实验二植物根系活力的测定
植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验学习测定根系活力的甲烯蓝法。
【原理】
根据沙比宁等的理论，植物对溶质的吸收具有表面吸附的特性，并假定被吸附物质在根系表面形成一层均匀的单分子层；当根系对溶质的吸附达到饱和后，根系的活跃部分能将吸附着的物质进一步转移到细胞中去，并继续产生吸附作用。在测定根系活力时常用甲烯蓝作为吸附物质，其被吸附量可以根据吸附前后甲烯蓝浓度的改变算出，甲烯蓝浓度可用比色法测定。已知1mg甲烯蓝形成单分子层时覆盖的面积为1.1m2，据此可算出根系的总吸收面积。从吸附饱和后再吸附的甲烯蓝的量，可算出根系的活跃吸收表面积，作为根系吸收活力的指标。
【材料、仪器与试剂】
1.材料：植物根系。
2.仪器及用具：分光光度计；移液管；烧杯；比色管。
3.试剂：0.01 mg•mL-1甲烯蓝溶液；0.0002 mol•L-1（0.075 mg•mL-1）甲烯蓝溶液。
【方法与步骤】
1. 甲烯蓝标准曲线的制作按表2－1用0.01 mg•mL-1甲烯蓝溶液配制系列标准溶液，于660 nm处测定吸光度，以甲烯蓝浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
表2－1 甲烯蓝系列标准溶液的配制
2. 将待测的植物根系洗净沥干，浸在装有一定量水的量筒中，用排水法测定根系的体积（或用体积计测定）。
3. 将0.0002 mol•L-1的甲烯蓝溶液（每毫升溶液中应含0.075 mg甲烯蓝，为消除溶液配制和比色误差，其含量需要重新进行比色，查标准曲线确定）分别倒入3个小烧杯中，编号，每个烧杯中溶液体积约10倍于根系的体积。准确记下每个烧杯中的溶液量。
4. 将洗净的待测根系，用吸水纸小心吸干，然后依次浸入盛有甲烯蓝溶液的烧杯中，每杯中浸1.5 min，注意每次取出时，都要使根上的甲烯蓝溶液流回到原杯中去。
5. 从3个小烧杯中各吸取甲烯蓝溶液1 mL，用去离子水稀释10倍后，于660 nm处测定吸光度，根据标准曲线，查得各杯浸根后甲烯蓝的浓度。
【结果与计算】
（1）总吸收面积（m2）=[（c1—c1’）×v1+（c2—c2’）×v2]×1.1
（2）活跃吸收面积（m2）= [（c3—c3’）×v3]×1.1
（3）活跃吸收面积%=根系活跃吸收面积（m2）/根系总吸收面积（m2）×100%
（4）比表面积（cm2·cm-3）= 根系总吸收面积（cm2）/根体积（cm3）
式中c：各杯未浸泡根系前的甲烯蓝浓度（mg•mL-1）；
c’：各杯浸泡根系后的甲烯蓝浓度（mg•mL-1）；
v：各杯中的溶液量（mL）。
【思考题】
1. 在TTC法和甲烯蓝法测定根系活力的过程中哪些环节容易产生误差？如何减少这些误差？
2. 在TTC法中，保温结束后加硫酸与否对实验结果有何影响？
