尿蛋白电泳操作规程

双向电泳操作步骤双向电泳操作步骤及相关溶液配置A(实验过程一实验原理:2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。

这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。

二实验步骤:1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。

其中每隔10,15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，—80oC保存。

2. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA(牛血清白蛋白)用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。

取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul, 5ul,10ul, 15ul, 20ul 的BSA溶解液，另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水(总体积为80ul)，然后，各管中分别加入4ml的Bradford液(原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用)，摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。

(测量过程要在一个小时内完成)。

3. 双向电泳第一向---IEF(双向电泳中一律使用超纯水)3.1 水化液的制备称取2.0mg 的DTT，用700ul水化液储液溶解后,加入8ul 0.05, 的溴酚兰，3.5ul(0.5,v/v)IPG buffer (pH 3-10)振荡混匀，13200rpm离心15min 除杂质，取上清。

在含300ug 蛋白(经验值)的样品溶解液中加入水化液，至终体积为340ul，振荡器上振荡混合,13200rpm离心15min除杂质，取上清。

3.2 点样，上胶分两次吸取样品，每次170ul, 按从正极到负极的顺序加入点样槽两侧，再用镊子拨开 Immobiline DryStrip gels (18cm，pH 3—10)胶条，从正极到负极将胶条压入槽中,胶面接触加入的样品。

蛋白质检测操作规程最新《蛋白质检测操作规程》一、实验室安全操作规程1. 实验室应具备必要的安全设施，如安全淋浴器，消防器材，急救箱等。

2. 操作人员应穿戴好实验室服装、手套和护目镜，并在操作过程中避免接触有害物质。

3. 实验室内禁止饮食，操作台面应保持清洁整洁，避免交叉污染。

二、蛋白质检测操作规程1. 样品准备：取得待测样品，根据要求进行样品制备，如细胞抽提、蛋白质提取等。

2. 蛋白质浓度检测：采用比色法或荧光法等方法，测定待测样品中蛋白质的浓度，并根据需求稀释样品。

3. 凝胶电泳：将待测蛋白质样品加入凝胶样品槽，进行蛋白质分离，检测蛋白质的分子量。

4. Western blot：将分离的蛋白质转移到膜上，然后用特异性抗体探测需要的蛋白质。

5. 结果分析：根据Western blot结果，判断目标蛋白质的表达情况，经过定量分析，得出相应的实验数据。

三、实验记录和报告1. 操作人员应记录实验的详细过程、使用的试剂和仪器型号、操作步骤、实验数据等内容。

2. 实验完成后，应将实验记录整理成报告，包括实验目的、原始数据、结果分析和结论等部分。

四、仪器设备维护和清洁1. 实验后及时清洁和消毒使用过的实验仪器和设备，确保下次使用前的卫生安全。

2. 定期对实验室仪器进行检查和维护，保证仪器正常使用。

五、结果存档和数据管理1. 所有实验记录和报告要有相应的存档，并按照规定的时间要求保存。

2. 实验数据的管理应该做好备份，并防止数据丢失或篡改。

通过以上《蛋白质检测操作规程》，实验室可按照规程科学、规范的开展蛋白质检测工作，确保实验数据的准确性和实验室的安全运行。

尿素－SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳1．试剂的配制①30%凝胶母液丙烯酰胺和N, N’-亚甲双丙烯酰胺。

以温热（利于溶解双丙烯酰胺）的去离子水配制含有29.2 %（w/v）丙烯酰胺和0.8 %（w/v）N, N’-亚甲双丙烯酰胺的贮存液，丙烯酰胺和双丙烯酰胺在贮存过程中缓慢转变为丙烯酸和双丙烯酸，这一脱氨基反应是光催化或碱催化的，故应核实溶液的pH值不超过7.0。

这一溶液置棕色瓶中贮存于室温，每隔几个月须重新配制。

小心：丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并容易吸附于皮肤。

②4倍SDS分离胶缓冲液(4×, pH 8.8) (200 ml)称取SDS 0.8 g (4%)，Tris 36.342 g (1.5mol/L)，溶解（必要时加热），用盐酸调pH为8.8，定容至200 mL。

③4倍SDS浓缩胶（堆积胶或积层胶）缓冲液。

(4×，pH 6.8)（100 ml）称取SDS 0.4 g (4%)，Tris 6.051 g (0.5mol/L)，溶解（必要时加热），用盐酸调pH为6.8，定容至100 mL。

④TEMED(N,N,N’,N’-四甲基乙二胺)。

TEMED通过催化过硫酸铵形成自由基而加速丙烯酰胺与双丙烯酰胺的聚合。

⑤10%过硫酸铵。

0.5 g过硫酸铵溶于5 mL去离子水中，可于4 ℃下存放数月⑥Tris-甘氨酸电极缓冲液（1 L）称取3g Tris （25 mmol/L）,14.4 g甘氨酸(192 mmol/L),1 g SDS（0.1 %），溶解后定容至1L，pH应该在8.3左右。

也可以制成10×的储存液在室温下长期保存。

⑦样品处理液（5×样品缓冲液）（10 mL）称取Tris 0.07266 g Tris (60 mmol/L), SDS 0.02 g (2%, W/V), 溶于4 mL水中, 用HCl小心调节pH为 6.8,再加 5 mL 50%的甘油(终浓度25%, V/V)，0.5 mL 2-巯基乙醇(14.4 mmol/L)，溴酚蓝0.01 g (终浓度0.1%), 加去离子水至10 mL。

2.2.5 SDS全细胞蛋白电泳提取蛋白质：用Ependorf管离心收集菌体（对数生长期），称其重量，并用样品缓冲液（sample buffer）裂解细胞，使其浓度达到150 mg⋅ml-1，放入-20℃冰箱中，临用前在95℃下加热10 min，并以4000 rpm/min离心2 min，待用。

电泳：用DYCZ-24D双垂直电泳槽，10%的分离胶，5%的浓缩胶。

先灌分离胶，等其凝固后再灌入浓缩胶，同时插好梳子。

电泳前将2.1.2.5中样品取出溶化后在95℃下加热10 min放在冰上冷却后即可点样，第一个孔点buffer，第二个孔点marker，其余每孔点样7 μl，电泳时恒流30 mA，视其指示剂溴酚兰到达胶的底端为止。

胶的染脱色及判读：电泳完把胶取下放在大小适合的盒子里，放入染色液在37℃摇床振荡30 min，然后用脱色液脱色，遵循少量多次原则（约5次），直到背景蓝色褪去。

把胶放在紫外成像仪上照相观察，把条带相同的归为一类。

所需试剂：样品缓冲液：4 ml 水；1 ml 0.625 M Tris-HCl，pH 6.8；0.8 ml 甘油；1.6 ml 10% SDS；0.4 ml β-巯基乙醇；0.2 ml 1%百里溴酚兰。

电泳缓冲液：3.03 g Tris base，14.41 g 甘氨酸，1 g SDS；加水到1000 ml；pH 8.4+0.1。

下胶缓冲液：18.17 g Tris Base，2 ml 20%SDS溶液，pH 8.8，加水到100 ml。

上胶缓冲液：6.06 g Tris Base(1.5 M), 2 ml 20%SDS溶液，pH 6.8，加水到100 ml。

10ml 10% 分离胶：2.5 ml 下胶缓冲液；3.4 ml H2O；4.1 ml Acry/biscrylamide (24.2%, 30:1) ; 30 μl 10%的过硫酸铵; 20 μl TEMED。

5 ml5% 浓缩胶：1.25 ml 上胶缓冲液; 2.25 ml 水; 1 ml Acry/biscrylamide(24.2%); 30 μl 10% 的过硫酸铵; 20 μl TEMED。

一、目的：建立电泳仪的操作规程，保证实验结果的有效、准确性。

二、适用范围：适用于电泳仪的使用。

三、职责：设备管理人员、操作人员。

四、内容：
1.电泳前，禁止将电泳仪附带的电泳导线连接到电泳仪电源上。

2.把U型凝胶托盘放入制胶器中，然后把配好的琼脂糖凝胶倒入制胶器中（注意凝胶液体温度控制在60℃左右），再把试样格插入凝胶托盘的两边槽内。

3.待凝胶聚合后，轻轻拔掉试样格，注意先拔一侧。

垂直拔出会使胶孔产生真空，导致部分凝胶被带出。

把凝胶托盘移入电泳仪，加入缓冲液，使缓冲液没过凝胶1-2mm。

（注意：加样孔靠近负极一端）
4.用移液器将样品加入加样孔中。

5.盖好上盖，连接电泳仪电源与电泳仪之间的电泳导线。

6.注意不要接错正负极，检查无误后接通电泳仪电源，根据实际情况选择适宜的电压（一般情况200V-250V,电压过高会产生液体过热影响电泳结果）即可电泳。

7.电泳实验结束后，先关闭电泳仪电源，随之拔出电泳导线，然后打开电泳仪上盖，取出凝胶托盘。

把凝胶轻轻推入到用于照相的凝胶托板上准备照相。

8.仪器使用登记。

免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYＤRＡＧＥL IMMUＮＯFIXAＴION)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β—球蛋白与γ—球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。

为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。

免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:1。

蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。

2。

电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散、３。

使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。

4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。

为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。

经电泳后,ELP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。

其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。

通过它(们)与抗血清,γ(IｇG)、α(ＩｇA)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别、该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果。

四．方法学溯源自1930年由Tｉｓｅlius发现了移界电泳(moviｎg bounｄａry ｅectrophoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe eｌecrｒophoresiｓ)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键。

通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。

五．仪器（一）型号:ＳＥBIA HＹＤRASYＳ(PＮ12１0)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:10ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0—30０V(可选至３０00V)电流0—500mＡ功率0-１00Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．HＹDＲＡGEＬ1 IF试剂盒HＹDＲAＧＥL 2IF试剂盒HYDRＡGEL 4IF试剂盒HYＤＲAGＥL 9 ＩＦ试剂盒（1）商标:ＳＥBIA（2）包装规格:10测试/2０测试／40测试/90测试（3）货号:ＰN４301/ＰN４３0２／PN4３04/ＰN４３０９2．脱色液(1) 商标:SＥＢIA(2)包装规格:Ｐａcｋfｏr １０×100ml(3) 货号:PＮ4５40(４) 成分:柠檬酸3、洗涤液（1）商标:ＳEBＩA（2）包装规格:Paｃk foｒ10×80ｍl（3）货号:ＰＮ4541（4）成分:叠氮钠4.稀释剂（1）商标:SEＢIA（2）包装规格:Paｃｋfｏr1×５ml（3）货号:PN458７（二）配套品:ＩＦ试剂抗体(1) 商标:SEBIA(2 ) 包装规格:Pａcｋfor 5×1mｌ(３)PＮ4３15七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。

免疫固定电泳操作规程项目名称免疫固定电泳( HYDRAGEL IMMUNOFIXATION)检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳方法学原理血清蛋白电泳中岀现的异常条带主要存在于B -球蛋白和丫 -球蛋白区域，通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。

为鉴别异常条带，可运用免疫固定技术。

免疫固定电泳是一种简单的技术，电泳后的蛋白质与相应抗体形成复合物和被固定在相应的位置上，通过下列四个步骤： 1．蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。

2．电泳后已分离的蛋白质被固定并产生免疫沉淀：应用固定剂和抗血清加于凝胶表面的泳道上，并让固定剂和抗血清在凝胶内渗透扩散。

3．使用吸水纸和清洗将未沉淀的蛋白质去除，已被沉淀的蛋白质贮留在凝胶内。

4．将蛋白质染色，并将这些免疫沉淀区带的位置与蛋白质经电泳后观察到的异常蛋白区带进行比较。

为了精确识别单克隆区带，样品同时在六条泳道上进行测试。

经电泳后，ELP作为参考泳道以显示电泳后的蛋白质。

其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。

通过它(们)与抗血清，丫(IgG)、a (IgA)、卩(IgM)重链和K、入轻链(游离和非游离)反应与否进行鉴别。

该技术简单、快速、图象清晰，易于解释结果。

方法学溯源自 1930 年由 Tiselius 发现了移界电泳( moving boundary eectrophoresis )，而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳( zone elecrrophoresis )所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。

通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性是鉴定某一蛋白成分最好的方法，免疫固定电泳技术是目前应用最广泛的方法之一。

仪器型号： SEBIA HYDRASYS (PN1210)分析和计算参数：处理量：约 18 个样本 / 小时所需样本量： 10ul检验时间：约 55 分钟重复性：有良好的批内和批间重复性电泳参数：电压 0 — 300V (可选至 3000V)电流 0－ 500mA功率 0— 100W试剂及配套品试剂HYDRAGEL 1 IF式剂盒HYDRAGEL 2 IF式剂盒HYDRAGEL 4 IF式剂盒HYDRAGEL 9 IF式剂盒商标：SEBIA包装规格：10测试/20测试/40测试/90测试货号：PN4301/ PN4302/ PN4304/PN4309脱色液(1)商标：SEBIA(2)包装规格：Pack for 10 x 100ml(3)货号：PN4540(4)成分：柠檬酸3 •洗涤液商标：SEBIA包装规格：Pack for 10 x 80ml货号：PN4541成分：叠氮钠4 .稀释剂商标：SEBIA包装规格：Pack for 1 x 5ml货号：PN4587配套品：IF试剂抗体(1) 商标：SEBIA(2 ) 包装规格：Pack for 5 x 1ml(3) PN4315操作步骤㈠开机，启动电泳仪。

尿蛋白测定方法
尿蛋白测定方法
尿蛋白是指在正常情况下应该不应存在于尿液中的蛋白质。

通过尿蛋白的检测，在一定程度上可以确定身体是否存在肾脏疾病或其他慢性病变。

目前，常用的尿蛋白检测方法主要有三种：尿液常规检查、尿蛋白蓝染色法和定量检测法。

第一种方法是指通过常规尿液检查，来初步发现蛋白质是否异常。

此方法简单易行，成本低廉，但是在发现异常蛋白质时，无法确定具体的蛋白类型或浓度。

第二种方法是指采用尿蛋白蓝染色法。

此方法适用于初筛法，能在相对较短的时间内检测出异常蛋白质的类型和数量，并可定性分析蛋白质的来源。

但是，该方法的缺点在于操作难度较大，需要使用特殊的设备，而且结果容易受操作人员水平的影响。

第三种方法是目前最常用的定量检测法。

此方法通过测量尿液中蛋白质的浓度来确定是否存在异常蛋白质。

常用的尿蛋白测定方法包括比
浊法、免疫测定法、电泳法等。

其中，比浊法操作简单，成本低廉，
但灵敏度不高；免疫测定法在灵敏度和特异性方面较好，但成本较高；电泳法可以分离出不同种类的蛋白质，但需要更加专业的设备和操作
技术。

总体上，目前的尿蛋白测定方法已经具有较高的准确性和可靠性，但
需要根据具体情况选择相应的方法来测定尿蛋白，以更好地发现和治
疗慢性病变。

糖尿病肾病患者尿蛋白电泳测定及其临床意义摘要】目的对糖尿病肾病患者进行琼脂糖凝胶尿蛋白电泳测定,分析患者尿蛋白成分特点,探讨糖尿病肾病患者进行尿蛋白电泳的临床意义。

方法采用全自动琼脂糖凝胶电泳分析仪对20例正常对照组及60例糖尿病患者进行尿蛋白电泳分析。

结果60例糖尿病患者,24例尿蛋白定性阴性中有17例没有检出尿蛋白,1例肾小管性蛋白尿,6例为生理性蛋白尿。

36例尿蛋白定性阳性患者生理性蛋白尿7例,4例肾小管性蛋白尿,15例肾小球性蛋白尿,10例混合性蛋白尿。

结论对糖尿病患者进行尿蛋白电泳测定,对糖尿病患者早期肾损伤诊断、判断肾损伤程度和部位有重要意义。

【关键词】糖尿病肾病尿蛋白电泳【Abstract】 Object Objective of diabetic nephropathy in patients with agarose gel electrophoresis of urinary protein determination, analysis of urinary protein composition in patients with characteristics of the patients with diabetic nephropathy urine protein electrophoresis of clinical significance. Methods Automatic analyzer agarose gel electrophoresis of 20 cases of normal control group and 60 cases of diabetes in patients with urine protein electrophoresis.Results The results of 60 cases of diabetic patients, 24 patients with negative qualitative urine protein in 17 cases not detected in urine protein and one cases of renal tubular proteinuria, proteinuria in 6 cases of rational living. Characte rization of 36 cases of urinary proteinin patients with positive physiological proteinuria in 7 cases, 4 cases of renal tubular proteinuria, glomerular proteinuria in 15 cases, 10 cases of mixed proteinuria. Conclusion Diabetic patientswith determination of urine protein electrophoresis of renal injury in diabetic patients with early diagnosis, to determine the extent and site of renal injury are important.【Key words】diabetic nephropathy urine protein electrophoresis糖尿病(DM)近年来在全球其发病率呈上升趋势。

血清蛋白电泳标准操作程序1规范血清蛋白电泳检测的操作程序，以保证临床检测结果的准确性。

2检测方法为电泳技术。

原理是：粒子在溶液中带有净电荷才能在电场中移动，其带电状态取决于粒子表面的化学基团和溶液的pH值。

蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点。

若溶液pH处于等电点酸侧，则蛋白质带正电荷，向负极移动。

若溶液pH处于等电点碱侧，则蛋白质带负电荷，向正极移动。

血清中各种蛋白质等电点不同，在同一电场中泳动速度不同。

电泳后用酸兰染色，通过扫描检测。

白蛋白带负电荷最多，因此泳动在最靠阳极，以后依次为α-1 球蛋白、α-2 球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白。

3血清。

4黄色胶头促凝试管，有促凝剂。

抽取静脉血 2~3ml 置黄头试管内送检。

血清样本 2~8℃可稳定 1 周。

如果需要延长保存样品时间，需将样品保存在-20℃条件下。

55.1 试剂：美国海伦娜血清蛋白电泳检测试剂盒。

5.1.1 染色液 I：取丽春红浓缩液一瓶(试剂盒内) 过滤，用 5 份甲醇、 5 份蒸镏水、1 份冰醋酸混匀稀释至 1000 ml ，装入专用壶内备用。

5.1.2 脱色液I：5 份甲醇、 5 份蒸镏水、 1 份冰醋酸混匀稀释至 1000ml ，装入专用壶内备用。

5.1.3 染色液 II：取酸性蓝染色试剂一瓶(试剂盒内)，用 50%冰醋酸 100ml ，使其完全溶解并过滤，加蒸镏水混匀稀释至 1000 ml ，装入专用壶内备用。

5.1.4 脱色液 II：配制 5%冰醋酸 1000 ml ，装入专用壶内备用。

5.2 试剂保存与有效期5.2.1 新购试剂保存于室温，勿冷冻，在有效期内使用。

5.3 仪器： SPIFE4000 电泳仪。

66.1 打开 SPIFE4000 全自动电泳分析系统主电源，然后打开电脑点击 SPIFE4000 图标使仪器初始化。

6.2 灌注样品处理器。

点击 Maintenance→ Prime→ Sample Delivery system 进行灌洗。

蛋白电泳是一种常用的蛋白质分离和分析技术，用于研究蛋白质的分子量、电荷和纯度等特性。

蛋白电泳样品的制备包括以下几个基本步骤：
样品提取：根据需要研究的蛋白质来源，选择合适的提取方法。

常用的提取方法包括机械破碎、化学提取和生物化学方法等。

确保样品提取得到足够纯净的蛋白质溶液。

样品预处理：根据需要去除样品中的其他杂质，如细胞碎片、核酸、脂质等。

可以使用蛋白质溶解剂、洗涤缓冲液、热处理等方法进行样品预处理。

蛋白质浓度测定：使用合适的方法测定蛋白质样品的浓度，以确保加样量的准确性和一致性。

常用的测定方法包括Bradford法、Lowry法、BCA法等。

添加蛋白质加载缓冲液：为了保持样品的稳定性和在电泳过程中获得更好的分离效果，将蛋白质样品与加载缓冲液混合。

加载缓冲液一般包含Tris-HCl缓冲液、甘氨酸、尿素、SDS等。

热处理和还原：对于某些样品，可以进行热处理和还原以助于蛋白质的解聚和线性化。

常见的热处理方法是将样品加热至95℃-100℃，常用的还原剂为二巯基乙酸（DTT）或巯基乙醇（β-ME）。

加载样品：将经过处理的蛋白质样品按照所需电泳装置的规格和要求加载到准备好的凝胶中，常用的凝胶有聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）和聚丙烯酰胺浓缩凝胶（Native PAGE）。

以上步骤仅为一般流程，具体的样品制备方法和步骤可能因蛋白质的来源和实验目的而有所不同。

在进行蛋白电泳实验前，建议参考相关的实验方法和文献，以确保样品制备的准确性和可重复性。