检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究
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检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的方法研究姚羽‘，李慧义２，张启明２，田颂九２，张正行３（１．山西省药品检验所，太原０３０００１； ２中国药品生物制品检定所，北京１０００５０；３．中国药科大学，南京２１０００９）
摘要：目的建立镇静安神类中成药中非法添加化学药品的检测方法。方法对中成药中常见添加的１０种化学药品，建立等度ＨＰＬＣ－ＤＡＤ方法对样品进行分离测定。以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；甲醇一乙睛一体积分数０．５％甲酸ｐＨ （２． ８士０．１）（３０：巧：５５）为流动相；检测波长为２５４ ｎ，同时进行ＤＡＤ全波长扫描；然后建立ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法对ＨＰＬＣ－ＤＡＤ的结果进行确证。结果相关分子离子峰特征碎片离子明显，并在数批镇静安神类中成药中检出非法添加的化学药品成分。结论本方法专属性强、灵敏度高，结果准确可靠，可作为检测镇静安神类中成药中非法添加化学药品的有效方法。关键词：镇静安神；高效液相色谱法；超高效液相色谱－０联四极杆质谱中图分类号：Ｒ２８４； Ｒ９１７文献标识码：Ａ文章编号：１００１一２４９４（２００７）０３一０２２４－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｌｅｇａｌ Ｍｉｘｔｕｒｅ ｉｎ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ＭｅｄｉｃｉｎｅＤＡＤｏｆ Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ｂｙ ＨＰＬＣ－
ＹＡＯ Ｙｕ＇，ＬＩ Ｈｕｉ－ｙｉ２，Ｔａｉｙｕａｎ ０３０００１，Ｃｈｉｎａ； ２ＺＨＡＮＧ Ｑｉ－ｍｉｎｇ２，ＴＩＡＮ Ｓｏｎｇ－ｊｉｕ２，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｅｎｇ－ｘｉｎｇ３（１． Ｓｈａｎｘｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，
Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００５０， Ｃｈｉｎａ；３． Ｃｈｉｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９， Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＳＴ ； ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ： Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｅｎ ｉｌｌｅ脚ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉ－ｃｉｎｅ （ＴＣＭ） ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ． ＭＥＴＨＯＤＳ ＨＰＬＣ－ＤＡＤ ａｎｄ ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆｔｈｅ ｏｒｇａｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ＴＣＭ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ， Ｔｈｅ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ａｎｄ Ｃ，￥ ｃｏｌｕｍｎ． Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓｍｅｔｈａｎｏｌ－ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ－０．５％ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ（ ｐＨ ２．８士０．１）（３０：１５：５５） ， ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｖｅ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ ｎｍ． ＲＥＳＵＬＴＳ Ｉｌｌｅｇａｌ ｃｏｍ－ｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｍａｎｙ ＴＣＭ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ． ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ， ａｎｄ ｃａｎ ｂｅｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｉｌｅｇａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ＴＣＭ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ： ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ；ＨＰＬＣ ；ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ
中药成分非常复杂，且通常多以复方使用。大多数人认为中药作用较缓和，不良反应小。因此有相当多患者更喜欢使用中成药，但现在个别不法厂商为牟取暴利，在中成药制剂中非法添加化学药品，以增强疗效。有些镇静安神类中成药及保健品的生产厂家在制剂中非法掺人苯二氮罩类，巴比妥类等药物，患者在不知情下而长期服用此类中药，易产生较大不良反应川。为防止和打击此类不法行为，保障人民健康，本试验建立了同时检测１０种化学药品的等度ＨＰＬＣ－ＤＡＤ和ＵＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法来检测镇静安神类中成药中非法添加的化学药品。１仪器与试药 仪器：Ａｇｉｌｅｎｔ １１００液相色谱仪，配有ＤＡＤ二极管阵列检测器，Ａｇｉｌｅｎｔ化学工作站。Ｗａｔｅｒｓ ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣ液相色谱仪及Ｗａｔｅｒｓ Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ Ｐｒｅｍ－ｉｅ：串联四极杆质谱仪。氯氮罩（批号１７１２４８－
２００３０１）、咪达哇仑（批号１７１２５０－２００４０１）、硝西伴（批号１２１７－９２０１）、艾司哇仑（批号１２１９－０１０２） ，氯硝西浮（批号１７１２２７－２００３０２）、劳拉西伴（批号１７１２２９－２００３０１）、阿普哇仑（批号１２１８－９７０２）、苯巴比妥（批号１７１２２２－２００３０３）、地西洋（批号１２３０－９６０１）、三噢仑（批号１２３０－２００００１），以上对照品均由中国药品生物制品检定所提供。样品Ａ（安神口服液，规格：１０ ｍＬ、医院制剂、批号０５０３０７）；样品Ｂ（复方解郁安神胶囊，市售，批号２００４０２１１）。甲醇、乙腊均为色谱纯，甲酸为分析纯，水为超纯水。２方法与结果２．１ ＨＰＬＣ测定２．１．１色谱条件色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ Ｚｏｒｂａｘ ＳＢ － Ｃｔ￥（４． ６ ｍｍ ｘ２５０ ｍｍ，５ ｝Ｌｍ）；流动相：甲醇一乙睛一体积分数０．５％甲酸ｐＨ（２．８１０．１）（３０：１５：５５）；检测波长：２５４ ｎｍ；柱温：３５℃；流速：１．３ ｍＬ・ｍｉｎ一’；进样
作者简介：姚羽，男，主管药师Ｔｅｌ： （０３５１）２０２９７２２Ｅ－ｍａｉｌ： ｙａｏｙｕ２０２＠ ｔｏｍ． ｃｏｍ
・２２４・Ｃｈｉｎ Ｐｈａｒｍ Ｊ，２００７ Ｆｅｂｒｕａｒｙ， Ｖｏｌ． ４２ Ｎｏ． ３中国药学杂志２００７年２月第４２卷第３期表２ＴａｂＺ各组分的检测限和定量限表
ＬＯＤ ａｎｄ ＬＯＱ ｏｆ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌｓ
ＬＯＤ／ｎｇＬＯＱ／ｎｇ０‘
４
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…，一
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１７２２３１５７５１４４４０
８８１２２８５
０．２２５６９１７．ｌｌ５６１３５１２）
量：２０ Ｒ，ＬＯ２．１．２溶液的配制①对照品溶液的制备：精密称取氯氮罩５ ｍｇ、咪达哩仑３０ ｍｇ、硝西浮３０ ｍｇ、艾司哇仑２０ ｍｇ，氯硝西洋２０ ｍｇ、劳拉西浮３０ ｍｇ、阿普哇仑２０ ｍｇ、苯巴比妥６０ ｍｇ、地西洋３０ ｍｇ、三哇仑３０ ｍｇ置于同一１００ ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。②供试品溶液的制备：取样品适量（样品说明书所述之一次口服剂量。胶囊剂连同胶囊壳一同倾人，先用水１０ ｍＬ将囊壳加热溶解；口服液量取５ ｍＬ）置具塞锥形瓶中，精密加人甲醇５０ ｍＬ，称定重量，超声处理２５ｍｉｎ，冷至室温，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液［２１。２．１．３方法学考察线性关系：精密配制各对照品系列溶液，分别进样２次，计算２次测得的各峰峰面积的平均值，以各组分的质量浓度（ｍｇ・Ｌ一‘）为横坐标，以峰面积为纵坐标进行回归，得到各组分线性回归方程，见表ｌａ表１镇静安神类药物的线性Ｔａｂ １ Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌｓ
ＣｈｌｏｒｄｉａｚｅｐｏｘｉｄｅＭｉｄ．－ＩＡ－
Ｎｉｔｒａｚｅｐａ叨Ｅｓ＊－ＡＡ－
ＣｌｏｎａｚｅｐａｍＬｏｒａｚｅｐａｍＡｌｐｒａｚｏｌａｍＰｈｅｐ－｝－ｒｈｉｔａｌＤｉａｚｅｐａｍＴｒｉｎＡａｍ
见图１一３０
Ｕｎｅａｒ ｒｖｎｎａＲｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ ／ｍｇ・Ｌ一’
图１混合对照品溶液色谱图１一抓氮罩；２一苯巴比妥；３一咪达哩仑；－４一硝西浮；５一氯硝西浮；６一艾司噢仑；７一劳拉西淬；８一阿普哇仑；９一三哇仑；１０一地西浮Ｆｉｇ １ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｆｏｒ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄｓ１一ｃｈｌｏｒｄｉａｚｅｐｏｘｉｄｅ；２一ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ ； ３一ｎｕｄａｚｏｌａｍ；４一ｎｉｔｒａｚｅｐａｍ ； ５一ｃｌｏｎａｚｅ－ｐａｍ；６一ｅｓｔａｚｏｌａｍ； ７一ｌｏｒａｚｅｐａｍ；８一ａｌｐｒａｚｏｌａｍ；９一ｔｒｉａｚｏｌａｍ；１０一ｄｉａｚｅｐａｍ
一『一『 Ｃｈｌｏｒｄｉａｚｅｐｏｘｉｄｅ Ｙ＝８．４６５ １ｐ＋８．７４４２ ０．９９９ ９ ０． ５１８ ０一２５９．０
Ｍｉｄａｚｏｌａｍ Ｙ＝２．３４４知＋３．４１１９ ０．９９９９ ３．１２０一１ ５６０ Ｎｉｔｒａｚｅｐａｍ Ｙ二３． ７３７ｐ＋１．４４４５ ０．９９９９ ２．０６４一１ ０３２ Ｅｓｔａｚｏｌａｍ Ｙ＝４．４４３知＋４．９１２６ ０．９９９９ １．５１５一７５７．５ Ｃｌｏｎａｚｅｐａｍ Ｙ二２．６９１币＋４．１９３ ０．９９９９ ２．０４７一１ ０２３．５ Ｌｏｒａｚｅｐａｍ Ｙ＝３．０９６知＋６．０２６ ０．９９９９ ５．１０８一２ ５５４ Ａｌｐｒａｚｏｌａｍ Ｙ＝１．９０５外＋０．１６３６ ０．９９９９ ４．０８８一２０４４ Ｐｈｅｎｏｂａｒｂｉｔａｌ Ｙ＝０．３１知＋５．３５９ ０．９９９９ １０．３８一５ １９２ Ｄｉａｚｅｐａｍ Ｙ＝４．５１７ １ｐ＋３０．５６８ ０．９９９９ ４．９８８一２ ４９４ Ｔｒｉａｚｏｌａｍ Ｙ二２．０２７助十９．５８６８ ０．９９９９ ５．８８０一２ ９４０ 精密度实验：取混合对照品溶液重复进样６次，
测定各峰峰面积，结果各对照品峰面积的ＲＳＤ值范围为０．３５％一１．７５％；峰保留时间的ＲＳＤ值范围为０．２１％一０．４２％，表明本法精密度良好。 稳定性实验：取对照品溶液，于配制后的。，２，４，６，８，１０，１２，２４ ｈ测定，各组分之色谱峰的保留时间和峰面积均无明显变化，结果表明，溶液在２４ ｈ内稳定。 检出限和定量限：将各对照品贮备溶液用甲醇溶液倍比稀释后测定，在信噪比Ｓ／Ｎ约为３时测得各组分检测限；在信噪比Ｓ／Ｎ约为１０时测得各组分定量限，结果见表２０２．１．４测定精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各２０ ｐ，Ｌ注人液相色谱仪，记录色谱图。结果
图２样品（Ａ）和（Ｂ） ＨＰＬＣ色谱图６一艾司哇仑；１０一地西浮Ｆｉｇ ２ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ（Ａ） ａｎｄ（Ｂ）６一ｅｓｔａｚｏｌａｍ；１０一ｄｉａｚｅｐａｍ
一
几／ｍｎ大／ｍｎ图３样品（Ａ）和（Ｂ） ＨＰＬＣ－ＤＡＤ光谱图
