杜仲叶中绿原酸提取工艺的优化

杜仲叶中绿原酸提取工艺的优化
摘要:分别以水和乙醇溶液为溶剂从杜仲(Ecommia ulmoides Oliv.)叶中提取绿原酸,采用高效液相色谱法测定提取物中绿原酸的含量并计算提取率,设计正交试验优化提取工艺｡结果表明,优化的醇提法工艺条件为料液比1∶15(m∶V,g/mL)､体积分数30%的乙醇作溶剂､提取时间2.0 h､提取次数2次;优化的水提法工艺条件为料水质量比1∶10､提取温度60 ℃､提取时间1.5 h､提取次数2次｡
关键词:杜仲(Ecommia ulmoides Oliv.)叶;绿原酸;水提法;醇提法;正交设计
Optimization of the Extracting Method of Chlorogenic Acid from Eucommia ulmodies Leaves
Abstract: Using water and ethanol as solvent, chlorogenic acid was extracted from Eucommia ulmodies leaves. The content of chlorogenic acid in extract was determined by HPLC and used to casulate the yield of chlorogenic acid. Orthogonal design was adopted to optimize the ethanol extraction process. The optimized ethanol extraction process was, material to liquid ratio, 1∶15(m∶V,g/mL), fraction ratio of ethanol, 30%; extraction time, 2.0 h; extract twice. The results showed that the optimized water extraction method was, mass ratio of material to water, 1∶10; extraction temperature, 60 ℃; extraction time, 1.5 h; extract twice.
Key words: Eucommia ulmodies leaves; chlorogenic acid; water extract method; ethanol extract method; orthogonal design
杜仲(Ecommia ulmoides Oliv.)为杜仲科(Eucommiaceae)杜仲属的落叶乔木[1],是中国特有经济树种,全国约有杜仲林28万hm2,每年可产叶400万t[2,3]｡杜仲干燥的树皮是名贵滋补药材,具补肝肾､强筋骨､降血压､安胎等诸多功效｡近年来研究表明杜仲叶和杜仲皮具有基本相似的化学成分和药理作用[4],其中绿原酸(图1)是杜仲叶所含的有效成分之一,具有抗菌消炎､清热解毒､利胆止血､提高白血球含量､兴奋中枢神经系统等多种药理作用[5,6]｡本研究采用醇提法和水提法提取杜仲叶中的绿原酸,并设计正交试验优化提取工艺,以期为杜仲的综合开发利用提供参考｡
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
乙醇为分析纯,绿原酸对照品购自Sigma公司,杜仲叶分别采集自陕西省略阳县､四川省南充市､湖北省孝感市､湖南省双峰县,8月份采集绿叶后以普通铁锅作为炒锅,翻炒至叶面失去光泽､叶色暗绿､叶质柔软､手握叶不粘手､失重30%左右即可｡
主要仪器包括Alpha2型真空冷冻干燥仪(德国Christ公司)､H66025T型超声清洗器(无锡超声电子设备厂)､高效液相色谱仪(美国Waters公司),R-201旋转蒸发器(上海申科技术有限公司),Sartorius R200D电子天平(赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)等｡
1.2 试验方法
1.2.1 醇提法从杜仲叶中提取绿原酸的方法及优化以乙醇溶液为提取溶剂,按一定的料液比加入到杜仲叶中,60 ℃水浴提取一段时间,提取液过滤后滤液减
压浓缩,真空干燥,即得绿原酸提取物｡
采用L9(34)正交试验考察提取剂乙醇溶液的体积分数､料液比(m∶V,g/mL,下同)､提取时间和提取次数4个因素对杜仲叶中绿原酸提取率的影响,优化提取工艺｡醇提法正交试验因素与水平见表1｡
1.2.2 水提法从杜仲叶中提取绿原酸的方法及优化以水为提取溶剂,在一定温度下加热提取一段时间,提取液过滤,滤液减压浓缩,真空干燥｡
采用L9(34)正交试验考察提取温度､料水质量比､提取时间和提取次数4个因素对绿原酸提取率的影响,优化提取工艺[7,8]｡水提法正交试验因素与水平见表2｡1.2.3 HPLC法测定提取物中绿原酸的含量①提取物待测液的配制｡取获得的杜仲叶中提取物样品干燥粉末约0.5 g,精确称定,加50%的甲醇50 mL,称定质量,超声处理30 min,冷却后称重,用50%的甲醇补足至原重,摇匀,过滤,弃去初滤液,精确量取滤液5 mL,置25 mL棕色量瓶中,加50%的甲醇至刻度,摇匀,待测｡②色谱条件｡C18柱(10 cm×5 cm),十二烷基硅烷键合硅胶为填充剂,粒径3~10 μm,乙腈—0.4%磷酸溶液为流动相,紫外检测器,检测波长327 nm,进样量10 μL,柱温25 ℃,理论塔板数按绿p 正交试验优化醇提法提取绿原酸工艺的结果见表4｡由极差R 的大小可知,各因素中对绿原酸提取率影响最大的是乙醇溶液体积分数,其次是提取次数,料液比对绿原酸提取率的影响较小,提取时间的影响最小｡最佳试验组合为A3B3C3D2,即以体积分数30%的乙醇溶液作提取剂､料液比1∶15､提取时间2.0 h､提取2次｡
2.3 水提法的优化结果
正交试验优化水提法提取绿原酸工艺的结果见表5｡由极差R可知,各因素对绿原酸提取率的影响由大到小依次为提取次数､提取温度､料水质量比､提取时间｡最佳试验组合为A2B3C2D2,即提取温度60 ℃､料水质量比1∶10､提取时间1.5 h,提取次数为2次｡
3 小结与讨论
采用正交试验优化杜仲叶中绿原酸的提取工艺,优化的醇提法工艺条件为料液比1∶15(m∶V,g/mL)､体积分数30%的乙醇作溶剂､提取时间2.0 h､提取次数2次;优化的水提法工艺条件为料水质量比1∶10､提取温度60 ℃､提取时间1.5 h､提取次数2次｡
参考文献:
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