山楂新品种黄酮的提取与分析

山东林业科技　２０１０年第６期　总１９１期　ＳＨＡＮＤ（）ＮＧ　Ｆ０ＲＥＳＴＲＹ　ｓＣＩＥＮＣＥ　ＡＮＤ　ＴＥＣＨＮ０Ｌ０ＧＹ　２０１０．Ｎｏ．６　文章编号：１００２—２７２４（２０１０）０６一Ｏ０１２—０３　

山楂新品种黄酮的提取与分析　连建国　，孟庆杰。～，王光全　，张　凯　（１．聊城市林业局，山东聊城２５２０００；２．聊城大学生命科学学院）　

摘要：以５个新品种山楂为原料，对果实中的总黄酮进行了提取。以芦丁为材料制作标准曲线，通过分光光度比色法测　定提取液中总黄酮的含量。通过单因素分析以及正交试验，确定了最佳提取方案为：６Ｏ　的乙醇浓度，１：７Ｏ料液比，７Ｏ℃，热　回流提取２ｈ。　关键词：山楂；有机溶剂；黄酮；提取；分析　中图分类号：￥６６１．５　文献标识码：Ａ　

山楂果实含有丰富的营养物质　，特别Ｖｃ和　黄酮类化合物等含量高。山楂具有消积化滞、活血　化淤等功效。山楂中的黄铜类等药物成分，具有显　著的扩张血管及降压作用，有增强心肌、抗心律不　齐、调节血脂及胆固醇含量的功能。黄酮还是一种　很强的抗氧剂，可以改善血液循环，降低胆固醇，阻　止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生，因此，提　取分析ＬｌＪ楂果实中的黄酮化合物，对于科学利用山　楂果实，提高山楂在药品、食品等许多方面的应用价　值具有重要意义。　１材料和方法　１．１芦丁标准曲线的制作　准确称取适量芦丁样品２　ｍｇ，干燥后用６０　的　乙醇溶解，并定容至１００　ｍｌ。取母液２．５　ｍｌ，用　６０　乙醇定容至２５　ｍｌ，即配制成０．２　ｍｇ／ｍｌ的芦　丁标准液。分别精确吸取芦丁标准液０、１．０、２．０、　３．０、４．０、５．０　ｍｌ加入到６支２５ｍｌ的容量瓶中，加　入５　亚硝酸钠ｌ　ｍｌ，摇匀，静置６分钟；加入１Ｏ　硝酸铝溶液１　ｍｌ，静置６分钟；加入４　氢氧化钠溶　液１Ｏ　ｍｌ，静置１５分钟　；。将配置好的溶液，用ＵＶ　２１００分光光度计，在５１０ｎｍ波长下测其吸光值。　以吸光值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。　得标准曲线方程：Ｙ一１０．５５７ｘ＋０．０１２２（Ｒ。一　０．９９５５）　Ｌ　２　山楂黄酮的提取　以采自沂蒙山区的山楂新品种五星红、齐鲁红、　天宝红、辐泉红和沂蒙红为试材。将山楂切碎去核　烘干，粉碎后用研钵研磨成粉末，过６Ｏ目筛。称取　２．０ｇ山楂粉末，置于磨口烧瓶中，用有机溶剂热回　流法提取山楂中的总黄酮。提取液经布氏漏斗抽　滤，再经减压旋转蒸发，将提取液中的液体除去。用　少量医用酒精使粗黄酮溶解，并定容至２５ｍｌ。吸取　０．５ｍｌ提取液定容至２５ｍｌ。以空白管为对照，测定　提取液的Ａ５１Ｏ值。并根据芦丁标准曲线，计算出　提取液的浓度（ｍｇ／ｍ１）。再计算出山楂总黄酮的得　率。　

芦丁标准曲线　ｎ　５　ｎ　４　Ｏ．３　０．２　Ｏ．１　０　

芦丁浓度（ｍｇ／ｍ１）　图１￣Ｔ，ｂｆ，ａｔ曲线　总黄酮得率（　）一　避　×１００　９／６　样品干重（ｇ）×１　Ｏ（）０　‘　

２结果与分析　２。ｌ　黄酮提取方法的单因素分析　２。１．１　乙醇浓度对黄酮提取的影响　配制４０　、５０　、６０％、７０　、８Ｏ　的乙醇溶液，　

收稿日期：２Ｏｌ０～１０—１９　＊山东省科技攻关项目（２００９ＧＧ１０００９３１）；山东省农业科技成果转化项目（鲁科农字Ｅ２ｏ１０￣７９号）　＊＊通讯作者　

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《覃＝ｆ　山东林业科技　连建国等：山楂新品种黄酮的提取与分析　２０１０年第６期　按１：３０的料液比，在５０￣Ｃ条件下热回流１　ｈ提取粗　黄酮，按１．２的方法测定提取液的吸光值，计算总黄　酮提取率，并绘图。　乙醇浓度对撮率的影响　ｎ　８　ｎ　６　ｎ　４　ｎ　２　０　０　２０　４Ｏ　６０　浓度（％）　图２　乙醇浓度对提取率的影响　由图２可知，在较低浓度下，随着乙醇浓度的增　大，总黄酮提取率逐渐增大，在乙醇浓度为６０　左右　时，提取率达到峰值，当乙醇浓度继续增大时，提取率　降低，因此，６０　的乙醇浓度为最佳提取浓度。　２．１．２　料液比对黄酮提取的影响　精确称取山楂粉末２．０　ｇ，按１：２０、１：３０、１：４０、　１：５０的料液比，用６０　的乙醇，６Ｏ℃水浴１　ｈ提取　粗黄酮，按１．２的方法测定提取液的吸光值，计算总　黄酮提取率，并绘图。　料液比对提取率的影响　Ｏ・８　三　辞０．４　萋０．２　０　２　３　料液比　图３料液比对提取率的影响　由图３可知，在料液比较小时，随着料液比的　增大，总黄酮提取率逐渐增大，当料液比达到１：４０　时，提取率达到峰值，当料液比继续增大时，提取率　降低，因此，１：４０为最佳料液比。　２．１．３时间对黄酮提取的影响　时间对提取率的影响　一Ｏ・８　苎Ｏ・６　辞０．４　萋眦　ｏ　０　ｌ　２　３　时间（ｈ）　图４时间对提取率的影响　精确称取山楂粉末２．０　ｇ，按１：３０的料液比，用　６Ｏ％的乙醇做提取剂，在５Ｏ℃条件下，分别水浴回　流提取１、１．５、２、２．５ｈ，按１．２的方法测定提取液的　吸光值，计算总黄酮提取率，并绘图。　由图４可知，在时间较短时，随着时间的延长，　总黄酮提取率逐渐增大，在提取时问为２ｈ左右时，　提取率达到峰值，当时间继续延长时，提取率逐渐降　低，因此，２ｈ左右为最佳提取时间。　２．１．４温度对黄酮提取的影响　精确称取山楂粉末２．０ｇ，按１：３０的料液比，用　６Ｏ　的乙醇做提取剂，分别在５０℃、６０℃、７Ｏ℃、　８０℃条件下，水浴回流提取１ｈ，按１．２的方法测定　提取液的吸光值，计算总黄酮提取率，并绘图。　温度对提取率的影响　０．８　０．６　许ｏ．４　０．２　Ｏ　Ｕ　ＺＵ　４Ｕ　６Ｕ　Ｕ　ｌＵＵ　

温度（℃）　

图５温度对提取率的影响　由图５可知，在温度较低时，随着温度的升高，　总黄酮提取率逐渐增大，在７Ｏ℃左右时，提取率达　到峰值，当温度继续升高时，提取率逐渐降低，因此，　７０￣Ｃ左右为最佳提取温度。　２．２黄酮提取的正交优化　根据单因素的试验结果，选择乙醇浓度、料液　比、温度、时间做　３水平４因素正交试验（表１），以　确定总黄酮的最佳提取条件。　表１正交试验因素水平表　

水平　Ａ乙醇浓度（／　）Ｂ料液比（／ｇ：ｍ１）Ｃ时间（／ｈ）温度（／￣Ｃ）　

根据正交试验因素水平表，设计９组试验，分别　在相应的条件下，进行山楂总黄酮的提取，并对提取　液按１．２的方法进行处理。吸取０．５ｍｌ提取液定容　至２５ｍｌ。以空白管为对照，测定提取液的Ａ５１０　值。并计算提取率（表２）。　由表中数据和验证试验可知，有机溶剂热回流　提取法提取山楂黄酮的最佳提取条件是　Ａ３Ｂ２Ｃ３Ｄ１，即山楂黄酮的最佳提取条件是６０　乙　醇浓度，１：４Ｏ的料液比，提取时问２ｈ，提取温度　７Ｏ℃，回流提取２次，效果最好。　

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一９６一讣　山东林业科技２０１０年第６期　表２　山楂黄酮的正交试验结果　

品种　吸光值　浓度（ｍｇ／ｍ１）　得率（　）　２。３　山楂新品种黄酮含量分析　

山楂黄酮的乙醇提取法，在含量的测定中采用　了分光光度法，由于山楂所含的色素与黄酮在　５１Ｏｎｔｏ处均有吸收值，所以对黄酮含量的测定有一　定的影响。经计算，５个新品种山楂的黄酮含量如　下表所示（表３）。在这５个新品种中，黄酮含量由　高到低依次是齐鲁红、五星红、天宝红、沂蒙红、辐泉　红　

３讨论　山楂总黄酮的乙醇提取法，设备要求较为简单，　而且黄酮提取率也较高，因此，在天然活性物质的提　取中，多用乙醇作为提取剂［３３。植物粉末的粉碎程　度，乙醇的浓度，料液比，提取时间，温度等对总黄酮　的提取率都有不同程度的影响。通过本次实验可　知，乙醇浓度、温度、时间、料液比对提取率的影响依　次增大。　

参考文献：　［１］北京农业大学．果树栽培学［Ｍ］．北京：农业出版社，１９８０　［２］梅洪睿，云霞，杨红．回归正交试验法优化菜芙蓉茎中总　黄酮的提取工艺＿Ｊ］．大连工业大学学报２００８（４）：２９７￣３００　Ｅ３］张德权，台建祥，付勤．生物类黄酮的研究及应用概况　ＥＪ］．食品发酵工业，１９９９，２５（６）　

（接第４页）　ｏｎ　ｏｘｙｇｅｎ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｎｅｒｇｙ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｏｆ　ｈｙ—　ｂｒｉｄ　ｐｏｐｌａｒ　ｃｌｏｎｅｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｐｈｏｔｏａｃｏｕｓｔｉｃ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　［Ｊ］．植物学报，（英文），４２（８）：８１８－－８２３　［４］战吉皮，黄卫东，王利军．植物弱光逆境生理研究综述　［Ｊ］．植物学通报２００３，２０（１）：４３～５０　［５］贾虎森，李德全，韩亚琴．高等植物光合作用的光抑制研　究进展［Ｊ］．植物学通报．２０００，１７（３）：２１８～２２４　Ｅ６］宋建，田纪春，赵世杰．中午强光胁迫下高蛋白小麦旗叶　的光合特性『Ｊ］．植物生理学报，１９９９，２５（３）：２０９～２１３　［７］甘德欣，王明群，龙岳林，等．３种彩叶植物的光合特性研　究［Ｊ］．湖南农业大学学报：自然科学版，２００６，３２（６）：６０７　～６ｌＯ　［８］何春霞，李吉跃，郭明，等．４种乔木叶片光合特性和水分　利用效率随树高的变化［Ｊ］．生态学报，２００８，２８（７）；３００８～　３Ｏ１６　［９］张蕾，金松恒，方伟．４种珍稀观赏竹光合作用特性研究　

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