免疫组化技术在妇科的临床应用样本

免疫组化技术在妇科临床应用 免疫组化基本原理 免疫组化是免疫组织化学技术简称。它是应用抗原、抗体特异性结合原理，使用已知抗体在病理切片上与相应抗原结合，然后把结合产物应用组织化学办法显现出来，使之可以在显微镜下观测得以确认。普通使用显色剂为联苯胺，结合抗体显示为棕色颗粒，因此把免疫组化成为“棕色革命”。 构成人体细胞分为若干种，如：上皮细胞、神经细胞、肌肉细胞、血细胞等，每种细胞均有其特殊构造物质，每种细胞均有其特异功能，每种功能又有其物质基本。如：鳞状上皮细胞通过角化物可以防止机体水份蒸发和外界病原体侵入，肌肉可以通过肌动蛋白使自己收缩。突触素可以传导神经兴奋，某些器官借以实现其功能激素受体，载有遗传物质DNA全段——基因等。当前人们都可以把这些物质纯净分离出来，并把它们作为抗原免疫大鼠和家兔，使之产生相应抗体，人们再把每种抗体分离纯化，就得到咱们免疫组化应用抗体。咱们把这些抗体作用于病理切片，然后再通过染色，如果切片上有这种抗体相应抗原，就会在切片上浮现棕色颗粒，如果没有棕色颗粒，就阐明没有这种抗体抗原，在显微镜下就一目了然。

免疫组化标记在妇科肿瘤应用及其意义 免疫组化以它特异性和敏感性，结合组织学上定位性已成为各种肿瘤病理形态学诊断新手段。这里需要阐明是虽然当前具备诊断价值肿瘤标记物有数百种之多，但至今还没有发现人体肿瘤特异性抗原，也就是说还没有任何一种抗体能100％地确诊一种肿瘤。 尽管如此，人们正是得到了某些与肿瘤有关抗原，存在于肿瘤细胞胞核、胞浆和胞膜上，它存在或量变可以提高肿瘤性质，借以理解肿瘤组织发生，细胞分化、细胞功能，以有助于肿瘤诊断，鉴别诊断、分类，判断预后和指引临床治疗。 当前具备诊断价值肿瘤标记物虽已有数百种，但在临床病理诊断惯用有50余种，其标记物有如下类型： 一、肿瘤有关抗原 这种抗原只存在肿瘤组织中，正常组织内没有或含量甚微。或其为几种类型肿瘤所共有，故又称为肿瘤群体抗原，对判断肿瘤良、恶性和来源均有一定协助 CA125 对卵巢上皮性肿瘤均有一定表达，但重要对浆液性肿瘤阳性表达，卵巢粘液性腺癌CA125 不表达。可以用于这两种肿瘤鉴别诊断。 CA125 对子宫内膜样肿瘤透明细胞癌，未分化癌上皮成分也是阳性表达。 CEA癌胚抗原 广泛存在于各种上皮性肿瘤，大多数卵巢浆液性肿瘤不表达，而卵巢粘液性肿瘤表达，在子宫内膜样腺癌，透明细胞癌，勃勒纳氏瘤CEA均有不同限度表达，在胃肠道恶性肿瘤中CEA也为阳性表达，因此卵巢库肯勃氏瘤CEA也是阳性表达。 AFP甲胎蛋白 是胚胎卵黄囊细胞，胚胎肝细胞和胎儿肠道细胞合成一种糖蛋白，重要用于肝癌诊断，在卵巢内胚窦瘤、胚胎性癌，恶性畸胎瘤都为阳性表达。

二、细胞构造抗原 这种抗原可存在于正常组织和肿瘤组织中，为某些组织细胞群所特有，对判断肿瘤来源有重要意义 CK7: 重要标记腺上皮和移行上皮。卵巢、肺、乳腺上皮CK7阳性表达。而结肠，前列腺和胃肠道上皮CK7阴性表达。可用于卵巢癌与胃肠道癌鉴别诊断。 CK20: 重要标记胃肠道上皮、尿道上皮。卵巢粘液性囊腺癌CK20为阳性表达。子宫内膜腺癌、宫颈鳞癌、乳腺癌、肺癌和卵巢非粘液性肿瘤CK20均不表达。 desmin 结蛋白 为中间丝蛋白之一，分布于正常平滑肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞和 肌上皮细胞及其肿瘤中。结蛋白在良性肌源性肿瘤是强阳性表达，而在平滑肌肉瘤中表达率仅为50％，此外在平滑肌瘤中结蛋白与波形蛋白Vimentin（是表达间叶组织来源肿瘤，上皮来源肿瘤不含此蛋白，用于癌与肉瘤鉴别，恶黑与癌鉴别等）表达呈反向关系，分化越好结蛋白阳性反映越强，波形蛋白阳性反映弱或阴性；反之，分化越差，结蛋白反映弱或阴性，而波形蛋白反映越强。此外具有肌源成分癌肉瘤，恶性中胚叶混合瘤，畸胎瘤中也存在结蛋白 S-100 是一种可溶性酸性蛋白，重要存在于神经组织、垂体、唾液腺等组织，是神经性肿瘤重要标记。在恶黑及脂肪肉瘤为阳性表达 SMA 肌动蛋白 是一种标记平滑肌瘤蛋白，重要用于诊断平滑肌瘤、血管平滑肌瘤，平滑肌肉瘤以及肌上皮细胞。在乳腺肿瘤中以此抗体检测导管上皮肌上皮细胞阳性与否来判断乳腺肿瘤良、恶性。

三、可用于某些生殖细胞来源肿瘤和妊娠关于肿瘤诊断，惯用有： 内分泌激素及其受体抗原 涉及肽类激素和类固醇激素两种，以肽类激素抗原应用较多，惯用有胰岛素、高血糖素、胃泌素、生长抑素、降钙素等。 类固醇激素有雌激素、孕酮、睾酮等。但此类激素在组织切片中保存困难，且在组织内有各种构造类似激素前体，不但染色效果不好，且难以对的判断。因此多检测其激素受体。如：ER（雌激素受体）、PR（孕激素受体）

四、肿瘤中病毒抗原 HPV（人乳头状瘤病毒）特别是HPV16、18是宫颈癌重要致病病毒，亦可用于头颈部癌、前列腺癌和食管癌研究 HIV（人类免疫缺陷病毒）即艾滋病病毒，表达于淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、滤泡树突状细胞和HIV感染神经胶质细胞，重要用于艾滋病研究.此外尚有HSV（单纯性疱疹病毒等）

五、作为判断预后标记抗体 C-erbB-2 是一种癌基因蛋白质，存在于细胞膜上，该蛋白可加速细胞运动，参加细胞浸润和转移调节。在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、胃癌阳性表达提示预后差。特别是乳腺癌阳性表达具备独特预后价值，阳性表达者复发及转移率高，无瘤生存期及总生存期短。宫颈腺癌C-erbB-2 阳性表达者盆腔淋巴转移率和宫颈深肌层侵犯率高于阴性组。 P53（肿瘤抑制基因） P53蛋白也是当代分子生物学中研究最多蛋白质之一， P53蛋白除具备细胞生长阻滞作用外，同步还参加细胞DNA损伤与修复、细胞生长与分化、诱导细胞调亡过程，当前以为P53是生命科学领域中最重要蛋白质分子。 P53是肿瘤抑制因子，但由于失活、突变使蛋白构造发生变化，这在许多恶性肿瘤中可以见到P53基因突变，特别是结肠癌、直肠癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、宫体癌、食道癌、胃癌、肝癌、乳腺癌及膀胱癌尤为常用。此外对骨肉瘤、软组织肉瘤、淋巴瘤及白血病等恶性肿瘤细胞中也可见到。研究证明， P53突变与肿瘤大小正有关，与分化限度、病人总生存期和无瘤生存期呈负有关。 P53突变肿瘤复发率和死亡率明显高于阳性者。且P53突变与肿瘤血管侵袭呈明显有关。 在各种恶性肿瘤中突变性P53蛋白表达水平升高，用免疫组化可以检测到，因此咱们仍以P53阳性表达来预测患者预后、术后易复发等指标。 P53阳性表达与癌前病变关系也极为密切，在宫颈和食管非典型增生中均可检测出P53蛋白。 PCNA（增殖细胞核抗原） 是一种仅在增殖细胞中合成或表达核内多肽。 PCNA阳性表达与细胞增殖活性关于，可做为细胞增殖状态一种重要指标。在恶性肿瘤中PCNA阳性表达提示有肿瘤浸润、转移和临床预后不佳。 Ki-67 是一种与细胞增殖关于核抗原，位于胞核中。Ki-67增殖指数高低即阳性表达与许多肿瘤分化限度、浸润、转移及预后密切有关，因而被广泛做为各种恶性肿瘤必检项目之一。 ER、PR 是乳腺癌、子宫内膜腺癌、宫颈癌、卵巢癌等必检项目之一。 ER、PR阳性与否与病人术后化疗方案选取和内分泌治疗以至于肿瘤复发、转移、预后都密切有关。 ER、PR阳性者，内分泌、化疗治疗效果好，复发、转移率少，缓和期长，生存率高。 六、肿瘤多耐药基因 在临床肿瘤治疗中，经常有这样状况：同一种肿瘤，使用同一种治疗方案，或同一种病人，化疗之初和化疗后期，其效果迥异。这种状况决定性因素是肿瘤细胞内与否存在或产生了多耐药性。多耐药性基因编码蛋白可以把化疗药从细胞内泵到细胞外，从而避免了化疗药对细胞破坏。 研究表白，癌细胞有六种耐药途径，通俗点说：化疗药物要制服、杀灭癌细胞，而癌细胞有强大对抗办法，使化疗药物奈何不了它，这样，癌细胞仍可肆无忌弹地增生，最后达到危及健康与生命目。因此每一位化疗病人在治疗前都应当检查肿瘤耐药性，如果阳性，可以使用逆转剂，提高肿瘤细胞对化疗物敏感性 Pg糖蛋白 它是多耐药基因产物，作用“药泵”功能，引起癌细胞产生耐药。容易产生耐药抗药药物重要有长春新碱、长春花碱、阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、紫杉醇、VP16等。阳性表达（++）以上故意义，对肿瘤病人选取化疗方案和愈后判断具备重要临床意义。 MRP3 多耐药有关蛋白，重要用于非Pg糖蛋白肿瘤细胞系肿瘤耐药性研究。容易产生耐药抗药药物重要有阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、长春新碱、长春花碱、VP16。 常用妇科肿瘤免疫组化检测应用举例 寻常工作中依照每位病人，不同肿瘤类型从诊断、鉴别诊断、探讨组织来源、内分泌治疗及化疗前肿瘤多耐药基因及病人愈后等多方面选取一组免疫组化抗体以达到辅助诊断目。 子宫内膜腺癌 ER、PR、Ki-67 、P53（浆液性乳头状腺癌过表达）、PCNA 、PTEN、MRP3、Pg糖蛋白 PTEN是一种肿瘤抑制基因，在维持细胞增殖、分化和调亡平衡起着重要作用，该基因在许多肿瘤体现突变和丢失。子宫内膜腺癌发生一某些是与持续与过多雌激素关于，病人有不排卵、不孕及子宫内膜增生过长病史。PTEN常为阳性表达，提示预后较好。有些内膜癌患者无雌激素增高，有正常排卵，卵巢功能正常。诸多绝经近年老年妇女，癌周内膜多显萎缩，阐明无雌激素影响，这种内膜腺癌发生机制尚不清晰，PTEN阴性表达提示肿瘤恶性限度高，预后差。

子宫平滑肌肉瘤 SMA 、P53、结蛋白、波形蛋白、PCNA、CD10、Ki-67、MRP3、Pg糖蛋白。 子宫内膜间质肉瘤 ER、PR、CD10、波形蛋白、desmin 、SMA、P53、Ki-67、MRP3、Pg糖蛋白