细胞培养常见污染的判别及应对措施
2011-01-02 10:19:04| 分类：实验| 标签：污染无菌细胞培养基灭菌|字号大中小订阅
一、避免细胞培养污染的措施：
污染是细胞培养中一个大敌，一旦污染，前功尽弃！决定要进行细胞培养，首先一定要有强烈的无菌意识！操作中要遵守严格的操作规程，不要怕麻烦，越细心越好！注意以下几点，大部份的污染是可以避免的：
1. 每次开始实验前，先用紫外照无菌台和实验室20分，用酒精擦手，台面和不消毒的器械（如移液枪等）；实验中，如允许，尽量多过火，开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处；使用无菌台后，再用酒精擦台面，紫外照20分！
2. 滴管不要接触瓶口，吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。
3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时，往往头会距离组织很近，所以带口罩很重要！还要换无菌衣（紫外照过的白大褂）。
5. 注意配制完全培养基时不要发生污染，在使用前一定要做无菌培养，因为一般应用污染后的培养基培养细胞后，很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求，切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台！另外无菌台上的器械，试剂摆放，也尽量遵循一定的顺序！依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染：
下面是几种细胞培养过程中常见的污染：
1. 支原体污染：
传说中的黑焦虫，长得暴快。24小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。
图1 支原体污染的光镜检测（圆圈所示，×10倍）
图2 支原体污染的光镜检测（×20倍）
图3 支原体污染的荧光检测
图4 支原体污染的电镜检测（×30k，煎蛋状和其他形状）
图5 支原体污染的电镜检测
2. 念珠菌污染：
似乎无处不在，而且顽固得很。长得暴快（12h就能在细胞上面密布）。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上，高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测（低倍镜）
图7 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）
图8 念珠菌污染的光镜检测（高倍镜）
图9 念珠菌污染的检测（革兰氏染色阳性）
这么大面积的污染，你可以看看是不是操作上出了问题，要不然就是培养基的问题。既然已经污染了，就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水，但最起码要是蒸馏水。
3.霉菌污染
比较常见的一种污染，常常来源于污染的空气、水和器械。
图10 霉菌污染的光镜检测（低倍）
图11 霉菌污染的光镜检测
（典型的霉菌污染，肉眼看到白色的团块或白点，镜下呈丝状。400倍）
图12 霉菌污染的光镜检测（树枝状，高倍）
图13 霉菌污染的倒置显微镜检测（树枝状）
4. 杆菌污染：
培养基中加入抗生素可以减少此种污染，但也不是绝对的。
图14 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，高倍）
图15 杆菌污染的光镜检测（瑞氏染色，低倍）
细胞中的颗粒到底是怎么回事？
我的细胞总有颗粒，开始是细胞中有，后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊？是支原体污染吗？这可是我刚买回来的细胞啊!
我们实验室也有这种情况，是不是黑的小碎片，有人说是细胞代谢产物，后来拿到高倍镜下看还会动，就怀疑是污染了，也想问问大家到底是什么
是黑色的小碎片。我没注意到它会动，只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差，裂解出的东西。但是，是什么东西不清楚。
的确很常见
在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现，我根据自己的经验估计是一种污染，因为随着黑点增多，本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现，我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下，好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。
以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题，可以有条件换进口血清试试，或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊？有谁知道？
我培养的细胞也出现过此中问题，放到高倍镜下看时有东西在动，但培养液不混浊，估计不是细菌污染，可能是血清问题，是支原体污染。
我培养的细胞也出现过这样的问题，我个人认为是一种支原体污染。国产血清是罪魁祸首，因为只要将细胞饥饿一下，不超过24小时，这种东西就会疯长
我培养的细胞也有出现这中情况。但是并不影响细胞生长。应该不是支原体污染
最近，我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西，尽管我用的是GIBCO的FBS，后来，每天换液之前洗几遍后，就慢慢变少，现在没了
细胞培养的细菌污染
我们新建的细胞室。每周都会做清洁，用0。2%新洁尔灭消毒，照紫外。实验前也会照至少30分钟。培养基中加青霉素，链霉素。可是培养细胞时还是常有细菌污染，有时甚至分析不出原因。用培养瓶还好一点，用多孔板或平皿就更凄惨。我养的是哺乳动物细胞，不知各位有什么好的方法避免污染！谢谢！
很可能是超净台无效了，，或者培养基？其实严格操作箱污染都难
我们是新的超净台，不可能失效。而且用同一瓶培养基，一瓶传两瓶，原始的一瓶污染，
新传的很好。所以我分析不出原因呀
那么假如把原始的那瓶换新瓶养可以么？
都污染了，我仍还来不及，那还敢换新瓶
染菌有很多原因，因为整个细胞操作过程均要求无菌，所以看看操作是否规范，例如戴手套等。
多半是环境因素，做点平板，操作时放在几个地方，培养后看看长菌情况。消毒用新洁尔灭好象不是太有用。
人是最大的污染源，不知你做好手部的消毒工作以及戴口罩没有，其实，只要你操作的好，严格在靠近火的附近操作，污染的几率是很小的。从你的描述中可以看出培养基应该没有问题，新的一瓶很好，老的一瓶污染，只有操作不当引起的，还需要加强练手。
