮源基础培养基葡萄糖2％;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装大试管;每管20 ml; 115℃灭菌15min..附3酵母各属检索表一 1.生子囊孢子简称孢子;营养细胞芽殖二..2. 生子囊孢子;营养细胞裂殖或兼有芽殖三..3.不生子囊孢子;但生掷孢子营养细胞芽殖四4.不生子囊孢子及掷孢子五二营养细胞芽殖;生子囊孢子1.除芽生细胞外;有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis..2.无真菌丝1营养细胞多边芽殖A2营养细胞两极芽殖BA1.孢子圆卵形;光面;无凸线Ⅰ2. 孢子半圆形;光面;无凸线Ⅱ3. 孢子痣面Ⅲ4. 孢子有凸线Ⅳ5. 孢子长条形Ⅴ6.生袋状子囊;孢子多到16个;圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个;圆;卵形;光面;无凸线；营养细胞多边芽殖;圆形;卵形;长形..……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomycesa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………结合酵母亚属Zygosaccharomycesb孢子生成时;子囊生试探接合枝;但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时;子囊直接有营养细胞变成;无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces2.孢子1～4个;光面;无凸线；圆卵形;但营养细胞两极芽殖;为柠檬形………………………………………………4类酵母属SaccharomycodesⅡ孢子为半圆形或肾形1. 孢子为半圆形;多角形;或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichiaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………接合毕氏酵母亚属Zygopichiab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia2. 孢子为肾形………………………………………………………a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..……接合肾孢酵母亚属Zygofabosporab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属FabosporaⅢ孢子痣面1. 孢子痣面;无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces2. 孢子痣面;无凸线;子囊由接合子的芽子而成;营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia3.孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线；营养细胞多边芽殖;…………9施氏酵母属SchwanniomycesⅣ孢子有凸线1. .孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属2. .孢子光面;圆或卵形;中腰有凸线;使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsisa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsisb孢子生成时;子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis3. 孢子光面;凸线生在一边;使孢子形如草帽;营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenulaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenulab孢子生成时;子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula4. 孢子光面;凸线生于一边;使孢子形如草帽;营养细胞两极芽殖;…………………………………………………………………12孢子柠檬形酵母属HanseniasporaⅤ孢子长条;梭形或鞭形..1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu2. 孢子2～8个;长条带鞭毛;如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞;两极芽殖;柠檬形..1. 孢子生成时;营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes2. 孢子上有凸线;使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora3. 孢子痣面;子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia三营养细胞裂殖;或兼及芽殖;生子囊孢子..1.由真菌丝Ⅱ2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝ⅠⅠ只有裂生子;无真菌丝..1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属Ⅱ有真菌丝1. 有真菌丝;只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces2.有真菌丝;芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis.. 四生掷孢子1. 掷孢子肾形;不对称;菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces2. 掷孢子圆形或卵圆形;菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera.. 五不生子囊孢子或掷孢子1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon2. 芽殖细胞;假菌丝及真菌丝可能有;但无裂生子Ⅰ..Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达;真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida2. 无真菌丝;假菌丝原始型或无Ⅱ..Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula2. 无类胡萝卜素Ⅲ..Ⅲ1. 两极芽殖;普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera2. 三角芽殖;营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis3.营养细胞瓶形;芽殖;子母细胞基部甚宽;生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum4. 营养细胞一端为尖穹窿状;含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ..Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质;不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus..2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis..酵母菌亚属各种检索表Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：a细胞圆形;子囊孢子一个;…………………………………单孢子酵母S.unisporus b细胞圆形;子囊孢子2或多个………………………………大连酵母 S.dairensc细胞卵形………………………………………………球形酵母S.globosus..Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………S.ribis2. 发酵糖类不同Ⅲ..Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：。

微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤一、目的要求1、掌握各种分离、接种方法。

2、掌握无菌操作基本环节。

二、实验说明微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。

在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。

微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。

然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。

三、实验材料1、恒温培养箱。

2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。

3、培养基（上次实验配制的）。

4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。

四、方法步骤（一）接种的操作1、斜面接种（接金黄葡萄球菌）（1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。

（2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。

（3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。

（4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。

（5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。

（6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。

（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。

从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。

有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

（7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。

从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。

有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。

（8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。

实验1,大肠杆菌的培养和分离篇一：实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1. 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。

2. 进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。

3. 说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。

实验材料1. 配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。

2. 配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。

实验步骤1. 培养基灭菌。

在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB 固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。

既可以通气，又不使细菌进入。

)。

将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。

同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。

2. 倒平板，倒斜面。

灭菌后。

待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。

超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。

将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。

待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。

倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。

倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。

培养基实验报告篇一：《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告实验目的1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。

实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。

在自然界中．微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。

但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素等。

不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌例外)。

所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。

此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。

待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。

导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。

基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。

其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。

在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。

羊肚菌菌种分离和培养技术1、菌种分离目前可以纯人工栽培的羊肚菌品种有变红羊肚菌、梯纹羊肚菌、尖顶羊肚菌、六妹羊肚菌、七妹羊肚菌以及粗柄羊肚菌、普通羊肚菌。

当前我国的栽培品种主要以黑色品系为主，梯纹羊肚菌占总栽培面积的95％以上，产量及稳定性最好；六妹羊肚菌和七妹羊肚菌次之，产量稳定性与梯纹羊肚菌相当，开发潜力较大；黄色品系粗柄羊肚菌栽培规模较小，产量及稳定性有待进一步提高。

采用孢子分离、组织分离或基质分离法获得纯菌种。

分离物必须经过纯化鉴定，并经出菇试验方可大规模栽培使用。

通常情况下，分离物在20℃～25℃培养2d即可萌动，3d左右即可形成初生菌落，挑取萌发菌落的尖端进行纯化或扩大培养。

2、母种培养各种真菌培养基均适合羊肚菌菌丝的生长，通常情况下，菌丝在25％条件下培养4d～7d即可长满试管，5d～8d开始形成菌核。

母种培养基：PDA培养基，马铃薯200g(煮汁)、葡萄糖20g、琼脂18g～20g，自来水1000mL，pH值自然；CYM完全培养基：葡萄糖20g、蛋白胨2g、酵母膏2g、卧磷酸氢二钾1g、硫酸镁0.5g、磷酸二氢钾0.46g、琼脂粉20g，蒸馏水1000mL。

优良母种表现为菌丝生长均匀，初期菌丝密集洁白，粗壮，气生菌丝旺盛，爬壁力强，后期菌丝产生浅棕黄色色素，菌落浅棕色至棕色。

大部分羊肚菌菌株在培养4d～6d开始产生菌核，菌核初期白色，针尖大小，后期芝麻粒至绿豆粒大小，分散或凝集呈片状，菌核随着生长时间增长开始变黄，最终为棕黄色。

3、原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基配方基本相同，常压或高压灭菌后使用，常用配方如下：杂木屑70％、麦麸20％、生石灰1％～2％、石膏1.5％、腐殖质土10％；杂木屑60％、小麦25％、生石灰l％～2％、石膏1.5％、腐殖质土15％。

每个18mm×l80mm母种块转接6瓶原种，每瓶原种转接50袋～55袋栽培种。

750mL菌种瓶生产原种，22℃～25℃暗室培育，15d～20d即可长满，25d可用于栽培种制作。

培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。

培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。

1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。

固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。

配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。

常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。

步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。

然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。

步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。

温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。

待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。

1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。

液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。

为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。

2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。

常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。

2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。

3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。

2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。

1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。

例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。

2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。