药用植物乌头内生真菌研究
摘要从药用植物乌头的侧根、茎、叶、花中分离获得内生真菌164株，将其中的151株根据显微形态观察进行分类鉴定，它们归属于6个目、9个科、23个属，其中毛霉属、黑孢属、头孢霉属、芽枝霉属和交链孢属为该植物内生真菌的优势属，表明药用植物乌头不同部位内生真菌在种群、数量及分布上具有多样性特征，在侧根上分布得最多。
关键词乌头；内生真菌；分离；分类鉴定；多样性
中图分类号r282.5文献标识码a文章编号 1007-5739（2009）07-0007-02
乌头（aconitum carmichaeli debx．）为毛莨科（ranunculaceae）乌头属（aconitum l.）多年生草本植物。
该植物全株有毒，母根为川乌，母根上所附生的侧根为附子。
主产四川、陕西，云南、贵州、河北、湖南、湖北、江西、甘肃等省也有栽培。
乌头含有多种生物碱，具有抗炎、免疫抑制、麻醉止痛、抗肿瘤、强心、降血压、扩血管等作用[1]。
在农业上有杀虫作用[2] 。
目前，国内外对植物内生真菌的研究报道较多，许多来自植物的天然化合物与植物的内生真菌有密切的关系，甚至也是内生真菌的次生代谢产物[3]。
对乌头的研究报道较多的是它的药效、药用成分的分离提取、毒性、种植、田间管理和病虫害的防治等[4-6]。
笔者对乌头植物内生真菌作了系统的研究，从内生真菌的分离、分类鉴定到活性物质的筛选和分离提取，以期为研究乌头植物内生真
菌提供依据。
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1供试植物。
乌头样品采自昆明市云南大学微生物所栽培的乌头植物。
1.1.2培养基。
①分离培养基：pda培养基（马铃薯葡萄糖培养基），使用前1ml培养基中加80iu的青霉素，以抑制细菌生长。
②分类鉴定培养基：pda培养基和促孢培养基（kh2po4，mgso4·7h2o，kno3，kcl，葡萄糖，蔗糖）。
1.2试验方法
1.2.1内生真菌的分离培养。
首先用自来水冲洗乌头植物表面的泥沙，去除母根，接着进行表面消毒、分离和培养。
方法参照文献[7]。
1.2.2内生真菌的分类鉴定。
采用插片培养方法，对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、分类鉴定。
分类检索参照文献[8，9]。
2结果与分析
2.1乌头植物内生真菌的种群组成
从乌头植物中分离获得内生真菌164株，将其中的151株根据显微形态观察进行分类鉴定，归属于6个目9个科23个属（见表１）。
从表１可以看出，在分离获得的乌头植物内生真菌中，以毛霉属（mucor）、黑孢属（nigrospora）、头孢霉属（cephalosp-orium）、芽枝霉属（cladosporium）和交链孢属（alternaria）较多，这５个属为乌头植物内生真菌的优势属。
其次是木霉属（trichoderma）和曲霉属（aspergillus）。
刚毛孢属（pleiochaeta）、头囊聚孢霉属（cephaliophora）、假丝酵母菌属（candida）和小克银汉霉属（cunninighamella）最少，均只有1株。
2.2乌头植物不同部位内生真菌的种群分布
在分离获得的164株乌头植物内生真菌中，侧根上分离的内生真菌在数量和种群上都是最多的，有78株（占总菌株的47.56%）16个属（占23个属的69.57%）；其次是茎部分离的有54株（占32.93%）15个属（占65.22%）；叶部和花上分离的内生真菌在数量和种群上都较少，分别为17株（占10.37%）和15株（占9.15%），均是7
个属（占30.43%）（见表2）。
从表2可以看出，在侧根部位分离的内生真菌种群中，毛霉属和木霉属为其优势属种，分别为15株和9株，各占侧根部内生真菌的19.23%和11.54%；黑孢属和芽枝霉属为茎部内生真菌的优势属种，分别为13株（占茎部内生真菌的24.07%）和9株（占16.67%）；叶部内生真菌的优势属种是黑孢属和盘多毛孢属（pestalotia），分别有6株（占叶部总菌株数的35.29%）和3株（占17.65%）；芽枝霉属和毛霉属为花部内生真菌的优势属种，均为3株，占花部内生真菌总数的20.00%。
从表2还可以看出，毛霉属、盘多毛孢属、组丝核菌属（phacodiun）和黑孢属在乌头植物各部位都有分布；交链孢霉属在侧根、茎和花上有分布，而在叶上没有分布；球壳孢属（sphaeropsis）除了在花上没有分离获得外，在乌头植物的其他部位均可分离获得；假丝酵母菌属、木霉属、镰孢霉属（fusarium）、卷枝霉属（pireella）、根霉属（rhizopus）、葡萄孢属（botrytis）和小克银汉霉属只在侧根部有分布；而刚毛孢属和束丝菌属（ozonium）只在茎部才有分布；头囊聚孢霉属只在花上分离得到。
3结论与讨论
（1）毛霉属不仅是乌头植物内生真菌的优势种群，同时也是附子植物侧根部和花部内生真菌的优势属种；而黑孢属既是乌头植物内生真菌的优势种群，又是其茎、叶部位的优势属种；芽枝霉属则是乌头植物及其茎、花部的优势种群。
（2）在乌头植物侧根、茎、叶和花等部位分离获得的内生真菌在数量和种群分布上存在差异，在侧根部位分离获得的内生真菌最多，其次是茎部，在叶和花上分离获得的内生真菌较少，侧根部和茎部的内生真菌种群明显多于叶部和花部。
这表明乌头植物不同部位内生真菌在种群、数量及分布上具有多样性特征。
（3）乌头植物的侧根就是药用附子，本次乌头植物内生真菌的分离结果表明，无论在内生真菌的数量还是在种群分布上，都是侧根上分布的最多。
这可能与附子中含有的药用成分及含量有关。
对以后研究乌头植物内生真菌的代谢产物及分离提取有活性物质有
指导性的作用。
4参考文献
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