沙枣多糖的超声提取及含量测定

G板上,以醋酸乙酯2甲酸2水(10∶2∶3)为展开剂,展开,取出晾干,自然光下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显示相同黄褐色斑点。Rf值为0158。21113　甘草鉴别　取银屑胶囊内容物418g,置圆底烧瓶中,用100mL70%的乙醇回流提取2次,每次1h,过滤,合并滤液水浴蒸干,残渣加60mL蒸溜水溶解,调节pH5～6,用乙醚萃取4次,每次10mL,弃取乙醚层,残渣加5mL甲醇溶解,浓缩至1mL,作为供试品溶液〔3〕。按处方比例配制除甘草外的阴性对照液,制法同上。另取甘草酸铵对照品制成2g・L-1的甲醇溶液。吸取上述各溶液5ΛL点于同一硅胶G板上,以醋酸乙酯2甲醇2冰醋酸2水(3∶2∶2∶4)为展开剂,展开,用硫酸2乙醇显色检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,显示相同紫褐色斑点,Rf值为0156。212　盐酸小檗碱的含量测定21211　试液的制备　样品供试液:取银屑胶囊10粒,精密称定,倒出内容物,混匀,取出约415g,精密称定。置索氏提取器中,加盐酸2甲醇(1∶100)溶液60mL回流提取至无色(515～6h),提取液浓缩至约10mL,滤过定容至25mL。准确吸取该溶液15mL挥干溶液,残渣加无水乙醇溶解,并定容至25mL,作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品制成0115g・L-1甲醇液作为标准溶液。21212　扫描条件　对上述盐酸小檗碱对照液斑点在200～400nm波长进行光谱扫描〔1〕,结果表明盐酸小檗碱在345nm处有最大吸收波长,而在370nm处吸收较小,故采用ΚS=345nm,ΚR=370nm的双波长反射法锯齿扫描,狭缝014mm×014mm,S=3。21213　线性关系考察　精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(0115g・L-1)2,4,6,8,14ΛL点于同一薄层板上,以苯2醋酸乙酯2甲醇2异丙醇2水(6∶3∶115∶115∶013)为展开剂展开扫描,结果表明盐酸小檗碱在013～211Λg之间与峰面积呈线性关系,回归方程为Y=1247122+72084108X,r=019993。21214　精密度试验　同一样品在同一薄层板上不同位置点样,测其峰面积,结果平均峰面积为7687210,RSD=0111%(n=6)。21215　稳定性试验　精密吸取盐酸小檗碱对照液5ΛL点样,按上述条件展开,取出晾干,于0,015,1,2,3h测定其峰面积,峰面积积分值为X=29062103,RSD=0159%(n=5)。结果表明盐酸小檗碱至少在3h内稳定。21216　样品含量测定　银屑胶囊中盐酸小檗碱含量测定采用外标两点法,其测定结果见表1。表1　银屑胶囊中盐酸小檗碱含量测定结果(n=6)样品平均粒重󰃗g平均含量󰃗mg・粒-1RSD(%)99080801407601319144990821014020011641709909080140400125419021217　回收率试验　采用加样回收率方法测定,平均回收率为9816%,RSD为2135%。21218　提取时间考察　取同一批银屑胶囊样品约5g,精密称定,分别置索氏提取器中,加盐酸2甲醇(1∶100)60mL,加热回流提取,提取时间为315,415,515,6h,依法测定含量,结果相对提取率(%)分别为55110,77155,100100,100145,表明提取515h已基本可将盐酸小檗碱提取完全。3　讨论在展开剂的选择上,盐酸小檗碱、黄芩苷、甘草酸铵分别考察了4种、2种、4种展开剂系统,结果盐酸小檗碱以苯2醋酸乙酯2甲醇2异丙醇2水(6∶3∶115∶115∶013)、黄芩苷以醋酸乙酯2甲酸2水(10∶2∶3)、甘草酸铵以醋酸乙酯2甲酸2冰醋酸2水(30∶2∶2∶4)为展开剂,斑点集中,效果好,故分别选此为展开剂。参考文献:〔1〕　中国药典2000年版[S]1一部12000:71,270,273.〔2〕　中华人民共和国卫生部药典委员会编著1中国药典中药薄层色谱彩色图集[S]11993171,83,91.〔3〕　刘成基,刘利根,张清华,等1甘草及其炮制品中甘草酸含量测定方法[J]1中药材,1991,14(1):31.(收稿:2001210217)沙枣多糖的超声提取及含量测定

江发寿,刘金荣,但建明,王航宇(石河子大学药学院,新疆石河子832002)摘要:目的　从沙枣中提取多糖并测定其含量。方法　采用超声法提取,分光光度法测定多糖含量。结果　用超声法提取测得沙枣多糖含量为6181%,较常规法高出近50%。结论　多糖提取可优选超声法。关键词:沙枣多糖;超声提取;含量测定中图分类号:R28412 文献标识码:A文章编号:100422407(2002)0120013202

胡颓子科植物沙枣〔1〕(ElaeagnusangustifoliaL),在新疆广泛种植为防风林,自然资源极为丰富。沙31西北药学杂志　2002年2月　第17卷　第1期枣的果实、枝叶、花均能供药用,临床上多用于脾胃虚弱、消化不良、肠炎腹泻、肺热咳嗽等疾病的治疗〔2,3〕。沙枣果实含多种有效成分和营养物质,有较高的药用和食用价值。据文献报道〔4,5〕,沙枣果实主要含糖43%～59%(其中果糖约占20%)、蛋白质约10%以及少量的鞣质、黄酮、粘液质、微量元素等。但对多糖的研究还未见报道,随着近年来植物多糖研究的日益深入,作者对沙枣果实中多糖的提取及含量进行研究,为沙枣多糖的研究和开发利用奠定基础。1　仪器与试药111　仪器　岛津UV2紫外可见分光光度计,DL2360超声波仪(35kHz,浙江宁波市象山县石浦海天电子仪器厂)。112　试药　沙枣(购自乌鲁木齐市农贸市场);葡萄糖对照品(分析纯);苯酚试剂(重蒸)。2　方法与结果211　标准曲线的制备　精密称取干燥恒重的葡萄糖011002g,配成100100mL溶液,浓度为11002g・L-1;分别精密吸取0110,0120,0140,0160,0180,1100mL于50mL量瓶中,分别加入苯酚溶液6mL和浓硫酸30mL,30℃恒温015h后,冷水浴冷却至室温,定容至50mL,在490nm处测定吸光度。以不加样为空白。以浓度C对吸光度A回归得方程A=31525×10-2C+0101336,r=019995(n=6)。样品在4100～12100mg・L-1范围内线性良好。212　沙枣多糖的提取和精制　称取沙枣粉末100g,经石油醚(60℃290℃)500mL回流脱脂2次,每次1h。再用80%乙醇回流提取2次,每次2h,以除去单糖和低聚糖。将药渣加水500mL90℃水浴提取2次,每次2h。合并两次提取液,减压浓缩至150mL,加少量活性炭脱色,过滤。滤液加5倍量95%乙醇,放置过夜,抽滤后的沉淀以水100mL溶解重复用乙醇沉淀1次。沉淀以95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤,60℃干燥,即得沙枣多糖。213　换算因素的测定　精密称取沙枣多糖20100mg,置100mL量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀作贮备液。精密吸取贮备液2100mL,照标准曲线制备项下的方法自“分别加入6mL苯酚溶液和30mL浓硫酸”起依法测定。按下式计算换算因素,f=W󰃗CD。W为多糖质量(Λg);C为多糖液中葡萄糖的浓度mg・L-1;D为多糖的稀释因素。测得f=2136。214　沙枣多糖含量测定21411　常规法提取　取沙枣粉末012511g,用滤纸包裹,置索氏提取器中,加80%乙醇100mL,回流提取2h,将残渣用80%的乙醇洗涤2次,以除去单糖和低聚糖。残渣移至圆底烧瓶中加水100mL于90℃水浴提取2次,每次2h。合并两次提取液,移至250mL量瓶中,将残渣用水洗涤2次,洗涤液并入量瓶中,定容作为供试液。精密吸取供试液1010mL,照标准曲线制备项下的方法自“分别加入6mL苯酚溶液和30mL浓硫酸”起依法测定。根据回归方程计算浓度C,按下式计算多糖含量。多糖含量%=CDf󰃗W×100%。测得沙枣多糖含量为4168%。21412　超声法提取　称取经烘干处理的沙枣012506g,用80%的乙醇液100mL在室温下于45kHz超声提取2次,每次20min,将残渣用80%的乙醇洗涤2次,以除去单糖和低聚糖。滤渣用水100mL在室温下于45kHz超声提取2次,每次20min,合并2次提取液,移至250mL量瓶中,将残渣用水洗涤2次,洗涤液并入量瓶中,定容作为供试液。照21411自“精密吸取供试液1010mL”起依法测定。测得多糖含量为6181%。215　回收率测定　精密称取沙枣样品粉末0115g,加入一定量的沙枣多糖,照21412自“用80%的乙醇液100mL在室温下于45kHz超声提取2次”起依法测定。计算回收率,结果为10013%(n=3),RSD=1154%。3　讨论从以上两种提取沙枣多糖方法的测定结果来看,超声法提取多糖有较大的优势:提取时间大大缩短,收率提高近50%〔6〕。提取全过程无需加热,可避免沙枣多糖的分解,所用仪器简单,操作方便。参考文献:〔1〕　中国科学院中国植物志编辑委员会1中国植物志[M]1第五十二卷1第二分册1北京:科学出版社,1983141.〔2〕　江苏新医学院1中药大辞典[M]1上册1上海:上海科学技术出版社,199711162.〔3〕　新疆生物土壤沙漠研究所1新疆药用植物志[M]1第二册1乌鲁木齐:新疆人民出版社,1981176.〔4〕　马丽娟1沙枣的开发利用[J]1宁夏科技,2000,6(4):37.〔5〕　刘勇民1维吾尔药志[M]1上册1乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社[K],199912282231.〔6〕　应崇福1超声学[M]1北京:科学出版社,19901511.(收稿:2001209211

)41西北药学杂志　2002年2月　第17卷　第1期