当前位置：文档之家 › L_精氨酸高产菌的选育及基于代谢流量分布的育种机制_许正宏

L_精氨酸高产菌的选育及基于代谢流量分布的育种机制_许正宏

  • 格式：pdf
  • 大小：224.23 KB
  • 文档页数：6

第36卷第4期 2006年12月工业微生物IndustrialMicrobiology Vol.36No.4 Dec.2006

国家0十五0科技重点攻关项目(2004BA713B07-05)作者简介:许正宏(1971~),男,博士,副教授,主要从事微生物资源开发与利用的研究。*通讯作者,电话:86-510-85862412;E-mail:Wytao@sytu.edu.cn

L-精氨酸高产菌的选育及基于代谢流量分布的育种机制许正宏, 熊筱晶, 窦文芳, 陶文沂*(江南大学生物工程学院无锡214036)

摘 要 从分析钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)的精氨酸合成途径入手,提出了一种通过选育脯氨酸结构类似物抗性突变株以提高其精氨酸合成能力的育种思路。采用亚硝基胍(NTG)诱变处理出发菌株YD8(His-,SGr1.2mg/mL,D-Argr15mg/mL),经含15mg/mL的脯氨酸结构类似物S-甲基半胱氨酸(S-MC)的抗性筛选获得精氨酸高产突变株YDM403(His-,SGr

1.2mg/mL,D-Argr15mg/mL,S-MCr15mg/mL),产酸水平可达29.4g/L,较出发菌株YD8的产酸高出55.0%。通过代谢流量分布分析了菌株YD8和YDM403代谢网络的变化,结果表明,菌株YD8可能存在顺序反馈抑制作用,出发株YD8解除了Arg对Glu到Arg的反馈抑制,而YDM403又解除了Pro对Glu到Pro的反馈抑制,从而使中间物Glu累积量下降而对A-KG到Glu不再有反馈抑制,其通量提高,与此同时从Glu向Arg的代谢通量也相应增加。关键词:钝齿棒杆菌; 精氨酸; 代谢流量分布; 菌种选育

对于工业微生物细胞而言,在特定的生理条件下,其代谢表型(Metabolicphenotype)可以通过胞内代谢网络中各种代谢物的流量来进行表征[1]。代谢流量分布(metabolicfluxdistribution)是一种研究胞内代谢的方法,是根据胞内主要反应的化学计量模型和胞内代谢产物的质量平衡来计算胞内的代谢流量[2],通过较准确的代谢流的定量分析,找出影响目标代谢物过量合成的0瓶颈0因素是代谢工程的重要目标之一。氨基酸代谢是代谢工程研究领域的重要课题之一,国外已将代谢流分布的分析广泛用于研究氨基酸菌种在不同条件下代谢表型的改变,进而达到理性优化发酵工艺的目的,如谷氨酸[3]和赖氨酸[10]发酵条件的优化,谷氨酸棒杆菌在不同渗透压协迫条件下代谢流分布的改变[4]等。近年来,国内学者也有利用代谢流量分析来指导L-异亮氨酸发酵条件的优化[5],还有采用该技术手段分析L-缬氨酸育种机制的研究报道[6]等。 L-精氨酸(L-arginine,以下简称Arg)是一种碱性氨基酸,在医药和食品工业有较广泛的用途[7],近年来备受氨基酸工业的广泛关注。目前世界上仅日本等国实现了Arg的发酵法生产,其产量可达60g/L。而我国主要依靠毛发水解提取法制备Arg,发酵法生产的研发尚处于开始阶段。国际上有少量采用基因工程手段进行Arg菌种构建的报道,但从实际的产酸能力看,远未达到工业化生产的水平,因而国内外普遍采用的Arg菌种的选育技术仍以传统的诱变育种为主,其中又以Arg结构类似物抗性筛选为主要方法[8,9]。本文从分析钝齿棒杆菌YD8的Arg及相关氨基酸合成途径入手,提出了一种Arg高产菌株选育的新方法,并通过代谢流量分析比较了出发菌株YD8和高产菌株YDM403的代谢流分布的变化,解析了突变株代谢调节模式的可能的变化,为下一步采用代谢工程手段改良L-精氨酸高产菌株的研究奠定了一定的理论基础。

1 材料与方法1.1 菌株 钝齿棒杆菌CorynebacteriumcrenatumYD8

(His-,SGr1.2mg/mL,D-Argr15mg/mL)为本实验室保藏的L-精氨酸生产菌株,突变株YDM403

)1)(His-,SGr1.2mg/mL,D-Argr15mg/mL,S-MCr15mg/mL)由YD8经NTG诱变而来。1.2 培养基及培养条件 (1)完全培养基(g/L):葡萄糖20,牛肉膏10,蛋白胨10,酵母膏5,NaCl5,琼脂20。pH7.0~7.2,121e灭菌20min。 (2)基础培养基(g/L):葡萄糖10,(NH4)2SO43,KH2PO41,MgSO4#7H2O0.5,FeSO4#7H2O0.02,MnSO4#7H2O0.02,琼脂20,生物素3@10-5,硫胺素2@10-4,L-组氨酸5@10-4。pH7.0~7.2,121e灭菌20min。 (3)种子培养基(g/L):葡萄糖30,玉米浆20,(NH4)2SO420,KH2PO41,MgSO4#7H2O0.5,尿素1.5。pH7.0~7.2,121e灭菌20min,装液量30mL/250mL。 (4)发酵培养基(g/L):葡萄糖120,玉米浆10,(NH4)2SO450,KH2PO41.5,MgSO4#7H2O0.5,Fe-SO4#7H2O0.02,MnSO4#H2O0.02,生物素8@10-5,L-组氨酸5@10-4,CaCO330。pH7.0~7.2,121e灭菌10min,装液量15mL/250mL。 如无特别说明,种子培养采用30~31e,往复式摇床(无锡查桥轻机厂)96r/min培养15~16h后,以10%的接种量接入发酵培养基中,31e往复式摇床96r/min培养96h。5L全自动发酵罐(上海保兴生物工程有限公司)实验中接种量和培养温度同摇瓶实验,通风量为0.75vvm,搅拌速度为500r/min,自动流加氨水控制pH7.2左右。1.3 诱变方法和突变株的筛选 选用亚硝基胍(NTG)为诱变剂,采用适当浓度S-甲基半胱氨酸(S-MethylCysteine,简称S-MC)的平板作为筛选平板。 菌株YD8种子培养到对数生长中后期再以50%的接种量转接到新鲜种子培养基中培养5h使细胞达到同步培养。取培养液10mL无菌离心,收集菌体,用0.1mol/L,pH6.0的磷酸缓冲液洗涤2~3次,转入带玻璃珠的三角烧瓶中打散,得菌悬液,细胞浓度控制在108个/mL左右。称取少量亚硝基胍溶解在少量丙酮中,再加入磷酸缓冲液,制成浓度为1.0mg/mL的亚硝基胍溶液。取一定量的菌悬液中加入亚硝基胍溶液,使其终浓度约0.2mg/mL,30e振荡20min,诱变结束后快速离心终止反应,用0.1mol/L,pH6.0的磷酸缓冲液洗涤2~3次。最后取菌悬液按梯度稀释涂布筛选平板,31e恒温培养3~5d后随机挑选菌落进行初筛。 配制基本培养基,灭菌后分别加入S-MC使终浓度达到10mg/mL、12mg/mL、15mg/mL、18mg/mL。再在各个不同S-MC浓度的平板上涂布经适当稀释的未经诱变处理的YD8菌悬液,观察生长情况,确定出发菌株YD8耐受S-MC的浓度。然后将诱变处理的菌悬液涂布到高于此浓度的S-MC药物平板上,置于31e培养3~5d,随机挑选单菌落进行摇瓶发酵实验进行高产突变株的初筛。1.4 有机酸的测定 采用高效液相色谱仪HP1100(惠普公司)测定

发酵液中的有机酸含量,柱条件如下: 色谱柱为ZORBAXSBC18(4.6mm@250mm),

流动相为0.1%(v/v)磷酸溶液,流速为1mL/min,柱温25e,检测波长为210nm结构类似物。通过归一化法计算各有机酸的含量。1.5 氨基酸的测定 采用氨基酸分析仪1100(安捷伦公司)分析发

酵液中各氨基酸的含量。

2 结果与讨论2.1 Arg的代谢途径分析及育种策略的提出 不同的微生物在Arg生物合成途径及调节机制

上有所不同,已有文献对微生物的Arg生物合成途径进行了很好的综述[8,9]。本文选用的产Arg的出发菌株为实验室选育的钝齿棒杆菌YD8,该菌利用葡萄糖底物生物合成Arg的途径是A-酮戊二酸衍生类型,即谷氨酸类型。在棒杆菌中与Arg合成途径相关的主要分支途径为L-脯氨酸合成途径。这两个氨基酸不仅各自对经由谷氨酸合成自身的后续代谢途径中的酶具有终产物抑制作用,而且还会对它们的共同合成途径,即由葡萄糖底物合成谷氨酸的代谢途径中的酶起到协同反馈调节作用。结合代谢育种原理以及代谢网络调节的观点,Arg的育种策略除采用Arg结构类似物抗性来解除Arg对其代谢途径中的酶的反馈抑制外,还可以尝试通过结合选育脯氨酸的结构类似物抗性突变株来解除Arg和脯氨酸对共同途径中酶)2)

第4期 工 业 微 生 物第36卷 的协同反馈调节的作用,以增加前体物谷氨酸的合成量,从而达到过量合成Arg的目的。 针对上述假设,作者通过NTG诱变处理出发菌株YD8,进而通过筛选脯氨酸结构类似物)))S-甲基半胱氨酸(S-MC)(图1)抗性突变株,以期获得图1 S-甲基半胱氨酸和L-脯氨酸的结构式比较Arg的高产突变株。2.2 高产Arg的突变株YDM403的获得 根据1.3方法采用NTG处理出发菌株YD8,

经含15mg/mL的S-MC的抗性平板处理和摇瓶筛选获得Arg高产突变株YDM403(His-,SGr1.2mg/mL,D-Argr15mg/mL,S-MCr15mg/mL),后者的产酸水平可达29.4g/L,较出发菌株YD8的产酸水平高出55.0%。2.3 菌株YD8与菌株YDM403的发酵过程的比较及代谢流量分析 为进一步分析出发株和突变株在代谢网络上的

变化,在同一发酵条件下,采用5L全自动控制发酵罐实验分析比较了菌株YD8和YDM403的发酵过程,结果如图2、图3及图4:

图2 发酵过程中葡萄糖的消耗和Arg合成的变化曲线rGlucose tArginine A:YD8 B:YDM403

图3 菌株YD8发酵过程中副产物的生成曲线rSerine tLysine vLacticacidoAcetate @Pyruvate图4 菌株YDM403发酵过程中副产物的生成曲线

rAlanine tProline vLacticacid oAcetate @Pyruvate 由图2、3可以看出,菌株YD8在发酵过程中有丝氨酸和赖氨酸生成,由此可知,部分葡萄糖经旁路代谢生成了丝氨酸,且葡萄糖经TCA循环转化成A-酮戊二酸后,碳架流经过TCA循环部分转化为赖氨酸,赖氨酸的生成量为3.02g/L,而Arg的生成量

仅为12g/L。 由图2和4可知,出发菌株经过NTG诱变处理

得到的S-MC抗性突变株YDM403在相同发酵条件下,Arg的产量为32.8g/L,且在发酵过程中无丝氨酸和赖氨酸的生成,但是有少量的脯氨酸和丙氨

)3)

第4期许正宏,等:L-精氨酸高产菌的选育及基于代谢流量分布的育种机制第36卷

合集下载

抗生素的发酵生产

抗生素的发酵生产

抗生素的发酵生产抗生素的发酵法生产摘要:对马杜霉素，螺旋霉素，农用抗真菌素的发酵生产，确定其最佳的发酵条件，并且对其各自发酵工艺进行比较，深入的了解用发酵法产抗生素的原理及方法。

关键词:马杜霉素螺旋霉素农用抗真菌素发酵生产引言采用发酵工程技术生产医药产品是制药工程的重要部分，其中抗牛素是我国医药生产的大宗产品，随着基因工程技术的进展，基因工程药的比例逐渐增大。

但抗生素在国计民生中所起的作用是能完全替代的。

特别是西方同家出于能源和环保的考虑，转产生产高附加值的药物，留出厂抗生素的市场空间，为我国的抗生素生产发展提供了机遇，作为一个发展中的国家，可以说在相当长时间内，我国抗生素生产在整个医药产品巾仍占很大的比例，因此抗生素类发酵过程优化技术研究对医药行业的生产具有重要的经济和社会意义。

抗生素发酵过程优化研究中主要存在的问题长期以来为提高抗生素发酵水平，把注意力主要放在菌种筛选与改造，或从国外引进菌株。

近年来，随着现代牛物技术的日益发展，尤其是基因工程和代谢1:程技术的发展，已经取得了引入注目的效果，主要有:(1)将生物合成途径中关键酶基因克隆来改良现有抗生素生产菌种;(2)将抗生素生物合成产生副产物的酶基因敲除，以提高产生抗生素的能力;(3)克隆外源基因以改良原菌种的发酵生理特性;(4)克隆外源抗生素合成基因簇来合成新的抗牛素等，但是在通过各种方法得到一个高产菌株后，在实际发酵操作时，往往忽视厂生物反应器中上程问题所必须加以考虑的工艺变化和过程优化。

随后的逐级放大与优化基本上是以最佳工艺控制点为依据，采用人工经验为主的静态操作，在方法上基本以正交试验为基础。

因此，发酵过程优化与放大始终是生化上程中一个复杂问题的两个侧面，人们从不同的角度进行研究。

此外，随着计赞机技术的迅速发展，各抗生素发酵工厂已普遍采用计算机在线控制，主要在补料操作上采用杯式流加技术，基本上满足了抗生素工业发酵生产上所需要的高精度控制补料速率问题，对提高发酵效价起了重要作用。

2011年国家自然基金获得者名录——中国农业大学

2011年国家自然基金获得者名录——中国农业大学


C170106 C130403 C150203 C200101 D010701 C170204 C200301 E090202 D010106 C170108 C1807 C170105 C031102 C010201 D010201 D010502 C170102 C1805 C020408 E090201 D010502 C140601 C140601 B020901 D010103 C140101 E050303 E0906 C150705 C170110
项目批准号 申请代码1 项目名称 项目负责人 依托单位 金额 51139006 E0902 水稻覆膜旱作节水、防污和减排温室气体的效应与机理 左强 中国农业大学 300 31101263 C200102 萝卜硫素调控MicroRNA抑制肝癌细胞侵袭能力机制研究 朱毅 中国农业大学 24 21177154 B070102 手性农药在沉积物-水蚯蚓-斑马鱼食物链传递中的选择性环境行为研究 周志强 中国农业大学 65 31101738 C170107 硝态氮抑制瘤胃甲烷生成的机制 周振明 中国农业大学 23 31129006 C170105 宫内生长受限对新生仔猪肠道DNA甲基化影响的研究 周怀军 中国农业大学 120 11171346 A0112 基于先验知识的支持向量机的最优化模型与算法研究 钟萍 中国农业大学 45 81102340 H3002 法卡林二醇类天然产物的合成及抗肿瘤活性研究 钟江春 中国农业大学 22 31171258 C060605 马铃薯花粉特异基因SBgLR 5'非翻译区（UTR）在基因表达调控中的作用 赵倩 中国农业大学 60 31101289 C200103 基于近、中红外光谱的葡萄酒品种和地理标识的溯源研究 赵龙莲 中国农业大学 25 31171993 C150303 狗蔷薇PLB发生关键基因功能及其互作 赵梁军 中国农业大学 60 31172293 C1802 Cystatin B缺失与Prion疾病自噬作用机制的研究 赵德明 中国农业大学 60 31100115 C010801 甜菜黑色焦枯病毒卫星RNA与复制酶结合的关键区域定位 张永亮 中国农业大学 23 31171801 C140102 NoxR在稻瘟菌致病性与发育中的作用机理研究 张燕 中国农业大学 54 41171089 D010106 基于参与式GIS的农作物品种适应性评价与精准推广方法研究 张晓东 中国农业大学 25 31171399 C120106 HANABA TARANU (HAN) 调控植物茎尖与花发育的分子机理研究 张小兰 中国农业大学 50 31171714 C200204 纳滤浓缩处理对乳蛋白浓缩物溶解性的影响及其作用机理分析 张列兵 中国农业大学 60 31101079 C130104 蔬菜苗间锄草的苗草信息获取及视觉伺服控制研究 张俊雄 中国农业大学 22 21172257 B020901 基于靶酶GlmS的新型杀菌剂合理设计合成与生物活性研究 张建军 中国农业大学 60 31171613 C1305 通过全基因组关联分析发掘水稻杂种优势相关基因 张洪亮 中国农业大学 10 31171510 C130302 耕作方式对华北平原麦玉两熟农田土壤有机碳的影响及其固碳潜力研究 张海林 中国农业大学 56 41171337 D010702 基于高分辨率遥感数据的农作物纹理特征表达及其类型识别研究 张超 中国农业大学 60 31171992 C150303 扩张蛋白EXPANSINs基因在月季切花失水胁迫耐性中的作用解析 张常青 中国农业大学 60 31171942 C150103 葡萄抗病相关磷脂酶D基因的分离和功能鉴定 战吉宬 中国农业大学 66 31171509 C130302 覆盖作物不同还田模式对稻田甲烷氧化菌多样性与活性的影响 曾昭海 中国农业大学 60 31172209 C170104 IFN-τ 调控牛囊胚发育的分子通路 曾申明 中国农业大学 60 31171648 C200101 凝固剂迁移与大豆蛋白凝胶微结构有序化形成的互作机制 殷丽君 中国农业大学 65 31171991 C150303 唐菖蒲抗病基因NPR1的克隆与功能分析 义鸣放 中国农业大学 58 31130007 C020102 花粉转录因子PTF1家族调控花粉管极性生长和雌雄互作的机理 叶德 中国农业大学 260 31101072 C130102 基于NIRS的秸秆/煤混燃发电中秸秆消耗量计量方法研究 杨增玲 中国农业大学 23
L-异亮氨酸产生菌黄色短杆菌的选育

L-异亮氨酸产生菌黄色短杆菌的选育

上 ， 一步 筛 选 ａ氨 基 丁 酸 抗 性 突 变株 ， 进 一 以期 获得 Ｌ 异亮 氨酸 产量 有较 大提 高 的突变株 。 一
收稿 日期 ：２ １ －０２ ０ Ｉ１—５ 作 者简介 ：沈加彬 ， １８ 在读硕士 ， 男（９ ５） 研究方向为微生物遗传育种 。 基金项 目： 福建省 自然科 学基金 项 目（ ｏ ９ｏ １ ８ ； 建省科 技重 ２ ｏＪ １ ２ ） 福
摘 要 ：以黄 色 短 杆 菌 Ｂ ４ ０为 出发 菌 株 ， 过 紫 外 线 和 亚 硝 基 胍 （ Ｇ） 合 诱 变 处 理 后 ， 得 一 株 甲硫 氨 酸缺 陷 （ ｔ Ｆ２ 经 ＮＴ 复 获 Ｍｅ一）
及 抗 ａ氨 基 丁酸 （— Ｂ 的 Ｌ异 亮 氨酸 产 生 菌 Ｂ ６０ 该 菌 株 在 未 进 行 优 化 的 发 酵 条 件 下 能 够 积 累 Ｉ异 亮 氨 酸 的 量 为 ７ １ 一 ａＡ ） 一 Ｍ２ １ ， 『 ．２ ｇＬ ・ ， 出发 菌 株 Ｂ ４ ０提 高 了 １ ２ ５ 。 比 Ｆ２ ２ ．
１ 材料 与方 法 １ １ 材 料 ．
１ １ １ 菌种 ： 色短 杆 菌 Ｂ ４ ０为 本 实 验 室 保 藏 ．． 黄 Ｆ２
菌种 。 １ １ ２培养基 ．．
有许 多生 理功 能 ， 已被 广 泛应 用 到 医 药 、 品 、 味 食 调
剂、 动物饲 料 以及化 妆 品的制 造 中 ， 以在 医学研究 尤 和 治疗 中受 到重视口 。 ］
关 键 词 ： 异 亮 氨 酸 ； 色 短 杆 菌 ； 合 诱 变 ； 种 黄 复 育
中 图分 类 号 ： ９ Ｑ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号 ： ０ ６８ ７ （ ０ １ ０ —０ ８ ０ １０ —３ ６ ２ １ ）４０ ３—４
2014安徽省自然科学基金

2014安徽省自然科学基金


项目编号 1408085MC56 1408085MC57 1408085MC58 1408085MC59 1408085MC60 1408085MC61 1408085MC62 1408085MC63 1408085MC64 1408085MC65 1408085MC66 1408085MC67 1408085MC68 1408085MD69 1408085MD70 1408085MD71 1408085MD72 1408085MD73 1408085MD74 1408085MD758085ME78 1408085ME79 1408085ME80 1408085ME81 1408085ME82 1408085ME83 1408085ME84 1408085ME85
主持人 周艺峰 凤权 朱曙光 朱大焕 梁凤霞 余庆选 陶锋 王伟 刘有余 胡毅 丁卫平 乔红斌 黎春林 宋新江 张晶晶 胡业林 朱茂飞 吕小莲 李家文 郭兴众 刘广彬 陈清华 贾磊 来永斌 葛斌 朱家兵 王子磊 方贤勇 董永平 史明光
依托单位 安徽大学 安徽工程大学 安徽建筑大学 中国科学院合肥物质 科学研究院 合肥工业大学 中国科学技术大学 安徽工程大学 合肥工业大学 安徽工程大学 合肥工业大学 中国科学技术大学 安徽工业大学 铜陵学院 安徽省水利部淮河水 利委员会水利科学研 合肥工业大学 安徽理工大学 中国科学院合肥物质 科学研究院 滁州学院 中国科学技术大学 安徽工程大学 合肥通用机械研究院 安徽理工大学 合肥通用机械研究院 安徽理工大学 安徽理工大学 中国电子科技集团第 三十八研究所 中国科学技术大学 安徽大学 安徽工业大学 合肥工业大学
附件
2014年度安徽省自然科学基金项目表
一、2014年度面上项目
项目编号 1408085MA01 1408085MA02 1408085MA03 1408085MA04 1408085MA05 1408085MA06 1408085MA07 1408085MA08 1408085MA09 1408085MA10 1408085MA11 1408085MA12 1408085MA13 1408085MA14 1408085MA15 1408085MA16 1408085MA17 1408085MA18 1408085MA19 1408085MA20 1408085MA21 1408085MB22 1408085MB23 1408085MB24 1408085MB25 主持人 黄守军 王奇 周兴才 汪忠志 钱建发 程燕 方龙祥 叶永升 申传胜 张榕京 鲁文建 张战军 朱青峰 郑云英 王大理 李大创 郭玉献 喻远琴 黄仙山 张刚 余龙宝 裘灵光 江海龙 谷永红 汪文栋 依托单位 安徽师范大学 安徽大学 铜陵学院 安徽工业大学 安徽理工大学 中国人民解放军陆军 军官学院 安徽师范大学 淮北师范大学 安庆师范学院 中国科学技术大学 中国科学院合肥物质 科学研究院 安徽大学 中国科学技术大学 淮北师范大学 安徽师范大学 合肥师范学院 安徽建筑大学 安徽大学 安徽工业大学 皖西学院 合肥师范学院 安徽大学 中国科学技术大学 中国科学技术大学 中国科学技术大学 项目名称 弹性材料若干数学问题的研究 脉冲微分方程若干问题的理论与应用研究 复杂相依数据半参数模型非线性小波估计的理论研究及其应用 信源广义熵遍历定理及其应用基础研究 量子编码理论中新问题的研究与探索 一类非线性时滞微分方程奇异摄动问题研究 无限二阶矩过程驱动的OU过程的统计推断 图的pebbling问题和Graham猜想 复杂网络上多尺度动力学过程的介观理论研究 微生物膜(Biofilm)的成因，发展及演化 过渡金属硫族化合物中电荷密度波与超导电性的关联性研究 量子关联研究方法发展与量子态关联研究 大质量恒星形成区谱线观测研究 粘弹性多孔介质的分数阶建模及有限元分析 受限Dirac电子系统中奇异的量子效应研究 一类特殊的固态海森堡系统中的复杂量子特性研究 二氧化钒微纳尺寸晶粒的相变特性及调控机理 醇-水溶液团簇结构中蓝移氢键C-H„O的理论与实验研究 白光腔实现可调短脉冲激光器的机理研究 基于几何量子操作的固态量子计算研究 基于超导线路的自旋-玻色模型理论实现及其性质研究 基于金属-有机骨架纳米晶荧光试纸的制备及其对硝基爆炸物传感性 质研究 催化功能导向金属有机框架材料的结构调控与性能研究 手性烯丙醇的取代反应 可控形貌钛酸前体制备TiO2复合纳米结构及其催化性能研究