H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

营养与疾病 Nutrition and Disease重组禽流感病毒H5+H7亚型三价天活疫苗(H5N1 Re-11 栋、Re- 12<+H7N9Re-2)对蛋鸡免疫效崇抗体监测以及安全性试验评估杨起贺，杨浩，高鹏，荣富龙，李叔伟**收稿日期：2019-10-24作者简介：杨起贺(1986-),男，黑龙江哈尔滨人，初级兽医师，主要从事动物疫苗的服务工作。

*通讯作者：E-mail: 23674649@(哈药集团生物疫苗有限公司，哈尔滨150000)摘要：试验通过对重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5NlRe-ll 株+Re-12株+H7N9H7Re2株)在接种蛋 鸡后产生抗体效价值的情况，评价重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5NlRe-ll 株+Re-12株+H7N9 Re-2株) 对蛋鸡预防高致病性禽流感疫病的效果。

同时进行安全性试验。

结果表明，蛋鸡在15日龄接种重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5NlRe-ll 株+Re-12株+H7N9 H7Re2株)，45日龄进行二次免疫，75日龄进行三免，产生H5NlRe-ll 株抗体滴度、H5NlRe-12株抗体滴度、H7N9 Re-2株抗体滴度都较高，从抗体消长规律来看，对产蛋前的蛋鸡都有校好的保护力，疫苗接种后未对鸡群造成应激反应。

通过本试验在蛋鸡上接种重组禽流感病毒(H5+H7)三 价灭活疫苗(H5NlRe-ll 株+Re-12株+H7N9H7Re2株)首次免疫后14d 产生抗体有保护力，二免后14d 抗体滴度达到高峰，对蛋鸡有很好的保护力，为预防蛋鸡高致病性禽流感疫病提供临床依据。

关键词：禽流感；消长规律；HI;安全中图分类号：S858.31文献标志码：A 文章编号：1001-0084(2019)12-0042-03Antibody Monitoring and Safety Evaluation of RecombinantH5+H7 Trivalent Inactivated Vaccine (H5H1 Re-11 Strain,Re-12 Strain+H7N9Re-2) for Laying HensYANG Qihe, YANG Hao, GAO Peng, RONG Fulong, LI Shuwei *(Harbin Pharmaceytical Group Biological Vaccine Co., Ltd., Harbin 150000, China)Abstract ： In order to evaluated the effect of recombinant avian influenza virus (H5Nlre-l 1 strain + Re-12 strain +H7N9 H7Re2 strain) trivalent inactivated vaccine (H5NlRe-ll strain + Re-12 strain +H7N9 Re —2 strain) on the prevention of highly pathogenic avian influenza in laying hens. At the same time, carry out safety test. The resultsshowed that the antibody titer of H5NlRe-ll strain + Re-12 strain + H7N9 H7Re2 strain was higher than that ofH5NlRe-12 strain and H7N9 H7Re2 strain at the age of 15 days, and the antibody titer of H5NlRe-l 1 strain, H5N 1 Re-12 strain and H7N9 Re-2 strain were higher at the age of 75 days No stress reaction was caused to chickensafter vaccination. In this experiment, the recombinant avian influenza virus (H5 + H7) trivalent inactivated vaccine42 饲料博览2019年第12期Nutrition and Disease营养与疾病(H5NlRe-l1strain+Re-12strain+H7N9H7Re2strain)was inoculated on laying hens for the first time.The anti­body produced a protective effect14days after the first immunization.The antibody titer reached a peak14days after the second immunization,which had a very good protective effect on laying hens and provided a clinical basis for the prevention of highly pathogenic avian influenza disease in laying hens.Key words：avian influenza;law of fluctuation;HI;safety1材料与方法1.1供试材料哈药集团生物疫苗有限公司重组禽流感病毒H5+H7亚型三价灭活疫苗（H5NlRe-ll株、Re-12株+H7N9Re-2）灭活疫苗。

动态本栏目主要是及时报道国家批准 的新兽药和企业内部研制的新产品（包 括原料药、成品药、疫苗及各种检测 试纸），为广大读者提供最新的兽药信 息，着重介绍药物的特点、作用机理、 作用用途及临床应用效果。

欢迎来稿！E —mail:sysc.**********引领兽药市场/直面兽药销售/沟通兽药产销/探索营销之道国家三类新兽药重组新城疫病毒、禽流感病毒（H9亚型）二联灭活疫苗（aSG10株+G 株）吉林正业生物制品股份有限公司发证日期:（H9亚型）二联灭活疫苗（aSGlO 株+G 株）根据《兽药管理条例》，该兽药符合规定，准予注册|中华人民共和国新兽药注册证书重组新城疫病毒、禽流感病毒（H9亚型）二联灭活疫苗（aSG10 株+G 株）由中国农大动物医学院副院长、博士生导师张国中教授主导研发；中国农业大学、中国兽医药品监察所、吉林正业生物制品股份有限公司等5家单位联合研制,为国家三类新兽药【注册证号：（2019）新兽药证字26号铱。

一、产品特点和优势（一）最新流行毒株，与当前流行毒株更为匹配，保护力更高该产品采用基因VII 型人工致弱鸡新城疫病毒aSG10株和H9N2亚型禽流感病毒G 株双新毒株制备遥新城疫病毒aSG10疫苗株是通过对近5年国内流行的NDV 毒株进行系统分析筛选得到的一株基因V 型代表性毒株,并将该毒株利用反向遗传操作技术进行了人工致弱,对目前流行的新城疫有很高的保护作用遥H9亚型禽流感病毒G 株是通过对近5年国内流行的500株H9-AIV 毒株进行系统分析筛选出与其他毒株交叉保护好的代表性毒株，核酸同源性高达93.2%-99.0%遥分析结果显示,该产品对近五年田间分离的不同地区NDV 和H9-AIV 代表性流行毒株进行攻毒保护试验,免疫 保护效果均在90%以上遥（二）起效快,保护期至少6个月该产品具有免疫产生期早、免疫持续期长、免疫保护效率高的优点遥将3批疫苗分别免疫21日龄SPF 鸡和120 日龄海兰褐商品蛋鸡,0.25mL/只遥疫苗免疫后21天,H9-HI 抗体效价达9log2以上；H9-AIV 流行株攻击后,鸡群不表现任何临床症状,且有效抑制排毒率达90%以上遥本疫苗免疫后14天即可产生较好的免疫保护效果,免疫持续期至少为24周遥新药动态12SPF 鸡NDV-HI 抗体商品蛋鸡NDV-H1抗体108 642 O1(g )车曇垢壬A-*-201301 -•-201302T-201303T-对照组108 6 421(嘗°】$樣拴军三06 8 10 12 14 16 IS 20 22 24 26 28 30 32免疫后不同时间（周〉-*-201301■-201302-*>201303T*-对照组Bl商品蛋鸡H9-HI 抗体SPF 鸡H 9-HI 抗体0 2 4 6 8 10 12 14 16 1S 20 22 24 26 28 30 32A2免疫后不同时间（周〉-♦-201301 -•-201302 -*-201303对照组0 8 6421(2800H E -*-201301-0-201302 —*—201303对照组4 6 & 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32免疫后不同时间（周）O2B 图1疫苗免疫后HI 抗体消长情况A1: SPF 鸡 NDV-HI 抗体；A2 ： SPF 鸡 H9-HI 抗体；B1:商品蛋鸡NDV-HI 抗体；B2：商品蛋鸡H9-HI 抗体判定标准：新城疫HI 抗体平均值M5log2；禽流感H9亚型HI 抗体平均值:&7log2该产品对近几年田间分离株的攻毒保护实验该产品以0.25ml/只剂量经颈部皮下注射途径接种3周龄SPF 鸡,免疫后21日NDV HI 抗体平均滴度在7log2以上,AIV HI 抗体平均值在8.5log2以上；用近几年田间分离株攻毒,NDV 对照鸡在攻毒后4日全部死亡,免疫鸡观察期内全部健活且病毒分离阴性率不小于9/10，攻毒保护率达90%以上；AIV 对照鸡病毒分离率均为5/5阳性，免疫鸡观察期内全部健活且病毒分离均为阴性，攻毒保护率为100%遥（见表1、表2）表1免疫鸡对不同NDV 毒株的攻毒保护情况新药动态D 攻毒毒株HI 抗体（Iog2）发病情况死亡慵况病毒分离攻毒保护免疫组7.70/100/101/109/10未免疫组0.05/55/55/50/5cm □ fH-免疫组7.30/100/100/1010/10未免疫组0.05/55/55/50/5l*4R1 A -免疫组7.50/100/101/109/10未免疫组0.05/55/55/50/5免疫组8.10/100/100/1010/10HLJlb 秣"未免疫组0.05/55/55/50/5cvi a 址免疫组8.20/100/100/1010/10未免疫组0.05/55/55/50/5/空白对照0.00/50/50/5/编辑部电话：0311-8 5151289表2免疫鸡对不同H9AIV 的攻毒保护情况攻壽毒株HI 抗体(Iog2 )死亡情况病毒分离情况攻毒將JS12 株免疫组9.20/100/1010/10未免疫组0.01/55/50/5HB13 株免疫组9.30/100/1010/10未免疫组0.01/55/50/5SD14 株-免疫组8.70/100/1010/10未免疫组0.00/55/50/5JS15 株免疫组9.50/100/1010/10未免疫组0.00/55/50/5HN16 株、免疫组9.10/100/1010/10未免疫组0.01/55/50/5/空白对照组0.00/50/5/该产品与国內其他同类疫苗的比较使用新城疫、禽流感疫苗免疫3周龄SPF 鸡,免后21日的测定HI 抗体平均滴度,并使用NDV 强毒株（SG10株）与G 株对不同免疫组进行攻毒,观察其攻毒保护率遥实验结果显示:该产品在安全性方面与其它厂家疫苗无明显差异曰在免疫效力方面，免疫21日后,该产品HI 抗 体平均滴度与其它厂家疫苗无明显差异遥新城疫部分,本疫苗和重组新城疫病毒灭活疫苗（A-VII 株）攻毒保护效果相当曰禽流感部分，攻毒保护效果优于其它两款疫苗遥（见表3、表4）表3 4种疫苗的免疫效力检验结果（新城疫部分）疫苗名称HI 抗体平均滴度（Iog2）（本毒株腿检测）发病数/死亡靭攻毒数病毒分离阳删/攻毒数保护数/攻毒数A （禽正好）6.20/0/102/108/10B 5.8///C5.6///D 6.10/0/102/108/10攻毒对照组0.05/5/55/50/5表43种疫苗的免疫效力检验结果（禽流感部分）尉翔攻毒数病毒分离阳性数 欣毒数HI 抗体平均滴度（Iog2 ）G 株驱 本毒株腿疫苗名称A （禽正好）9.19.10/1010/10B 6.89.02/108/10C7.08.91/109A0攻毒对照组0.00.05/50/5备注：A ,重组新城疫病毒、禽流感病毒（H9亚型）二联灭活疫苗（aSG10株+ G 株）；B ,新城疫、禽流感（H9亚 型）二联灭活疫苗（La Sota 株+ F 株）；C ,鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗（La Sota 株+ HL 株）；D ,重组新城疫病毒灭活疫苗（A-VII 株）遥新药动态基因VII 型NDV 疫苗产生的保护效果明显优于LaSota 疫苗株HI 抗体水平丄‘攻毒方式-*■ ■ ■ ■80604020 (案)#牟举免疫：LaSota免疫：aSGlO 攻毒：SG10攻毒：SG10试验结果显示：当NDV-HI 抗体大于3log2时，本制品与LaSota 灭活疫苗均可保护鸡只不表现临床症状或死亡, 但免疫鸡只的排毒率存在明显差异。

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗（N7a株+M41株+SZ株）说明书和内包装标签（一）鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗（N7a 株+M41株+SZ株）说明书【兽药名称】通用名鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感（H9亚型）三联灭活疫苗（N7a株+M41株+SZ株）商品名无英文名Newcastle Disease, Infectious Bronchitis and Avian Influenza (Subtype H9) Vaccine, Inactivated(Strain N7a+Strain M41+Strain SZ)汉语拼音Ji Xinchengyi Chuanranxingzhiqiguanyan Qinliugan（H9 Yaxing）Sanlian Miehuoyimiao（N7a Zhu+M41 Zhu+SZ Zhu）【主要成分与含量】疫苗中含有灭活的鸡新城疫病毒N7a株，灭活前病毒含量≥108.4EID50/0.1ml；含灭活的鸡传染性支气管炎病毒M41株，灭活前病毒含量≥106.4EID50/0.1ml；含灭活的禽流感（H9亚型）病毒SZ株，灭活前病毒含量≥108.4EID50/0.1ml。

【性状】乳白色均匀乳剂。

【作用与用途】用于预防鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和H9亚型禽流感。

免后21日可产生免疫力，免疫期为6个月。

【用法与用量】皮下或肌肉注射。

2～5周龄鸡，每只0.3ml；5周龄以上鸡，每只0.5ml。

【注意事项】（1）该疫苗免疫前或免疫同时应使用鸡传染性支气管炎活疫苗作基础免疫。

（2）仅用于接种健康鸡。

（3）使用前须检查，如出现变色、破乳、破漏、混有异物等均不得使用。

（4）使用前应使疫苗恢复至室温，并充分摇匀。

（5）疫苗开启后限24小时内用完。

（6）接种器具应无菌，注射部位应消毒。

（7）用过的疫苗瓶、器具和未用完的疫苗等应进行无害化处理。