无菌工艺模拟验证
-培养基灌装试验
王新峰
QA/QC 厂房设施人员
灭菌工艺
无菌保证
培养基灌装
HVAC，水
操作规程
日常监控EM&PM
内容
1.培养基灌装的目的
2.法规要求
3.不同制剂工艺的培养基灌装（液体、冻干
产品，干粉分装产品）
4.风险分析
5.实验设计
6.审计要点
培养基灌装试验的定义
定义:
培养基灌装－采用培养基代替产品，按照正常生产的程序来进行无菌灌装工艺验证。
培养基灌装试验目的
目的：
–评估在既定无菌生产环境和过程控制条件下生产无菌产品的能力
–证明指定的无菌工艺设计和变更是否可行
–证明无菌工艺过程中的相关操作是否可行
–评估无菌工艺人员的操作水平（资格确认组成部分）– QAR调查的手段
–证明符合cCMP的要求
–发现无菌工艺过程中潜在的微生物污染因素
培养基灌装试验应用范围
•无菌药品和生物制剂的生产
•用无菌工艺进行医疗器械，人和动物保健品的生产
法规要求2010GMP
•第四十七条无菌生产工艺的验证应当包括培养基模拟灌装试验。
•应当根据产品的剂型、培养基的选择性、澄清度、浓度和灭菌的适用性选择培养基。
应当尽可能模拟常规的无菌生产工艺，包括所有对无菌结果有影响的关键操作，及生产中可能出现的各种干预和最差条件。
•培养基模拟灌装试验的首次验证，每班次应当连续进行3次合格试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应当重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应当按照生产工艺每班次半年进行1次，每次至少一批。
•培养基灌装容器的数量应当足以保证评价的有效性。批量较小的产品，培养基灌装的数量应当至少等于产品的批量。培养基模拟灌装试验的目标是零污染，应当遵循以下要求：
•（一）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品。
•（二）灌装数量在5000至10000支时：
•1.有1支污染，需调查，可考虑重复试验；
•2.有2支污染，需调查后，进行再验证。
•（三）灌装数量超过10000支时：
•1.有1支污染，需调查；
•2.有2支污染，需调查后，进行再验证。
•（四）发生任何微生物污染时，均应当进行调查。
•第四十八条应当采取措施保证验证不能对生产造成不良影响。
其它法规要求
• EU
– guidelines in Annex 1 to UK cGMP’s
– PICS publication PE 002-2 “Recommendation on the Validation of Aseptic Processes”( April
2000 )
• USA
–“Guideline on Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing” FDA 1987
– Reissued with updates in 2004
其它组织要求
• PDA Technical Report No 22 “Process Simulation Testing for Aseptically Filled Products” 1996 (2011 revised)
• PDA Technical Report No 36 “Current Practices in the Validation of Aseptic Processing”2002
培养基灌装的前提
•洁净室环境达到设计要求
–通风系统（HVAC）的确认
•设备验证状态确认
–生产线设备安装、运行和性能确认–设备的清洗和消毒CIP,SIP
–湿热、干热灭菌工艺
–除菌过滤的验证
–容器/胶塞密闭性测试（CCIT）•人员培训
–无菌操作，无菌室行为
–无菌更衣资格确认
–无菌环境取样资格确认
培养基灌装设计•定义被模拟的工艺
•定义使用的房间，灌装线和设备
•使用的容器和密封的类型
•灌装线的速度
•灌装数量、批量
•模拟过程中的干扰和中断的数目和类型•参与的人员数目
•使用的培养基
•灌装到容器内培养基的体积
•培养条件，培养温度，培养时间
•进行的环境监测
•进行的测试及接受标准
•选择的最差条件及其原理
培养基选择
–适应广谱微生物生长
–较好的澄明度，较小的粘度
–可除菌过滤\灭菌(对于液体产品应采用和产品一致的灭菌方法;粉末产品应采用经过验证的灭菌方法)
–在某些情况下应该考虑使用厌氧性培养基
–常用培养基：TSB\FTM
–应进行促生长实验，5天培养（应包括惰性物质使用浓度的确认）
＜100CFU
USP标准菌株
环境分离菌株
惰性介质的选择(粉末分装)
•应采用无菌的惰性填充剂灌装(PEG 6000, PEG 8000、甘露醇、乳糖)
•填充量应该不能抑制微生物生长
•填充在添加液体培养基后，应保证惰性介质全部溶解
不同剂型对培养基灌装的要求液体和冻干制剂
•从药液除菌过滤/灭菌开始，到完成无菌灌装并包括部分冻干程序
•培养基灌装冻干模拟步骤：
✓容器灌装好培养基，半压塞状态装载冻干机
✓冻干机部分抽真空，室温放置一定的时间
✓用无菌空气破坏真空（不使用惰性气体），全压塞
✓压塞后轧盖
