土壤硝态氮的测定
酚二磺酸比色法
１ 原理 用饱和CaSO 4·2H 2O 溶液浸提后，取一份浸出液在微碱性条件下蒸干，残渣用酚二磺酸试剂溶
解，此时NO 3－
既与试剂生成硝基酚二磺酸：
C 6H 3OH （HSO 3）2＋HNO 3=C 6H 2OH （HSO 3）2NO 2＋H 2O 2，4-酚二磺酸 6-硝基酚-2，4-二磺酸
此反应必须在无水的条件下才能迅速完成，产物在酸性介质中无色，碱化后为稳定的黄色盐溶液，可在400～425 nm 处有最大吸收峰，用分光光度计比色测定。本法中Cl -为主要干扰物，但在15mg ·L -1以下无影响，大于此范围可用AgSO 4 消除（按0.1mg AgSO 4可沉淀22.7mgCl -）。 ２ 仪器设备
分光光度计；水浴锅；蒸发皿，震荡机；三角瓶；容量瓶等。 ３ 试剂
３.１CaSO 4·2H 2O （分析纯、粉状） ３.２Ca ＣO ３（分析纯、粉状）
３.３酚二磺酸试剂：25.0ｇ白色苯酚于500ml 三角瓶，加225ml 浓硫酸，混匀，瓶口松松的加塞，于沸水
浴加热６小时。试剂冷却后可能会有结晶，用时需重新加热溶解，但不可加水。必须贮于玻塞棕色瓶中，严防吸潮。
３.４NO ３－
－Ｎ标准溶液：取0.1805ｇ120℃烘干2ｈ的KNO ３溶解并定容于250ml ，此为100mg ·L -1，取
此液20ml ，定容于200ml ，为10mg ·L -1标准液。
３.５其它试剂：１：１NH ４OH ；AgSO 4；MgCO ３ ４ 操作步骤
４.１提取：称取新鲜土样50克于500ml 三角瓶，加250ml 饱和硫酸钙（或风干土样５ｇ，加30ml 饱和硫
酸钙），加塞，于震荡机上震荡１０分钟，（24℃，150r ·min －１
），澄清10分钟后，过滤，将最初的２～３ｍｌ滤液弃去。同时做空白。
４.２吸取滤液10ｍｌ于蒸发皿中，加0.05gCa ＣO ３，水浴加热，蒸干后不要继续加热。冷却，迅速加入酚
二磺酸试剂２ｍｌ，旋转器皿，使试剂接触到所有蒸干物，静止10分钟，使其充分作用。
４.３向作用后的液体中加５ｍｌ水，用玻棒搅拌直到蒸干物完全溶解，洗入50ｍｌ容量瓶，冷却后缓缓
加入15ml １：１NH ４OH （应保证NH ４OH 过量），定容后摇匀，溶液呈黄色。 ４.４用上清液于410nm 处比色，空白调零。
４.５标准曲线绘制：取6支干洁试管编号，按下表加试剂，并按4.2~4.4操作，以浓度为横坐标，OD 值
５ 结果计算
NO ２－
―Ｎ（mg ·L -1）＝浓度×液土比×
吸取反应液体积
定容后体积
本实验：液土比：５
吸取反应液体积
定容后体积
＝５
浓度：标准曲线查得（mg ·L -1）。 ６ 注意事项
６.１土壤含cl－超过15mg·kg-1浸出液需再用AgSO4处理，每100ml加０.１ｇAgSO4，震荡15分钟，再加０.２ｇCa（OH）２和０.５ｇMgCO３以沉淀过剩的Ag+，震荡５分钟，过滤，吸取清液测定。６.２如NO２－，超过１mg·kg-1，每10ｍｌ待测液加20ｍｇ尿素放置过夜以破坏之。NO２－可用亚硝酸试粉检查，５滴浸出液加0.1ｍｇ，放置10分钟，显出红色既有１mg·ｋｇ-1 NO２－。
６.３碱化时不用NaOH等，因NH３与Ag+可络合成水溶性物质，不会生成沉淀影响比色。
