抗PR3和抗MPO抗体的检测在原发性小血管炎诊断中的应用

７６　国际检验医学杂志２００９年１月第３Ｏ卷第１期Ｉｎｔ　Ｊ　Ｉｌｂ　Ｍｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ　２００９，Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．１　

抗ＰＲ３和抗ＭＰＯ抗体的检测在原发性小血管炎诊断　中的应用　陈绩才　林秋强　李剑民　陈韧　【关键词】血管炎；抗体，抗中性白细胞胞质　中图分类号：Ｒ４４６．６２；Ｒ５４３　文献标识码：Ｂ　肽水解酶类；　过氧化物酶　文章编号：１６７３—４１３０（２０Ｏ９）０１—００７６　０２　抗中性粒细胞胞浆抗体（ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ　ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ　ａｎｔｉ　ｂｏｄｙ，ＡＮＣＡ）是一组针对中性粒细胞和单核细胞许多胞浆成　分抗原所产生的自身抗体，其靶抗原实际为胞浆中的颗粒蛋白　酶，主要位于中性粒细胞胞浆的嗜天青颗粒和单核细胞胞浆的　溶菌酶中。抗蛋白酶３（ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ３　ＰＲ３）抗体和抗髓过氧化　物酶（ｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ，ＭＰＯ）抗体是其中的主要两种，是近年　来发展起来用于原发性小血管炎特异性血清学诊断及临床治　疗监测的重要指标，为原发性小血管炎特异性自身抗体并与疾　病活动性密切相关，对原发性小血管炎的诊断具有特异性。本　组用ＥＬＩＳＡ检测抗ＰＲ３抗体和抗ＭＰＯ抗体，用间接免疫荧　光法检测ＡＮＣＡ，现将１５０例血管炎和非血管炎患者检测结　果报道分析如下。　资料与方法　１．对象　１５０例血管炎和非血管炎患者均来自该院就　诊患者，分别为血管炎患者１２例，ｓＩ　Ｅ患者３Ｏ例，ＲＡ患者５８　例，肾脏疾病３Ｏ例，自身免疫性肝病２Ｏ例。其中男５５例，女　９５例，年龄１６～６５岁，平均４６岁。临床诊断均符合美国风湿　病协会制定标准。健康对照组为¨诊体检健康人员１００例，男　６ｏ例，女４ｏ例，年龄２１～６ｏ岁，平均５０岁。　２．方法　１）抗ＰＲ３和抗ＭＰＯ的检测：采用德闲欧蒙公　司生产的ＥｕＳＡ试剂，操作是将样品稀释，按加样方案向相应　微孔中分别加稀释血清，阴性、阳性对照和空白对照各１００　“Ｉ　，３７℃×３０　ｓ，洗板３次，加酶标抗体１００，３７℃×３０　ｓ，同前　洗板３次，加底物　色，３７℃×ｌ５　ｓ后，加终止液１００“Ｌ，４５Ｏ　ｒｉｍ波长比色。＞２Ｏ　ＲＵ　ｍＬ判为阳性。２）应用间接免疫荧光　法检测ＡＮＣＡ总抗体，用德国欧蒙公司生产的荧光ＡＮＣＡ试　剂盒，用于检测中性粒细胞胞浆抗体，标本检测时用ＰＢＳ缓冲　液作１：１０稀释，严格按照说明书操作，同时设阴、阳性对照。　ｍ现亮绿色荧光者判为阳性。　结　果　１５０例血管炎和非血管炎患者抗ＰＲ３抗体、抗ＭＰＯ抗体　和ＡＮＣＡ检测结果见表１。　追踪本组患者确诊情况，１２例血管炎患者中，有９例ＰＲ　抗体阳性确诊为韦格纳肉芽肿（Ｗｅｇｎｅｒ　Ｓ　ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｓｉｓ，　ＷＧ），１例抗ＭＰＯ阳性确诊为显微镜下型血管炎（ｍｉｃｒｏｓｃｐｉｃ　ｐｏｌｙａｎｇｉｔｉｓ，ＭＰＡ），２例ｐＡＮＣＡ阳性确诊为溃疡性结肠炎　ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１　６７３—４１３０．２００９．０１．０３５　作者单位：５１５８００广东汕头澄海人民医院检验科（陈绩才、李剑　民），内科（林秋强），风湿科（陈韧）　·经验交流·　

（ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）。３０例’肾脏疾病中２例ＭＰＯ抗体阳性　确诊为坏死性新月体型肾小球肾炎（ｎｅｃｒｏｔｉｚｉｎｇ　ａｎｄ　ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ　ｇｌｏｍｅｒａｌｏｎｅｐｈｒｉｔｏｓ，ＮＣＧＮ）。３０例ＳＬＥ患者中，有２例ｐＡＮ　ｃＡ阳性，是否伴有肾脏损害．有待进一步检查。自身免疫性　肝病（ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ，ＡＩＨ）３例ｐＡＮＣＡ阳性。１００例　健康对照组，ＡＮＣＡ谱检查结果均阴性。　表１抗ＰＲ３抗体、抗ＭＰＯ抗体和ＡＮＣＡ检测结果　

讨　论　ＡＮＣＡ是诊断原发性小血管炎最为重要的实验检查指　标，间接免疫荧光法可把ＡＮＣＡ分为２个最常见的荧光染色　型，即胞浆型（ｃＡＮＣＡ）和核周型（ｐＡＮＣＡ）。ｃＡＮＣＡ其靶抗　原主要是ＰＲ３，其他包括杀菌素、通透性增高蛋白及某些未知　的抗原等；ｐＡＮＣＡ其靶抗原主要为ＭＰＯ，其他包括人白细胞　弹性蛋白酶、乳铁蛋白、组织蛋白酶、溶菌酶等。　ＰＲ３一ＡＮＣＡ在临床上与ＷＧ密切相关，已成为原发性小　血管炎特异性血清学诊断及Ｉ临床治疗监测的重要指标。ＰＲ３　能降解许多细胞外基质蛋白，其生理抑制因子主要为　抗胰　蛋白酶（ａ　一ＡＴ），劬一ＡＴ通过与ＰＲ３不可逆结合形成复合物从　肝脏被清除，从而抑制ＰＲ３的水解活性。但ＰＲ３一ＡＮＣＡ与　ＰＲ３结合可抑制ＰＲ３与ａ　一ＡＴ形成复合物，ＰＲ３一ＡＮＣＡ与　ＰＲ３复合物在炎症部位分解，ＰＲ３发挥水解作用，致血管内皮　损伤。因此，ＰＲ３在血管炎的发病中可能起到重要作用。ＷＧ　是坏死肉芽肿和血管炎，病变累及小动脉、静脉及毛细血管，是　以发热、鼻咽、肺及肾慢性肉芽肿为特征的疾病。本组９例　ＰＲ３一ＡＮＣＡ阳性，阳性率为７５　，结合临床其他资料最后确诊　为ＷＧ。３Ｏ例肾脏疾病、３Ｏ例ｓＩ　Ｅ、５８例ＲＡ和２Ｏ例ＡＩＨ，　ＰＲ３一ＡＮＣＡ全为阴性，说明ＰＲ３一ＡＮＣＡ是原发性小ｍ管炎特　异性抗体，主要在血管炎患者中出现，特别是对ＷＧ有高度的　敏感性和特异性。　ＭＰＯ—ＡＮＣＡ主要与显微镜下型多血管炎（下转第７８页）

　７８　国际检验医学杂志２００９年１月第３Ｏ卷第１期Ｉｎｔ　Ｊ　ＬａｂＭｅｄ，Ｊａｎｕａｒｙ　２００９，Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．１　特别注明，如动脉血气申请单应记录采血时间、患者体温、吸氧　浓度（ＦｉＯ　）、呼吸频率（ＲＲ）、机械通气（ＭＶ）条件等，作为检查　结果的参照指标。对于送检的痰标本，应填写标本采集日期和　时问，写明标本的获取途径（咳痰、经人工气道吸引或者经支气　管镜采样等），是否需要特殊染色，做何种培养，怀疑真菌感染　注明需延长培养时间等。检验人员拿到申请单后需认真阅读，　避免遗漏重要信息，收到送检标本及时处理。通过一张小小的　申请单双方在工作上做到相互配合。　７．检验人员和ｌ临床医务人员应当共同制定某些检验指标　的警戒值（如血钾大于６．０　ｍｍｏｌ／Ｌ，血钠小于１２０　ｍｍｏｌ／Ｌ　等），若超过警戒值，检验人员应复查后及时电话联系临床医　生，了解患者情况后与医生共同决定重新送标本检验或者根据　现有结果进行临床处理，避免延误治疗时机。对于危重患者，　病情瞬息万变，１　ｈ前后的情况可完全不同，此时对检验科提　出了更高的要求，对于动脉血气、电解质、肾功能、血常规、心肌　损伤等项目在尽量短时间内给出结果，特别是动脉血气，最好　有专人２４　ｈ值班，及时分析标本。同时，临床医生也必须在检　验申请单上注明“急查”或者在送检标本后及时电话联系检　验科。　８．在一些新项目开展后，检验人员和ｌ瞄床医务人员应该对　这些项目进行再评价，通过收集临床资料和检验结果，分析评　价这些项目的敏感性、特异性、假阳性率和假阴性率等，选择性　价比高的项目作为长期开展项目。如果不进行再评价工作，可　能会导致临床价值非常有限的检验项目仍然在进行，造成资源　和经济上的浪费。　９．检验科不仅需要先进的仪器设备和专业技术出色的检　验人员，同时也需要关注基础和临床方面的新理论、新技术。　积极应用检验科设备技术优势，参与临床和科研工作，既为临　床医生提供技术支持，也充实自己的理论知识，与实践经验相　结合，更好地提高医疗质量。临床和科研水平的提高也必须依　赖于检验技术的发展，双方合作能更好地推动科技进步。　１Ｏ．检验科应该定期公布所在医院近期内病原微生物耐药　性检测资料，报告病原微生物耐药性流行趋势，为临床医生选　用合适的抗菌药物提供依据，避免盲目地滥用抗菌药物。　１１．检验科也需用定期公开检测项目的质控结果。临床诊　断的准确性不断提高，不仅得益于医学检验技术的蓬勃发展，　更与严格的质量控制密切相关。质量控制应该包括患者的准　备、标本的正确收集、标本的及时送检、检验所采用的方法、试　剂、仪器以及工作人员的专业操作培训、检验结果的及时反馈　等方面，其中临床和检验方面工作人员的素质是关键。质量控　制要从单纯的室间质量控制转变为全面质量保证，定期进行质　量评价可提高检验结果的准确性、稳定性和可靠性。　总之，检验医学的不断发展为临床工作提供＿ｒ巨大帮助，　使临床工作者能得到及时、准确的检验报告，指导诊疗工作。　随着对疾病认识的不断深入，对检验医学的要求要逐渐提高。　加强检验人员与临床医务人员的交流合作有利于收集合格的　检测标本从而保证检验前质量控制；更好地判断、解释和应用　检验结果；也可以及时反馈结果指导治疗手段的正确选择，有　效提高医疗质量。　参　考　文　献　［１］沈佐君，白洁，丛玉隆．电泳技术在临床检验中的应用［Ｊ］．中华　检验医学杂志，２００５，２８（７）：６８４　６８６．　Ｅ２］张盈华．流式细胞仪在医学检验中的应用［Ｊ］．中华检验医学杂　志，１９９７，２０（４）：２０３—２０４．　［３］何蕴韶．聚合酶链反应技术在医学检验中的应用和展渠［Ｊ］．中华　医学检验杂志，１９９９，２２（３）：１３３　１３４．　［４］张正．分子生物学技术在检验医学中的应用［Ｊ］．中华检验医学　杂志，２００３，２６（１２）：７３５　７３６．　Ｅ５］丛玉隆，秦小玲．检验科管理中的几个主要问题与对策¨Ｊ］．中华　检验医学杂志，２００３，２６（１１）：６４９—６５１．　（收稿日期：２００７—１２－２０）　（上接第７６页）　（ＭＰＡ）、坏死性新月体型肾小球肾炎（ＮＣＧＮ）、过敏性肉芽肿　性血管炎（ｃｈａｎｇ—ｓｔｒａｕｓ　ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＣＳＳ）相关。体内、体外的研　究资料显示，ＭＰＯ—ＡＮＣＡ参与血管炎相关疾病的致病机制。　ＭＰ（）ＩＡＮＣＡ与疾病的相关性较ＰＲ３　ＡＮＣＡ特异性差，可在　多种疾病中检出ｌｌ　］。但每一个怀疑血管炎或。肾小球肾炎的患　者，只要原因不明，就应检测ＡＮＣＡ、ＭＰ（ＹＡＮＣＡ，阳性强烈　提示坏死性血管炎或特发性ＮＣＧＮ。本组病例ＭＰＯ－ＡＮＣＡ　阳性３例，结合临床其他资料，ｌ例确诊为ＭＰＡ，２例确诊　ＮＣＧＮ。　ＡＮＣＡ最开始是在原发性小血管炎患者血清中发现，但　随着对ＡＮＣＡ研究的深入，与之相关的疾病越来越多，间接免　疫荧光法发现的ＡＮＣＡ阳性并不一定意味着血管炎ｌ３］，包括　炎症性肠病、肺部炎症性疾病和自身免疫性肝胆疾病、ＲＡ和　ＳＬＥ等。ＡＮＣＡ与这些疾病相关的特异性靶抗原并非是ＰＲ３　和ＭＰＯ，而是其他特异性靶原成分。本组病例中，ｃＡＮＣＡ阳　性９例，全确诊为ＷＧ。ｐＡＮＣＡ阳性１Ｏ例，其中２例确诊为　ＮＣＧＮ，１例确诊为ＭＰＡ；由于抗ＰＲ３和抗ＭＰＯ阴性，确诊为　ＵＣ；ＳＩ　Ｅ患者ｐＡＮＣＡ阳性２例，可能与慢性炎症反应有关，　如动脉炎、浆膜炎和ＣＲＰ增高等，ＡＮＣＡ阳性是否会增加合并　血管炎的风险，以及同疾病活动性和严重性的关系尚待进一步　研究；３例为自身免疫性肝病，进一步研究发现他们的转氨酶　和　一球蛋白都增高，说明ＡＮＣＡ阳性可能与疾病活动有关。　结果显示，原发性小血管炎患者为阳性率７５　，主要为ｃＡＮ—　ＣＡ。而自身免疫病则以ｐＡＮＣＡ为主。对于此类疾病患者，　ＡＮＣＡ检测最重要的临床价值在于同原发性小血管炎的鉴别　诊断。　综上所述，ＰＲ３一ＡＮＣＡ和ＭＰＯ－ＡＮＣＡ及ＡＮＣＡ作为原　发性小血管炎的一种特异性血清学标记抗体，提高了对原发性　小血管炎的认识，减少了对原发性小血管炎的误诊，提高原发　性小血管炎诊断水平　］，并已形成以ＷＧ为代表的小血管炎　的血清学诊断指标，是原发性小血管炎疾病活动性监测、预测　复发及指导临床治疗的重要指标。　参　考　文　献　［１］于涛，刘新光，贾博琦．炎症性肠病相关抗中性粒细胞胞质抗体　［Ｊ］．国外医学生理、病理科学与临床分册，１９９９，１９：２３８—２４０．　Ｅｅｌ　Ｇｒｏｓｓ　ＷＬ，Ｈａｕｓｃｈｉｌｄ　Ｓ，Ｍｉｓｔｒｙ　Ｎ．Ｔｈｅ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ　ＡＮ—　ＣＡ　ｉｎ　ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｅｘｐ　Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９３，９３（Ｓｕｐｐｌ　１）：７　１１．　［３］谭立明，彭卫华，徐承云，等．抗ＰＲ３抗体和抗ＭＰＯ抗体的检　测及临床研究ＥＪ］．中华风湿病学杂志，２００４，８（９）：５４８　５５１．　［４］许元初，顾继安，孙秋蓉，等．间接免疫荧光技术检测抗中性粒细　胞胞浆抗体［Ｊ］．上海免疫学杂志，１９９２，１２（６）：３７１　３７２．　（收稿日期：２０Ｃｌ８－０１－１８）