Rac1在肝癌细胞株生长和侵袭中的意义
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基因RASSF1B、RASSF1F在肿瘤细胞中转录表达及临床意义
基因RASSF1B、RASSF1F在肿瘤细胞中转录表达及临床意义RASSF1B和RASSF1F是两个不同的转录变体，属于Ras相关实质化蛋白1家族（Ras association domain family, RASSF）。
该家族成员的共同特点是拥有Ras相关实质化域（Ras association domain, RASSF）和Salvador/Warts/Hippo（SWH）结构域，可通过与GTP结合蛋白进行交互作用，参与细胞生长、凋亡、旋转动力学和周期调节等许多细胞进程的调节。
RASSF1B和RASSF1F在某些肿瘤类型中的表达下降与疾病发生和进展密切相关，已成为研究的热点和前沿。
在多种人类肿瘤中，RASSF1B和RASSF1F的表达均受到了下调的调节。
在肺癌、鼻咽癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、前列腺癌和脑瘤中，RASSF1B和RASSF1F在不同程度上都出现了表达下调现象。
下调的RASSF1B和RASSF1F表达与许多临床因素关联紧密。
例如，RASSF1B和RASSF1F的缺失可以增加肿瘤的侵袭和转移性。
在肺癌患者中，与正常患者相比，RASSF1B和RASSF1F的表达降低与淋巴结转移和晚期疾病密切相关。
在全身性治疗中，RASSF1B和RASSF1F的表达水平可能会对治疗结果产生潜在影响。
例如，在乳腺癌患者中，与化疗灵敏性差的患者相比，RASSF1B较低的患者更可能出现肿瘤复发和早期死亡现象。
总的来说，RASSF1B和RASSF1F在多种人类肿瘤中的表达下调与肿瘤发生、发展和治疗效果密切相关。
随着对这两种变异体作用机制的进一步探究，相信这对于对肿瘤的诊断、监测和治疗将有重要的临床指导意义。
血管内皮生长因子受体1对肝癌侵袭转移的影响
血管内皮生长因子受体-1对肝癌侵袭转移的影响作者：艾军华郑树国曾永毅张雷达董家鸿【摘要】目的通过检测血管内皮生长因子受体-1（vascular endothelial growth factor receptor-1，VEGFR-1）在肝癌组织中的表达，探讨VEGFR-1在肝癌侵袭、转移中的作用。
方法共取82例肝癌组织和癌旁肝组织的石蜡标本，采用免疫组织化学方法检测VEGFR-1、上皮标志物E-钙黏蛋白和间叶标志物波形蛋白的表达情况，并分析其关系。
对肝癌患者临床病理学指标和HBV感染中VEGFR-1的表达进行分析。
结果癌旁肝组织中无VEGFR-1表达，肝癌组织中VEGFR-1的表达率为89%（73/82）。
VEGFR-1的表达在肿瘤分期、门静脉癌栓、肿瘤包膜、肿瘤直径、分化程度差异有统计学意义（χ2=22.192，15.934，16.751，20.154，6.487，P＜0.05）；对术后1、2年的复发率和术后2年生存率有影响（χ2=0.983，0.958，0.847，P＜0.05）；对术后1年的生存率无影响（χ2=0.359，P＞0.05）。
VEGFR-1与E-钙黏蛋白的表达呈负相关（r=0.765，P<0.01），而与波形蛋白的表达呈正相关（r=1.469，P＞0.05）。
结论 VEGFR-1可能在肝癌的侵袭、转移中发挥作用，其促肝癌侵袭转移可能与肝癌细胞发生上皮-间叶样表型转化有关。
【关键词】肝肿瘤；血管内皮细胞生长因子受体-1；侵袭转移【Abstract】Objective To investigate the effects of vascular endothelial growth factor receptor-1 （VEGFR-1） in theinvasion and metastasis of hepatocellular carcinoma （HCC） by detecting the expression of VEGFR-1 in HCC tissues. Methods Paraffin-embedded tissue which containing HCC tissues and adjacent tissues were prepared from patients （n=82） with HCC, then were analyzed by immunohistochemical technique for the expression of VEGFR-1, epithelial marker E-cadherin and mesenchymal marker Vimentin. The relationship between the expression of VEGFR-1 and pathological parameters, and the correlation between VEGFR-1 and E-cadherin, VEGFR-1 and Vimentin were analyzed. Results The expression rates of VEGFR-1 in HCC tissues and adjacent tissues were 89% （73/82） and 0, respectively. The difference of VEGFR-1 expression in portal vein tumor thrombus, tumor capsule, stage, size and differentiation grade of tumor had statistical significance （χ2=22.192，15.934，16.751，20.154，6.487，P＜0.05）. The expression of VEGFR-1 had effect on the 1-, 2-year recurrence rate and 2-year survival rate （χ2=0.983, 0.958, 0.847, P＜0.05）, but not on 1-year survival rate （χ2=0.359, P＞0.05）. The expression of VEGFR-1 was negatively correlated with that of E-cadherin （r=0.765, P<0.01） but positively with that of Vimentin （r=1.469, P＞0.05）. Conclusions VEGFR-1 may play an important role in invasion and metastasis of HCC.Epithelial-mesenchymal transition that induced by VEGFR-1 may contribute to the invasion and metastasis of HCC.【Key words】 Liver neoplasm; Vascular endothelial growth factor receptor-1; Invasion and metastasis血管内皮生长因子受体-1（vascular endothelialgrowthfactorreceptor-1，VEGFR-1）是血管内皮生长因子的特异性受体，与相应的血管内皮生长因子结合，刺激血管内皮细胞增殖、迁移，促进新生血管的生成。
circRNA和母基因通过不同的pathway影响肝癌细胞的生长，迁移和侵袭
circRNA和母基因通过不同的pathway影响肝癌细胞的生长，迁移和侵袭研究背景肝细胞癌（HCC）是最常见的一种恶性肿瘤，同时，中国也是肝癌的癌症大国。
虽然现在的医疗诊断技术发展很快，但是，对与肝癌的现有诊断技术还是受限很大。
因此，开发新的诊断biomarker，并理解这些biomarker的作用机制，是很多科研人员想做的事情。
本研究从circRNA，一类非常适合做biomarker的候选分子出发，深入研究了一个锌指家族基因ZKSCAN1及其产生的circZKSCAN1，在HCC 中的作用机制及作为biomarker的潜在价值。
研究结果1.基因表达模式分析ZKSCAN1，是一个锌指蛋白家族，该家族基因在肿瘤发生，发展，转移和药物耐受方面都发挥着非常重要的作用。
同时，现有的研究也发现，ZKSCAN1基因的第二个和第三个外显子部分能形成一个circRNA，在人脑部和肝脏表达丰富。
因此，研究人员首先验证了ZKSCAN1和circ ZKSCAN1在HCC组织中的表达情况。
102个HCC 组织和配对癌旁的RT-PCR结果显示，他们在HCC样本中的表达显著降低。
进一步将ZKSCAN1和circ ZKSCAN1的表达与临床指标进行关联分析，发现低的ZKSCAN1表达与肿瘤大小显著相关；而circ ZKSCAN1的表达与不同肿瘤数目，硬化程度，血管侵袭，微血管侵袭，肿瘤grade都显著相关。
ROC曲线分析显示，circ ZKSCAN1的AUC 值达到0.834，敏感性和特异性能达到82.2%和72.4%，相比而言，ZKSCAN1的AUC值只有0.474。
因此，circ ZKSCAN1的表达更合适作为肿瘤组织的诊断biomarker。
2. circRNA与母基因表达相关性分析对于circRNA的研究，第一个想到的是circRNA的表达是否会和母基因表达有关联。
因此，研究人员先在不同人HCC细胞系中检测了ZKSCAN1 mRNA和circZKSCAN1的表达。
人卵巢癌组织中Tiam1和Rac1的表达与肿瘤侵袭转移的关系
人卵巢癌组织中Tiam1和Rac1的表达与肿瘤侵袭转移的关系吴明富;史艳燕;韩志强;刘玉兰;卢运萍;马丁【期刊名称】《中国肿瘤临床》【年(卷),期】2005(32)16【摘要】目的:检测Tiam1和Rac1蛋白在人卵巢癌组织中的表达,探讨其与卵巢癌组织学类型、临床分期、病理分级和侵袭转移的关系.方法:采用免疫组织化学SP法和半定量方法检测Tiam1和Rac1蛋白在52例卵巢癌、12例良性卵巢肿瘤及14例正常卵巢组织中的表达.结果:Tiam1和Rac1蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率分别为80.77%和78.00%,明显高于正常卵巢组织和良性病变(P＜0.01);在不同组织学类型和年龄中表达差异无统计学意义(P＞0.05);Ⅰ～Ⅱ期阳性表达率为61.53%和46.15%,明显低于Ⅲ～Ⅳ期87.18%和89.74%,(P＜0.05);随组织分化程度的降低,二者的染色强度有逐渐增高的趋势,Ⅱ级和Ⅲ级阳性表达率明显高于Ⅰ级(P＜0.05);有转移者阳性表达率90.63%和96.87%明显高于无转移者65.00%和50.00%,两者差异有显著性(P＜0.05).结论:Tiam1和Rac1蛋白的表达与临床分期、分化程度及肿瘤转移等密切相关,提示Tiam1和Rac1信号通路在人卵巢癌侵袭转移中起重要作用.【总页数】5页(P910-914)【作者】吴明富;史艳燕;韩志强;刘玉兰;卢运萍;马丁【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030;华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科,武汉市,430030【正文语种】中文【中图分类】R737.31【相关文献】1.Tiam1和Rac1在宫颈鳞癌组织中的表达及临床病理意义 [J], 冯天平;赵景志;庞超;张凌云;尹磊2.Tiam1、Rac1蛋白在胃癌侵袭转移中的表达及影响因素研究 [J], 彭微波;李幸子3.Rac1蛋白在人卵巢浆液性腺癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响 [J], 苏梦亚; 黄平; 齐冰丽; 姚海荣; 张纪妍4.Tiam1和Rac1在大肠癌组织中的表达及其临床意义 [J], 钟大平;周进明;章容;周琪;彭秋平;梁后杰5.Tiam1和Rac1在食管鳞癌组织中蛋白表达的相关性及临床病理意义 [J], 刘帅;曲蕴慧;鄢文海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
ACY1在肝细胞肝癌中的表达及作用机制研究开题报告
ACY1在肝细胞肝癌中的表达及作用机制研究开题报
告
一、研究背景及意义
肝癌是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，尤其是在中国，肝癌的发
病率和死亡率都位居前列。
肝癌的发病机制十分复杂，涉及到多个信号
通路和基因的异常表达，其中ACY1作为一个转移酰化酶，在代谢和信号转导中发挥重要作用。
目前，在肝癌研究中，对ACY1的了解还比较少，进一步探究ACY1在肝细胞肝癌中的表达及作用机制对于肝癌的病理生理学、分子诊疗及治疗具有重要意义。
二、研究内容及方法
1.研究目的
探究ACY1在肝细胞肝癌中的表达及作用机制，为肝癌病理生理学、分子诊疗及治疗提供实验依据。
2.研究方法
（1）采用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫组化等方法检测ACY1在肝细胞肝癌中的表达。
（2）采用基因编辑技术，建立ACY1敲除肝癌细胞模型，检测
ACY1敲除对肝癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学行为的影响。
（3）利用基因芯片等技术分析ACY1在肝癌中参与的通路和相关基因。
三、研究预期结果
通过本研究，我们可以探究ACY1在肝细胞肝癌中的表达及作用机制，进一步揭示肝癌的发病机制，为肝癌的诊断与治疗提供新的理论依
据和实验基础。
含HECT和锚蛋白结构域的E3泛素化连接酶-1在肝癌中表达的意义及其对肝癌细胞增殖、侵袭能力的影响解析
Ｊｉａｋａｉ，Ｘｕ Ｇｎａｎｇ，Ｘｕ Ｗｅｉｗｅｉ，Ｃｈｅｎ Ｃｈａｏｑｕｎ，Ｇｕｏ Ｗｅｎｚｈｉ，Ｚｈａｎｇ Ｓｈｕ彰ｕｎ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ
（Ｗａｎｇ
Ｙ，‰Ｇ，‰聊）；Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｌｉａｒｙ Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ
Ｃｅｎｔｅｒ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ
ｏｆＡｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ．ｔｈｅ
Ｆｉｒｓｔ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ
ｏｆＺｈｅｎｇｚｈｏｕ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００５２，Ｃｈｉｎａ
Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｎｇ－
ｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｏｒｇａｎ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，Ｈｅｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ Ｌｉｖｅｒ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ
ｐｒｏｇｒａｍ：Ｔｈｅ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ
（１２２１０２３ １０２１５）
含ＨＥＣＴ和锚蛋白结构域的Ｅ３泛素化连接酶一１ （ＨＡＣＥｌ）定位于人类染色体６ｑ１６…。研究证实， ＨＡＣＥｌ具有抑癌基因功能；在多种肿瘤中ＨＡＣＥｌ低 表达心。］。我们通过免疫组织化学检测肝癌及癌旁组 织ＨＡＣＥｌ表达水平，探讨ＨＡＣＥｌ表达水平与患者预 后的关系；并通过质粒上调肝癌细胞ＨＡＣＥｌ表达，观 察ＨＡＣＥｌ对肝癌细胞增殖及侵袭能力的影响。
材料与方法
Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ上层小室内的细胞，显微镜下拍照（×１００
倍），计数。每种细胞每次至少拍照计数５个视野。
６．Ｗｅｓｔｅｒｎ
ｂｌｏｔ：收集对数期生长细胞，提取蛋白，
定量（ＢＣＡ）后取５０斗ｇ蛋白上样，十二烷基硫酸钠一 聚丙烯酰胺凝胶（ＳＤＳ—ＰＡＧＥ）电泳分离后，转至硝酸 纤维素（ＮＣ）膜，５％脱脂奶粉封闭２ ｈ，加入ＨＡＣＥＩ
Rac1和MMP-2在胃癌组织中的表达及其与胃癌浸润转移的关系
高 于癌 旁组 （ ６２ ） 有 淋 巴结转 移 组 ＭＭＰ２阳性 表 达 率 为 ９ ． ２ ．％ ； － ７ ９％ ， 著 高于 元 淋 巴结 转 移组 （４ ２％ ） 两 组 相 比较 显 ４． ，
差异有统计学意义（ ＜ ．５ 。结论 Ｒ ｃ 和 ＭＭ － 胃癌组织 中有 高表达 ， ａｌ和 ＭＭＰ２参 与 了胃癌发生发展 、 Ｐ ００ ） ａｌ Ｐ２在 Ｒｃ － 浸润 转移等生物学行为。Ｒ ｃ 和 Ｍ － ａｌ ＭＰ２可以作 为评价 胃癌恶性程度 的一 个新型指标 ， 来预测 胃癌的浸袭转移情 况及 患者的
预后。
【 关键词】 Ｒｃ； Ｍ 一； ａｌＭ Ｐ２ 胃癌； 免疫组化
【 中图分类号 】 Ｒ３２ １ ．１ ９ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】 １ ４ ５１２１ ）９１３－ ０ － ０ （０００ ． ２ ３ ００ ２ ０
Ｈ ｓｉ ｏ ｔ ｏ ｐ ａ ｆ￣ｚｏ， ｄ ａ ｌ ｈ ｏＭｅｉ ｃ ｌ
Ｄ Ｉ ・ Ｘ ｈｕ． ．ｈ ｉｔ ｅ ｌｓ ｏ ｉ ｌｆＹ ｉ，ｉ ｎＳｃｕｎ６ ４ ０ ；．ｔ Ａ 肋 ｌ ， ＵＺ ｏ １ｔｅＦｒ ｏ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ Ｙ ｉ，ｉ ａ ４０ ０ ２ ｈ ｉ ｓＰ ｐ Ｈ ｐ ａ ｏ ｂ ｂ ｈ ｅ
Ｃ ｌｇ ，ｕｈｕ Ｓｃｕｎ６６ ０ ；．ｆｌ ｔ ｈｎｓ ｄ ｉ ｏ ｉｌｆｌｚｏ ｄ ａ ｏｌ ｅＬｚｏ ，ｉ ｕｎ６ ６０ ，ｈ－ ｏｅｅＬｚｏ ， ｉ ａ ００ ３Ａ ｉ ｅ Ｃ ｉ ｅ ｌ ｈ ４ ｉ ｆａｄ ｅ Ｍｅｉｎ Ｈ ｓ ｔ ＿ ｈ ｕ ｃ ｅ ｐａ ｏ ａ Ｍｅｉ ｌ ｌｇ ，ｕｈ ｕＳｃ ａ ４Ｏ ０ Ｃ ／ ｃ Ｃ ｅ ｈ －
ｐｏ ｉ ｓｓ （ ｒ ｅ ａｅ－ ＭＭＰ２ ｎｇｓ ｉ ｃｎｅ ｄｅ ｅｔ ｏ ｍ ｒ ｎａｉ ｎ ｅ ｔ ｉ ｔｎ ２ －）ｉ ａｔｃ ａｃｒ ｎ ｃｓ ｎｔ ｏ ｉｖ ｏ ａｄｍ ｔ ａ ｓ ｒ ａ ｆ ｕ ｓ ｎ ｓ ａ ｓ ．Ｍｅｈ ｄ Ｔ ｅＲ ｃ ｎ Ｐ２ｅｐｅ－ ｔｏ ｓ ｈ ａ ｌ ｄＭＭ － ｘｒｓ ａ
差异有统计学意义（ ＜ ．５ 。结论 Ｒ ｃ 和 ＭＭ － 胃癌组织 中有 高表达 ， ａｌ和 ＭＭＰ２参 与 了胃癌发生发展 、 Ｐ ００ ） ａｌ Ｐ２在 Ｒｃ － 浸润 转移等生物学行为。Ｒ ｃ 和 Ｍ － ａｌ ＭＰ２可以作 为评价 胃癌恶性程度 的一 个新型指标 ， 来预测 胃癌的浸袭转移情 况及 患者的
预后。
【 关键词】 Ｒｃ； Ｍ 一； ａｌＭ Ｐ２ 胃癌； 免疫组化
【 中图分类号 】 Ｒ３２ １ ．１ ９ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】 １ ４ ５１２１ ）９１３－ ０ － ０ （０００ ． ２ ３ ００ ２ ０
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Ｄ Ｉ ・ Ｘ ｈｕ． ．ｈ ｉｔ ｅ ｌｓ ｏ ｉ ｌｆＹ ｉ，ｉ ｎＳｃｕｎ６ ４ ０ ；．ｔ Ａ 肋 ｌ ， ＵＺ ｏ １ｔｅＦｒ ｏ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ Ｙ ｉ，ｉ ａ ４０ ０ ２ ｈ ｉ ｓＰ ｐ Ｈ ｐ ａ ｏ ｂ ｂ ｈ ｅ
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RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响
RIP1在肝癌组织中的表达意义及其对细胞侵袭、迁移的影响李健;周峥;熊立新;邓科平;尹清华;何恒正【摘要】探讨受体相互作用蛋白激酶-1(RIP1)在肝癌组织及癌旁组织中的表达情况,并探索其对肝癌细胞侵袭和迁移的分子调控机制.收集肝癌和癌旁组织,免疫组化检测RIP1蛋白的表达,筛选高表达RIP1的肝癌细胞系.对肝癌细胞系进行RIP1沉默处理并设置阴性对照.采用western blot及RT-PCR法检测RIP1的表达量;Tranwell观察细胞侵袭能力;细胞划痕观察细胞迁移能力.结果显示,48例肝癌组织中,22例存在RIP1蛋白阳性表达,阳性率为45.83％,其中,强阳性患者为15例,中等及弱阳性7例,该研究中有6例复发患者.RIP1在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.05),高表达RIP1患者的总生存率和无复发生存率显著低于低表达RIP1的患者(均P<0.05).抑制RIP1基因后其相对表达量、细胞侵袭、迁移能力均下降(P<0.05).RIP1在肝癌中存在高表达,可能参与肝癌细胞侵袭与迁移过程.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2019(047)001【总页数】5页(P20-24)【关键词】肝癌;受体相互作用蛋白激酶-1;组织病理;细胞侵袭;细胞迁移【作者】李健;周峥;熊立新;邓科平;尹清华;何恒正【作者单位】长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005;长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005;长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005;长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005;长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005;长沙市第一医院普外一科,湖南长沙410005【正文语种】中文【中图分类】R735.2肝癌是当前常见的肝脏恶性肿瘤，主要分为原发性和继发性两类，恶性程度极高，发现较晚，对患者生命健康造成严重威胁[1]。
目前针对肝癌治疗的方法主要包括手术治疗、化学药物治疗、放射治疗以及生物治疗等，但由于该病易出现复发和远处转移，肝癌患者的预后仍不理想[2]。
RASSF1A基因在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义
RASSF1A基因在肝细胞肝癌中的表达及其临床意义梅海军;成华【期刊名称】《南通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2009(029)005【摘要】目的:探讨RASSF1A基因在肝细胞肝癌(简称肝癌)组织中的表达情况并探讨其临床意义.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测48例肝癌组织及癌旁正常组织RASSFlA基因的转录水平.结果:48例肝癌组织中有32例RASSF1A mRNA表达缺失;但48例相应癌旁组织仅有16例RASSF1A mRNA表达缺失.Logistic逐步回归分析表明患者的年龄、性别、肝功能、血AFP、肝癌分化、肝癌大小、肝癌有无包膜与RASSF1A mRNA是否表达无显著相关性(P>0.05).但在HBsAg(+)患者的肝癌组织及相应的癌旁组织中RASSF1A mRNA的表达率显著低于HBsAS(-)患者(P<0.01,P<0.05).结论:RASSFIA表达缺失在肝癌的发生、发展中起重要的作用.【总页数】2页(P339-340)【作者】梅海军;成华【作者单位】南通大学附属医院小儿外科,南通,226001;南通大学附属医院小儿外科,南通,226001【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.RASSF1A基因在结直肠癌中的表达及临床意义 [J], 朱崎;肖伟升;欧瑜;廖爱军2.RASSF1A基因在骨肉瘤中的表达及其临床意义 [J], 刘之川;邵增务;邓超;丁凡;兰观华3.RASSF1A基因在胰腺癌组织中的表达及临床意义 [J], 徐伟;纪艳超4.利用组织微阵列研究RASSF1A和survivin基因在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 [J], 盛赠美;范青松5.RASSF1A基因在胃癌中的表达及临床意义 [J], 陈雅慧;兰忠平;惠起源;陈美霓因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酪氨酸激酶介导RAC1信号通路在神经胶质瘤中的作用机制
酪氨酸激酶介导RAC1信号通路在神经胶质瘤中的作用机制匡梦;黄艳姣;郑兰荣【摘要】神经胶质瘤是人类中枢神经系统最常见的肿瘤,其侵袭、迁移和增殖等特性是其不良预后的主要原因.证据表明酪氨酸激酶是信号传递过程中的重要因子,其家族成员的异常参与肿瘤发生的多个病理过程.异常激活的酪氨酸激酶,激活一系列下游信号通路,尤其是Ras相关的C3肉毒素底物1 (RAC1),引起级联反应,细胞增殖调节紊乱,最终导致肿瘤的形成.因此酪氨酸激酶/RAC1信号通路被认为是调控肿瘤细胞侵袭迁移的关键,通过针对酪氨酸激酶/RAC1的靶向药物能成为破坏肿瘤的有效途径.【期刊名称】《实用医学杂志》【年(卷),期】2018(034)006【总页数】3页(P1033-1035)【关键词】神经胶质瘤;酪氨酸激酶;RAC1;信号通路【作者】匡梦;黄艳姣;郑兰荣【作者单位】皖南医学院病理学教研室安徽芜湖421002;皖南医学院病理学教研室安徽芜湖421002;皖南医学院病理学教研室安徽芜湖421002【正文语种】中文神经胶质瘤发生于神经外胚层，根据胶质瘤细胞的分化情况分为：星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤等。
越来越多的证据［1-2］表明神经胶质瘤与Ras相关的C3肉毒素底物1（RAC1）的异常有关。
RAC1是小鸟苷酸三磷酸酶的成员，可以通过细胞前端的肌动蛋白聚合来促进迁移，并诱导膜皱褶和鳞片状伪足的形成［3］。
通过调节细胞骨架重排，RAC1在肿瘤细胞黏附、迁移和侵袭起到了重要作用［4-5］。
RAC1及其下游效应物的异常与乳腺、肺、卵巢癌和神经胶质瘤等肿瘤细胞迁移，侵袭和转移相关［6-9］。
1 酪氨酸激酶家族酪氨酸激酶按其结构可以分为两大类：受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸激酶。
受体型的酪氨酸激酶通常具有胞外配体结合结构域、一个跨膜区以及胞内激酶域。
胞外结构域与配体结合并引起构象变化，激活具有自磷酸化位点的胞内段的酪氨酸激酶。
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Rac1在肝癌细胞株生长和侵袭中的意义【摘要】目的：证实Rac1在肝癌细胞的生长与侵袭中的意义，寻找可能的肿瘤基因治疗新靶点。
方法：特异性抑制Rac1蛋白表达的siRNA干扰肝癌高转移细胞株97H，观察肝癌高转移细胞株97H 内Rac1表达、细胞生长、肿瘤细胞的活力和体外侵袭力的变化。
结果：肝癌高转移细胞株97H内Rac1表达、细胞生长受抑制，肿瘤细胞的活力和体外侵袭力显著降低。
结论： Rac1表达的减少能够显著抑制肝癌细胞的生长和侵袭，可能成为肿瘤基因治疗新的靶点。
【关键词】 Rac1 肝癌高转移细胞株 siRNA 移［Abstract］Objective: To prove Rac1 might play an important role in the proliferation and transference of hepatoma cell.Methods： small interference RNA technique was employed to knock down gene expression of Rac1 in hepatoma cell line 97H. Results： The protein level of Rac1, the cell proliferation, the cell vitality and the ability to invade the reconstituted basement membrane were decreased dramatically after transfection with a Rac1specific siRNA vector. Conclusion：Rac1 might play an important role in the development, progression,transference of hepatoma and also provide a possible strategy for the interference of tumor angiogenesis by targeting the Rac1.［Key words］ Rac1; hepatoma cell; siRNA;transference肝癌的基因治疗正在不断探索中,表达调控治疗是肝癌基因治疗的重要策略。
在先前的研究中我们发现肝癌细胞株Rac1的表达显著高于正常肝细胞株，提示Rac1与肝癌的生长和转移有密切的关系［1］。
本次研究我们运用RNA干扰技术，调控信号分子的表达，进一步证实Rac1与肝癌生长转移的关系，为肝癌的基因治疗寻找新的靶点。
1 材料与方法1.1 材料肝癌高转移细胞株97H由复旦大学附属中山医院肝癌研究所分离和保存。
LipofectamineTM 2000购自Invitrogen公司；兔抗人Rac1购自Santa Cruz公司；鼠抗人的βactin购自R&D公司；HRP标记山羊抗鼠二抗，HRP标记山羊抗兔二抗购自Biochemicol公司；细胞裂解液、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自上海申能博彩公司；PVDF 膜购自华舜公司；Costar TranswellTM培养板（3422，孔径8μm，直径 6.5 mm），购自Corning公司；Trigel Basement Membrane Matrix(356237, Phenol Red free),购自BD公司；siRNA由上海化学基因公司合成。
1.2 研究方法肝癌高转移细胞株97H用含10%小牛血清的DMEM培养液置于37℃，5%CO2的培养箱中培养。
1.2.1 siRNA合成在基因库中查到人Rac1基因序列（编号是NM_198829），输入到RNAi设计软件中，得到4个siRNA片段序列，选择特异性最好的三种加上文献报道的针对大鼠Rac1的一段序列，序列如下：1号siRNA：5′UGUCCGUGCAAAGUGGUAUtt3′5′AUACCACUUUGCACGGACAtt3′2号siRNA：5′UCCUAUCCGCAAACAGAUGtt3′5′CAUCUGUUUGCGGAUAGGAtt3′3号siRNA：5′CUUUGCAAAGACCUUCGUCtt3′5′GACGAAGGUCUUUGCAAAGtt3′4号siRNA：5′GUUCUUAAUUUGCUUUUCCtt3′5′GGAAAAGCAAAUUAAGAACtt3′上述siRNA由上海化学基因公司合成，分别为5 nmol，另未知序列的对照siRNA也购自上海化学基因公司。
5 nmol siRNA溶于250 μl退火缓冲液中，分装后置于－70℃冰箱保存。
1.2.2 分组筛选正常对照组为c组，对照siRNA为0组，此次设计的分别为1，2，3组，文献报道的针对大鼠Rac1的siRNA为4组。
经中山医院钱成博士筛选，选定2号组作为本实验用siRNA。
1.2.3 LipofectamineTM 2000介导的siRNA干扰将细胞接种于六孔板，生长至60%～80％融合，干扰前24小时，PBS洗涤两次，更换为不含抗生素的DMEM培养液1 ml。
再取30 μl含siRNA的退火缓冲液加入470 μl Opti MEMⅠ；另取一离心管，分别加入30 μl LipofectamineTM 2000和120 μl Opti MEMⅠ室温孵育7～10 min。
混合上述两种溶液（用倒转法），室温孵育20～25 min，溶液变混浊。
此时再加入新鲜的Opti MEM溶液320 μl，总容量调整为1 000 μl。
将1 000 μl siRNA－LipofectamineTM 2000加入前一天更换的无抗生素培养液中去，此时的siRNA的终浓度为50 nmol/L。
6 h后加无抗生素含10％胎牛血清的培养液至3 ml/孔，两天后用于实验。
1.2.4 蛋白提取和Western blot印迹用RIPA加PMSF裂解细胞，BCA法测定蛋白浓度，在基本保持蛋白上样量相等的情况下行蛋白电泳，半干后电转移至 PVDF膜上，丽春红染色，剪下相应的蛋白条带，5%的脱脂奶粉封闭4 h，加相应的一抗，4℃过夜，TBST洗膜3次，再加相应的HRP标记的二抗，室温下孵育1 h，用TBST洗膜3次，加发光剂，ECL发光检测。
1.2.5 细胞生长曲线与细胞活力的测定取干扰组、未干扰组、加入脂质体组的97H肝癌细胞培养液接种于96孔细胞培养板上，培养 5 d。
酶联免疫检测仪测定各孔光密度（D），绘制生长曲线。
MTT 法分别测定1，3，5天的细胞活力，以光密度（D）表示。
肿瘤细胞抑制率=［对照组平均D(495 nm)干扰组平均D(495 nm)］/对照组D（495 nm)1.2.6 细胞体外侵袭能力测定用Transwell小室进行细胞侵袭重建基膜实验。
Matrigel胶用无血清DMEM培养液稀释，加入到滤膜上表面，室温下通风橱中干燥过夜。
将干扰组、未干扰组、加入脂质体组的97 H细胞用无血清培养液洗3次，消化后重悬于无血清DMEM培养基中，取5×104/ml细胞100 μl加入至上室，600 μl 10%小牛血清培养基加入下室。
37℃，5％CO2条件下培养20 h后，去除滤膜上层细胞，取下滤膜，行Gimsa染色，镜下计数滤膜下表面细胞数，随机计数5个视野中的细胞数目，每个标本重复2次，实验重复2次，求得平均数和标准差，以侵袭细胞的相对数目来表示肿瘤细胞的侵袭能力。
1.3 统计学分析运用SPSS软件进行单因素方差分析。
2 结果2.1 经siRNA干扰后97H肝癌细胞株Rac1蛋白表达选择未干扰组和加入脂质体组做对照。
图1显示在总蛋白上样量基本保持一致的前提下（βactin条带亮度基本相同），Rac1在各组中的表达。
可以看到Rac1在siRNA干扰后的97H肝癌细胞株中的灰度明显低于对照组（未干扰组和仅加入脂质体组）。
用Alpha Imager软件对感光胶片进行灰度分析，以目的条带（Rac1）与内参照（βactin）的比值代表目的蛋白的表达水平，运用SSPS软件进行统计学处理，分析结果如图2。
可以看到Rac1条带在siRNA干扰后97 H肝癌细胞株中与βactin条带灰度值之比明显低于未干扰组和仅加入脂质体组的灰度值之比。
上述差异有统计学意义（P<0.01）。
2.2 siRNA干扰后细胞生长曲线的变化siRNA干扰后能显著抑制肝癌高转移细胞株97H的生长，记录第1，2，3，4，5天的光密度（D）。
绘出生长曲线（图3）。
第5天时干扰组细胞数约为对照组（未干扰组和加入脂质体组）的70%，差异有统计学意义（P<0.05）。
图3 各组细胞生长曲线Fig 3 Cell growth curve of each group2.3 经siRNA干扰后97H肝癌细胞活力的改变和siRNA对肿瘤细胞抑制率的测定与未干扰组和仅加入脂质体组相比，在同一时间点干扰组细胞活力显著下降，肿瘤抑制率在30%左右。
表明siRNA干扰能显著抑制97 H肝癌细胞株的活力和生长。
2.4 肝癌细胞体外侵袭能力的改变siRNA干扰后由于细胞内Rac1蛋白的显著减少，使细胞穿透Matrigel胶处理后的Transwell小室的能力下降。
侵袭至Transwell 小室滤膜下表面的细胞数每高倍视野干扰组为（280±10.2）个，显著低于未干扰组［（350±12.4）个］和仅加入脂质体组［（345±8.5）个］，侵袭率和侵袭抑制率分别为80%和20%。
3 讨论Rac1是Ras信号途径的下游小分子蛋白，在不同细胞过程如基因表达、细胞运动、增殖和凋亡中起着关键性的调节作用。
Rac1在一些肿瘤，如乳腺癌、结肠癌、睾丸细胞癌、胰腺癌、头颈部肿瘤、胃癌中的表达均有增高［2 -5］。
我们在先前的研究中也发现Rac1在肝癌细胞中的表达显著增高［1］。
Xue等［6］在对胃癌细胞的研究中发现， Rac1特异的siRNA干扰胃癌细胞株，能高效抑制肿瘤细胞的增殖。
他们的研究还表明，这种抑制作用可能是通过抑制血管内皮细胞生长因子的分泌来完成的。
吴富明等［7］的研究提示Rac1与卵巢癌侵袭转移相关。
现在已经明确的是Rac1与肿瘤基因的多个阶段有关，干扰 Rac1的表达可能为肿瘤的基因治疗开辟新的策略。
RNA干扰技术是近几年发展起来的一项特异性抑制基因表达的方法。
RNA干扰现象首次在线虫中发现，不久，在真菌、植物、果蝇、锥虫、涡虫、水螅、斑马鱼等真核生物中都发现了RNAi现象。
目前，在人、小鼠及其他哺乳动物中，RNAi已经被广泛用来进行基因功能的研究，同时RNAi技术作为一种基因治疗手段为人类战胜重大疾病带来希望。