表面擦拭微生物限度检
查法回收率实验方案 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-
湖北天圣康迪制药有限公司GMP文件
表面擦拭微生物限度检查法
回收率实验方案
1. 目的
对表面擦拭微生物限度检查法回收率进行验证，确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查。
2．范围
本方案适用于表面擦拭微生物限度检查法回收率的验证。
3．职责
质管部负责验证方案起草、组织实施、起草验证报告及送审
4. 验证过程
验证用菌种：
4.1.1 所用菌种表1
4.1.2 菌株选择的原则：代表性，普遍性，低或非致病性，标准菌株。
4.1.3 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。
4.1.4 加菌量：50～100cfu。
菌液的制备
4.2.1 取经37℃培养18-24小时，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌肉汤培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5～10-7，为50～100个/ml，做活菌计数备用。
4.2.2 取经25℃培养18-24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5～10-6，为50～100个/ml，做活菌计数备用。
回收率的测定：
4.3.1 将经灭菌的开孔面积为20cm2的金属模板放在试验物体表面，分别向无菌物体表面接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和枯草芽孢杆菌的菌悬液，接种面积为20cm2，并在层流下进行干燥。验证结束后用75%的酒精擦洗染菌表面。
4.3.2 取无菌棉签用%无菌氯化钠溶液稍沾湿,在板孔范围内擦抹5次，换1无菌棉签同法再擦抹5次， 2支棉签共擦抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL 灭菌生理盐水的采样管内。摇匀取1mL倒平板，每次倒三个平板。
分别培养计数。用同样的方法重复操作三次。
4.3.3 试验要进行三次独立操作，每次试验的回收率要≥70%方可认为该方法合适。
回收率计算
试验结果下表，棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再乘以稀释倍数（10）。
4.4.1 金黄色葡萄球菌试验结果
金黄色葡萄球菌试验结果表2
根据表中的数据，回收率计算如下表3：
符合要求□不符合要求□
检查人日期
复核人日期
4.4.2 大肠埃希菌试验结果
大肠埃希菌试验结果表4
根据表中的数据，回收率计算如下表5：
符合要求□不符合要求□
检查人日期
复核人日期
4.4.3 白色念珠菌试验结果
白色念珠菌试验结果表6
根据表中的数据，回收率计算如下表7：
符合要求□不符合要求□
检查人日期
复核人日期
4.4.4 枯草芽孢杆菌试验结果
枯草芽孢杆菌试验结果表8
根据表中的数据，回收率计算如下表9：
符合要求□不符合要求□
检查人日期
复核人日期
方法确认结论
符合要求□不符合要求□
检查人日期
复核人日期
5. 偏差及处理
操作人：复核人：日期：年月日
6. 验证报告
验证小组负责人根据测试数据，进行统计分析，起草验证报告。并根据验证结果拟定再验证周期。
