香椿中内生固氮菌的分离筛选与鉴定

森林根际土壤细菌的分离、鉴定及生物活性筛选冯路遥;赵江源;施竹凤;莫艳芳;杨童雨;申云鑫;何飞飞;李铭刚;杨佩文【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2024(40)1【摘要】【目的】从无量山国家级自然保护区森林根际土壤发掘具有多种生物活性的功能菌株,探究其开发应用潜力。

【方法】采集无量山地区25个区域植物的根际土壤,采用选择培养基,分离鉴定磷酸盐溶解、固氮、溶锌和拮抗等活性菌株,进一步测定菌株分泌铁载体、ACC脱氨酶和吲哚乙酸等生物活性,并验证促番茄种子发芽和生长效果。

【结果】分离鉴定得到解磷菌70株,固氮菌27株,解钾菌8株,拮抗镰刀菌的菌株51株。

其中,YIM B08401和YIM B08402形态学结合生理生化特性和16S rDNA序列测序,鉴定为白色伯克霍尔德氏菌(Burkholderia alba)和青岛假单胞菌(Pseudomonas qingdaonensis),两个菌株均具有磷酸盐溶解、固氮、溶锌和分泌铁载体的活性,最大可溶性磷含量为(455.63±59.65)mg/L和(878.95±64.78)mg/L;两株菌的促种子发2芽试验结果接近,施加稀释10倍、10倍和310倍的发酵上清液后,发芽率都维持在82%-93%,明显高于对照组的56%和49%,施加菌株发酵液的处理组相较于空白对照组的长度都有显著增加。

盆栽实验证明,两株菌株促生效果最明显的处理组在地上部长度、鲜重、干重、茎粗、根长、根鲜重、根干重方面的数据都显著优于对照组,YIM B08401的上述指标相对于对照组分别显著增加了89%、495%、268%、62%、53%、385%和469%,YIMB08402的上述指标相对于对照组分别显著增加了118%、528%、477%、55%、37%、413%和747%。

此外,菌株YIM B08401还具有拮抗病原菌和分泌ACC脱氨酶活性,YIM B08402则还具有分泌吲哚乙酸的活性。

分类号：单位代码：10019密级：学号：S02402硕士学位论文固氮芽孢杆菌的分离鉴定以及固氮巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）C4在玉米、水稻、小麦上的定殖研究Isolation and Identification of Nitrogen-fixing Bacillus andColonization of Maize, Rice and Wheat by Nitrogen-fixingBacillus megaterium C4研究生：刘旭明指导教师：陈三凤教授申请学位门类级别：理学硕士专业名称：微生物学研究方向：微生物遗传所在学院：生物学院2005年6月China Agricultural UniversityMaster DissertationIsolation and Identification of Nitrogen-fixing Bacillus and Colonization of Maize, Rice and Wheat by Nitrogen-fixingBacillus megaterium C4Master Candidate: Liu XumingMentor: Chen SanfengMajor: MicrobiologyDepartment of MicrobiologyCollege of Biological SciencesChina Agricultural UniversityBeijing 100094, P.R. China独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。

尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。

与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。

大豆高效自生固氮菌分离鉴定与特性研究一、研究背景随着全球人口的增长和经济的发展，粮食需求不断上升，大豆作为重要的粮食作物之一，其产量和质量对保障国家粮食安全具有重要意义。

然而当前大豆生产面临着土壤肥力下降、病虫害严重、抗逆性差等问题，这些问题严重影响了大豆的产量和品质。

为了解决这些问题，研究大豆高效自生固氮菌的分离鉴定与特性具有重要的理论和实践价值。

大豆生长过程中需要大量的氮素营养，而土壤中的氮素资源有限，因此大豆根系对氮素的需求量较大。

传统农业生产中，常采用施用化肥的方法补充氮素，但这种方法不仅成本较高，而且容易导致土壤板结、酸化等问题。

因此寻找一种能够提高大豆抗逆性、增加产量、减少化肥使用的方法显得尤为重要。

自生固氮菌是一种能够在无外部氮源条件下实现固氮的微生物，具有较高的固氮活性和广泛的适应性。

研究表明自生固氮菌能够改善土壤结构、提高土壤肥力、促进植物生长等，对于提高大豆产量和品质具有潜在的应用价值。

目前关于大豆高效自生固氮菌的研究主要集中在菌种筛选、生理特性分析等方面，尚未形成系统的理论体系和技术路线。

因此本研究旨在通过对大豆高效自生固氮菌的分离鉴定与特性研究，揭示其在大豆生产中的应用潜力，为大豆高产、优质、抗逆性的实现提供理论依据和技术支持。

A. 大豆作为重要的粮食和经济作物，对氮肥的需求量较大大豆作为重要的粮食和经济作物，对氮肥的需求量较大。

由于大豆根系发达，能够吸收土壤中的大量氮元素，因此在农业生产中，氮肥的施用对于大豆的生长具有重要意义。

然而传统的氮肥施用方式往往会导致土壤中氮素的积累和流失，从而影响大豆的产量和品质。

因此研究大豆高效自生固氮菌的分离鉴定与特性，对于提高大豆抗逆性、减少氮肥施用量、保障粮食安全具有重要意义。

通过筛选和鉴定大豆高效自生固氮菌，可以为大豆生产提供一种新的氮肥替代方案。

这些菌株能够在大豆根际土壤中产生固氮酶，将空气中的氮气转化为植物可吸收的形式，从而降低对传统化肥的依赖。

包 装 工 程第40卷 第9期 ·36·PACKAGING ENGINEERING 2019年5月收稿日期：2019-03-06基金项目：陈伟（1991—），女，天津科技大学硕士生，主攻天然产物化学。

通信作者：刘常金（1969—），男，博士，天津科技大学副教授，主要研究方向为农产品贮藏与加工。

香椿老叶中黄酮类和皂苷类物质的分离鉴定陈伟，李晨晨，冉浩，李文华，刘常金（天津科技大学 食品工程与生物技术学院食品营养与安全国家重点实验室，天津 300457） 摘要：目的 对香椿老叶中的黄酮类和皂苷类活性物质进行分离鉴定，为进一步开发香椿老叶产品提供理论基础。

方法 使用柱色谱和高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC ）对香椿老叶中的物质进行分离纯化，并采用核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance, NMR ）和红外光谱（Infrared Spectroscopy, IR ）对分离物质进行测定。

结果 香椿老叶中含有芦丁、表儿茶素、槲皮素、异槲皮素、番石榴苷等。

利用显色反应初步定性鉴定出香椿皂苷中包括甾体皂苷和三萜皂苷。

结论 香椿老叶中含有丰富的黄酮类和皂苷类物质，具有广阔的开发前景。

关键词：香椿老叶；黄酮；皂苷；分离鉴定中图分类号：S644.4 文献标识码：A 文章编号：1001-3563(2019)09-0036-07 DOI ：10.19554/ki.1001-3563.2019.09.006Isolation and Identification of Flavonoids and Saponins in Old Toona Sinensis LeavesCHEN Wei , LI Chen-chen , RAN Hao , LI Wen-hua , LIU Chang-jin(State Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, School of Food Engineering and Biotechnology,Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China)ABSTRACT: The paper aims to isolate and identity flavonoids and saponins in old toonasinensis leaves to provide a the-oretical basis for further development of old toonasinensisleaves. Column chromatography and high performance liquid chromatography (HPLC) were used to separate and purify the substances in old toonasinensisleaves.Nuclear magnetic resonance (NMR) and infrared spectroscopy (IR) wereused for todeterminethe isolated substances. The old toonasinen-sisleaves of containrutin, epicatechin, quercetin, isoquercetin, guava glucoside, etc. The steroidal saponins and triterpe-noidsaponins in toonasinensissaponins were identified by chromogenic reaction.Oldtoonasinensis leaves are rich in fla-vonoids and saponins, which have broad development prospects.KEY WORDS: old toonasinensis leaves; flavonoids; saponins; isolation and identification香椿（Toonasinensis ）属于楝科香椿属落叶乔木，在中国种植广泛且面积逐年扩大，在山东、安徽、河南、河北、广西、湖南、四川、山西、陕西和云南等地均有大面积的香椿种植地[1]。

2株青贮玉米根际固氮菌的筛选鉴定及促生作用研究孟超楠;赵玉洁;陈佳欣;张旖璐;王彦佳;冯丽荣;孙玉刚;郭长虹【期刊名称】《草业学报》【年(卷),期】2024(33)3【摘要】为了获得优良的固氮菌,并评价其对青贮玉米的促生效果,本研究采用稀释涂布平板法,利用阿须贝氏固体培养基从青贮玉米根际土壤中分离筛选到10株固氮菌,对其固氮能力进行分析,结果表明,菌株ZL-2和ZL^(-1)3的固氮能力较强,菌株ZL-2的固氮量为1.07μg·mL^(-1),ZL^(-1)3的固氮量为0.95μg·mL^(-1)。

通过细菌形态学、16S rDNA序列分析和生理生化特征,确定菌株ZL-2为生癌肠杆菌和ZL^(-1)3为成团泛菌。

对2株固氮菌的促生特性进行分析,结果表明,2个菌株具有泌铵能力、溶磷能力、产嗜铁素能力和合成吲哚-3-乙酸(IAA)的能力。

盆栽试验结果表明,接种固氮菌ZL-2和ZL^(-1)3能够显著提高青贮玉米的株高、根长、地上和地下干、鲜重(P<0.05)。

田间试验结果表明,2株固氮菌单接种和双接种均能提高青贮玉米的株高、茎粗、产量、粗蛋白含量和全磷含量(P<0.05)。

接种2株固氮菌的青贮玉米,其氮代谢和氨同化相关基因(ZmAMT-4、ZmAMTB、ZmGOGAT2和ZmGS1-3)的表达量显著提高(P<0.05)。

因此,2株固氮菌具有较好的促生特性,在提高青贮玉米的产量和品质方面发挥了重要作用,是开发微生物菌剂的优质菌种资源。

【总页数】12页(P174-185)【作者】孟超楠;赵玉洁;陈佳欣;张旖璐;王彦佳;冯丽荣;孙玉刚;郭长虹【作者单位】黑龙江省分子细胞遗传与遗传育种重点实验室;黑龙江国宏节能环保有限公司【正文语种】中文【中图分类】S81【相关文献】1.固氮菌Kosakonia radicincitans GXGL-4A对玉米和水稻的促生作用及其根际定殖动态2.一株玉米根际多功能促生菌的筛选鉴定及效应研究3.高寒草甸嵩草、珠芽蓼根际优良植物根际促生菌的分离筛选及促生特性研究4.薇甘菊根际可培养固氮菌和氨化细菌的分离鉴定与促生作用5.3株水稻根际促生菌的筛选鉴定及促生作用研究因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

·1397·甘薯块根内生固氮菌的分离鉴定和系统发育分析王崇1，2，雷剑1，靳晓杰1，柴沙沙1，邹语嫣1，孙小琼3，焦春海1，杨新笋1*，王连军1*（1湖北省农业科学院粮食作物研究所/粮食作物种质创新与遗传改良湖北省重点实验室/农业农村部作物分子育种重点实验室，湖北武汉430064；2长江大学农学院，湖北荆州434025；3青海大学农牧学院，青海西宁810016）摘要：【目的】对甘薯块根内生固氮菌进行分子鉴定和多样性分析，并分析其菌群结构，为深入研究甘薯内生固氮菌的应用提供理论参考。

【方法】以鄂薯11和鄂薯17为试验材料，采用无氮培养基筛选获得2个甘薯品种块根的内生固氮菌，根据16S rDNA 基因序列分析对分离的内生固氮菌进行分类鉴定；进一步扩增nifH 基因片段验证固氮菌；依据Shannon 多样性指数、菌株相对分离率和相似性指数对甘薯块根内生固氮菌的菌群分布及多样性进行分析，并比较内生固氮菌菌群差异。

【结果】从鄂薯11和鄂薯17块根中总共分离得到80株内生固氮菌，归属为1门1纲1目1科2属，包括普里斯特氏菌属（Priestia ）和芽孢杆菌属（Bacillus ），相对分离率分别为51.25%和48.75%；普里斯特氏菌属在鄂薯11和鄂薯17块根的相对分离率分别为51.11%和51.43%，芽孢杆菌属在鄂薯11和鄂薯17块根的相对分离率分别为48.89%和48.57%，2个甘薯品种块根中内生固氮菌的相对分离率变化差异小。

2个甘薯品种块根内生固氮菌总Shan-non 指数为0.6929，总均匀度指数为0.4803。

鄂薯11和鄂薯17间的相似性指数为1，2个甘薯品种块根中的内生固氮菌属相同。

系统发育进化树显示，从鄂薯11和鄂薯17中分离得到的内生固氮菌遗传多样性较低。

【结论】从鄂薯11和鄂薯17块根中分离鉴定出80株内生固氮菌，归属于普里斯特氏菌属和芽孢杆菌属，2个品种间的内生固氮菌菌群构成无明显差异。

一株自生固氮细菌的分离和鉴定吴翔;甘炳成;贾定洪;蒋元继;唐杰;周洁【摘要】A free living nitrogen-fixing bacteria strain named GN1S was obtained from Ashby nitrogen-free culture medium. GN15 was a gram-positive bacteria,which grew fast and well on beef extract peptone medium, the morphological and physiological characteristics were detected , and phylogenetic sequences of 16S rDNA were analyzed. The results showed that GN15 was Pantoea agglomerans, which was named Pantoea agglomerans GN1S, the its research provided scientific basis for the development of azotobacterin.%利用阿须贝培养基从土壤样品中分离到一株具有自生固氮作用的细菌,编号为GN15.GN15为革兰氏阴性菌,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长速度快,长势好,通过对其进行形态特征、生理生化特征测定以及16SrDNA序列分析,结果表明,GN15为成团泛菌(Pantoea agglomerans),将其命名为Pantoea agglomerans GN15,对该菌的基础研究为固氮菌肥的研制提供基础的科学依据.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2013(026)001【总页数】4页(P255-258)【关键词】自生固氮;分离;鉴定;成团泛菌【作者】吴翔;甘炳成;贾定洪;蒋元继;唐杰;周洁【作者单位】四川省农业科学院土壤肥料研究所,四川成都610066【正文语种】中文【中图分类】S154.38+1;X172目前，我国的化肥生产量和消费量均居世界第一［1］，长期大量的施用化肥，导致污染物在土壤中累积，严重影响土壤的生态环境，也导致了农产品中有害物质的严重超标，最终影响人类身体健康。

一株旱稻联合固氮菌株的分离鉴定及促生作用胡应平;林冬梅;胡弘正;吴颖;林佳丽;林占熺;刘斌【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2024(37)4【摘要】[目的]旱稻是一种重要的种质资源,对成熟期旱稻根系内生固氮菌进行筛选与鉴定,以获得对旱稻有较好促生作用的菌株。

[方法]采用联合固氮固体培养基培养方法,从成熟期旱稻根系中分离出内生固氮菌,通过扩增固氮酶nifH基因和16S rRNA基因进行分子鉴定和系统进化分析生化指标测定和形态学鉴定;采用透明圈法进行溶磷、产铁载体能力验证;以褐球固氮菌为阳性对照,利用ELISA测定试剂盒测定菌株分泌固氮酶活性、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶,采用Salkowski比色法测定生长素(IAA)含量,并研究其生长特征。

将分离的固氮菌株以1%浓度(约8×10~7CFU/mL)浸泡旱稻谷种进行催芽,研究其促生效果。

[结果]分离的菌株URR45为固氮菌,属于嗜温型微生物,最适生长温度为32~50℃,最适pH为6.0~6.5,不耐盐。

其分泌的固氮酶含量为220.15 U/L,ACC含量为898.69 ng/mL,生长素含量为14.91 mg/L,固氮酶含量和ACC含量显著高于对照组褐球固氮菌。

该菌株能够利用葡萄糖、麦芽糖等碳源,属于发酵型细菌,具有水解明胶、溶磷和产铁载体特性。

该菌株经16S rRNA基因测序后通过NCBI BLAST比对,鉴定为Herbaspirillum seropedicae,隶属于Pseudomonadota门、Betaproteobacteria纲、Burkholderiale目、Oxalobacteraceae科、Herbaspirillum属,革兰氏染色呈阴性。

促生试验结果表明,在主根长度、侧根长度以及测根数方面均显著高于对照组。

[结论]该菌株对旱稻幼苗具有一定的促生作用,在农业上产上可作为功能性内生固氮菌开发利用。

【总页数】9页(P780-788)【作者】胡应平;林冬梅;胡弘正;吴颖;林佳丽;林占熺;刘斌【作者单位】福建农林大学;福建农林大学国家菌草工程技术研究中心【正文语种】中文【中图分类】S182【相关文献】1.一株具有植物促生作用的沙棘内生真菌的分离鉴定2.一株固氮解磷菌的筛选鉴定及其对花生的促生作用研究3.一株防病促生细菌HPS-211菌株的分离与初步鉴定4.水稻根系内生固氮菌的分离鉴定及其促生作用研究5.基于基因组的一株土壤固氮菌分离菌株鉴定及其促生作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

香椿叶多酚的提取分离及其体外对糖尿病关键酶活性的抑制作用扶雄1，张伟1，朱思明1，李超1，游丽君1，赵振刚1，刘瑞海1,2（1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640）(2.康奈尔大学食品科学系，纽约伊萨卡 14853-7201) 摘要：本研究从香椿叶中提取分离多酚，研究多酚对糖尿病关键酶（猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶）活性的影响。

采用活性追踪法，运用多种分离纯化技术和色谱学分析，逐级筛选活性强的部位以及单体化合物。

研究发现香椿叶多酚粗提物具有显著的酶抑制作用，猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶的半数抑制率（IC50）值分别为0.45 mg/mL、1.29 mg/mL和1.41 mg/mL。

乙酸乙酯萃取后的70%乙醇洗脱部位为主要活性部位，其对猪胰腺α-淀粉酶、鼠小肠蔗糖酶和麦芽糖酶抑制作用的IC50值分别为0.091 mg/mL、0.97 mg/mL和1.00 mg/mL。

从活性部位分离出2个单体化合物，分别鉴定为：1, 2, 3, 4, 6-O-五没食子酰葡萄糖（PGG）和没食子酸乙酯（EG），其中PGG具有显著的α-淀粉酶抑制活性，IC50值为0.069 mg/mL；EG对蔗糖酶和麦芽糖酶具有一定的抑制活性，IC50值分别0.82 mg/mL和0.81 mg/mL。

研究表明多酚化合物是香椿叶的有效降血糖功能成分之一，PGG和EG是主要的活性成分。

关键词：香椿叶；多酚；α-淀粉酶；蔗糖酶，麦芽糖酶，糖尿病文章篇号：1673-9078(2014)7-10-15Inhibitory Activities of Phenols from Toona sinensis Leaves on KeyEnzyme Linked to T ype 2 Diabetes in vitroFU Xiong1, ZHANG Wei1, ZHU Si-ming1, LI Chao1, YOU Li-jun1, ZHAO Zhen-gang1, LIU Rui-hai1,2(1.School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China)(2.Department of Food Science, Cornell University, Ithaca New Y ork 14853-7201, USA)Abstract: To clarify the postprandial glucose suppression effects of phenols from Toona sinensis leaves, its inhibitory effects against key enzymes (porcine pancreatic α-amylase, rat intestinal sucrase and maltase) linked to type 2 diabetes were investigated. Results showed that the crude extract of T oona sinensis leaves had significant enzyme inhibitory activities. Its IC50 values for the three key enzyme activities were 0.45, 1.29, and 1.41 mg/mL, respectively. The 70% ethanol sub-fraction of the ethyl acetate fraction was mainly responsible for enzymes inhibitory activities, which showed the strongest enzyme inhibitory activities with IC50 values of 0.091, 0.97, and 1.00 mg/mL, respectively, on porcine pancreatic α-amylase, rat intestinal sucrase and maltase. PGG (1, 2, 3, 4, 6-penta-O-galloyl-β-D-glucopyranose) and EG (ethyl gallate) isolated from 70% ethanol sub-fraction were identified as the active monomer compounds. PGG exhibited significant enzyme inhibitory activity against α-amylase with IC50 value of 0.069 mg/mL. The EG had inhibitory effects on sucrase and maltase to some extent. Its IC50 value for sucrase and maltase were 0.82 and 0.81 mg/mL, respectively. This study revealed that T oona sinensis leaves may be helpful to develop drug and functional foods for diabetes and related symptoms.Key words:Toona sinensis leaves; phenols; α-amylase; sucrase; maltase;diabetes近几十年来，糖尿病的发病率逐年递增，已成收稿日期：2014-04-25基金项目：广州市科技计划项目（2013J4500036)；广东省科技计划项目（2012B050500003）；广东省领军人才项目（刘瑞海）作者简介：扶雄（1971-），男，教授，博士生导师，研究方向：功能碳水化合物通讯作者：赵振刚（1979-），男，博士，讲师，研究方向：功能碳水化合物为继心脑血管疾病、恶性肿瘤之后严重威胁人类健康的第三大慢性疾病。