生物质中纤维素、半纤维素和木质素含量的测定
一实验目的
1.掌握生物质中主要化学成分含量的经典分析方法和原理。
2.了解纤维素、半纤维素以及木质素这三种主要化学成分在生物质热裂解中的作用。
二实验原理
植物的主要化学成分是纤维素、半纤维素和木质素这三部分。它们是构成植物细胞壁的主要组分。其中，纤维素组成微细纤维，构成纤维细胞壁的网状骨架，而半纤维素和木质素是填充在纤维和微细纤维之间的“粘合剂”和“填充剂”。
1.纤维素
生物质粉末在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。淀粉、多缩戊糖和其它物质受到了水解。用水洗涤除去杂质以后，纤维素在硫酸存在下被重铬酸钾氧化成二氧化碳和水。
C6H10O5 + 4K2Cr2O7 + 16H2SO4 = 6CO2 + 4Cr2(SO4)3 + 4K2SO4 + 21H2O
过剩的重铬酸钾用硫酸亚铁铵溶液滴定，再用硫酸亚铁铵滴定同量的但是未与纤维素反应的重铬酸钾，根据差值可以求得纤维素的含量。
K2Cr2O7 + 6FeSO4+ 7H2SO4 = 3 Fe2(SO4)3 + Cr2(SO4)3 + K2SO4 + 7H2O
2.半纤维素
用沸腾的80％硝酸钙溶液使淀粉溶解，同时将干扰测定半纤维素的溶于水的其它碳水化合物除掉。将沉淀用蒸馏水冲洗以后，用较高浓度的盐酸，大大缩短半纤维素的水解时间，水解得到的糖溶液，稀释到一定体积，用氢氧化钠溶液中和，其中的总糖量用铜碘法测定。
铜碘法原理：半纤维素水解后生成的糖在碱性环境和加热的情况下将二价铜还原成一价铜，一价铜以Cu2O的形式沉淀出来。用碘量法测定Cu2O的量，从而计算出半纤维素的含量。
测定还原性糖的铜碱试剂中含有KIO3和KI，它们在酸性条件下会发生反应，也不会干扰糖和铜离子的反应。加入酸以后，会发生反应释放出碘：
KIO3 + 5KI +3H2SO4 = 3I2 + 3K2SO4 +3H2O
加入草酸以后，碘与氧化亚铜发生反应：
Cu2O + I2 + H2C2O4 = CuC2O4 + CuI2 + H2O
过剩的碘用Na2S2O3溶液滴定：2Na2S2O3 + I2 = Na2S4O6 + 2NaI
3.木质素
先用1％的醋酸处理以分离出糖、有机酸和其它可溶性化合物。然后用丙酮处理，分离叶绿素、拟脂、脂肪和其它脂溶性化合物。将沉淀用蒸馏水洗涤以后，在硫酸存在下，用重铬酸钾氧化水解产物中的木质素：
C11H12O4 + 8K2Cr2O7 + 32H2SO4 = 11CO2 + 8K2SO4 + 8Cr2(SO4)3 + 32H2O
过量的重铬酸钾用硫酸亚铁铵溶液滴定。方法和测定纤维素相同。
三实验所需试剂和仪器
1. 实验试剂
硫酸亚铁铵分析纯，重铬酸钾分析纯，硫代硫酸钠分析纯，
硝酸钙分析纯，硫酸铜分析纯，碘化钾分析纯，
可溶性淀粉分析纯，氯化钡分析纯，邻菲啰啉分析纯，
丙酮分析纯，碘酸钾分析纯，草酸分析纯，
酒石酸分析纯，浓硫酸分析纯，盐酸分析纯，
冰醋酸分析纯，硝酸分析纯，酚酞
2. 所需仪器
50mL酸式滴定管，50mL碱式滴定管，10mL离心试管若干支，不同型号烧杯若干个，250mL 锥形瓶若干个，电炉，离心沉淀器。
四实验步骤
（一）纤维素含量的测定(需时5-6 h)
1. 所需溶液
硝酸和醋酸的混合液，0.5N硫酸-重铬酸钾溶液，试亚铁灵指示剂
浓硫酸，0.1N莫尔氏盐溶液，0.1N重铬酸钾溶液。
2. 实验步骤
（1）配制所需的各种溶液，0.1N莫尔氏盐溶液在使用的一周内准备，并在使用当天测定其滴定度K。测定办法：取25mL 0.1000N（精确到小数点后四位，真实浓度设为c N）的重铬酸钾溶液，加入5ml浓硫酸和3-5滴试亚铁灵试剂，用该莫尔氏盐溶液滴定，用去m mL。
K= 25 × c / m
（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.06g，数值为n
（3）装入离心管内，加入硝酸和醋酸的混合液5 mL
（4）塞住离心管，在沸水中煮沸25 min，并定期搅拌
（5）离心，滗去清液，加入蒸馏水离心洗涤沉淀，共洗三次（10ml×3）
（6）沉淀中加入10 mL 0.5 N的硫酸-重铬酸钾溶液，沉淀溶解。搅匀，放入开水中10 min，并定期搅拌
（7）冷却，倒入洁净的250ml锥形瓶中，用少许蒸馏水（约10-15ml）冲洗沉淀，洗涤液合并到锥形瓶中溶液，冷却后滴入3滴试亚铁灵试剂，用0.1N莫尔氏盐溶液滴定，用去b mL，由黄色经黄绿色至红褐色为终点
（8）对照试验：取10 mL 0.5N硫酸-重铬酸钾溶液，稀释至15ml，冷却后滴入3滴试亚铁灵试剂，用0.1N莫尔氏盐溶液单独滴定，用去a mL
（9）生物质中纤维素的含量计算公式
x% = 0.00675×K（a－b）/n ×100%
x%：纤维素含量；K：莫尔氏盐滴定度；a：滴定10ml 0.5N硫酸-重铬酸钾对照液所耗0.1N 莫尔氏盐溶液的体积；b：纤维素测定所耗0.1N莫尔氏盐溶液的体积；n：分析材料样品重（g）；
0.00675：纤维素的标准滴定度
（二）半纤维素含量的测定(需时7-8 h)
1. 所需溶液
80%硝酸钙溶液，2 N盐酸，酚酞指示剂，2 N氢氧化钠溶液，碱性铜试剂
草酸-硫酸混合液，0.5%淀粉，0.01 N硫代硫酸钠溶液。
2. 实验步骤
（1）称取自然风干的生物质粉末0.1-0.2g，数值为n
