重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗研究及应用

77投稿信箱sydk2007@新城疫（ND）和禽流感（AI）是危害养禽业最为严重的两种传染病，广泛分布于世界各国。

这其中，ND 与H9亚型AI 混合感染发病率最高，在临床上最常见，给我国的养禽业造成了严重的经济损失。

国内外普遍使用疫苗（有活苗和灭活苗两种）预防这该疾病，单苗的使用较为普遍，但单苗存在使用不便，两次免疫造成养殖成本上升。

为此研制开发一种安全有效的二联疫苗将两种病毒抗原联合，达到一针防两病的目的，对预防控制危害养禽业的两种主要病原具有重要的实践意义。

灭活疫苗是采用化学或物理方法杀死病原生物所制备的一种用于预防接种的生物制品。

灭活疫苗是先对病毒或细菌培养，然后用加热或化学剂将其灭活。

灭活疫苗即可由整个病毒或细菌组成，也可由它们的裂解片段组成为裂解疫苗。

鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗主要是由甲醛灭活后与油佐剂混合乳化制成。

所有的乳化剂分子都是由极性的亲水基团和非极性的亲油基团两部分组成。

而且两部分分处分子两端，形成不对称的结构。

这样的分子结构使得乳化机分子一部分可溶于水，另一部分易于和油相结合。

乳化剂的作用就在于使用机械作用分散所得的液滴不互聚集结。

乳化机在成品质量方面发挥的很大的功效，影响着产品的质量，本文主要通过试验对不同乳化剂进行研究，以便指导生产。

一、材料和方法（一）材料1.试验用主要试剂（如表1）。

2.试验用动物。

试验用SPF 鸡，由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供，饲养在SPF 舍内，由专人负责管理和饲喂，饲料均经Co60照射消毒，饮水用煮沸消毒的常水；试验用SPF 鸡胚，由山东济南斯帕法斯家禽有限公司提供SPF 种蛋，哈药集团生物疫苗有限公司孵化；SPF 鸡血清，SPF 鸡鸡翅静脉采取血液1 ml，3 000 rpm 离心10 min 获得3.试验用疫苗。

鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗样品（A-M、A-F、A-H）。

4.试验用主要仪器（如表2）。

CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY禽流感病毒H5N4的重组酶介导检测方法学研究陈淑丹I廖静I王玲I罗鹏I郭利川2郑伟广吴忠华I应清界2摘要采用逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(Reverse Transcription Recombinase-aided amplification,RT-RAA)建立检测禽流感病毒H5N1的快速方法，根据禽流感病毒H5N1保守序列设计引物及探针，将H5N1RNA逆转录为cDNA,然后以cDNA作模板.扩增检测病毒核酸序列本研究构建了带有H5N1核酸序列的质粒，以此为模板检测不同浓度的质粒.分析该方法的灵敏度，对已知样本进行检测来验证方法的特异性.设计的H5N1特异性引物和探针，能在3『C恒温下，10-30min可有效扩增岀相应病毒的核酸.与其他流感病毒无交叉反应；对质粒的检测灵敏度可达10拷贝建立的RT-RAA检测禽流感病毒H5N1方法灵敏度和特异性均较髙.且该方法操作简单，适用于禽流感病毒H5N1的快速检测关键词禽流感病毒H5N1；逆转录-重组酶介导核酸扩增技术(RT-RAA)；分子检测Rapid Detection of H5N1Avian Influenza Virus Based onRAA Fluoresce n ee AssayCHEN Shu-Dan1LIAO Jing1WANG Ling1LUO Peng1GUO Li-Chuan*12ZHENG Wei1,WU Zhong-Hua1YING Qing-Jie2Abstract A quick assay of detecting H5N1avian influenza virus was established through reverse transcription recombinase-aided amplification assay(RT-RAA).H5N1avian influenza virus RNA was transcribed into the cDNA by a reverse-transcription reaction,which served as template for RAA amplification.We design universal primer and probe according to the conserved nucleic acid sequence of H5N1virus.Then constructed plasmid and clinical samples were used to evaluate the specificity and sensitivity of the method.The results showed that nucleic acids of H5N1could be well amplified with specific primer and probe,while nucleic acids of other viruses had negative amplification results.The whole reaction was completed within30minutes under constant temperature of 39°C.The study indicates that the RT-RAA method is very sensitive and able to detect10copies.The established RT-RAA assay had high sensitivity and specificity,ready-to-hand for rapid detection of H5N1avian influenza virus.Keywords H5N1avian influenza virus；reverse transcription recombinase-aided amplification(RT-RAA)；molecular detectio n基金项目:海关总署科研项目(2019HK139)通讯作者：郑伟(1979-),男，汉族，杭州人，博士，主任医师.主要从事口岸病原体检测工作，E-mail：*************** 1•杭州国际旅行卫生保健中心(杭州海关口岸门诊部)杭州3100122.江苏奇天基因生物科技有限公司无锡2141351.Hangzhou Intemationai Travel Healthcare Center(Hangzhou Customs Port Outpatient Departments),Hangzhou3100122.Jiangsu Qitian Gene Bio-Sci&Tech Co.Ltd,Wuxi2141354中国口岸科学技术禽流感病毒可通过空气传播，引起急性呼吸道感染高致病性禽流感H5N1曾在亚洲、欧洲和非洲引起大量家禽的流感暴发野生鸟类包括海鸟、海鸥和家鸭被认为是病毒的天然宿主。

鸡新城疫疫苗研究及应用概况作者：宫晓程增青李陆梅等来源：《湖北畜牧兽医》2013年第09期摘要：介绍了鸡新城疫病的流行情况及疫苗的应用现状，概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的鸡新城疫疫苗研究及应用现状，旨为鸡新城疫疫苗的研制和应用提供一定的参考依据。

关键词：新城疫；疫苗；研制；应用中图分类号：S858.31 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）09-0065-021 新城疫流行情况及疫苗应用现状鸡新城疫又叫亚洲鸡瘟。

它是一种由副粘病毒引起的高度接触性、急性败血性传染病。

主要感染禽，也可感染人类。

该病流行于很多国家，给世界养殖业造成很大的威胁，被世界卫生组织定为A类疫病[1]。

新城疫自1926年被确认以来，在世界范围内广为传播已有80多年，给养禽业带来了巨大的经济损失，迄今仍是禽类最重要的疾病之一。

新城疫病毒自1946年在我国首次分离至今已在中国存在了60多年，自20世纪90年代以来，临床上非典型新城疫的发生现象十分普遍，在鹅群及鸭群中均有发生[2-4]，说明新城疫的易感宿主范围在进一步扩大。

由于疫苗的广泛应用，目前的NDV流行株基因型已发生较大改变，流行病学调查充分显示，基因Ⅶd亚型在我国当前NDV流行株中占有绝对优势，与经典疫苗Lasota 株（基因Ⅱ型）核苷酸同源性不足78%。

扬州大学[5]、中国动物疫病流行中心[6，7]、山东农科院家禽所[8]等在流行病学调查中均显示我国近几年基因Ⅶ型NDV流行十分普遍。

目前国内外企业生产的新城疫疫苗毒株有10余株，其中Lasota毒株制备的活疫苗、灭活疫苗占据优势地位。

2 疫苗种类2.1 灭活疫苗目前预防鸡新城疫的灭活疫苗使用较多的为油乳剂灭活疫苗，国内生物制品厂家多用Lasota株，梅里亚用Ulster2c株、英特威用Clone-30株制备疫苗。

评价疫苗质量的主要因素在于毒株的免疫原性及病毒含量的高低。

目前，疫苗效力均已达到国际上要求的灭活苗标准，可用于不同日龄的鸡，主要通过颈部皮下及肌肉注射途径免疫。

国家批准使用的有关兽用疫苗参考目录一、高致病性禽流感重组禽流感病毒（H5+H7）三价灭活疫苗二、口蹄疫1. 口蹄疫O型灭活疫苗2. 口蹄疫O型合成肽疫苗3. 口蹄疫A型灭活疫苗4. 口蹄疫O型—A型二价灭活疫苗5. 口蹄疫O型—A型二价合成肽疫苗三、小反刍兽疫1. 小反刍兽疫活疫苗2. 小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗四、布鲁氏菌病1. 布鲁氏菌病活疫苗（S2株）（布氏菌病活疫苗（S2株））2. 布鲁氏菌病活疫苗（A19株）（布氏菌病活疫苗（A19株））3. 布氏菌病活疫苗（M5株）4. 布氏菌病活疫苗（M5-90株）5. 布氏菌病活疫苗（A19-ΔVirB12株）6. 布鲁氏菌病活疫苗（BA0711株）7. 布鲁氏菌病活疫苗（Rev.1株）8. 布鲁氏菌基因缺失活疫苗（M5-90Δ26株）五、猪瘟1. 猪瘟活疫苗（传代细胞源）2. 猪瘟活疫苗（细胞源）（政府采购专用猪瘟活疫苗（细胞源）3. 猪瘟耐热保护剂活疫苗（细胞源）4. 猪瘟活疫苗（兔源）5. 猪瘟耐热保护剂活疫苗（兔源）6. 政府采购专用猪瘟活疫苗（脾淋源）7. 猪瘟活疫苗（C株，悬浮培养）8. 猪瘟活疫苗（C株，PK/WRL传代细胞源）9. 猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗（Rb-03株）10. 猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒灭活疫苗（WH-09株）11. 猪瘟基因工程亚单位疫苗（293T-E2）六、新城疫1. 鸡新城疫活疫苗（La Sota株）2. 鸡新城疫活疫苗（Clone30株）3. 鸡新城疫活疫苗（CS2株）4. 鸡新城疫活疫苗（HB1株）5. 鸡新城疫活疫苗（N79株）6. 鸡新城疫活疫苗（F株）。

灭活疫苗有哪些优点
张秀芳
【期刊名称】《山西农业（致富科技）》
【年(卷),期】2003(000)011
【摘 要】@@ 灭活疫苗从对种鸡和商品蛋鸡的保护角度来讲,具有以下几个优点.
【总页数】1页(P48)
【作 者】张秀芳
【作者单位】030200,古交市牧业局
【正文语种】中 文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗与H5亚型二价灭活疫苗免疫效价对比
[J], 谭福林;陆兰敏
2.牛口蹄疫O型-亚Ⅰ型双价灭活疫苗、A型灭活疫苗和牛口蹄疫三价灭活疫苗免
疫效果对比试验 [J], 周静华;丰春燕;王建忠
3.牛口蹄疫O型-亚I型双价灭活疫苗、A型灭活疫苗和牛口蹄疫三价灭活疫苗免
疫效果比对试验 [J], 周静华;丰春燕;王建忠
4.最新种猪口蹄疫型灭活疫苗及型-型二价灭活疫苗免疫效果评估 [J], 刘针伶;黄溢
泓;全琛宇;李志源;周师师;覃艳然;许宗丽;马小蓉;邱洁
5.灭活疫苗有哪些优点？ [J],

因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买

H5亚型禽流感免疫程序的临床免疫效果检测
谢海燕;张济培;朱燕秋;张险朋;杨德胜;陈建红;王健青
【期刊名称】《畜牧与兽医》
【年(卷),期】2008()1
【总页数】2页(P111-112)
【关键词】H5亚型禽流感疫苗;免疫程序;效果检测;临床;大田试验;二次免疫;血凝抑制;肉鸡场
【作者】谢海燕;张济培;朱燕秋;张险朋;杨德胜;陈建红;王健青
【作者单位】广东省东莞市兽医防疫检疫站,广东东莞523010;佛山科学技术学院,广东南海528000
【正文语种】中文
【中图分类】S858.3
【相关文献】
1.禽流感疫苗(H5亚型)免疫程序对杂交番鸭的免疫效果 [J], 严甦;余旭平;沈生泉;沈琴芳;严惠群;范月明;朱建芬
2.六盘水市规模养殖场H5亚型禽流感免疫抗体检测及免疫效果分析 [J], 彭郁霖;宋敏;周标;李晓林;张熠
3.开封市蛋鸡新城疫、禽流感(H5、H9)不同免疫程序免疫效果检测 [J], 朱锐广;杜娟
4.商丘市H9亚型禽流感免疫程序及免疫效果检测 [J], 李桂喜;严平;梁磊;王磊;刘少博;张琼
5.重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗(H5N1Re-11株、Re-12株
+H7N9Re-2)对黄羽肉鸡免疫效果抗体监测试验 [J], 赵东旭; 孟福强; 李叔伟; 姜宇
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

中华人民共和国农业部公告第2251号正文：----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------中华人民共和国农业部公告第2251号根据《兽药管理条例》和《兽药注册办法》规定，经审查，批准中国农业科学院哈尔滨兽医研究所等5家单位申报的重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）等2种兽药产品为新兽药，现核发《新兽药注册证书》，并发布产品试行规程、质量标准、说明书和标签，自发布之日起执行。

农业部公告第2233号“马波沙星片”研制单位之一天津生机集团股份有限责任公司应为天津生机集团股份有限公司，马波沙星原料及马波沙星片监测期应为“三年”。

特此公告。

附件：1.新兽药注册目录2.试行规程3.质量标准4.说明书和标签农业部2015年4月27日附件1：新兽药注册目录新兽药名称研制单位类别新兽药注册证书号备注监测期重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、山东信得动物疫苗有限公司、哈尔滨维科生物技术开发公司三类（2015）新兽药证字20号注册3年聚维酮碘口服液深圳市安多福动物药业有限公司、深圳市安多福消毒高科技股份有限公司四类（2015）新兽药证字21号注册3年附件2（略）附件2（略）附件3（略）附件4重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）等2种兽药产品说明书和标签一、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）说明书和内包装标签（一）重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）说明书【兽药名称】通用名重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（细胞源，Re-6株+Re-4株）商品名无英文名Reassortant Avian Influenza Virus H5 Subtype Vaccine,Inactivated (Cell Source，Strain Re-6+Strain Re-4)汉语拼音Chongzu Qinliugan Bingdu H5 Yaxing Erjia Miehuoyimiao (Xibaoyuan,Re-6 Zhu+Re-4 Zhu) 【主要成分与含量】疫苗中含灭活的重组禽流感病毒H5N1亚型Re-6株和Re-4 株。

马立克病毒二价活疫苗效价检测实验王友;尤永君;徐兆强;朱秀同;秦爱建【期刊名称】《中国动物保健》【年(卷),期】2013(15)8【摘要】由于CVI988/Rispense疫苗优良的免疫特性，已经被认为是目前防控马立克氏病（Marek's disease， MD）效果最好的疫苗。

然而，近年来随着马立克病毒（Marek's disease virus，MDV）毒力的不断增强。

CVI988/Rispense需要与MDV-Ⅱ或者HVT联合使用才能防止免疫失败的发生。

本实验通过空斑计数和间接免疫荧光相结合的方法测定了马立克病毒CVI988/Rispense+FC126二价活疫苗的效价。

结果显示批次 A 中 CVI988为4400PFU/dose，HVT 为2600/dose；批次 B 中 CVI988为4800PFU/dose，HVT 为2400PFU/dose；批次C中CVI988为4600PFU/dose，HVT为2800PFU/dose。

所得结果均显著高于国家标准CVI988不少于2000PFU/dose，HVT不少于1000PFU/dose，并且批次之间非常稳定，适合用作鸡群马立克氏病的防控。

%CVI988/Rispense has become recognized as the gold standard due to its superior protection properties. With further increase in virulence of fieldviruses,CVI988/Rispense was com bined with serotypeⅡor HVT to prevent the vaccine failure. The CVI988/Rispense+FC126 bivalent live vaccine potency was determined by plage count and indirect immunofluorescence. The result display A batch include 4400PFU CVI988 and 2600PFU HVT per dose. B batch include 4800PFU CVI988 and 2400PFU HVT per dose. C batch include 4600PFU CVI988 and 2800PFU HVT per dose. These resultssiginificantly higher than government standard with CVI988 no fewer than 2000PFU and HVT no fewer than 1000PFU per dose. The reaearch showed that the potency is very stable between batches,so the bivalent live vaccine is suitable for Marek's disease prevention and control.【总页数】4页(P16-18,20)【作者】王友;尤永君;徐兆强;朱秀同;秦爱建【作者单位】天津瑞普生物技术股份公司天津300381;天津瑞普生物技术股份公司天津300381;天津瑞普生物技术股份公司天津300381;天津瑞普生物技术股份公司天津300381;扬州大学兽医学院农业部生物制品创制重点实验室江苏扬州225009【正文语种】中文【相关文献】1.重组禽流感病毒(H5+H7)二价灭活疫苗与H5亚型二价灭活疫苗免疫效价对比[J], 谭福林;陆兰敏2.新工艺新产品，再创新辉煌——瑞普生物马立克氏病二价活疫苗隆重上市 [J],3.新工艺新产品,再创新辉煌——既瑞普生物马立克氏病二价活疫苗隆重上市 [J], 天津瑞普生物技术股份有限公司4.鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立 [J], 李启红;杨承槐;刘丹;夏业才;李慧姣;李俊平5.马立克氏病二价活疫苗（CVl988＋FCl26株） [J], 无因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。