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Agilent_1200型高效液相色谱仪标准操作规程

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Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. 山东先声麦得津生物制药有限公司

Applicable dept.: TC 分发部门：技术中心 Subject: Standard operation procedure of Agilent 1200 HPLC 文件名称：Agilent 1200型高效液相色谱仪标准操作规程 Document No.: TC171-00 文件号： TC171-00 Supersedes document No.: 替代文件号：无 Revision: 修订号：00 Effective Date: 生效日期：2009.11.01

第 1 页 共 7 页 Approvals批准 Dept. 部门 Occupation 职务 Signature 签名 Date 日期 Draftsman 起草人 TC 技术中心 职员

Verifier 审核人 QD 质量管理部 文件主管

Verifier 审核人 QD 质量管理部 经理

Approved by 批准人 GMO 技术中心 总监 Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. 山东先声麦得津生物制药有限公司

Applicable dept.: TC 分发部门：技术中心 Subject: Standard operation procedure of Agilent 1200 HPLC 文件名称：Agilent 1200型高效液相色谱仪标准操作规程 Document No.: TC171-00 文件号： TC171-00 Supersedes document No.: 替代文件号：无 Revision: 修订号：00 Effective Date: 生效日期：2009.11.01

第 2 页 共 7 页 1 目的 建立Agilent 1200高效液相色谱仪的操作规程，保证其正确使用。

2 范围 Agilent 1200高效液相色谱仪的操作与维护。

3 职责 操作人员和责任人员对本规程的实施负责。

4 内容 4.1 组成 G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329A自动进样器、G1330B自动进样器恒温器、G1315B可变波长检测器（DAD）、GB16A 柱温箱和一套Agilent 1200 CHEMSTATIONS 软件（软件光盘与说明书原件由工程部保存），打印机。

4.2 在线清洗 若实验的流动相中含有的缓冲盐和离子对等试剂干后会留下固体印迹的物质时，必须要进行在线清洗过程。首先配制好10%异丙醇溶液，经0.45μm有机膜抽滤后，装入已用滤过的10%异丙醇溶液洗过三遍的洁净玻璃瓶内，调整流量为2～3滴/分钟，10%异丙醇溶液必须每周更新。

4.3 开机 接通电源，打开计算机，等计算机启动成功后，含四元泵的Agilent 1200高效液相色谱仪系统：从上到下，依次打开脱气机、泵、进样器、进样器恒温器、柱温箱和多波长检测器。约30秒钟后，各部件自检完毕，进入待机状态，指示灯为黄色或无色。 Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. 山东先声麦得津生物制药有限公司

Applicable dept.: TC 分发部门：技术中心 Subject: Standard operation procedure of Agilent 1200 HPLC 文件名称：Agilent 1200型高效液相色谱仪标准操作规程 Document No.: TC171-00 文件号： TC171-00 Supersedes document No.: 替代文件号：无 Revision: 修订号：00 Effective Date: 生效日期：2009.11.01

第 3 页 共 7 页 双击桌面上的Instrument 1 Online，计算机进入工作站的Method and Run Control操作界面。 画面如下所示。

4.4 色谱条件的设定 4.4.1 方法的编辑 ● 在method and run control 状态下，单击“method”选择“edit entire method”，请先在复选框中选择method中需要编辑的项目。 ● 进入method information 在method comments 中输入方法的名称及相关描述，参数设置完毕后单击OK。 ● 进入泵参数设置画面，设置泵流速（ml/min），流动相组成，冲洗梯度，停针时间等，参数设置完毕后单击OK。 ● 进入column thermostatted method 编辑状态，选择柱温箱温度，设置完毕单击OK。 ● 进入VWD编辑状态，选择方法中所需波长、峰宽、响应时间等，参数设置好单击OK。 ● 进入signal details 编辑画面，选择下拉菜单中的VWDIA 进行参数设定，点击“DAD”图标，点击“Setup DAD Signals”，在“Signals”下方的空白处输入所需的检测波长，并在前面的方框里画“√”设置完毕单击OK。 ● 进入编辑积分表画面，对所需积分的峰斜率、峰宽、峰高、峰面积、肩峰等参数进行设定，设定完毕后单击OK。 ● 进入specify report 编辑画面，单击screen 前的方框，设置报告。使其输出结果到屏幕，在calculate 选项中选择percent，在report style 选项中选择short， 单击singnal options 设置打印信号范围，单击OK。 ● 进入时间编辑，在data acquisition 和standard data analysis 的复选框中打×，选择好后单击OK，则方法编辑完毕。 ● 在method and run control 状态下，单击method，选择save method as 选项，编辑方法名存储。 4.4.2 进样操作 Shandong Simcere-Medgenn Bio-Pharmaceutical Co., Ltd. 山东先声麦得津生物制药有限公司

Applicable dept.: TC 分发部门：技术中心 Subject: Standard operation procedure of Agilent 1200 HPLC 文件名称：Agilent 1200型高效液相色谱仪标准操作规程 Document No.: TC171-00 文件号： TC171-00 Supersedes document No.: 替代文件号：无 Revision: 修订号：00 Effective Date: 生效日期：2009.11.01

第 4 页 共 7 页 4.4.2.1 调用方法 进入method and run control 状态下，单击选择method 选项，单击load method 选择所要使用的方法。此时系统将根据所选择的方法进行相应的设置。开始前请根据方法对相应的参数例如：泵参数、自动进样器参数、自动进样器恒温器参数设定、柱温箱参数设定、检测波长设定等进行验证是否与方法设置中的一致。 4.4.2.2 自动进样序列的设定 a 单个样品进行分析 在命令栏“Run control”下，选择“SampleInfo……”或单击快捷操作的“一个小瓶”图标，然后单击样品信息栏内的小瓶，选择“Sample Info……”，即打开了样品信息页面，可输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道(Subdirectory)、进样瓶号(Vial)、样品名(Sample Name)等信息，单击“OK”，即完成。 b 多个样品连续进行分析 ● 编辑新序列：在命令栏“Sequence”下，选择“New Sequence”；然后再在命令栏“Sequence”下，选择“Sample Parameters”，可输入操作者（Operator Name）、数据存贮通道(Subdirectory)等信息；然后再在命令栏“Sequence”下，选择“Sequence Table”或单击快捷操作的“三个小瓶”图标，单击样品信息栏内的样品盘，选择“Sequence Table”，即进入连续进样序列表的编辑，可输入进样瓶号（Location）、样品名（Sample Name）、方法名（Method Name）、进样次数（Inject/Location）、进样体积（Inject Volume）等信息，单击“OK”，即完成。 ● 调用已有序列：在命令栏“Sequence”下，单击“Load Sequence” 或直接单击快捷操作的“Load Sequence”图标（左边一文件夹，右边三个小瓶），选定文件名，单击“OK”即可。在对“Sequence Table”改动过后，切记要在“Sample Parameters”中改变保存路径，否则可能会覆盖以前的图谱。 ● 指定样品进样：在命令栏“Sequence”下，选择“Partial Sequence”，选中要进的样品瓶号，单击“Run Sequence”，单击“Yes”即可。 4.4.2.3 进样序列的保存 在命令栏“Sequence”下，单击“Save Sequence”或单击快捷操作的“Save Current Sequence”图标（左边一软盘，右边三个小瓶）；在path下选择保存路径，在此路径下选择subdiectory输入新文件名，单击“OK”，即完成。 4.4.2.4 平衡柱子 调用相应方法后，将流速改为0ml/min ，待界面变为绿色后，控制面板上显示”ready”，单击控制面板上的"on"，再将泵流速慢慢上升至所需流速。此时系统开始按照所设定的方法平衡柱子。 4.4.2.5 HPLC自动进样 在色谱图中可选择"Change"改变所要检测的波长，"Balance"使基线归零，"Adjust"使横纵坐标适应图谱，对于自动进样系统将自动平衡。等仪器准备好，基线平稳，直接点击“START”图标。

4.5 数据分析 4.5.1 谱图的调用 单击桌面上的Instrument 1 offline 打开命令窗口，单击Data Analysis此时在当前窗口左侧将出现磁盘中所保存的文件，在下拉菜单中找到所需要分析的文件并双击打开。或在Instrument 1 online 窗口中点击Data Analysis 按照上述程序操作画面中即出现所调用的色谱图。

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安捷伦1200液相色谱仪

安捷伦1200液相色谱仪

安捷伦1200液相色谱仪Agilent 1200系列液相色谱系统是Agilent 1100系列液相色谱系统的升级型号，是生产、科研领域最先进的液相色谱系统。

它提供给分析工作者以最为弹性的溶剂选择方式，最理想的自动分析方法，适应更广泛的领域的需求。

快速的溶剂转换、分析方法切换，提供二元、三元、四元梯度系统使得1200成为市场上最为人性化的产品。

配合自动进样系统又使1200成为多方法、大容量分析中最理想的解决方案。

该系统主要由溶剂架、真空脱气单元、泵、进样器、柱温箱、检测器、电脑工作站和检测与分析软件组成（其中泵、自动进样器、检测器可根据需要进行选配），其主要用于有机分子和生物大分子的分离纯化和鉴定。

特性与优势1、四种溶剂同时或梯度使用，快捷方便，使得流动相的准备得心应手。

2、极宽的流动（高达10ml/min）和延迟体积（800-1100ul）支持小量、标准分离或半制备应用。

3、简单易控的程序和控制：使用连续操作模块或化学工作站，轻松自如。

4、内置的微真空泵脱气装置，获得最高的洗脱效果，彻底免除了使用氦吹的烦恼。

5、直接朝前的通路，使得维修维护更加方便。

6、自诊断功能提供快速的故障查找排除，内建的工作日志和程序方法。

7、提前的维护回馈（EMF）功能。

长期跟踪仪器使用和用户自定义设定的限定标准，提供超限反馈信息。

8、LC1200系统全部模块具备升级扩展功能。

Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程一、开机前准备a、明确实验目的，检测样品的性质，选择相应的分析色谱柱；b、配制分析的样品和流动相，选用色谱纯流动相或用0.22 μm的过滤膜过滤，样品也可10000rpm离心10min；c、检验仪器和计算机的电源线，数据线是否连接完好。

二、开机a、打开计算机的电源，待计算机运行完全后；b、依次打开脱气机、泵、柱温箱、检测器的电源开关；c、待仪器自检完成后，双击桌面上的“Instrument 1 online 在线”图标，打开工作站。

Agilent 1200 HPLC操作

Agilent 1200 HPLC操作

Agilent 1200 HPLC 操作流程1、开机1.1 启动计算机，进入Windows系统，等待通讯连接完毕。

1.2 按以下次序打开仪器开关：脱气机——压力泵——进样器——馏分收集器——检测器，等待仪器自检完毕。

1.3 启动Chemstation Online工作站，进入联机状态。

1.4 检查流动相储液瓶液面高度，及时添加流动相，并更改仪器显示的参数。

2．分析/制备2.1 安装合适的色谱柱，注意连接处的螺旋头不要拧得太紧，以免损坏。

也不要过度拉拽塑料管道，以免照成六通阀漏液。

2.2 打开位于压力泵上的Purge阀，分别用流动相冲洗待用的管道，5 ml/min，10 min即可，以免管道中的气泡进入色谱柱，影响分析。

2.3 设置/调用待用的分析方法并保存，包括流速、流动相比例、进样量、检测波长。

2.4 关闭Purge阀，使待用流动相充分平衡色谱柱约20 min，以压力和吸收值基线平稳为准。

注意检查柱压是否异常，色谱柱两端连接处是否漏液。

2.5 将样品瓶放入进样盒的合适位置，设置好数据存放的路径，进样分析。

2.6 使用自动收集器时，点击收集器——Set up Fraction Collector——选中“Use Timetable”——点击“Fraction Preview”——点击“Load Signal” ：调出用制备方法跑的数据，调整TimeTable 里面的收集时间，点击“Refresh”即可看到可视化的接收情况，直至设置完所有需要接收的peak；点击“OK”，然后保存方法即可。

3. 关机3.1 分析结束后，用100%甲醇冲洗色谱柱至少30min以上，可使用Chemstation Schedule设置停止冲洗的时间。

注意：若流动相加酸／碱，先用高比例的水（90%水-10%甲醇or乙腈）冲洗30min以上，再切换到高比例有机相冲洗25分钟以上。

3.2 在Chemstation Online工作界面单击off，关闭高压泵和检测器，退出Chemstation Online。

Agilent液相色谱仪器操作规程

Agilent液相色谱仪器操作规程

1、打开计算机；
2、打开主机各模块电源（不分先后），再双击仪器 1 联机图标,进入工作站；
3、旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；
4、在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；
5、依次切换到B、C、D溶剂分别排气；
6、将工作站中的泵流量设到1ml/min，再设定溶剂配比,如A=80%，B=20%；
7、关闭排气阀，检查柱前压力；
8、待柱前压力基本稳定后,设置VWD波长,打开检测器灯，观察基线情况；
9、由运行控制进入样品信息进行一系列设置，进样分析
10、仪器使用后，应用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5∽1ml/min，再用100%甲醇冲0.5小时；
11、开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 >10bar，则应更换排气阀内玻璃料
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Agilent_液相色谱仪操作规程

Agilent_液相色谱仪操作规程

Agilent液相色谱仪操作规程★样品与流动相要求：1.样品临用前用0.45um滤膜过滤（区别水相膜与有机相膜），或者临用前离心取上清液（转速1万，20分钟)2.缓冲溶液必须当天配制，每次使用前用0.45um的水相膜过滤，水要求使用当天的超纯水，甲醇或乙腈等有机溶剂要求使用色谱纯。

流动相临用前超声脱气20分钟★液相开机操作过程：1．首先要启动电脑，进入Windows 后, 电脑在后台自动运行Agilent bootp Service。

2．从上往下打开液相色谱仪各模块前左下方的电源开关，液相各模块进入自检，右上角的指示灯不同颜色闪烁几下，最后变成橘黄色(或灭掉ALS、RID)，启动完成。

3. 双击电脑桌面的Instrument 1 联机图标，进入LC化学工作站（方法与运行控制界面）。

4. 调用或者编辑相应的操作方法。

★液相关机操作过程：1. 根据具体情况，使用水或溶剂，泵流量设为1.0ml/min,把系统的管道及柱子清洗干净。

2. 根据具体情况，不定时把A、B、C、D通道用有机溶剂冲洗干净，防止生长藻类等。

3. 把系统关闭(即把泵停下来及检测器的灯灭掉等)，若有seal wash,把其清洗的水卡住。

4. 先退出LC化学工作站，从下往上关掉液相色谱仪各模块前左下方的电源开关。

5. 退出电脑Windows系统，关掉电脑电源。

★液相的数据采集操作过程：1．从化学工作站菜单的方法中编辑完整方法，或者调用方法, 一般是方法存在如D:\CHEM32\1\METHODS\___.M，即运行此方法。

2．从化学工作站菜单的仪器的启动系统,可点击桌面上的启动按纽，也可以点每一模块图标中的控制来开或关。

(若有手动Seal Wash 应先把打开，约每分钟20滴)3. 手动进样或自动进样器单针进样时：从运行控制中的样品信息输入样品信息4. 待工作站提示就绪(变绿色)、仪器基线平衡稳定后:手动进样: 若是VWD或DAD先按一下平衡,把基线调零，阀在Load的状态，用注射针取样品从手动进样阀口注入，把手动阀转向Inject的方向，开始做样采集数据。